血清肌酐参考方法的建立及其在正确度调查中的应用

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定人血清肌酐的参考方法,并运用于临床实验室正确度调查新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法按照国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)推荐方法,建立本实验室肌酐参考方法,利用参考物质SRM909c及RELA比对样本考察所建方法的精密度与准确度,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度调查新鲜冰冻血清肌酐靶值的确立。结果参考方法测量参考物质SRM909c相对偏移为0.69%,测量不精密度2%,初步验证了方法的准确度和精密度。正确度调查样本201411、201412、201421、201422酶法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为14.97%、-2.77%、-1.37%、-1.92%;苦味酸法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为21.39%、2.10%、6.22%、2.38%。除201411样本(为低浓度样本)外,其余样本不同常规分析系统测定的血清肌酐浓度与参考方法赋值结果的相对偏移均不超过8%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清肌酐的方法精密度、准确度均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望在上海地区临床实验室正确度计划中发挥一定作用,并建议临床实验室重视低浓度下肌酐测量的准确度和一致性。     

血清尿酸测定的基质效应

目的检测21种样本(血清及制备物)的尿酸水平,评价其对13种尿酸常规检测系统的基质效应。方法根据卫生行业标准WS/T356-2011,以同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)为比对方法,将不同厂商生产的13种尿酸检测试剂盒(均为酶法)分别与日立7180全自动生化分析仪组成常规检测系统,并以此为评价方法。样本包括4种校准品、5种室间质量评价(EQA)样本、6种质控品、3种制备物(1种猪血清和2种水溶液制备物)、1种美国国家标准与技术研究院(NIST)的标准参考物质(SRM)909c、2种国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)检验医学参考实验室外部质量评价计划(RELA)样本,共计21种。用比对方法和评价方法分别测定40份新鲜冰冻血清和上述21种样本。将比对方法和评价方法尿酸测定结果进行直线回归分析,求得Y预测值双侧95%可信区间,评价血清及制备物的基质效应。结果 21种评价样本中有5种基质为新鲜血清或冻干血清的样本(2种EQA正确度验证血清、2种RELA样本和SRM 909c)在所有常规检测系统中均未观察到基质效应。2种校准品(朗道和迪瑞)仅在1种常规检测系统中有基质效应。5种EQA样本中除用于正确度验证的新鲜血清样本外,其他冻干血清样本在较多常规检测系统中存在基质效应。6种质控品中有4种在所有常规检测系统中无基质效应,2种高值质控品显示负基质效应。结论新鲜血清基质样本是可靠的检测样本,可在标准物质制备、质控品制备和EQA中使用。某些校准品在非配套系统中可能存在基质效应而产生校准偏差,因此在使用这些校准品前最好经过基质效应评价或方法验证。     

血清葡萄糖参考方法的复现及一种避免校准品基质效应的赋值方法

目的 根据国际医学检验溯源联合委员会(JCTLM)公布的血清葡萄糖参考测量程序复现血清葡萄糖参考方法,研究不具备互换性的水溶液校准品作为工作校准品时的赋值方法,以此实现对常规测量方法的量值传递。方法 通过测定2022年RELA-A、B及有证参考物质SRM965b Level1～4对参考方法的精密度和正确度进行评估。首先,将参考方法测定样本浓度值与常规方法测定样本的信号拟合成直线方程。再把常规方法测定工作校准品的信号值代入方程中计算出工作校准品的浓度,并以样本比对的方式对工作校准品的赋值进行验证。结果 葡萄糖标准曲线方程为：Y=0.049 63X+0.047 93,R²=1.000 0;测量样本的不精密度(CV)小于1.5%;测量SRM965b Level1～4偏倚均在±1.5%内;参考方法测定样本的浓度值与常规方法测定样本的信号值拟合方程为Y=500.74X-82.328,R²=0.999。校准后的常规方法与参考方法同时测定49例样本,回归方程为Y=0.994 5X+0.023,R²=0.999 5。结论 复现了血清葡萄...     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清肌酐

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的候选参考方法.方法 以[2H3]肌酐为内标,用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质,用氯仿纯化上清液,用液相色谱串联质谱分离测定,以包括法定量.结果 血清肌酐测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%(范围0.52%～0.61%)、0.43%(范围0.11%～0.59%)和0.73%(范围0.62%～0.83%).加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%.分析两种参考物质SRM909b和SRM 967b,测定结果与认定值的偏差小于0.4%.结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清肌酐的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清肌酐测定的参考方法.     

