人胎盘脂多糖和胎盘无蛋白血清对正常和受照射小鼠造血功能的影响

正常或经不同剂量γ线照射的小鼠,由腹腔注射人胎盘脂多糖或无蛋白血清后不同时间,取股骨检测骨髓CFU-S和CFU-GM含量,同时对脾脏和股骨作形态检查。结果表明,两种胎盘制剂对造血均有促进作用,且有不同程度的辐射防治效果,能加速辐射损伤后的造血重建,表现在脾指数、骨髓有核细胞数以及造血干、祖细胞恢复较早。脾脏与骨髓的形态变化亦相符合。     

具骨髓间充质干细胞表型的成体干细胞移植造血

目的为了探索骨髓成体干细胞是否能重建超致死剂量射线照射后小鼠的造血功能.方法采用液体培养分离,培养,扩增雄性小鼠骨髓成体干细胞,作为供体细胞,将受体雌性小鼠预先经Cs137全身照射850rad后在4 h内从尾静脉输入细胞.受体小鼠分为5组,每组10只a正常小鼠不经任何处理;b输入6×106cell/只(0.3ml)新鲜全骨髓;c输入6×106 cell/只(0.3 m1)去基质细胞的造血细胞;d输入6×106cell/只(0 3 m1)经培养后的成体干细胞,输注细胞后第1天上、下午肌肉注射各一次Granulocyte colony stimulating factor(G-CSF)等细胞因子;e注射D-Hanks液0.3ml/只.观察各组小鼠的存活情况,小鼠在输注前查尾静脉血,计细胞总数、涂片、分类,输细胞后每周各组分别取小鼠肝、脾、股骨,固定作病理切片,另外一侧股骨冲出骨髓,计数一条股骨有核细胞数、涂片、测定colonyforming unit-granulocyte/macrophage(GM-CFU)值.结果输全骨髓组外周血有核细胞和骨髓有核细胞数及GM-CFU值在输注后的第1,2周都高于单输成体干细胞组,但单输基质细胞组有核细胞逐渐恢复,小鼠存活好,至输注后第3周,无论外周血或骨髓中的有核细胞都较第2周明显恢复,GM-CFU也明显升高,而单输造血细胞和D-hnks液组小鼠存活7～8 d死亡.结论小鼠超致死剂量照射后,输入经培养后的同种小鼠骨髓成体干细胞配合G-CSF等细胞因子注射可重建小鼠造血功能.     

IL-12对辐射损伤后小鼠造血干细胞的修复作用

目的 研究重组小鼠白介素12(rmIL-12)对经辐射损伤后小鼠骨髓造血干细胞的修复作用.方法 选用SPF级BALB/c鼠,直接取骨髓造血干细胞或小鼠本身在辐照前后用rmIL-12处理后,检测造血干细胞的数量和凋亡细胞数,探讨rmIL-12对辐射损伤后骨髓造血干细胞的修复功能.结果 不论是直接辐射细胞或小鼠本身,在辐照前后用rmIL-12处理后,rmIL-12具有提高受损骨髓造血干细胞的数量增加,细胞凋亡率减少.结论 rmIL-12对辐射损伤后的造血干细胞具有明显的促进修复作用,这为临床上治疗造血细胞受损提供实验依据.     

芪加口服液对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用

目的研究芪加口服液对电离辐射损伤小鼠造血功能的防护作用。方法 50只小鼠按数字表法随机分为对照组、模型组、芪加口服液低、中和高剂量组(100、200、400 mg/kg),60Coγ射线照射,吸收剂量6.0 Gy。测定白细胞数、脾指数、内源性脾结节数、骨髓有核细胞数和骨髓DNA含量。结果照后第9天给药组受照小鼠的股骨有核细胞数、DNA含量、白细胞数、脾结节和脾指数与模型组相比均有明显的增高(P<0.01或P<0.05)。结论芪加口服液对辐射损伤小鼠造血系统有保护作用。     

不同小鼠之间异基因骨髓移植免疫耐受的实验研究

目的　研究有效诱导异种骨髓移植耐受的方法和对异基因骨髓移植重建的影响。方法　将C57BL 6J小鼠辐射后 ,尾静脉注射 1× 10 7个BALB c小鼠骨髓细胞 (输入骨髓细胞前 4h ,注射供鼠的活化NK细胞 ) ,观察生存期、体重、病理组织学等指标。结果　经骨髓及NK细胞输注的小鼠能显著提高受体小鼠的生存率 ,减轻移植物抗宿主病 (GVHD)的病理伤害程度。结论　在小鼠异基因骨髓移植初期 ,输入供鼠的NK细胞和骨髓细胞 ,能促进造血重建 ,预防移植物抗宿主病的发生     

