一氧化氮及caspase-3表达与暴发性肝衰竭细胞凋亡

目的:研究一氧化氮(NO)及caspase-3表达在暴发性肝衰竭(FHF)中与肝细胞凋亡的关系.方法:检测FHF模型小鼠及给予iNOS抑制剂L-NMMA后不同时间肝组织caspase-3表达、血清NO水平、肝组织iNOSmRNA表达及肝细胞凋亡的变化.结果:FHF模型小鼠于4 h时NO表达达高峰,以后逐渐下降,8 h可出现典型的肝细胞凋亡表现,caspase-3表达至最高峰;12 h caspase-3表达较8 h减少,肝细胞坏死和凋亡同时存在.阻断NO后,NO表达为正常水平,caspase-3表达较模型组无显著差异,阻断后8 h亦可见典型的DNA梯形带,12 h亦出现坏死带.阻断NO后肝组织病变较模型组更为严重.结论:在FHF中,拮抗NO作用不能阻断肝细胞凋亡和肝脏生化学及组织学变化,提示单纯应用NO拮抗剂对肝细胞凋亡及肝损伤无保护作用.NO可能抑制caspase-3的表达及肝细胞凋亡的发生.     

离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察电离辐射对caspase-3蛋白表达的影响。方法：采用体外传代培养的小鼠EL-4淋巴瘤细胞为实验材料；采用单克隆抗体免疫荧光标记，FACScan流式细胞仪(FCM)检测蛋白表达的变化；采用PI荧光标记及FCM测定细胞凋亡的变化；量效实验, 观察0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的变化；时效实验, 观察4.0 Gy照射后2、4、8、12、24、48及72 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达的变化。结果：量效实验表明，0.5、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。0.5、1.0及4.0 Gy 照射后24 h EL-4细胞凋亡明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。 时效实验表明，4.0 Gy照射后8、12及24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高, 与同时间点假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.01或P<0.001)。结论：电离辐射可诱导EL-4细胞caspase-3蛋白表达增高。同时诱导EL-4细胞凋亡。     

Caspase-3在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中作用的实验研究

目的探讨一种在天冬氨酸残基后进行裂解的半胱氨酸蛋白酶caspase-3(cystein protease cleaving after an aspresidue,caspase-3);在全脑缺血20min再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中的作用.方法雄性Wistar大鼠182只,体质量(220±20)g,分为对照组(14只)、缺血组(84只)和Ac-DEVD-CHO治疗组(84只),后两组设立8、24、48、72、120、168 h 6个时相点.按Pulsinelli等的方法制作大鼠全脑缺血20min再灌注模型,别于再灌注后上述6个时相点处死取海马组织,对照组施行麻醉及手术,但不缺血,观察72 h后活杀取海马组织,分别测定海马组织胞质(S-100)中caspase-3活性及海马区神经元凋亡情况,分析caspase-3活性与海马区神经元凋亡的关系.结果①海马组织胞质中caspase-3活性在对照组中为0,缺血再灌注后酶活性随时间的推移逐渐升高,至120 h达最高点,168 h则有所下降;Ac-DEVD-CHO治疗后并不能完全抑制酶的活性,但显著降低了各时相点酶的活性(8 h P＞0.05,24～120 h P＜0.01,168 h P＜0.05);②对照组海马中偶见凋亡细胞,缺血再灌注8 h凋亡细胞无明显增加(P＞0.05),24 h凋亡细胞明显增加,120 h达峰值,168 h有所减少,但24～168 h各时相点凋亡细胞数均明显多于对照组(P均＜0.01);Ac-DEVD-CHO治疗后并不能完全阻止凋亡细胞的增加,但与相应时相点缺血组比较,除8 h外,显著降低了凋亡细胞的升高程度(P均＜0.01).凋亡细胞主要分布在CA1区,CA2、CA3区于48h后亦可见凋亡细胞,但数量明显少于CA1区,齿状回区仅偶见凋亡细胞;③分别以缺血组、治疗组各时相点S-100中caspase-3活性与海马区神经元凋亡数行直线相关分析,结果二者的变化呈显著正相关(r分别为0.9356及0.9800).结论caspase-3在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用,Caspase-3的激活是引起海马神经元凋亡的主要因素之一.     

