检测结核分枝杆菌四种方法的比较

对我院结核病防治所收治的 2 16例肺结核病人分别采用痰涂片法、培养法、ＰＣＲ法进行检验 ,并对检测结果进行分析 ,报告如下。1　材料和方法1 1　观察对象　 2 16例肺结核患者系 1997年 1月至 1999年 12月本院结防所确诊病人 ,其中男 147人 ,女 6 9人。1 2　标本采集　分别留取晨痰、 2 4ｈ痰液和静脉血 2ｍｌ。1 3　仪器和试剂　ＰＥ480型ＤＮＡ扩增仪 ;结核杆菌ＰＣＲ试剂盒 (华美公司 ) ;分枝杆菌培养基 (中科院植物生理研究所 )。1 4　方法　痰涂片法、培养法、ＰＣＲ等方法按常规或试剂说明书进行。2　结果2 1　四种检验方法结果见表…     

提取结核分枝杆菌DNA 3种方法的比较

结核分枝杆菌DNA的制备是PCR扩增的关键。结核分枝杆菌的细胞壁坚韧,裂解困难,一般的裂解剂不易将结核分枝杆菌壁裂解。结核分枝杆菌DNA的制备方法有:经典的酚氯仿抽提法、Triton法、SDS法及胰酶法,应用较多的是后3种快速制备方法,但应用效果的报道不尽相同。为观察3种快速制备     

不同检测手段对结核病诊断价值的比较

比较不同检测手段对结核病的诊断价值。     

非结核分枝杆菌的感染现状与诊断方法研究进展

近年来，随着检测技术的发展与环境的变化，非结核分枝杆菌（NTM）的检出率持续升高，在一些地区甚至超过了结核分枝杆菌(MTB)。NTM能感染人体各部位，其中以肺部感染最多见，称为NTM肺病。由于该病常引起与结核病相似的中毒症状，故常被误诊为结核病。然而两者的治疗方案不同。因此，快速准确地鉴定NTM对疾病的早期诊断和早期治疗十分重要。细菌涂片及细菌培养灵敏度低且耗时长。随着分子诊断技术的发展，实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）、DNA测序、基因芯片技术（GCT）等新兴技术被用于NTM的鉴定。本文主要就NTM的感染现状与诊断方法的研究进展作一综述。     

4种方法比较检测新鲜和陈旧标本中的结核分枝杆菌

我们应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、聚合酶链反应(ＰＣＲ) 4种方法分别检测陈旧标本和新鲜标本中结核分枝杆菌 ,并作比较分析如下。一、材料与方法1 标本来源 :12 0份标本来自 1996年 10月～ 1997年 4月长治医学院附属和平医院传染科结核患者的痰、脑脊液、胸腹水等并置于灭菌青霉素小瓶中。当即对其中 43份标本处理 ,取每份标本的 1/2做抗酸染色、细菌培养、荧光染色、ＰＣＲ检测。其余的 1/2留在容器中放 4℃冰箱 ,直至 1999年10月再用 4种方法检测。2 抗酸染色、细菌培养按实验室常规方法操作。荧光染色试剂金胺 0 罗丹明 ,结核分…     

结核分枝杆菌实验室诊断方法的研究比较

自20世纪60年代起,结核病化学治疗已取代过去消极的“卫生营养疗法”,使新发现的结核病治愈率达到95％以上。但20世纪80年代中期以来,结核病出现全球性恶化趋势,目前,全球大约1／3的人口已感染结核分枝杆菌（MTB）,有2000万活动性结核病患者,每年约有300万人死于结核病,结核病已成为威胁人类健康的一个严重的全球性公共卫生问题［1］。因此,对于结核病的早期诊断尤为重要。结核病的实验室诊断方法有细菌学、免疫学、分子生物学三个大的方面,包含了许多技术,这些技术各有优劣,应该适当地结合互补。本文对将这些实验室诊断方法的特点和优劣势进行简要阐述。     