血清尿酸参考测量程序的优化及其在常规系统中的应用

目的 优化血清尿酸参考测量程序(简称参考方法),为尿酸常规测量系统的建立提供参考。方法 建立美国临床化学协会(AACC)推荐的血清尿酸参考方法,并进行优化(离心40 min后再次离心15 min),采用美国国家标准和技术研究院(NIST)标准品SRM 909C和国际比对样本RELA20B、RELA21A进行正确度验证。通过高、中、低值临床剩余血清样本验证精密度。配置6个浓度梯度进行线性评估。采用优化后的参考方法和临床常规方法同时测量40份单人份血清样本,将2种方法检测结果进行回归分析。根据美国临床实验室标准化学会(CLSI)EP14-A3文件要求对常规方法使用的校准品进行互换性分析。比较优化前后尿酸检测结果。结果 尿酸参考方法优化前后SRM 909C、RELA20B、RELA21A的测定结果均在国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)等效限范围内(±3.25%),SRM 909C优化前后的测量结果均在其证书范围内[(278.57±5.95)μmol/L]。优化后的重复性明显提高,实验室内精密度虽然改善不明显,但其低值精密度有很大改善,达到实验室对精密度的要求[变异系数(CV)<2...     

总蛋白改良参考方法的建立及其用于临床检测结果的溯源性研究

目的建立测量总蛋白(TP)参考方法,评价不同实验室TP测定结果的溯源性。方法参照美国疾病控制与预防中心推荐的参考方法及相关文件,建立37℃温浴10min的总蛋白参考方法。根据美国临床实验室标准化协会系列文件对方法的精密度、正确度、线性范围等性能进行评价。应用该参考方法对新鲜血清进行赋值作为校准品校准广州21家实验室,比较校准前、后赋值血清校准品、血清样本测定结果间的偏移,进行检验结果的可比性评价。结果改良参考方法的精密度评价样本浓度为55.48、88.68g/L的CV分别为0.56%、1.23%,标准参考物质909C与靶值的偏移为1.76%,分析测量范围上限128.69g/L。与参考方法测量结果比较,赋值血清校准品校准前平均偏移为6.38%,校准后降为1.86%,样本血清1、2校准前偏移分别为6.04%和8.71%,校准后降为-1.61%、-0.13%。结论改良的双缩脲法测量TP方法性能好,应用参考方法对新鲜血清进行赋值能够实现不同检测系统结果的溯源性。     

基于火焰原子发射光谱法血清钠离子候选参考方法的建立

目的建立基于火焰原子发射光谱法的血清钠离子候选参考方法并评估其基本性能。方法使用钠离子国家标准物质配制标准曲线校准血清钠离子候选参考方法,用国际标准物质909C评估方法的正确度,用利德曼公司两浓度工作校准品评估方法的精密度,通过参加2016年国际参考实验室外部质量评估计划(Rela)进一步验证方法的性能。结果钠离子标准曲线线性方程为Y=0.001 240 7 X+0.006 685 7,r~2=0.999 2;正确度评估结果为偏移-0.53%;利德曼公司高低两浓度工作校准品的总不精密度分别为0.57%和1.23%,两者均小于1.50%;Rela结果在等效限范围内。结论基于火焰原子发射光谱法的血清钠离子候选参考方法建立成功,为血清钠离子试剂盒的量值溯源提供了保障。     

