实时荧光定量聚合酶链反应技术检测解脲脲原体生物群的研究

目的建立解脲脲原体生物群Taqman荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法根据解脲脲原体生物群MBA基因差异,分别设计并合成引物和探针。优化引物和探针浓度及试验条件,并进行试验的灵敏度、特异性和重复性评价。结果生物1群最适缓冲体系:25μL反应体系中包含2.5U Taq酶,Mg2+2.5mmol/L,上、下游引物0.1pmol/L,TaqMan探针0.2pmol/L,模板DNA 2μL。生物2群最适缓冲体系:25μL反应体系中包含2.5UTaq酶,Mg2+2.5mmol/L,上、下游引物0.2pmol/L,TaqMan探针0.3pmol/L,模板DNA2μL。PCR反应条件:95℃2min;95℃10s;55℃(检测荧光信号)20s,循环40次。该方法线性范围在1.0×102～8 copy/mL之间,检测限达到100～200copy/mL,特异性达到100%,CV值为2.5%。结论 本研究建立的TaqMan荧光PCR检测解脲脲原体生物群线性范围宽、灵敏度高、特异性及重复性好,能够快速进行解脲脲原体生物群检测。     

实时荧光定量PCR检测解脲脲原体1270例分析

解脲脲原体（UU）是正常人生殖道可以分离出的一种支原体。由于它与原因不明的不孕、流产以及死胎等有一定的关系，还可导致非淋菌性尿道炎、宫颈炎、盆腔炎、前列腺炎、输卵管炎等疾病的发生。人一但被解脲脲原体感染后常缺乏特异性症状，极易形成隐匿性感染，使临床诊断相当困难。我室采用实时荧光定量PCR技术（聚合酶链反应）检测UU—DNA（解脲脲原体脱氧核糖核酸）计1270例，现报告如下。     

应用荧光探针定量PCR检测生殖道沙眼衣原体和解脲脲原体

目的　了解淋病奈瑟菌性尿道炎 (GU)和非淋病奈瑟菌性尿道炎 (NGU)患者同时感染沙眼衣原体(Ct)和解脲脲原体 (Uu)的状况。方法　应用荧光探针定量聚合酶链反应 (PCR)对 198例NGU患者和 10 2例GU患者分别进行Ct和Uu检测。结果　NGU患者Ct、Uu的感染率分别为 2 7.3%、18.2 % ,二者均感染的为8.1% ;GU患者Ct、Uu的感染率分别为 4 4 .1%、38.2 % ,二者均感染的为 15 .7%。结论　GU患者中伴Ct、Uu感染的比NGU患者更多见。     

聚合酶链反应检测解脲脲原体的临床应用

２３８例非淋菌性尿道炎的阴道分泌物作解脲脲原体ＰＣＲ检测与培养法比较，结果ＰＣＲ检出率为４９．６％（１１８／２３８），培养检出率为３９％（９３／２３８）。通过６０例治疗追踪，四环素－周疗程后，培养均转阴，而ＰＣＲ尚有９例阳性，二周疗程后ＰＣＲ仍有３例最性，三周疗程后才全部转阴性。     

聚合酶链反应检测解脲脲原体的研究

鉴于临床迫切需要建立特异、敏感、快速的实验诊断方法，从解脲脲原体（ＵＵ）基因组保守区域选择一对寡聚核甘酸引物建立检测ＵＵ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增产物片段为１８６ｂｐ，同时采用ＰＣＲ法和培养法对５２份孕妇宫颈分泌物检测。结果ＰＣＲ检出率（７５％）明显高于培养法检出率（２９％），经统计学配对计数资料χ￣２检验有显著性差异（Ｐ＜０．０２５）。研究表明：ＰＣＲ具有特异、敏感、快速等优点，是临床检测ＵＵ切实可行的方法。     

聚合酶链反应-单链构象的多态性技术在解脲脲原体生物群和基因型鉴定中的应用

本研究通过对解脲脲原体 (UU)的 1 4个标准血清型的聚合酶链反应 单链构象的多态性 (PCR SSCP)电泳分析 ,直接鉴定UU生物群和基因型。一、对象和方法1 .对象 :(1 )标准菌株 :UU标准菌株 1～ 1 4型由广东省江门市皮肤性病防治研究所转赠。 (2 )临床菌株 :6 0株耐药性UU临床菌株均来自我科确诊为非淋菌性尿道炎 /宫颈炎患者的泌尿生殖道 ,经液体培养和固体培养鉴定为UU。其中男性 1 2例 ,女性 4 8例。年龄 2 0～ 6 5岁。2 .试剂与仪器 :UU液体和固体 (A7琼脂 )培养基均购自生物梅里埃公司 ;(PCR)扩增仪 (PE2 4 0 0型 )为美国PE公…     