急性力竭运动大鼠脑皮质运动区组织中caspase-3的表达

目的观察急性力竭运动大鼠脑皮质运动区组织中caspase-3活性和蛋白表达,探讨不同强度力竭运动对脑皮质运动区细胞凋亡的影响。方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠80只随机分为对照组(n=8)、中等强度力竭运动组(n=36)和高强度力竭运动组(n=36)。对照组大鼠不进行力竭运动,中等强度力竭运动组和高强度力竭运动组大鼠建立急性力竭运动模型,分别在力竭运动后6 h和1、4、7 d采集大鼠脑皮质运动区组织,采用荧光分析法检测脑皮质运动区组织中caspase-3活性,Western blot法检测caspase-3蛋白水平,比较3组大鼠脑皮质运动区组织中caspase-3活性和蛋白水平。结果力竭运动后6 h,中等强度力竭运动组和高强度力竭运动组大鼠脑皮质运动区脑组织中caspase-3活性显著高于对照组(P<0.05),高强度力竭运动组大鼠脑皮质运动区脑组织中caspase-3活性显著高于中等强度力竭运动组(P<0.05)。力竭运动后1、4 d,高强度力竭运动组大鼠脑皮质运动区脑组织中caspase-3活性显著高于中等强度力竭运动组和对照组(P<0.05),但中等强度力竭运动组与对照组大鼠脑皮质运动区脑组织中caspase-3活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。力竭运动后7 d,3组大鼠脑皮质运动区脑组织中caspase-3活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。中等强度力竭运动组大鼠力竭运动后6 h脑皮质运动区脑组织中caspase-3活性显著高于力竭运动后1、4、7 d时(P<0.05)。高强度力竭运动组大鼠力竭运动后1 d时脑皮质运动区组织中caspase-3活性显著高于力竭运动后6 h和4、7 d时(P<0.05),力竭运动后6 h和4 d时脑皮质运动区脑组织中caspase-3活性显著高于力竭运动后7 d时(P<0.05)。与对照组比较,中等强度力竭运动组大鼠力竭运动后6 h和1、4、7 d时脑组织中caspase-3蛋白表达无显著变化(P>0.05);高强度力竭运动组大鼠力竭运动后脑组织中caspase-3蛋白表达逐渐升高,力竭运动后4、7 d时caspase-3蛋白表达显著高于对照组和中等强度力竭运动组(P<0.05)。结论力竭运动可能通过上调caspase-3活性和蛋白表达而促进大鼠脑皮质运动区细胞凋亡,且力竭运动强度越高,细胞凋亡越明显。     

大鼠肝再生早期线粒体介导的caspase 3激活的机制

目的:从线粒体介导的内源性途径分析大鼠肝再生早期肝细胞凋亡执行酶caspase-3激活的机制.方法:雄性SD大鼠35只,分成模型组15只(70%肝切除制作肝再生模型)、假手术组15只和正常对照组5只.模型组和假手术组根据时间分为术后3、6和24 h三个亚组,每个亚组5只.取各组大鼠肝组织,制备肝匀浆液.荧光法测肝组织凋亡酶caspase-3和caspase-9的活性;酶联免疫分析法测谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性;硝酸还原法测NO含量.结果:与假手术组相比,模型组凋亡酶caspase-3和caspase-9的活性在肝再生早期(术后3、6 h组)显著增高(P＜0.01);GSH-Px水平显著降低,NO分泌量显著增高(P＜0.01).结论:肝再生早期,肝组织处于氧化应激状态,线粒体介导的内源性途径参与凋亡执行酶的激活.     

Bcl-2蛋白及caspase-3基因表达与暴发性肝衰竭肝细胞凋亡关系的研究

目的：研究Bcl-2蛋白与caspase-3基因表达在实验性暴发性肝衰竭（FHF）中对肝细胞凋亡的作用。方法：用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型；免疫组化法检测肝组织内Bcl-2蛋白表达；原位杂交法检测肝组织内ccqspcqse-3基因表达；缺口原位末端标记技术检测肝细胞凋亡。结果：模型组用药后2h Bcl-2有较多表达，4h表达最多，以后逐渐减少，4h与2h比较差别显著（P〈0．05），与8h、12h比较差别十分显著（P〈0．01）。模型组用药后2h caspase-3开始少量表达，8h达最高峰，并出现典型的肝细胞凋亡改变。12h表达下降，且同时存在肝细胞凋亡和坏死。Bcl-2与caspase-3表达及肝细胞凋亡均呈负相关。结论：在FHF中，肝细胞凋亡与caspase-3的激活有关；Bcl-2可能通过抑制caspase-3的活性而抑制肝细胞凋亡。     