三羟异黄酮对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的保护作用

目的　探讨三羟异黄酮(genistein,GEN)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)的保 护作用。方法　成年雄性小鼠辐射前24h给予GEN,6.0Gyγ射线辐射后观察BMSCs的形态变化、成纤维细胞集落 (CFU -F)形成数量、BMSCs层对正常小鼠骨髓细胞(BMCs)的粘附能力以及血管细胞粘附分子(VCAM- 1)、纤维连接素(Fn) 和层粘素(Ln)等细胞粘附分子的变化。结果　GEN处理组辐射后BMSCs虽然形态上与单纯辐射损伤组在光镜下无差异, 但其CFU -F形成数量、对正常BMCs的粘附能力以及VCAM -1、Fn和Ln等细胞粘附分子的表达均较单纯辐射损伤组高而且 恢复较快。结论　GEN可减小辐射对小鼠BMSCs的损伤,促进受损BMSCs增殖、粘附功能恢复,改善骨髓造血微环境,有 利于辐射损伤小鼠造血重建,具有辐射防护作用。     

骨髓基质细胞及其上清液对L_(1210)细胞株生长抑制作用的观察

以成纤维细胞为主的骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal Cell,简称BMSC),具有稳定造血和促进造血的作用,其上清液(Stroreal cell Supernatant,简称SCS)含有刺激和抑制造血两种物质。本文以L_(1210)细胞株为靶细胞,观察了小鼠基质细胞层及其上清液的抑制作用。材料与方法细胞株:L_(1210)细胞株为小鼠淋巴细胞白血病细胞。建立基质细胞层:昆明种小鼠数只,脱颈处死,取出股骨,用RPMI1640(美国产)培养液冲     

人脐血移植SCID小鼠的实验研究

目的　探讨人脐血造血细胞在严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠体内植入、分化及造血调控。方法　采用流式细胞技术及克隆形成细胞体外培养方法观察了移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响及移植物抗宿主反应。结果　 1静脉输注 1～ 5× 10 7个脐血单个核细胞 (MNC) /只鼠可使受鼠体内表达嵌合体 ,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠 :可以重建造血功能并在小鼠骨髓微环境中分化表达 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关 ;可引起受鼠移植物抗宿主反应 ,并与输入细胞剂量有关。结论　脐血造血干细胞不仅可以在受鼠骨髓微环境中存活 ,还可进一步分化为各系特异细胞 ,重建造血。     

当归多糖对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的影响

目的 研究当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)的保护作用.方法 BALB/c小鼠按随机数字表法分为10组,每组24只,共计240只.正常组不作任何处理,其余9组经X射线照射后分别给予生理盐水(NS)、2 mg/kg APS和8 mg/kg APS,给药至第7、14、21天计数小鼠外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)及骨髓单个核细胞(BMNC);观察BMSC生长达80％贴壁所需时间及形成的成纤维细胞集落(CFU-F)数量;流式细胞术检测BMSC细胞周期、凋亡率及表面黏附分子CD54、CD106的表达水平.结果 与正常组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数明显减少(P＜0.05);BMSC达80％贴壁所需时间明显延长,CFU-F数明显减少(P ＜0.05);G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例显著降低(P ＜0.05);BMSC细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);CD54、CD106表达明显降低(P＜0.05).2 mg/kg APS、8 mg/kg APS组与NS组相比,外周血各指标、BMNC数及CFU-F数明显增加(P＜0.05);BMSC达80％融合时间显著缩短(P＜0.05);G0/G1期比例明显降低,S期比例显著增加(P＜0.05);凋亡率显著降低(P＜0.05);CD54、CD106表达明显增高(P＜0.05).第21天8 mg/kg APS组各指标均恢复正常.结论 APS可能是通过提高BMSC贴壁及增殖能力,加速BMSC由G0/G1期向S期转换,降低BMSC凋亡率,上调CD54、CD106表达来促进辐射损伤后小鼠造血功能的恢复.     

免疫对辐射损伤小鼠造血重建的影响——(一)辐射损伤小鼠造血重建规律

为了减轻或避免骨髓移植受体发生移植物抗宿主反应(GVHR),深入揭示免疫嵌合体形成机制,我们开展了“辐射损伤小鼠造血重建免疫学影响的研究。本文主要观察了骨髓移植后各类造血细胞重建规律。结果表明,每根股骨骨髓细胞数和每脾细胞数均随照后时间后延而不断增加,二者间呈明显正相关关系;每根股骨内CFU—S、CFU—C、CFU—E含量则随照后时间延长呈指数增加。各类造血细胞重建过程中,CFU—S起步早、增殖速率快、CFU—E、BFU—E后照9天才开始再建。说明致死剂量照射机体仍具有调控造血重建能力,其程序为先促进CFU—S增殖机能,待干细胞池数目抵一定程度时,再增强其分化机能,从而,渐渐恢复正常造血过程。     