2种方法检测结核分枝杆菌对10种药物耐药性的比较

目的　探讨应用比例法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性及可比性。方法　用比例法和绝对浓度法分别检测 2 4 0株结核分枝杆菌对异烟肼 (INH)、链霉素 (SM)、乙胺丁醇 (EMB)、利福平 (RFP)、乙硫异烟胺 (TH132 1)、对氨基水杨酸 (PAS)、丁胺卡那 (AN)、卡那霉素 (KM)、氧氟沙星 (OFLX)、卷曲霉素 (CPM)的耐药性。结果　SM、RFP、CPM、PAS、AN、KM绝对浓度法和比例法检出的耐药率无显著性差异 ,而INH、EMB、TH132 1、OFLX用比例法测试耐药率均明显高于绝对浓度法 (P <0 .0 1) ,两法药敏结果INH、SM、EMB、RFP、TH132 1、CPM、AN、KM、OFLX和PAS的符合率分别为 :81.7%、90 .8%、83.8%、97.9%、83.3%、94 .2 %、97.5 %、95 .4 %、83.3%、92 .5 %。结论　比例法和绝对浓度法耐药率的差别主要与选定的药物临界浓度有关。     

分枝杆菌的分子生物学诊断

分枝杆菌生长缓慢,传统方法分离、鉴定和药敏试验需几周或更长的时间,导致诊断与治疗延误。近年来,PCR、探针杂交、DNA测序等分子生物学方法已用于分枝杆菌的直接检测、鉴定以及分析耐药突变,极大缩短了诊断时间。     

4种方法在检测痰内结核分枝杆菌结果的比较分析

目的对结核病临床诊断方法的应用价值进行比较分析。方法对别采用涂片法、免疫磁珠技术分离涂片法（IMS-涂片）、痰培养法、荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对病例组112例和对照组53例痰标本进行检测。结果普通涂片法灵敏度最低为25.00%,其次是IMS-涂片和痰培养分别是39.29%和37.50%,FQ-PCR法的灵敏度为67.86%,明显高于其他方法。结论 FQ-PCR法和IMS-涂片可作为普通抗酸染色法和培养法的重要补充或是互补的方法,对提高检出率,早发现、早治疗极具临床意义。     

结核分枝杆菌检测方法临床应用的对比研究

目的用涂片、聚合酶链反应(PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对169例临床确诊的肺结核患者、可疑肺结核患者和非结核患者痰标本用涂片、PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析。结果 169例痰标本中,痰涂片检查阳性率为7.1%(12/169),PCR检测阳性率为32.54%(55/169);痰涂片、PCR法检测42例临床确诊的肺结核患者痰标本阳性率分别为11.9%(5/42)、57.1%(24/42);检测82例临床可疑肺结核患者痰标本阳性率分别为8.54%(7/82)、37.8%(31/82)。比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(χ2=19.729,P<0.01),检测45例非结核患者痰标本,涂片及PCR检测均为阴性。结论 PCR法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核病检测诊断的有效方法之一。     

3种结核分枝杆菌检测方法的比较研究

目的比较沉淀集菌法、罗氏培养法和聚合酶链反应(PCR)方法检测结核分枝杆菌的临床价值。方法收集2012年6月至2013年5月张家港市第一人民医院临床确诊且经抗结核治疗两月后结核患者的痰标本102份,用以上3种方法进行平行检查。结果 102份标本中,沉淀集菌法检测结果阳性标本92份,阳性率90.19%,罗氏培养法阳性48份,阳性率47.06%,PCR法阳性77份,阳性率75.49%。沉淀集菌法与罗氏培养法的符合率为56.86%,而PCR法与沉淀集菌法符合率为81.37%,与罗氏培养法符合率为61.76%。结论 3种方法联合运用,可弥补单独采用一种方法阳性率低的缺点,从而提高检测的准确度。     

