M2型巨噬细胞外泌体对小鼠自身免疫性肝炎的保护作用#br#

摘要：目的　探究M2型巨噬细胞来源的外泌体（M2 Exos）对刀豆蛋白A（Con A）诱导的小鼠自身免疫性肝炎（AIH）的保护作用。方法　采用IL-4（20 μg/L）刺激RAW264.7巨噬细胞24 h后提取M2 Exos并用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质免疫印迹对其进行鉴定;免疫荧光观察RAW264.7巨噬细胞对M2 Exos的摄取情况。将12只C57BL/6J小鼠随机分为PBS组、DiR-M0 Exos组、DiR-M2 Exos组和DiR染料对照组。Con A（15 mg/kg）注射完成1 h后通过尾静脉分组注射PBS溶液、DiR-M0 Exos（100 μg）、DiR-M2 Exos（100 μg）和DiR染料,活体成像技术观察Exos在AIH小鼠肝、脾、心、肺、肾、肠的分布情况。将20只C57BL/6J小鼠随机分为Control组（PBS溶液）、Con A组（15 mg/kg Con A）,M0 Exos组（15 mg/kg Con A+200 μg M0 Exos）和M2 Exos组（15 mg/kg Con A+200 μg M2 Exos）,每组5只。Con A注射完成12 h后处死小鼠,收集外周血和肝组织,全自动生化仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平;苏木精-伊红（HE）染色观察肝脏病理形态变化;实时荧光定量PCR（qPCR）检测肝组织肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6的mRNA表达水平;流式细胞术检测肝脏巨噬细胞亚群变化情况。结果　成功诱导并分离了M2 Exos,可被RAW264.7巨噬细胞摄取;经尾静脉注射后,M2 Exos主要在小鼠肝脏和脾脏中蓄积。与Control组相比,Con A组小鼠血清ALT和AST明显升高（P＜0.05）,肝脏结构紊乱,肝细胞大片坏死,肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达升高（P＜0.05）,肝脏单核细胞来源巨噬细胞（MoMFs）的浸润增多（P＜0.05）。与Con A组相比,M2 Exos组小鼠血清ALT和AST水平显著下降（P＜0.05）,肝脏坏死明显减轻,肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达降低（P＜0.05）,肝脏MoMFs的浸润减少（P＜0.05）。结论　M2 Exos可对小鼠AIH起到保护作用,其作用机制可能与降低肝脏炎性细胞因子的表达及减少对MoMFs的招募有关。     

中介素通过激活AMPK信号通路对脂多糖诱导巨噬细胞极化的影响

目的探讨中介素(intermedin,IMD)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7极化的影响及其作用机制。方法RAW 264.7细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+IMD组、LPS+IMD+CC(AMPK抑制剂Compound C)组。Real time-PCR法检测TNF-α、CD86、iNOS、Arg^-1、CD206 mRNA表达,Western blot法检测p-AMPK、AMPK、TNF-α、IL-6和IL^-10蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚型,ELISA法检测培养基上清IL-6和TNF-α浓度。结果与对照组及LPS组比较,IMD处理可增加AMPK磷酸化水平,增加p-AMPK/AMPK比值;与对照组相比,LPS诱导可导致巨噬细胞发生M1极化,M1型标志分子CD86、TNF-α及iNOS mRNA表达升高,M2型标志分子CD206、Arg^-1 mRNA表达降低,上调促炎因子TNF-α、IL-6表达,降低抑炎因子IL^-10表达,使M1型细胞数量增加,细胞上清中TNF-α、IL-6分泌增加;而IMD处理可抑制LPS诱导的M1极化,AMPK抑制剂Compound C组处理可在一定程度上拮抗这一作用。结论IMD通过激活AMPK信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化。     

血管活性肠肽对肺泡巨噬细胞M1/M2型极化及相关细胞因子的影响

目的 观察血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）对肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages，AM） M1/M2极化和相关细胞因子的影响。方法 分别采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）联合γ-干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin 4，IL-4）联合白细胞介素-13（interleukin 13，IL-13）诱导AM M1/M2型极化，后用10^-8~10^-6 mol·L^-1 VIP干预极化的AM，免疫荧光双标法测定M1型AM标记物CD86和促炎因子白细胞介素-6（interleukin 6，IL-6）的共表达，M2型AM标记物CD206和抗炎因子白细胞介素-10（interleukin 10，IL-10）的共表达；ELISA检测细胞上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-10、精氨酸酶-1（arginase-1，Arg-1）的表达，RT-PCR检测巨噬细胞表面标记物CD86、CD206和巨噬细胞相关因子IL-6、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、IL-10、Arg-1、几丁质酶-3样蛋白3（chitinase 3-like 3，Ym1）的表达。结果 经LPS联合IFN-γ、IL-4联合IL-13诱导后，AM分别向M1/M2型极化，与M1型相关的促炎因子IL-6、TNF-α、iNOS和与M2型相关的抗炎因子IL-10、Arg-1、Ym1的激活和释放明显高于未经诱导的正常组（P<0.05）；不同浓度VIP （10^-8~10^-6 mol·L^-1）的干预，均可下调M1型AM和相关炎症因子IL-6、TNF-α、iNOS的活性和表达（P<0.05）；上调M2型AM和相关抗炎因子IL-10、Arg-1、Ym1的活性和表达（P<0.05）。结论 VIP可抑制AM M1型极化，减少炎症因子IL-6、TNF-α、iNOS的激活和释放；促进AM M2型极化，提高抗炎因子IL-10、Arg-1、Ym1的激活和释放，提示VIP在肺内炎症时可能通过调控AM M1/M2型极化，抑制炎症反应，对肺组织起保护性作用。     