腺苷诱导HepG2细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9的活性变化

目的:探讨腺苷诱导HepG2肝癌细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9活性变化,确定caspase-3,-8,-9在腺苷诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。方法:用3 mmol/L腺苷处理HepG2细胞,作用48 h后,用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪定量检测凋亡细胞细胞比例;分别作用0,12,24,36,48 h,用荧光比色法检测HepG2细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9的活性变化,Western-blotting法检测caspase-3的活性片段;并检测加入caspase-3抑制剂后经3 mmol/L腺苷作用48 h后细胞凋亡变化情况。结果:3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞48 h,检测到(27.5±2.1)%的细胞出现凋亡,而对照组仅有(1.1±0.1)%的细胞出现凋亡(P<0.01)。3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞12 h后caspase-3活性开始升高,于36 h达到高峰,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),而caspase-8,-9活性无明显变化。3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞36 h后Western-blotting分析发现caspase-3被蛋白酶水解切断后形成的17 kU活性片段。使用caspase-3抑制剂30 min后,再经3 mmol/L腺苷作用48 h,肝癌细胞凋亡比例明显下降,抑制剂组与腺苷组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:在腺苷诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase-3被活化,caspase-8和-9没有被活化,caspase-3可能参与了腺苷诱导的HepG2肝癌细胞凋亡。     

胰腺癌细胞ASPC-1凋亡过程中caspase 1和2的表达

目的 :探讨细胞凋亡过程中 caspase- 1和 caspase- 2的表达及其意义。　方法 :胰腺癌细胞系 ASPC- 1无血清培养 2 4h后加入 IFN- γ,于 6、1 2和 2 4h收集细胞 ,检测细胞凋亡情况 (流式细胞法 )和 caspase- 1和 caspase- 2蛋白质表达 (western blot法 ) ,以不加 IFN -γ的细胞为对照组。　结果 :IFN-γ刺激可诱导 ASPC- 1细胞的凋亡 ,随着时间延长凋亡数量增多 ,2 4h达 9%。Caspase- 1和 caspase- 2表达随时间而增强 ,对照组轻度表达。　结论 :Caspase- 1和 cas-pase- 2在细胞凋亡过程中表达 ,是重要的凋亡调节基因     

严重烧伤小鼠肝细胞IFIT1 表达与凋亡的关系

目的：探讨严重烧伤急性应激期干扰素诱导含TPR基序的蛋白1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1,IFIT1)表达与肝细胞凋亡的关系。方法：健康C57/129小鼠25只,随机分成5组,每组5只：正常对照(0 h) 组、烧伤后1,6,12和24 h组。制作烧伤组大鼠20%总体表面积(total body surface area,TBSA)III度烧伤模型。取肝组 织,Western印迹观察IFIT1表达;免疫组织化学检测caspase-3和caspase-8表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口 末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测肝细胞凋亡。结果：IFIT1烧伤后 1 h开始增高,6 h最高,12 h开始降低,24 h降至最低,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);caspase-3和caspase-8烧伤 后随时间逐渐增高,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);TUNEL 法显示烧伤后肝细胞凋亡1 h与0 h比较差异无统计 学意义(P>0.05),6 h至24 h呈逐渐增高,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论：严重烧伤后IFIT1表达增高可促 使肝细胞凋亡的增强。     

大鼠肝再生时线粒体通透性转换的变化

目的:研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换(PT)的变化规律.方法:SD大鼠肝70%部分切除(PH)制作肝再生模型,断头取肝分离线粒体后,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在540 nm处光密度值(D540)变化来观察线粒体PT的时相变化.结果:与对照组比较,大鼠肝再生早期(PH后0～24 h)和后期(PH后120～168 h)都表现为肝线粒体先收缩后肿胀,也即通透性先下降后增高;同时大鼠肝再生早期肝线粒体可明显抵抗钙离子的诱导作用,而PH后24 h和168 h组的大鼠肝线粒体对钙离子的诱导非常敏感.环孢素A(CsA)可阻断钙的诱导作用.结论:大鼠肝再生过程中线粒体PT出现明显规律性改变,这可能与肝再生过程中线粒体氧化磷酸化的变化以及肝再生的启动和终止有关.     