快速免疫法在检测泌尿生殖道解脲脲原体中的应用

目的 应用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术这一快速免疫法检测解脲脲原体，用于非淋茵性尿道炎的诊断和治疗。方法 用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术对163例男性非淋茵性尿道炎患者的尿道分泌物进行了解脲脲原体检测，以拭子培养法为金标准判断该方法的检测效果。结果 聚合酶链反应结合反向杂交技术的敏感度为100％，特异度为97．44％，与培养法相比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 聚合酶链反应结合反向杂交技术是一种具高敏感性和特异性的男性泌尿生殖道解脲脲原体的检测方法，值得临床推广使用。     

五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较

筛选解脲脲原体尿素酶基因上的不同引物及扩增模板式，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应扩增ＵＵ１－１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程序分析引物序列与ＰＣＲ敏感性间的关系。结论引物自由能谱之差影响着ＰＣＲ扩增的敏感性ＵＵ１＋Ｂ引物扩增敏感性最佳。     

五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较

目的筛选解脲脲原体（ＵＵ）尿素酶基因上的不同引物及扩增模板区，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＵＵ１～１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程序分析引物序列与ＰＣＲ敏感性间的关系。结果不同种的引物对１４个血清型的扩增结果有差异。引物Ｕ１＋Ｂ、Ｕ１＋２、ＵＡ＋Ｂ、Ｕ２＋Ａ及Ｕ１＋Ｃ对１４个血清型的检出率分别为１００％、８６％、７８％、６４％及６４％。结论引物自由能谱之差影响着ＰＣＲ扩增的敏感性。ＵＵ１＋Ｂ引物扩增敏感性最佳     

荧光定量聚合酶链反应检测男性尿道炎沙眼衣原体和解脲脲原体感染

沙眼衣原体（CT）和解脲脲原体（UU）是引起人泌尿生殖道感染的主要病原体，近年来由此引起的非淋球菌尿道炎增加较快，成为较常见的性传播疾病。我们应用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）方法犤１犦对３２５例男性尿道炎患者的尿道分泌物进行了检测，取得了较好的效果。结果报道如下。１材料和方法１．１检测对象：本院性病专科门诊和泌尿外科门诊疑为沙眼衣原体和解脲脲原体感染的男性尿道炎患者，共３２５例，年龄８～６０岁，平均年龄３２岁。１．２标本采集：用特制消毒棉签伸入尿道约２cm处，旋转几周，停留数秒，以获取上皮细胞…     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体和解脲脲原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６例非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）和１２８例淋病性尿道炎（ＧＵ）患者进行沙眼衣原体（Ｃｔ）和解脲脲原体（Ｕｎ）检测，其中ＮＧＵ中Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为２６．３％、１７．９％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率为７．７％；ＧＵ患者Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为４３．８％、３３．６％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率的为１６．４％。     

新型荧光定量PCR检测孕妇生殖道解脲脲原体方法的建立

目的 探讨建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测解脲脲屏体（Uu）的可行性及价值。方法 根据Uu UreA基因序列设计合成引物和自身淬灭引物,采用基因克隆技术,将UreA基因片段插入到载体pMD18-T,以此作为标准品。优化PCR条件,建立以自身淬灭引物技术为平台的实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法,并对所建立的方法进行初步方法学评价。结果 成功构建了重组质粒pMD18-T-UreA;建立了以自身淬灭探针技术为基础的实时荧光定量PCR方法,其线性检测范围为10^1～10^9copies／μl;灵敏度为10copies／μl;重复性实验批内CV为2．35％,批间CV为3．68％,天间CV为4．92％;特异性好;通过初步临床应用发现,所建立的FQ-PCR方法与经典的培养方法相比,不仅能实时监测反应进程、绝对定量和快速检测,且检出率显著高于培养方法。结论自身淬灭探针荧光定量PCR方法检测Uu具有快捷、敏感、廉价等优点,可在临床诊断中应用。     

荧光探针定量聚合酶链反应检测孕妇生殖道解脲脲原体

解脲脲原体 (ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ ,ＵＵ)是非淋菌性尿道炎的重要病原体 ,常寄居在妇女生殖道 ,通常无症状。在孕期ＵＵ感染率明显增高 ,可达 40 %～ 80 % ,约有 2 0 %可引起孕期各种并发症 ,也可在宫内通过胎盘或分娩时经产道传播给胎儿或新生儿 ,引起各种围产儿异常[1 3] 。我们对太原地区孕妇ＵＵ感染状况及其检测方法作了比较分析 ,报告如下。一、材料和方法1 标本来源 :自 1998年 1月～ 1999年 12月在山西省妇幼保健院妇产科门诊和住院的孕妇 749名 ,年龄 2 1～ 42岁。用无菌棉拭子取宫颈分泌物 ,于 2ｍｌ生理…     