新成生物尿酸检测系统溯源性方案探讨

目的建立新成生物尿酸检测系统的溯源性,提高用户最终检测结果的准确性,为检测结果互认提供条件。方法依据《GB/T 21415-2008/ISO 17511:2003》中的国际标准溯源链式图自建新成生物溯源流程图;购买参考物质NIST SRM 909b,首先将厂商工作校准品溯源至参考物质,然后将产品校准品溯源至厂商工作校准品,并计算合成不确定度,完成新成尿酸产品校准品的量值溯源。结果通过测定临床新鲜血清标本进行临床比对,确保参考物质具有互通性,同时采用SPSS17.0进行统计学分析,以97%的预测区间和检测项目1/4CLIA′88总允许误差为标准[3],达到量值传递验证要求,进一步确定不确定度,完成量值溯源工作。结论新成生物自建溯源流程成功对产品校准品进行了赋值,实现了产品校准品的溯源,提高了新成试剂检测结果的准确性。     

尿素参考方法建立及在正确度验证中的应用

目的建立同位素稀释气相色谱串联质谱(isotope dilution gas chromatography tandem mass spectrometry,ID-GC/MS)测定人血清尿素(Urea)参考方法,并用于临床实验室正确度验证新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法参照国际检验医学溯源联合委员会推荐方法,建立本实验室Urea参考方法,采用美国国家标准和技术研究院标准参考物质(standard reference material,SRM)909c及国际临床化学协会提供的比对样本2014RELA-A和2014RELA-B考察所建方法的精密度与准确性,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度验证新鲜冰冻血清Urea靶值的确立。结果参考方法测量SRM909c相对偏移为-0.25%,2014RELA-A和2014RELA-B测定结果与靶值的相对偏移分别为0.00%、-0.10%,测量不精密度≤1.5%,验证了方法的准确性和不精密度。以实验室检测结果均值为靶值,允许总误差8%为标准评价,正确度调查样品201411、201412、201511、201512的不合格率分别为4.17%、1.39%、0.00%、1.59%;若以参考方法定值结果为靶值,则正确度调查样品不合格率分别为11.11%、1.39%、1.59%、3.17%。结论建立的ID-GC/MS测定血清Urea参考方法精密度、准确性均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望用于上海地区临床实验室正确度验证计划。     

天门冬氨酸氨基转移酶“改良参考方法”的建立及其用于测定结果的可比性研究

目的应用不含磷酸吡哆醛的参考方法评价不同实验室间天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定结果的可比性。方法参照国际检验医学溯源联合会（JCTLM）推荐的参考方法及日本临床化学会相关文件,建立不含磷酸吡哆醛的AST参考方法。根据美国临床实验室标准化协会（CLSI）系列文件对该方法的精密度、正确度、线性范围等性能进行评价。应用该参考方法对新鲜血清进行赋值作为校准品校准广州地区10家实验室的常规检测系统,比较校准前、后新鲜血清、能力验证样本以及市售制备物质测定结果间的偏倚,进行检验结果的可比性评价。结果改良参考方法的批内不精密度〈1%,总不精密度〈2%;检测日本临床化学会酶参考品结果均在其不确定度允许范围内,参加参考实验室网络赋值计划测定结果与均值比较在等效限内。改良AST参考方法分析测量范围上限为413.6 U/L。校准前新鲜血清测定结果与参考方法测定结果之间偏倚〉20%的所有11个测定结果中,有10个测定结果来源于用理论K值计算酶活性的检测系统;校准前新鲜血清组最大偏倚为-25.0%,平均偏倚为9.3%;使用改良参考方法定值的酶校准品校准后,最大偏倚降为12.3%,平均偏倚降为2.1%。而能力验证样本和市售制备物中AST测定结果的平均偏倚在校准前后则变化不大,市售制备物组平均偏倚反而略有升高。结论应用参考方法定值的新鲜血清作为校准品进行校准是实现不同检测系统检验结果一致性和可比性的有效途径,非新鲜血清样本存在不同程度的基质效应。     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定人血清尿酸