探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变

目的 评价探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的应用价值,为临床检测提供指导依据.方法 613份痰标本于2009年9月至2010年4月收集自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心.结核分枝杆菌H37Rv标准株来源于国家结核病参比实验室.37株包含结核与非结核分枝杆菌的标准盘由中国药品生物制品检定所提供.首先采用梯度稀释的野生型标准株H37Rv DNA考察探针熔解曲线分析法的分析灵敏度,然后用标准盘验证其检测特异性,最后以测序法为对照方法,采用613份结核分枝杆菌的标本评价该方法的临床应用价值.结果 探针熔解分析法可检测到3拷贝/反应,且能特异检测结核分枝杆菌.613份结核分枝杆菌的检测结果显示,符合要求的583份标本的试剂盒检测结果与测序结果完全一致,其中embB306突变菌株数为34株,embB 378-380突变菌株数为23株,embB 406突变菌株数为3株,embB 497突变菌株数为3株.结论 探针熔解分析法检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变特异性好,灵敏度高,能有效地检测临床标本常见乙胺丁醇耐药突变位点,是值得推广的快速检测方法.

Abstract：

Objective To evaluate the potential use of a probe melting analysis (PMA) assay in detecting the embB mutations which confer resistance against ethambutol in Mycobacterium tuberculosis. Methods The analysis sensitivity and specificity of PMA were investigated by detecting a serially diluted H37 Rv DNA and a reference panel from National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Product. Six hundred and thirteen sputum samples were collected from the Xiamen Center for Disease Control and Prevention, Xiamen First Hospital and Center for Zhangzhou Disease Control and Prevention from September 2009 to April 2010. The PMA assay was then evaluated by detecting 613 clinical isolates and the results were compared with the sequencing results. Results The PMA assay could specifically detect Mycobacterium tuberculosis and had a limit of detection of 3 copies per reaction. The assay results with 613 clinical isolates showed that PMA gave a 100% concordance with sequencing in the 583 qualified samples, among which 34 were mutations at embB 306,23 at embB 378-380, 3 at embB 406 and 3 at embB 497. Conclusions PMA assay is a sensitive and specific method enabling efficient detection of common embB mutations causing ethambutol-resistance. The rapidness of this method together with its reliability would facilitate its use in routine testing.     

结核分枝杆菌对氧氟沙星、左氧氟沙星体外耐药监测

目的了解菌阳肺结核患者对氟喹诺酮药物的耐药现状,为临床制定标准化方案提供参考依据。方法选取2008年3月至2009年3月期间天津市海河医院门诊及住院菌阳肺结核病患者119例,对其结核分枝杆菌（MTB）临床分离株做氧氟沙星（OFLX）,左氧氟沙星（LVFX）药物敏感性试验。结果初治患者耐OFLX 10例（14.5%）,耐LVFX 3例（4.3%）;复治患者耐OFLX 30例（60.0%）,耐LVFX 22例（44.0%）;敏感菌耐OFLX 16例（19.0%）,耐LVFX 8例（9.5%）,耐药菌耐OFLX 24例（68.6%）,耐LVFX 17例（48.6%）;单耐药、多耐药、耐多药、严重耐多药耐OFLX分别为2例（40.0%）、10例（66.7%）、7例（77.8%）、5例（83.3%）,耐LVFX分别为2例（40.0%）、6例（40.0%）、5例（55.6%）、4例（66.7%）;氟喹诺酮用药时间≤2周、2周至1月、〉1-3月、〉3-6月、〉6月,耐OFLX分别为2例（33.3%）、4例（36.4%）、7例（50.0%）、9例（100%）、5例（100%）;耐LVFX分别为1例（16.7%）、2例（18.2%）、6例（42.9%）、6例（66.7%）、5例（100%）。结论复治结核病对氟喹诺酮的耐药率较高,耐药结核菌对氟喹诺酮耐药率也明显高于敏感菌,而严重耐多药及耐多药菌株耐药率明显高于其他耐药类型结核病。试管内耐药浓度与耐药率呈负相关。制定标准方案时LVFX优于OFLX。     

结核分支杆菌对阿米卡星的耐药性研究

目的了解阿米卡星对耐药结核分支杆菌是否有效。方法5种不同浓度的抗结核药物培养基内加入结核分支杆菌浓度为0．1mg／mL的菌液0．1mL,4周后观察耐药情况。结果5种抗结核药物不同浓度,对结核分支杆菌有不同的敏感性和耐药性,其中以加入阿米卡星药物抗菌活性良好。结论阿米卡星为二线抗结核药物,对治疗耐药结核分支杆菌有效。     

