人纤溶酶原Kringle 5区的基因克隆的表达及纯化

目的克隆人纤溶酶原Kringle5(K5)区基因,并进行重组蛋白的表达纯化及活性鉴定.方法用PCR方法从正常成人肝cDNA库扩增出人纤溶酶原K5区基因,构建K5的原核表达载体pET-22b(+)-K5-6×His,IPTG诱导蛋白表达后经Ni+-树脂亲和层析进行纯化,通过血管内皮细胞增殖抑制试验检测蛋白活性.结果经PCR成功扩增出了243 bp的K5区基因,测序正确后克隆进大肠杆菌分泌型表达载体pET-22b(+),重组质粒在BL21中成功表达出分子量为14 000的蛋白质,纯化后的蛋白纯度达95%,具有抑制血管内皮细胞增殖活性的功能,K5蛋白浓度为4 μg/mL时抑制率达50%.结论纤溶酶原K5的成功克隆、表达及纯化可能在肿瘤和动脉粥样硬化的抗血管生成治疗中具有一定作用.     

人纤溶酶原Kringle 5区的基因克隆的表达及纯化

目的克隆人纤溶酶原Kringle5(K5)区基因,并进行重组蛋白的表达纯化及活性鉴定.方法用PCR方法从正常成人肝cDNA库扩增出人纤溶酶原K5区基因,构建K5的原核表达载体pET-22b(+)-K5-6×His,IPTG诱导蛋白表达后经Ni+-树脂亲和层析进行纯化,通过血管内皮细胞增殖抑制试验检测蛋白活性.结果经PCR成功扩增出了243 bp的K5区基因,测序正确后克隆进大肠杆菌分泌型表达载体pET-22b(+),重组质粒在BL21中成功表达出分子量为14 000的蛋白质,纯化后的蛋白纯度达95%,具有抑制血管内皮细胞增殖活性的功能,K5蛋白浓度为4 μg/mL时抑制率达50%.结论纤溶酶原K5的成功克隆、表达及纯化可能在肿瘤和动脉粥样硬化的抗血管生成治疗中具有一定作用.     

重组人纤溶酶原k1-3基因转染对血管内皮细胞的作用研究

目的 观察脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因转染人脐静脉内皮细胞导致细胞凋亡和移动抑制的效应,初步探讨k1-3基因的抗血管生成机制.方法 以阳离子脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因真核表达载体pcDNA-k13转染体外培养人脐静脉内皮细胞,经细胞凋亡检测和移动抑制试验,比较对照组和实验组的凋亡率和抑制率.结果 转染pcDNA-k13组有明显的细胞凋亡效应和移动抑制.结论 人纤溶酶原k1-3基因在人血管内皮细胞表达,并可能通过诱导细胞凋亡及抑制细胞迁移而抑制肿瘤新生血管的生成.     

血浆纤溶酶原激活剂抑制物1在肿瘤血管新生中的作用及机制研究进展

肿瘤血管新生在肿瘤生长及转移过程中起重要作用。血浆纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)是由多种细胞分泌的糖化蛋白,在体内参与多种生理过程。近年研究发现,PAI-1在肿瘤血管新生过程中发挥双重作用,在生理浓度范围内PAI-1可以促进肿瘤血管新生,而在药理作用范围内高浓度的PAI-1则抑制肿瘤血管新生,其作用可能是通过对细胞外基质的降解、细胞黏附以及细胞迁移的调节而实现的。     

人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

[目的]构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础.[方法]以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5mutl基因,将其克隆进表达载体pET-22b( )中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b( )/K5 mut1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2 -His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定.[结果]PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mutl基因片段,正确插入pET-22 b( )载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量M1≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L.[结论]成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白.     

人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

[目的]体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响.[方法]大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Western blot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD).[结果]SDS-PAGE及Western blot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160 nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组.[结论]K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制.K5具有治疗肝癌的潜在临床价值.     

血管抑素的制备

0 引言血管抑素(angiostatin,AS)是肿瘤源性血管生成抑制因子,相对分子质量(Mr) 38 000[1]. AS包括纤溶酶原(plasminogen, Pgn)的前四个Kringle结构,每个Kringle上均有特异的赖氨酸结合位点,因此可利用亲和层析的方法从血浆中提取AS.……     

代谢综合征患者血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1水平与靶器官损害的关系

血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)是血浆纤溶系统的主要抑制物.PAI-1水平升高是纤溶功能减弱的主要标志,在活性物质作用下,促进血栓形成,对抑制纤溶有重要的作用[1].     

血管生成抑制剂Angiostatin抗肿瘤的研究进展

1 AS的发现、结构与来源 1994年,O'Reilly等从荷瘤小鼠血清中发现特异性抑制肿瘤血管内皮细胞增殖的因子,分子量38KD,命名为Angiostatin(AS).用不同的层析方法,O'Reilly又从携有Lewis肺癌的小鼠尿中提取AS,即鼠源AS.人们依靠类似的方法从人血液中提取出人源AS.人源AS和鼠源AS 是同一种物质. AS是纤溶酶原的一个内在片段,这一肽段是纤溶酶原氨基酸序列中Thr98-Val 440的一段序列,N末端是Thr98-C末端是Val440.纤溶酶原本身含有5个Kringles结构,第1-4个Kringles结构即为AS.这4个Kringles结构具有很高的同源性 ,半衰期2.5天,对实验肿瘤有强烈的抑制作用.纤溶酶原的第5个Kringles结构与前4个无同源性,抑制bFGF刺激的血管内皮细胞增殖的活性大于AS,可作为一个新颖的血管生成抑制剂,同时也可作为内皮细胞迁移的选择性抑制剂[1].     

沙利度胺对血液肿瘤患者内皮细胞功能的影响

目的探讨沙利度胺对血液肿瘤患者内皮细胞功能的影响。方法检测和比较32例血液肿瘤患者服用沙利度胺前后内皮细胞功能指标：血浆内皮素-1（ET-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、组织因子（TF）、凝血酶调节蛋白（riM）、凝血因子V、血管性血友病因子（vWF）、抗凝血酶（AT）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）及纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）的活性。结果服用沙利度胺后血液肿瘤患者体内的VEGF、TF、TM、vWF、AT活性明显降低（P〈0．05或P〈0．01），而血浆ET-1水平比治疗前显著升高（P〈0．05），其余指标无明显改变（P〉0．05）。结论沙利度胺可以影响内皮细胞功能，抑制新生血管的增生，从而在血液肿瘤治疗中发挥作用。