葡多酚对小鼠肝细胞体内外增殖活性的影响

目的观察葡多酚(GPC)对正常肝细胞及受乙醇损伤的肝细胞增殖活性的影响.方法将小鼠正常肝细胞和乙醇引发损伤的肝细胞加入GPC培养,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定各组肝细胞增殖活性.将GPC经口给予正常小鼠和乙醇引发急性肝损伤的小鼠,取肝脏匀浆后培养3和16 h,用前述方法测定肝细胞增殖活性.结果体外实验的正常对照组和乙醇对照组细胞增殖活性分别为0.438±0.040和0.365±0.024;50mg/L GPC保护组和50 mg/L GPC对照组则为0.541±0.026和0.603±0.060.体内实验的150 mg/L GPC保护组细胞增殖率较乙醇对照组升高0.095;150mg/LGPC对照组则较正常对照组升高0.030.各组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论GPC能抑制乙醇对肝细胞增殖活性的损伤,并对正常肝细胞增殖活性有一定促进作用.     

葡多酚对小鼠肝细胞蛋白激酶C和增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察葡多酚(GPC)对小鼠肝细胞蛋白激酶C(PKC)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法每日给小鼠经口灌胃不同剂量的GPC,30天后取肝组织,用MTT法测各组小鼠肝细胞的增殖活性水平,免疫组化的方法检测各组PKC和PCNA的表达。结果高剂量GPC组PKC和PCNA阳性表达率分别为47.62%和82.76%,阴性对照组则分别为6.42%和32.62%,经χ2检验,差异有显著性(P<0.05)。各组肝细胞的PKC和PCNA阳性表达率随GPC剂量的增高而增高。结论葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC的表达,提高肝细胞增殖活性。     

葡多酚对肝细胞内Ca~(2+)浓度和增殖活性的影响

目的探讨葡多酚(GPC)对正常肝细胞和受乙醇损伤肝细胞内Ca2+浓度与细胞增殖活性的影响。方法将大鼠正常肝细胞和乙醇损伤肝细胞加入不同剂量GPC共同培养,用Fura-2荧光测定肝细胞内Ca2+浓度,用MTT法测定细胞增殖活性。结果①正常对照组和乙醇对照组的Ca2+浓度分别为(108·26±14·17)和(651·24±47·95)nmol/L,二者差异有显著性意义(P<0·05);中、高剂量GPC组均较乙醇对照组显著性降低(P<0·05)。②加入GPC的正常肝细胞内Ca2+浓度依次为:细胞外液含Ca2+组>外液无Ca2+组>正常对照组。③正常肝细胞和乙醇损伤肝细胞的中、高剂量GPC组细胞增殖活性均较正常对照组和乙醇对照组显著性升高(P<0·05)。结论GPC可通过增加细胞外液Ca2+内流和胞内Ca2+库的释放两种途径升高正常肝细胞内Ca2+浓度,提高细胞增殖活性,并可抑制乙醇引发的肝细胞内Ca2+浓度异常升高(超载)和细胞增殖活性损伤。     

葡多酚对小鼠肝细胞乳酸脱氢酶影响

葡多酚又称葡萄原花青素(grape procyanidins,GPC),是从葡萄籽中提取的一种天然多酚类物质.据国内外研究报道,葡多酚不仅具有清除自由基、抗氧化等生物学功效^[1,2],还能促进多种细胞的增殖活性^[3].本实验采用经口灌胃给葡多酚和体外细胞培养的方法,研究葡多酚对小鼠肝细胞乳酸脱氢酶(Lactic acid dehydrogenase,LDH)影响,探讨其对肝细胞增殖活性的作用.     