木樨草素通过抑制miR-142-3p降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞损伤

摘要：目的:探讨木樨草素对脂多糖（LPS）诱导的肺泡巨噬细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法:采用1 mg·L-1的LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞NR8383建立细胞损伤模型,并用不同剂量(0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2,6.4μg·ml-1)的木樨草素处理NR8383细胞。实验分为对照组、LPS组(1 mg·L-1)、LPS(1 mg·L-1)+木樨草素低、中、高剂量组(0.1,0.3,0.9μg·ml-1)、LPS(1 mg·L-1)+anti-miR-NC组、LPS(1 mg·L-1)+miR-142-3p inhibor组、LPS(1 mg·L-1)+木樨草素(0.9μg·ml-1)+miR-142-3p mimic组;采用MTT法检测木樨草素对NR8383细胞存活率的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）的水平;qRT-PCR法检测miR-142-3p的表达量;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3蛋白表达量。结果:随着木樨草素浓度的升高,LPS组细胞存活率升高,而对照组细胞存活率无明显变化;与对照组比较,LPS组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、miR-142-3p的表达量、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+木樨草素低、中、高剂量组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、miR-142-3p的表达量、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性（P<0.05）;与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+miR-142-3p inhibor组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达降低（P<0.05）;与LPS+木樨草素组比较,LPS+木樨草素+miR-142-3p mimic组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高（P<0.05）。结论:木樨草素通过抑制miR-142-3p表达可抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞凋亡,改善炎症反应。     

白头翁有效成分通过调控肿瘤相关巨噬细胞极化干预肿瘤发生发展的机制

目的对白头翁成分进行筛选,探讨白头翁有效成分对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响及其抗肿瘤免疫机制。方法 CCK-8法检测白头翁各成分对THP-1巨噬细胞与MCF-7乳腺癌细胞的IC_(50)值;通过Transwell将THP-1巨噬细胞与MCF-7细胞进行共培养,筛选能够抑制共培养体系中MCF-7细胞增殖的白头翁有效成分;将筛选出的有效成分作用于巨噬细胞24 h,通过实时PCR检测巨噬细胞M1型相关细胞因子(白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素12、白细胞介素23)以及M2型相关细胞因子(甘露糖受体、精氨酸酶1、白细胞介素10)的mRNA表达情况;流式细胞术(FACS)检测巨噬细胞表面抗原CD68、CD86的表达;Western印迹检测巨噬细胞TLR4信号通路相关蛋白的表达。结果通过筛选发现白头翁成分PA能够显著抑制共培养体系中MCF-7的增殖;实时PCR结果显示,白头翁成分PA低剂量(0.05 g·L~(-1))和高剂量(0.1 g·L~(-1))可显著增加M1型巨噬细胞相关因子IL-1β,TNF-α,IL-12,IL-23和CXCL11m RNA的表达,降低M2型巨噬细胞相关因子CD206,IL-10和Arg-1 mRNA的表达(P<0.05);FACS结果表明,白头翁成分PA组M1型巨噬细胞表面标志物CD86表达显著增高(P<0.01);Western印迹结果显示,白头翁成分PA可以促进巨噬细胞TLR4,My D88,TRAF6,NF-k B,P38,Ikbα和IRF5等蛋白的表达。结论白头翁有效成分PA可能通过影响巨噬细胞TLR4/My D88/TRAF6/NF-k B通路,诱导巨噬细胞向M1型极化、抑制M2型极化,启动巨噬细胞相关抗肿瘤免疫应答,从而干预肿瘤细胞的生长。     

木犀草素通过HIF-1α抑制糖酵解调控M1型巨噬细胞极化

目的 基于低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)介导糖酵解途径研究木犀草素(luteolin)调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法 RAW264.7细胞随机分为对照组(M0)和脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导组(M1);之后将M1组分为Luteolin治疗组、2-DG(糖酵解抑制剂)组、Luteolin+2-DG组、Luteolin+DMOG(HIF-1α激活剂)组。Western blot检测iNOS、Arg-1和HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测巨噬细胞亚型;ELISA检测细胞IL-6和IL-10浓度;Real-time PCR检测GLUT1、HK2、PFK1、PK和HIF-1α mRNA表达。结果 与M1组比较,Luteolin治疗组以及Luteolin和2-DG共培养组糖酵解相关因子HIF-1α、GLUT1、HK2、PFK1和PK表达水平降低;细胞葡萄糖消耗增加、乳酸分泌量减少。M1型巨噬细胞标记物iNOS、CD86和IL-6表达降低,M2型巨噬细胞标记物Arg-1、CD206和IL-10表达增高。而DMOG能...     