大鼠肝再生时肝PBR、Bcl-2、Bax基因mRNA的表达

目的:探讨肝细胞线粒体通透性转换(permeability transition, PT)的主要调节蛋白外周型苯二氮NFDB2类受体(PBR)、Bcl-2家族成员Bcl-2、Bax在肝再生过程中的表达情况,探讨上述基因表达与线粒体PT的关系.方法:健康成年雄性SD大鼠,随机分为3组:肝切除组,切除肝左叶和中叶部分约全肝的70%;假处理组,同样麻醉和开腹,但不切肝;正常组.手术后3、6、12、24、48、72、120 和168 h分别以半定量RT-PCR法检测PBR、Bcl-2、Bax在肝再生过程中mRNA表达的动态变化.结果:肝再生过程中PBR基因表达降低,但与假处理组无显著差异;Bcl-2在肝切除后3 h和120 h表达显著高于对应的假处理组和正常组(P<0.05);Bax mRNA表达低于正常组和假处理组,其中在肝切除后12 h和72 h时显著低于相应的假处理组(P<0.05).结论:PBR、Bax、Bcl-2在肝再生过程中表达变化可能与线粒体PT时相变化有关.     

IL-18和caspase-1在大鼠急性肝衰竭模型中表达及其意义

目的 了解IL-18与caspase1在大鼠急性肝功能衰竭的可能作用和机制.方法 模型组(n=50)D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肝衰竭模型.对照组(n=10)以生理盐水代替药物.于不同时间点对大鼠血清和肝脏组织进行HE和TUNEL染色观察,并对血清ALT、AST和TBIL,IL-18 ...     

白藜芦醇体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞的增殖及其机制

目的：检测白藜芦醇（Res）体外对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞增殖的影响，并探讨其可能机制。方法：用不同浓度Res处理RA滑膜细胞24h后，采用四唑蓝（MTT）法检测滑膜细胞的增殖水平；用缺口末端标记法（TUNEL）和流式细胞仪检测其凋亡百分率；采用Western-blot分析caspase-3酶原的裂解；用比色法测定Res（200μmol／L）处理RA滑膜细胞不同时间及不同浓度的Res处理RA滑膜细胞12h后，caspase-3的相对活性。结果：加入不同浓度Res处理RA滑膜细胞24h后，增殖水平均显著低于对照组（P〈0．01）；对照组与不同浓度Res处理组凋亡细胞百分率比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；用200μmol／LRes分别处理RA滑膜细胞不同时间，caspase-3活性与未处理组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；用不同浓度的Res处理细胞12h，caspase-3活性成浓度依赖性升高：用不同浓度Res处理培养的RA滑膜细胞24h，caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少。结论：Res在体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖，诱导细胞凋亡，可能与caspase-3的活化有关。     

妥泰对红藻氨酸致痫大鼠模型海马和颞叶皮层神经细胞caspase-3表达的影响

目的观察红藻氨酸(KA)的致痫作用并探讨妥泰(TPM)对KA致痫大鼠模型海马和颞叶皮层caspase-3表达的影响。方法取21～30日龄SD大鼠60只,随机分为3组:对照组、模型组和观察组,每组20只。对照组给予生理盐水;模型组仪用KA制作癫痫模型;观察组用KA制作癫痫模型后,加用TPM治疗。观察癫痫大鼠的行为表现、脑电图表现和病理学表现。用免疫组织化学法显示各组大鼠脑切片海马和颞叶皮层caspase-3表达的变化,并用HPIAS-2000显微图像定量分析系统进行图像分析。结果致痫大鼠的行为、脑电图和病理学改变符合癫痫的典型表现。对照组海马和颞叶皮层内存在少量caspase-3基础表达,模型组和观察组注射TPM 6 h后可见海马和颞叶皮层有少量棕褐色caspase-3阳性神经元,3 d时明显增多并达到高峰。与对照组比较,模型组和观察组相同时间点海马和颞叶皮层caspase-3阳性细胞计数均增多(P<0.05),观察组海马和颞叶皮层caspase-3阳性神经元计数与模型组相同时间点比较均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组和观察组海马和颞叶皮层caspase-3阳性神经元平均光密度值测定结果显示各相同时间点与对照组相比较所得数值显著增高,且有统计学意义(P<0.05),观察组海马和颞叶皮层caspase-3阳性神经无平均光密度值低于模型组(P<0.05)。结论KA的致痫作用很强,妥泰能抑制癫痫大鼠海马和颢叶皮层caspase-3表达,对癫痫发作大鼠具有神经细胞保护作用。     