目的建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC/MS/MS）测定人血清尿酸的候选参考方法。方法用[1,3]1-5N2尿酸作内标,与一定量的血清充分混匀,加入等量乙腈沉淀血清蛋白并提取尿酸,氯仿纯化上清液后用液相色谱串联质谱（LC/MS/MS）分离测定。优化LC/MS/MS的色谱条件,评价该法的精密度、回收率和偏倚,并计算不确定度。结果对3个浓度水平的室间质量评价用质控血清测定3批,批内、批间和总变异系数（CV）的均值（范围）分别为0.54%（0.44%-0.69%）、0.66%（0.45%-0.79%）和0.86%（0.66%-1.02%）。加样回收试验回收率范围为98.38%-102.64%。美国国家标准与技术研究所（NIST）标准物质SRM 909b-Ⅰ、Ⅱ的测定均值与靶值的偏倚分别为0.04%和0.25%。3种质控血清的相对扩展不确定度分别为1.80%、2.19%和2.04%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清尿酸的方法精密、准确,有望作为血清尿酸测定的参考方法。     

Determination of serum glucose by isotope dilution mass spectrometry: candidate definitive method.

We report a rather simple method to determine glucose concentration in serum, using isotope dilution mass spectrometry and [13C6]glucose as internal standard. The procedure involves a single step of sample purification and the conversion of the analyte into its aldononitrile pentaacetate. The between-day and within-day contribution to total variance for a single measurement was determined by assaying Standard Reference Material (SRM) 909 serum. The method was then applied to measurement of glucose concentration in three lyophilized sera: SRM 909 and two other commercially available sera. In the two studies, the concentration of SRM 909 serum was found to be 0.8% above and 0.3% below the reported value (6.25 mmol/L), respectively; the overall coefficient of variation for determinations in all sera ranged from 0.37% to 0.56%. The precision and the accuracy of the method satisfy the requirements for a Definitive Method.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清总甘油

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油的方法.方法 以[13C3]-甘油作内标,用氢氧化钾异丙醇溶液水解血清甘油酯为游离甘油,将游离甘油转化为苯甲酸酯,用同位素稀释液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)分离检测,用标准曲线法定量.结果 甘油/内标峰面积比与甘油浓度(0.565～4.517 mmol/L)线性相关系数大于0.999 9;测定不同浓度血清总甘油批内变异系数(CV)平均为0.52%(范围0.21%～2.62%),总CV平均为1.15%(范围0.62%～2.00%);分析国际和国家标准物质,测定值与认证值的偏倚小于1%(-0.20%～1.06%).结论 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油方法,方法特异、精密、准确,可望用作血清总甘油测定参考方法.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清葡萄糖

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清葡萄糖的候选参考方法.方法 以[~(13)C_6]葡萄糖为内标,用重量法准确地与血清混合,除去蛋白后在碱性条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮反应,用LC/MS/MS测定葡萄糖和内标衍生产物,以包括法定量.结果 血清葡萄糖测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.36%(范围0.28%-0.42%)、0.47%(范围0.20%-0.67%)和0.61%(范围0.42%-0.76%).加样回收试验的回收率范围为99.0%-100.9%.分析参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的平均偏差为-0.20%(范围-0.39%-+0.11%).结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清葡萄糖的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清葡萄糖测定的参考方法.     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。     

Pilot study for the standardization of insulin immunoassays with isotope dilution liquid chromatography/tandem mass spectrometry

BACKGROUND: An international working group convened by the American Diabetes Association (ADA) called for a reference measurement procedure for use in a trueness-based standardization project of insulin immunoassays. In view of this demand, we conducted a pilot study to investigate the feasibility of such a standardization project with our isotope dilution-liquid chromatography/tandem mass spectrometry (ID-LC/tandem MS) procedure. METHODS: We evaluated the precision, accuracy, and limit of quantification (LoQ) of the ID-LC/tandem MS procedure by use of insulin-free serum supplemented with insulin to give 3 pools with concentrations of 0.0796, 0.769, and 5.56 microg/L. We conducted a pilot method comparison study with 4 immunoassays and 80 samples from fasting and glucose-stimulated patients. RESULTS: The within-run and total imprecision (CV) ranged from 3.2% to 6.3% and from 4.9% to 12.1% (listing sequence from the high to the low pool). The recovery from supplemented insulin-free sera ranged from 101.8% to 104.1%, and the LoQ was 0.07 microg/L (12 pmol/L). Weighted Deming regression and correlation analysis of the method-comparison data showed considerable between-assay variation for the immunoassays but, with the exception of one assay, excellent correlation with ID-LC/tandem MS. Recalibration of the immunoassay results considerably reduced the between-assay variation. Moreover, after recalibration, 3 of the 4 assays fulfilled the total error specification of 32% proposed by the ADA Workgroup. CONCLUSIONS: Recalibration of insulin assays by regression equations established from method comparison with ID-LC/tandem MS can result in successful standardization and fulfillment of the total error criterion proposed by the ADA Workgroup.     