结核分支杆菌临床分离株耐药性调查与耐多药结核病流行特点探讨

目的调查结核临床分离株的耐药性,探讨多耐药结核病（MDR-TB）流行特点。方法采用匡氏琼脂培养基按比例法测定287株结核菌（56株来自初治病例）对8种抗痨药物的耐药性。结果初治病例菌株和复治病例菌株对异烟肼、利福平、链霉素、吡嗪酰胺高度耐药率分别为1．8％、3．6％、17．9％、0％和74．9％、58．0％、68．4％、32．0％,差异均极显著（P〈0．001）。复治病例MDR株占63．2％,广泛耐药（XDR）株占10％,15．8％的MDR株为XDR株;初治病例无XDR株感染,MDR株占1.8％,极显著低于复治病例MDR株比率（P〈0．001）。结论住院结核病患者MDR株和XDR株感染率高,且主要由获得性耐药产生。DOTS策略仍是我国耐药结核病防治重点。     

西藏地区169例复治失败肺结核病例耐药状况检测

目的 了解西藏地区复治肺结核患者中的结核分枝杆菌对抗结核化学药物的耐药状况,为有效防治肺结核病提供科学依据.方法 收集西藏自治区结核病防治所2000-2005年复治失败病例169例痰标本,用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测分离菌株对4种抗结核药物[链霉素(SM)、异烟肼(INH)、乙氨丁醇(EMB)、利福平(RFP)]的耐药性测定.结果 共检测169株结核分枝杆菌,其中耐药株165株,总耐药率高达97.63%,其中耐多药(所耐药物中含R和H)133例,耐多药率为78.70%.复治失败的耐药率和耐多药率明显高于全国46.50%的水平.对RFP、INH、SM和EMB的耐药率分别为91.12%(154/169)、84.02%(142/169)、75.15%(127/169)和21.30%(36/169).结论 西藏地区属高耐药区,应加强结核分枝杆菌的耐药监测和控制.     

结核分枝杆菌利福平耐药基因的检测

以药物敏感试验为标准，应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析方法对６８例利福平耐药菌株和２０例利福平敏感菌株进行测定，结果８８例结核分枝杆菌均扩增出目标ＤＮＡ条带，１０例非结核分枝杆菌和８例非分枝杆菌未出现目标ＤＮＡ条带，所用引物扩增ｒｐｏＢ基因２１５ｂｐ片段为结核分枝杆菌复合群异性的。     

耐药结核分枝杆菌基因突变分析

目的 探讨结核分枝杆菌耐药表型与基因突变位点之间的相互关系.方法 采用序列特异性引物分别扩增92株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB,异烟肼耐药基因katG、inhA、ahpC,链霉素耐药基因rrs、rpsL,乙胺丁醇耐药基因embB及喹诺酮耐药基因gyrA,SSCP筛选出突变序列,DNA测序分析突变性质.结果 59株利福平耐药株rpoB基因突变检出率94.9%(56/59),以Ser450Trp突变最多;90株异烟肼耐药株中,katG基因突变检出率38.9%(35/90),以Ser315Thr最多,3株检出inhA基因突变,ahpC基因无突变检出;34株喹诺酮耐药株中gyrA基因突变检出率82.4%(28/34),主要为Asp94Gly,其次为Ala90Val;31株链霉素耐药株中,15株检出rrs突变,最常见为A514C和A1041G,10株发生rpsL Lys88Arg突变,总的链霉素基因突变检出率为77.4%(24/31);31株乙胺丁醇耐药株中embB 基因突变检出率19.4%(6/31),主要为Met306Val.结论 耐药结核分枝杆菌耐药情况较为严重,以DNA测序为基础的基因突变分析能快速有效地检测结核分枝杆菌的rpoB、katG、gyrA、rrs、rpsL、embB 等耐药分子标识,显示了西安地区耐药性结核分枝杆菌的突变特点,为结核病的临床诊断和合理用药提供了实验依据.