大鼠海马神经元缺氧/复氧后caspase-3活性的变化

目的：研究caspase-3在体外培养的海马神经元缺氧／复氧损伤中的作用及其抑制剂的干预效果，为缺血性脑损伤的治疗提供实验资料。方法：诱导体外培养的大鼠海马神经元缺氧3h，再复氧12－4，并在缺氧前1h用不同剂量的caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CMK进行干预处理，应用MTT比色法测定细胞存活率，底物裂解法caspase-3活性。结果：缺氧／复氧后大鼠海马神经元存活率逐渐降低，caspase-3活性明显增强，复氧24h达高峰；用Ac-DEVD-CMK预处理的海马神经元caspase-3活性降低，细胞存活率增高，并呈剂量依赖性。结论：体外培养的大鼠海马神经元缺氧及缺氧／复氧后出现迟发性死恨，caspase-3介导的细胞凋亡机制在这种损伤过程中起一定的作用，通过抑制其活性可产生神经保护作用。     

Tmub1对再生肝细胞有丝分裂的影响及其机制

目的 探讨Tmub1对再生肝细胞有丝分裂的影响及与securin的相互作用机制.方法 使用40只雌性SD大鼠建立肝大部分切除术后肝再生模型,于术后0、6、12、24、48、72、96、168 h分别取再生肝组织,RT-qPCR和Western blot检测Tmub1和securin在肝再生过程中的mRNA与蛋白表达变化趋势.在大鼠正常肝细胞系BRL-3A中分别建立慢病毒稳定过表达Tmub1、干扰Tmub1和阴性对照组细胞株,用诺考达唑处理获取同步于有丝分裂期的细胞,免疫荧光观察Tmub1过表达组和阴性对照组细胞有丝分裂情况,并用免疫沉淀和Western blot检测Tmub1过表达、Tmub1干扰和阴性对照组BRL-3A细胞中securin的泛素化水平.结果 Tmub1的mRNA和蛋白水平在肝切除术后24、48 h最高,securin的mRNA水平也在48 h最高,而蛋白水平在48 h最低.Tmub1过表达可影响大鼠肝细胞有丝分裂,且securin泛素化水平显著低于阴性对照组(P＜0.01);Tmub1干扰组securin泛素化水平显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 Tmub1可通过抑制securin的泛素化影响大鼠再生肝细胞的有丝分裂.     

雌二醇对大鼠脑缺血/再灌注损伤脑组织bcl-2、caspase-3表达的影响

目的：观察雌二醇时大鼠脑缺血／再灌注损伤脑组织hcl-2．capase-3表达的影响。方法：Wistar大鼠72只，随机分为假手术组、局灶性脑缺血2h／再灌注3h、6h．12h、24h组及雌二醇治疗(100μg／kg) 脑缺血2h／再灌注3h、6h、12h、24h组，每时间点8只，假手术组8只。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤模型，采用连续切片免疫组化技术检测脑组织中bel-2、caspase-3表达部位及数量。结果：雌二醇治疗组皮层bcl-2免疫阳性细胞数与脑缺血／再灌注及似手术组比较，在再灌注后12h、24h增高，而纹状体bcl-2免疫阳性细胞数与脑缺血／再灌注组及假手术组比较筹异无统计学意义。假手术组无caspase-3表达，雌二醇治疗组caspase-3阳性细胞数，在皮层12h、24h明显减少．纹状体区caspase-3阳性细胞数治疗组各时间点稍减少，但与脑缺血／再灌注组比较无统计学意义。结论：雌二醇治疗可以诱导皮层bcl-2表达及下调caspase-3活性。