葡多酚对胰腺细胞增殖活性的影响作用

目的　观察葡多酚 (GPC)对正常胰腺细胞和受损伤胰腺细胞增殖活性的影响。方法　 ( 1)将经口灌胃不同剂量GPC的小鼠分作给予和不给予60 Co γ射线辐射 2种处理 ,取胰腺用MTT法检测细胞的增殖活性。 ( 2 )将加入和不加入GPC培养的胰腺细胞再分别加入双蒸水、葡萄糖和H2 O2 共同培养 2 4h ,测定细胞增殖活性。结果　 ( 1)15 0mg/kgGPC组动物照射组和不照射组的细胞增殖率分别为 ( 3 16± 0 13) %和 ( 12 0 0 10 ) % ,均较不给GPC组显著性升高 (P <0 0 1)。 ( 2 )双蒸水、30mmol/L葡萄糖和 2 0mmol/LH2 O2 组细胞不加GPC的增殖活性分别为0 12 0± 0 0 0 8,0 0 70± 0 0 0 2和 0 0 6 3± 0 0 0 6 ,均较加入 10 0 μg/mlGPC显著降低 (P <0 0 5 )。结论　GPC可促进正常胰腺细胞的增殖活性 ,抑制辐射、高糖及氧化剂对胰腺细胞增殖活性的损伤     

葡多酚对核接触人员辐射损伤的防护作用研究

目的 研究葡多酚对核接触人员辐射损伤的防护作用.方法 选取某单位从事核作业的核接触人员60人,数字表法随机分为对照组和实验组,每组30人,另选15名非核接触人员作为正常对照组.实验组服用葡多酚制剂,每天1粒(含葡多酚100 mg/粒),对照组同样的方法服用淀粉安慰剂,连续60 d.于实验前后各抽取空腹静脉血1次,检测白细胞计数、淋巴细胞转化率、血清总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、细胞增殖活性、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax等指标.结果 实验后实验组的白细胞计数、T-AOC和淋巴细胞增殖活性分别为(5.62±0.40)×109个/L、(17.07±1.91)U/ml和0.87±0.09,均较对照组增高,差异有统计学意义.MDA和Bax分别为(4.12±0.37)nmoL/L和28.06%±5.79%,均较对照组降低,差异有统计学意义.结论 葡多酚对核接触人员的细胞增殖活性降低和脂质过氧化等损伤,有一定的防护作用.     

葡多酚对小鼠乳腺癌细胞增殖活性抑制作用

目的研究葡多酚（GPC）对小鼠乳腺癌细胞增殖活性的抑制作用。方法将皮下接种乳腺癌（EMT6）细胞株的小鼠每日经口灌胃给予不同剂量的GPC，13d后取乳腺癌组织，用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测各组小鼠乳腺癌细胞的增殖活性．免疫组化法检测各组增殖细胞核抗原（PCNA）和P53表达。结果肿瘤对照组PCNA和P53阳性表达率分别为72．78％和37．22％．高剂量GPC组则分别为28．32％和7．46％，差异有统计学意义（P〈0．05）。各组乳腺癌细胞的增殖活性随GPC剂量的增高而降低。结论葡多酚可有效抑制小鼠乳腺癌细胞增殖活性。     

葡萄原花青素对乙醇诱发小鼠肝细胞Caspase-3和Bax蛋白异常表达的影响

目的研究葡萄原花青素(GPC)对乙醇诱发小鼠肝细胞Caspase-3和Bax蛋白异常表达的影响。方法将小鼠随机分为正常对照组、乙醇对照组和各剂量GPC组,除正常对照组外,每组小鼠均每天经口灌胃乙醇4g/kg,低、中、高剂量GPC组同时分别给予GPC 50、100和200mg/kg,连续4周。取肝组织用MTT法检测各组小鼠的肝细胞增殖活性,用免疫组织化学法检测肝细胞Caspase-3和Bax蛋白的表达水平。结果高剂量GPC组Caspase-3和Bax蛋白阳性表达率分别为19.08%和14.06%,乙醇对照组则为51.78%和58.08%,差异有显著性(P<0.05)。高、中剂量GPC组细胞增殖活性高于乙醇对照组(P<0.05)。结论 GPC可抑制乙醇诱发的肝细胞Caspase-3和Bax蛋白异常表达,对乙醇性肝损伤具有防护作用。     