当归补血汤对辐射损伤小鼠的防护作用及机制

目的 观察当归补血汤对⁶⁰C₀-γ射线辐照小鼠的防护作用。方法 将实验小鼠随机分为5组(正常对照组、模型组、当归补血汤低、中、高剂量组),采用⁶⁰C₀-γ放射源照射除正常对照组外的各组小鼠,建立辐射损伤模型,测定各组小鼠外周血中性粒细胞数(NEUT)、骨髓有核细胞数(BMC)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及血清丙二醛(MDA)含量。结果 辐射损伤小鼠的NEUT、BMC及SOD活性均明显降低(P<0.01),MDA含量增高(P<0.01)。当归补血汤可升高辐射损伤后小鼠NEUT、BMC及SOD活性,降低MDA含量,且当归补血汤高剂量组对辐射损伤小鼠的保护作用更好(P<0.01)。结论 当归补血汤对辐射小鼠的电离损伤有保护作用,且与剂量相关。     

气血康口服液抗辐射的实验研究

采用内源性脾集落形成法，骨髓有核细胞计数及脾脏称重法观察了气血康口服液对辐射小鼠造血功能的影响。研究结果表明，经气血康处理的小鼠ＣＦＵ－Ｓ、骨髓有核细胞数及脾重等项指标均明显明显高于阴性对照组和阳性对照组，提示气血康口服液在辐射损伤紧急状态下，不仅可促进髓内造血细胞生成，而且对动物体内髓外造血也有显著促进作用。其抗辐射的确切机理有待于进一步研究。     

三羟异黄酮对小鼠辐射损伤后造血功能的影响

目的 探讨三羟异黄酮(genistein, GEN)对辐射损伤造血功能的影响.方法 6.0 Gy γ射线一次全身照射BALB/c雄性小鼠复制出造血损伤模型.照射前24 h给予GEN灌胃(160 mg/kg体质量),分别观察照射后1、3、7、14、21、30 d不同时相点小鼠血清对粒单系集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte/macrophage, CFU-GM)和红系集落形成单位(colony forming unit-erythroid, CFU-E)的支持或抑制活性.结果 辐射前24 h给予GEN,辐射后该组小鼠血清造血刺激活性显著增加,使正常小鼠骨髓有核细胞CFU-GM、CFU-E形成数量明显增多,而且对CFU-GM的刺激活性较CFU-E强.同时,该组小鼠照后血清对CFU-GM、CFU-E的抑制活性明显降低,但对CFU-E和CFU-GM的抑制活性差异不明显.结论 提高辐射损伤后小鼠血清刺激活性可能是GEN防护放射性造血损伤、促进受损造血系统重建的分子机制之一.     

人参多糖动员的造血干/祖细胞移植重建造血衰竭小鼠造血功能的研究

目的:探讨经人参多糖动员的外周血造血干/祖细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法:建立小鼠造血衰竭模型,移植经人参多糖动员的外周血单个核细胞,检测受体小鼠生存时间,外周血WBC,脾湿重及脾集落数,进行染色体嵌合实验。结果:经人参多糖动员的雄性小鼠外周血MNC1×105个输注给致死剂量照射的雌性小鼠,可明显延长小鼠存活时间;提高受体小鼠外周血WBC数;亦能增加脾湿重,提高脾集落(CFU-S)数;经Y染色体检测(PCR法)受体小鼠外周血单个核细胞可检出581bpY染色体序列。结论:经人参多糖动员小鼠的外周血中存在数量较多的造血干/祖细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建小鼠造血功能。     

中药制剂兰州方对免疫介导的再生障碍性贫血模型小鼠骨髓增殖的影响

目的通过观察中药制剂兰州方对免疫介导的再生障碍性贫血模型小鼠骨髓组织形态学及股骨有核细胞数的影响,以此证实其的确切疗效并探讨机理。方法将BALB/C小鼠90只随机分为6组:兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组,模型组和正常对照组,每组15只。除正常对照组外,其余75只小鼠均经3.0 GY直线加速器γ射线全身照射,照射4小时内输入取自DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结细胞悬液。照射一周后,通过检测血象、骨髓象,证明造模成功。各组用药40天后将小鼠脱颈处死,取双侧股骨进行有核细胞计数和病理学切片观察,并对所测结果进行统计学处理。结果模型组,兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组小鼠BMC计数较正常对照组小鼠明显减少(P<0.05或P<0.01);兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组BMC计数较模型组显著升高(P<0.05或P<0.01)。模型组,兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组造血组织容量百分率较正常对照组明显减少(P<0.05或P<0.01);模型组,兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组脂肪组织容量百分率较正常对照组明显增多(P<0.05或P<0.01);兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组造血组织容量百分率较模型组显著升高(P<0.05),而脂肪组织容量百分率较模型组亦显著升高(P<0.05或P<0.01);兰州方中剂量组造血组织容量百分率高于兰州方大、小剂量组和贞芪扶正颗粒对照组(P<0.05);兰州方中剂量组脂肪组织容量百分率低于兰州方大、小剂量组和贞芪扶正颗粒对照组(P<0.05)。结论中药制剂兰州方具有改善骨髓微环境、促进骨髓造血细胞的增殖分化、提高造血祖/干细胞数量、抑制非造血组织细胞增生分化的作用,并通过以上环节使骨髓造血功能恢复。     