Feasibility of standardization of serum C-peptide immunoassays with isotope-dilution liquid chromatography-tandem mass spectrometry

BACKGROUND: Serum C-peptide concentrations reflect pancreatic function in different clinical and diagnostic settings; however, the utility of C-peptide testing is limited by the lack of standardized commercial immunoassays. Standardization can best be done by split-sample comparison with a hierarchically higher reference measurement procedure with a set of native sera. For serum peptides, isotope-dilution liquid chromatography-mass spectrometry (ID-LC/MS) is recommended as a reference measurement procedure. METHODS: We evaluated the analytical performance characteristics of an ID-LC/tandem MS procedure for measurement of serum C-peptide after a 2-step solid-phase extraction. To investigate the feasibility of this procedure for use in standardization, we also performed a method comparison with 3 representative commercial assays. RESULTS: The ID-LC/tandem MS procedure showed maximum within-run, between-run, and total CVs on dedicated sera (C-peptide concentrations, 1.6 and 4.0 mug/L) of 2.1%, 2.5%, and 2.9%, respectively; an accuracy of 94.6%-104.1%; a minimum trueness of 98.1% (95% confidence interval, 96.2%-100.0%), and limits of quantification and detection of 0.15 and 0.03 mug/L, respectively. Deming linear regression analysis of the method-comparison data showed that the immunoassays correlated well with ID-MS and were specific, but lacked intercomparability and trueness. We propose that the deficiencies can be resolved by recalibration on the basis of the method comparison. CONCLUSIONS: The ID-LC/tandem MS procedure is suitable for specific and accurate measurement of basal and stimulated serum concentrations of proinsulin C-peptide fragment 33-63 and is suitable for use in standardization of C-peptide immunoassays.     

A candidate reference method for the determination of uric acid in serum based on high performance liquid chromatography, compared with an isotope dilution-gas chromatography-mass spectrometer method

A method based on isocratic high performance liquid chromatography (HPLC) with UV detection at 292 nm is proposed as a candidate reference method for the determination of uric acid. Data obtained by this method are compared with those from an isotope dilution-gas chromatography-mass spectrometric method (ID-GC-MS), using [1,3-15N2]uric acid as internal standard and selected mass detection at m/z = 456 and m/z = 458. The inaccuracy of the ID-GC-MS method is maximally 0.4% for NBS-SRM-909 control sera with a concentration of 483 mumol/l. The coefficient of variation between days is 0.26%-0.80% and 0.37-0.90% for 14 control sera from other suppliers. The maximum bias of the HPLC method is 0.6%, and the coefficient of variation between days is 0.31%-0.65% for NBS-SRM-909 control sera. The coefficient of variation between days for the other 14 control sera tested is 0.35%-0.66%. Comparison of the HPLC method with the reference ID-GC-MS method resulted in a coefficient of correlation of r = 0.9998 (n = 14). The concentration of uric acid in the tested control sera ranged from 160 to 624 mumol/l.     

基于尿酸酶-钯纳米粒子的比色分析定量检测血清尿酸的方法建立及初步应用评价

目的 建立基于尿酸酶-钯纳米粒子(M CA-Pd N Ps)的比色分析法进行临床血清尿酸的定量检测.方法 应用比色分析方法检测吸光度值,通过专一性试验、线性范围确定、重复性试验和回收试验等对建立的检测体系进行方法学评价,并检测40份不同尿酸水平的临床血清标本,与生化分析仪结果进行比较.结果 检测体系对尿酸具有较高的特异...