葡多酚对N-亚硝基化合物诱发的肝细胞SSTR-2 mRNA表达的抑制

目的　研究葡多酚 (GPC)对N 亚硝基化合物诱发的大鼠肝细胞生长抑素受体 - 2mRNA(SSTR 2mRNA)表达的影响作用。方法　将大鼠经口灌胃 0 5 %的亚硝酸钠诱发肝细胞突变 ,2个GPC实验组同时经口给予GPC 1 0 0mg kg和 1 0mg kg,用原位杂交技术检测肝细胞SSTR 2mRNA的表达水平。结果　诱变损伤组和高GPC组SSTR 2mRNA表达的阳性细胞率分别为 1 9 89%和 7 83% ,两组之间的差别有显著性意义 (P<0 0 5 )。结论　葡多酚对N 亚硝基化合物诱发的大鼠肝细胞SSTR 2mRNA异常表达有抑制作用     

血清浓度对高原体外肝细胞培养的影响

目的了解在高原环境条件下血清对培养肝细胞生长的影响,初步确定进行体外肝细胞培养的适宜血清浓度。方法采用已适应本地环境的成年家兔肝细胞进行体外单层培养,在常规RPMI1640培养基的基础上添加不同浓度的新生牛血清(0%、2%、10%及20%),观察培养细胞形态、数量及培养上清中白蛋白和尿素水平变化。结果无血清组始终未见明显细胞贴壁及增殖,其他组细胞均于接种4 h开始贴壁,8 h开始增殖,10%血清组和20%血清组细胞均于6 d生长满瓶,并形成均匀的单层,而2%血清组细胞则于8 d生长满瓶;2%血清组的细胞数量峰值明显低于10%血清组和20%血清组;除无血清组外,培养上清中白蛋白和尿素水平均呈现显著升高,其中10%血清组和20%血清组的白蛋白及尿素峰值水平明显高于2%血清组。结论在高原环境条件下,体外培养肝细胞的生长、增殖及其生物学功能维持明显依赖于常规基础培养基中添加的血清浓度;对于普通肝细胞培养实验而言,10%血清浓度较为适宜。     

电磁辐射对大鼠海马PKC转位和激活的影响

目的 探讨电磁辐射对PKC转位和激活的影响。方法 以峰值功率密度为5 W/cm²的微波持续辐照大鼠1,3,5,10,15 d,用改良的Takai法检测海马PKC活性,用Western-blot法检测海马AMPA受体磷酸化程度。结果 微波辐照后,大鼠海马中的PKC被激活,时间为3~5 d,随着辐照时间增加,这种激活形式一直延续至辐照15 d;对照组和辐照组各个时相点的AMPA Glu2-Ser⁸⁸⁰位点的磷酸化程度差异无显著性。结论 峰值功率密度为5 W/cm²的微波辐照对中枢神经系统的损伤可能不涉及PKC-AMPA途径的功能变化。     

NF-κB和PKC在膀胱癌中的表达及意义

目的 研究NF-κB与膀胱癌分级、分期、复发及转移的关系，以及NF-κB和PKC的关系。方法 采用免疫组化SP法检测NF-κB和PKC在膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本54例和正常对照标本13例的表达。结果 NF-κBP65和PKC在54例膀胱癌中的阳性表达率分别为88．9％、81．5％。NF-κB阳性表达率随膀胱癌分级、分期的增高有降低趋势，而随复发及转移的增多而增高。NF-κBP65和PKC在膀胱癌中的表达具有正相关性。结论 NF-κB可能在膀胱癌早期起促进作用。有望作为评价膀胱癌恶性度、肿瘤进展的指标。PKC在NF-κB的激活过程中有可能发挥促进作用。     

铝暴露对大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型影响

目的通过研究慢性铝暴露大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型（PKCγ）的蛋白和mRNA表达的变化，观察大鼠海马CA1区长时程增强（LTP）形成，探讨铝暴露对学习记忆机制的影响。方法选择断乳后Wistar大鼠，以含有不同浓度A1Cl3的水进行饲养。3个月后，测量大鼠海马LTP，用改良的Takai法测定PKC活性的变化，蛋白印迹（Westernblotting）法检测PKCγ的蛋白表达；RT-PCR检测PKCγ的mRNA表达。结果（1）各染铝组PKC活性与对照组比较均降低，差异有统计学意义（P〈0.01）；（2）各染铝组PKCγ蛋白表达与对照组比较有降低趋势（P〈0．05）；（3）各染铝组PKCγmRNA表达与对照组比较均降低（P〈0．05），0．2％与0．4％，0．6％组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢性铝暴露影响大鼠海马PKCγmRNA和PKCγ蛋白表达。使PKC活性降低。导致LTP的下降，从而影响学习记忆的功能。     