实时荧光核酸恒温扩增技术在解脲脲原体检测中的应用

目的应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)对不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子及尿液进行解脲脲原体(UU)检测,并评价其敏感性和特异度。方法对452例不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子标本,采用SAT检测法、培养法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)进行UU检测,同时再对同一患者的尿液标本进行SAT检测,根据实验结果评估SAT在拭子及尿液标本UU检测中的灵敏度和特异度;同时UU培养阳性的标本经过临床UU规范治疗后,仍采用上述方法对患者进行UU复查,根据实验结果评估SAT在UU检测中的判断预后效果。结果初检时与UU培养结果作比较,UU-SAT拭子标本的检测灵敏度为97.1%(170/175),特异度为97.8%(271/277),差异无统计学意义(χ2=0.010 2,P=0.919 7);UU-SAT尿液标本的检测灵敏度为96.0%(168/175),特异度为98.9%(274/277),差异无统计学意义(χ2=0.163 5,P=0.686 0)。结论 SAT检测泌尿生殖道患者拭子及尿液UU检测具有很高的灵敏度和特异性,同时又有很好的判愈效果,为UU的临床实验室诊断提供了新的检测手段。     

初培养结合PCR检测精液解脲脲原体感染的临床应用

目的探讨初培养产物结合PCR方法检测精液解脲脲原体感染应用价值。方法选取120例不育症患者的精液,分别用PCR、培养加药敏试剂盒、初培养产物结合PCR的方法检测解脲脲原体,并与分离培养结果相比较。结果120例精液分离培养出62例解脲脲原体,使用PCR法检测出30例阳性、用培养加药敏试剂盒检测出65例阳性、用初培养产物结合PCR技术检测出62例阳性,以上三种方法与分离培养结果的总符合率分别为73.3%、97.5%和100%。结论初培养产物结合PCR是一种检测精液解脲脲原体的可行性方法。     

荧光定量PCR与常规PCR检测沙眼衣原体、解脲支原体的比较

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与常规聚合酶链反应检测沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)的敏感性差异。方法随机抽取临床送检的1060例标本,分别用两种方法检测CT、UU。结果FQ-PCR检测CT、UU与常规PCR比较,有显著性差异,其阳性检出率显著高于常规PCR(χ2=26.2及χ2=126.1P<0.01)。随着CT、UU基因拷贝数的降低,常规PCR法的假阴性率愈来愈高。结论荧光定量PCR检测CT、UU快速、灵敏,可以准确定量,优于常规PCR法。     

荧光定量聚合酶链反应在同时检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲脲原体中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)和解脲脲原体(UU)检测中的应用价值及NG、CT、UU的感染状况。方法采用FQ-PCR同时检测328例疑有泌尿生殖道感染患者的NG、CT和UU,并与培养法做比较。结果 FQ-PCR对NG、CT和UU的阳性检出率高于培养法。阳性标本定量均值分别为NG 1.1×108拷贝/mL、CT 1.2×107拷贝/mL、UU 3.9×106拷贝/mL。UU的阳性率为60.67%,CT为6.40%,NG为3.05%;CT+UU合并感染的阳性率为4.57%,NG+UU为1.83%,NG+CT为0.61%,总阳性率为70.12%(230/328)。结论 FQ-PCR灵敏度高、特异性强,可对NG、CT和UU进行定量测定,对三者感染的诊断具有重要的临床意义。     

荧光定量PCR与常规PCR检测沙眼衣原体、解脲支原体的比较

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与常规聚合酶链反应检测沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)的敏感性差异.方法随机抽取临床送检的1060例标本,分别用两种方法检测CT、UU.结果FQ-PCR检测CT、UU与常规PCR比较,有显著性差异,其阳性检出率显著高于常规PCR (x2=26.2及x2=126.1 P＜0.01).随着CT、UU基因拷贝数的降低,常规PCR法的假阴性率愈来愈高.结论荧光定量PCR检测CT、UU快速、灵敏,可以准确定量,优于常规PCR法.     

应用荧光探针定量PCR检测生殖道沙眼衣原体和解脲脲原体

目的 了解淋病奈瑟菌性尿道炎(GU)和非淋病奈瑟菌性尿道炎(NGU)患者同时感染沙眼衣原体(Ct)和解脲脲原体(Uu)的状况。方法 应用荧光探针定量聚合酶链反应(PCR)对198例NGU患者和102例GU患者分别进行Ct和Uu检测。结果 NGU患者Ct、Uu的感染率分别为27．3％、18．2％，二者均感染的为8．1％；GU患者Ct、Uu的感染率分别为44．1％、38．2％，二者均感染的为15．7％。结论 GU患者中伴Ct、Uu感染的比NGU患者更多见。     

聚合酶链反应检测解脲脲原体的研究

鉴于临床迫切需要建立特异、敏感、快速的实验诊断方法，从解脲脲原体（ＵＵ）基因组保守区域选择一对寡核甘酸引物建立检测ＵＵ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增产物片段为１８６ｂｐ。同时采用ＰＣＲ法和培养法对５２份孕妇宫颈分泌物检测。研究表明：ＰＣＲ具有特异、敏感、快速等优点，是临床检测ＵＵ切实可行的方法。