五羟色胺促进骨髓基质细胞生长初探

目的:探讨五羟色胺(serotonin,5-HT)对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)体外生长的影响.方法:采用骨髓基质细胞集落培养技术(CFU-F)检测不同浓度5-HT以及5-HT分别与碱性成纤维细胞生长因子(basic-fibroblast growth factor,bFGF),血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF),血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对小鼠及人BMSC体外培养的生长促进作用,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测人BMSC表面5-HT2型受体mRNA表达.结果:5-HT不同浓度(50,100,200,500nM)对小鼠及人BMSC体外培养均有生长促进作用(P＜0.05),显示最大作用浓度为200nM.5-HT可增强bFGF,PDGF和VEGF对BMSC生长促进作用.人BMSC表面有5-HT2A,2B,2C受体mRNA表达.结论:5-HT具有BMSC生长促进作用,并可增强bFGF,PDGF,VEGF促进BMSC的生长,其作用途径可能通过BMSC表面5-HT2型受体,从而促进细胞生长.     

豚鼠基质祖细胞在造血放射损伤修复中的作用——对辐射损伤后输注骨髓细胞的影响

经心腔给受照4.5Gy豚鼠混输CFU=F和BMC后1、2周,检查股骨骨髓细胞数、CFU-E和CFU-F等指标,发现混输CFU=F组均较只输BMC组者明显增高。认为附加基质输注后,经血循环向受体骨髓迁徙,定居并能迅速增殖,创建适宜的造血微环境,从而促进了造血辐射损伤的再建。     

钝顶螺旋藻多糖对辐射所致小鼠造血功能抑制的对抗影响

目的　观察钝顶螺旋藻多糖 (Spirulinaphatensispolysaccharide ,SPP)对辐射损伤小鼠造血功能的影响。方法　小鼠5Gy全身照射后 5、10、15d分别取材 ,作骨髓粒单系、红系造血祖细胞培养 ,造血干细胞集落测定 ,以及外周血常规计数等。SPP用量为 12 5mg·kg 1 ·d 1 ,ip,伤后连续注射 6d。结果　辐射损伤后骨髓有核细胞数、粒单系CFU GM、红系CFU E、BFU E及造血干细胞CFU S集落数均显著低于正常对照组 (P <0 .0 1) ,但应用SPP后 ,上述各项指标数值 ,均比同伤情的不用药组显著提高 ,尤以伤后10d恢复最快 (P <0 .0 1)。结论　SPP对辐射损伤有明显保护和促进造血恢复的作用。     

免疫对辐射损伤小鼠造血重建的影响(二)预防免疫的作用

采用造血干细胞及造血祖细胞体内、外培养方法,观察其免疫刺激剂短小棒状杆菌预防小鼠对辐射损伤小鼠造血—免疫重建的影响。结果表明:提高小鼠免疫水平有利于免疫嵌合体形成并促进造血重建过程。主要表现机体具有促进和调节造血干细胞增殖与分化。双重机能的作用。然后早期以CFU—S增殖为主,继之为CFU—S分化增强期。提示我们,这种,处置可能是促进同种骨髓移植个体免疫耐受性的建立。这将是抑制GVHR发生的根本措施。     

黄芪对辐照小鼠粒-单系造血祖细胞的影响

目的 :探讨黄芪对造血功能的影响及作用机制。方法 :采用造血祖细胞体外培养和体内扩散盒植入技术 ,观察黄芪对辐照小鼠粒 单系造血祖细胞 (CFU GM)的影响。结果 :体内培养证明 ,辐照前、后用药组CFU GM分别为 (2 7 14± 5 88)个 / (4× 10 5BMC)和 (2 6 38± 4 90 )个 / (4× 10 5BMC) ,均较辐照对照组 (16 5 8± 3 37)个 / (4×10 5BMC)明显增高 (P <0 0 1) ,而体外培养未显示刺激活性。结论 :黄芪可刺激体内造血干细胞的增殖与分化 ,对辐照小鼠的骨髓具有保护作用。