四氯化碳对体外培养肝星状细胞钙浓度的影响

目的研究四氯化碳(CC l4)对肝星状细胞内游离Ca2 ([Ca2 ]i)的影响。方法用常规的细胞培养方法,每组加入5~15 mmol/L的CC l4处理细胞,分别作用2~8 h后,以F luo-3/AM进行荧光染料负载,用激光共聚焦显微镜观察不同剂量CC l4作用不同时间[Ca2 ]i的变化。结果CC l4在5~15 mmol/L范围内可明显增加肝星状细胞[Ca2 ]i,且[Ca2 ]i随CC l4剂量的增大而升高(P<0.05),作用2 h后,各组[Ca2 ]i均上升,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),4 h后各组[Ca2 ]i继续升高;8 h后各组[Ca2 ]i维持在较高水平,各组分别与作用4 h比较差异均无显著性(P<0.05)。结论CC l4可能引起肝星状细胞[Ca2 ]i升高。     

姜黄素对氯化铝染毒的NG108 - 15细胞凋亡及PKC - NMDAR通路表达的影响

目的 探讨姜黄素对氯化铝染毒所致NG108 - 15细胞凋亡的影响及其机制,为铝致学习记忆损伤的治疗提供参考。方法 取对数生长期NG108 - 15细胞,随机分为空白对照组、DMSO组（溶剂对照）、姜黄素组（16 μmol/L姜黄素）、铝组（160 mg/L氯化铝染毒 ）、铝+姜黄素组（160 mg/L氯化铝染毒24 h后,给予16 μmol/L姜黄素处理24 h）。收集各组细胞,采用吖啶橙/嗅化乙锭（AO/EB）双荧光染色观察细胞凋亡形态,计数凋亡细胞数并计算凋亡率;流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT - PCR检测细胞中PKC、NMDAR1、NMDAR2B 的mRNA表达水平,western blot检测细胞中凋亡相关蛋白（caspase3、Bax）和PKC、NMDAR1、NMDAR2B的蛋白表达水平。多组间均数的比较采用单因素方差分析（one - way ANOVA）,组间两样本均数的比较采用LSD法。结果 与空白对照组相比,铝染毒组的caspase3、Bax蛋白表达水平升高（t = - 5.547、 - 4.948,P＜0.001）,PKC、NMDAR1、NMDAR2B的mRNA（t = 4.926,P = 0.003;t = 6.330,P＜0.001;t = 4.224,P = 0.019）和蛋白（t = 20.638,P＜0.001;t = 4.509,P＜0.001;t = 17.388,P = 0.002）表达水平降低, AO/EB染色和流式细胞术结果均表明细胞凋亡率升高（t = - 5.153、 - 7.390,P＜0.001）;加入姜黄素处理后,与铝染毒组相比,铝+姜黄素组的caspase3、Bax蛋白表达水平降低（t = 2.930,P = 0.006;t = 4.907,P＜0.001）,PKC、NMDAR1、NMDAR2B 的mRNA（t = - 10.337、 - 6.621、 - 6.847,P＜0.001）和蛋白（t = - 30.551、 - 7.451、 - 26.294,P＜0.001）表达水平升高,AO/EB染色和流式细胞术结果均表明细胞凋亡率降低（t = 2.707,P = 0.01;t = 4.632,P＜0.001）。结论 上调PKC - NMDAR信号通路表达,可能是姜黄素减轻氯化铝染毒所致NG108 - 15细胞凋亡的机制之一。     

Glycoglycerolipid analogues inhibit PKC translocation to the plasma membrane and downstream signaling pathways in PMA-treated fibroblasts and human glioblastoma cells, U87MG

Glycoglycerolipid analogues, derived from 2-O-β-d-galactosylglycerol, have been synthesized on the base of the structure of natural glycoglycerolipids showing anti-tumor and anti-inflammatory efficacy. These compounds have been previously demonstrated to inhibit phorbol 12-myristate-13-acetate (PMA) induced tumor promotion in mouse skin, but their mechanism of action has never been elucidated. In this work, we studied the effects of glycoglycerolipid analogues on PKC activation induced by PMA and its downstream target molecules, in human fibroblasts. Our results proved that: a) the tested compounds were able to block PKC translocation to the plasma membrane, promoted by PMA, in a dose-dependent manner (IC₅₀: 0.48 μM for the most active compound 2); b) the efficacy of these compounds was strongly connected to their acyl chain linked to galactose; in particular, the addition of hexanoyl and branched chains enhanced PKC inhibition, the presence of a cyclohexane ring and an excessive length of the acyl chain, or its lack, exerted a negative effect; c) the inhibition of PKC translocation blocked enzyme activation and downstream signaling pathways, MAPK and FAK, involved in proliferation and adhesion/migration control. In addition, the branched glycoglycerolipid (compound 2) was able to inhibit PKC translocation and activation in naturally highly PKC activating glioblastoma cells, U87MG. As consequence, U87MG cell proliferation and, especially, migration potential resulted to be markedly reduced (−30% and −84%, respectively). Thus, these results reveal the role of a PKC-dependent mechanism in glycoglycerolipid analogues mediated protective effects and highlight their possible employment in the field of prevention/treatment of cancer.     

JWA编码区PKC磷酸化位点突变对佛波酯诱导MCF-7细胞分化的影响

目的探讨JWA蛋白PKC磷酸化位点对TPA诱导的MCF-7细胞分化的影响。方法利用连续PCR引入点突变技术构建JWA编码区PKC磷酸化位点1、2以及两位点同时突变的三种pEGFP-N1载体，脂质体稳定转染获得相应的三种MCF-7细胞株，油红O染色观察细胞分化状态。结果20μmol／L TPA处理MCF-7-N1（稳定转染pEGFP-N1载体的MCF-7细胞）、MCF-7-JWA（稳定转染pEGFP—N1-JWA载体的MCF-7细胞）、MCF-7-JWA-1、MCF-7-JWA-2、MCF-7-JWA-1＋2细胞2d后，油红O染色阳性细胞百分比分别为48％、67％、69％、67％、70％。与MCF-7-N1相比，TPA诱导MCF-7-JWA、MCF-7-JWA-1、MCF-7-JWA-2、MCF-7-JWA-1＋2细胞分化率（油红O染色阳性细胞百分比）显著升高（P〈0．05），但MCF-7-JWA、MCF-7-JWA-1、MCF-7-JWA-2、MCF-7-JWA-1＋2细胞分化率，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论稳定转染JWA能增强TPA诱导的MCF-7细胞分化；JWA编码区PKC磷酸化位点突变并不影响TPA诱导MCF-7细胞分化，可能存在其他的分子机制。     

蛋白激酶C对小儿心衰作用的研究进展

蛋白激酶C家族作为第二信使在多条信号通路中发挥着重要作用,具有广泛的生物学效应.与细胞增殖、分化、凋亡、心肌肥大、心室重塑等有着密切联系.近几年国外有关蛋白激酶C与心血管疾病的相关报道日见增多,有关蛋白激酶C的研究越发受到人们的关注.该文就蛋白激酶C在心血管系统的研究进展作以介绍.     

氢醌对人L-02肝细胞泛素连接酶Rad18表达的影响

目的 研究氧醌(hydroquinone,HQ)对人L-02肝细胞中泛素连接酶Pad18表达的影响,探讨Rad18在HQ所致肝细胞毒性中的作用及其可能机制.方法 将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 μmol/L)的HQ作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率;用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况;实时荧光定量PCR技术检测Rad18在mRNA水平上的表达;Western blot方法检测Pad18在蛋白质水平上的表达.结果 在0-80 μmoFL的范嗣内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响,当染毒剂量超过160 μmol/L时,细胞存活率(79.20%)明显下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).随着 HQ作用浓度的升高,L-02肝细胞的Olive尾矩也逐渐增加,呈线性正相关关系(r=920,P<0.01).在HQ染毒剂量低于40μmol/L的范围内,Rad18在mRNA和蛋白质水平上的表达均有随着剂量的增加而增加的趋势;当HQ的剂量超过40 μmol/L时,Pad18在mRNA水平上的表达继续增加,而其在蛋白质水平上的表达则无明显变化.结论 HQ可使L-02肝细胞的Rad18表达增加.