丹皮酚通过雌激素受体α调控巨噬细胞表型转换

目的基于雌激素受体α(ERα)研究丹皮酚对巨噬细胞表型转换的影响。方法利用100μg·L^-1脂多糖(LPS)和20μg·L^-1γ-干扰素(IFN-γ)联用复制巨噬细胞M1极化模型。ELISA实验观察丹皮酚对白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。进一步用Western blot检测巨噬细胞M1表型标志物一氧化氮合酶iNOS、CD86和M2表型标志物精氨酸酶-1(Arg-1)、CD163的表达,并利用阻断剂和shRNA干扰的方法验证丹皮酚的效应是否通过ERα实现。结果ELISA结果表明丹皮酚可降低模型组TNF-α、IL-1β和MDA的含量,升高IL-10和SOD的含量。Westernblot结果显示,丹皮酚可降低模型组iNOS、CD86的蛋白表达,升高Arg-1、CD163的蛋白表达。ERα选择性阻断剂MPP和ERαshRNA均能降低丹皮酚的药效,ERβ选择性阻断剂PHTPP对丹皮酚的效应没有明显改变。结论丹皮酚可通过ERα诱导巨噬细胞向M2型转化,改善动脉粥样硬化。     

microRNA-125b在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平相关性

摘要：目的探讨microRNA-125b（miR-125b）在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子的相关性。方法 腹腔注射脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤大鼠模型,对照组注射等量的生理盐水（n=20）;各模型组（n=20）大鼠注射LPS 4、8、12及24 h后取其肺组织,HE染色观察病理学变化;PCR检测各组各时点肺组织中miR-125b、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-6（IL-6）变化。Pearson相关性分析实验组肺组织中miR-125b的表达与TNF-α、IL-6水平的相关性。NR8383细胞培养后分组,对照组不进行LPS刺激,实验组加入LPS刺激4 h、8 h、12 h及24 h时收集细胞,检测各组miR-125b、TNF-α与IL-6的含量变化。另NR8383细胞设3组,阴性对照组只转染空表达质粒,miR-125b mimic组转染miR-125b mimic表达质粒,miR-125b inhibitor组转染miR-125b inhibitor质粒。PCR测各组细胞中miR-125b 表达情况,Western blot测Notch1的表达情况。结果LPS各处理组大鼠模型肺组织严重出血、水肿及大量炎症细胞浸润。与对照组比较,在注射LPS 4、8、12以24 h后,实验组大鼠肺组织中miR-125b显著降低;而肺组织中TNF-α与IL-6水平则升高,其中在LPS注射4 h后,TNF-α与IL-6的表达水平达到峰值（P＜0.05）。实验组肺组织中miR-125b的表达与TNF-α及IL-6呈负相关（r 分别为-0.599、-0.580;P＜0.05）。在LPS诱导的第4、8、12、24 h,实验组NR8383细胞系miR-125b表达水平均低于对照组,而TNF-α、IL-6的表达水平均高于对照组（P＜0.05）。与阴性对照组比较,miR-125b mimic组miR-125b 相对表达量升高、Notch1蛋白相对表达量则降低（P＜0.05）,miR-125binhibitor组miR-125b 相对表达量降低、Notch1蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与miR-125b mimic组比较,miR-125binhibitor组miR-125b 相对表达量降低、Notch1蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。结论在脓毒症急性肺损伤中,microRNA-125b可能通过调控Notch1蛋白的表达,影响炎症因子TNF-α与IL-6的表达,参与其免疫炎症调控过程。     

miR-124靶向趋化素样因子超家族成员6对胶质瘤细胞的影响

目的　探究微小RNA（miR）-124靶向调控趋化素样因子超家族成员6（CMTM6）对胶质瘤细胞的侵袭、迁移的影响。方法　实时荧光定量PCR（qPCR）法检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹实验检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中CMTM6蛋白表达水平。miRTarBase预测miR-124与CMTM6的结合位点,实验设mimic NC组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组、miR-124 mimic+CMTM6组,分别转染miR-124 mimic NC、miR-124 mimic、pcDNA、pcDNA+CMTM6于各组细胞中。qPCR法检测各组细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭、迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白免疫印迹实验检测细胞中CMTM6、细胞表面程序性死亡蛋白配体1（PD-L1）蛋白表达水平。结果　与OLN93相比,SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124表达水平降低（P＜0.05）,CMTM6 mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）,选择U251细胞进行后续实验。miRTarBase预测发现miR-124与CMTM6存在结合位点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与mimic NC组和miR-124 mimic+CMTM6组相比,miR-124 mimic组和miR-124 mimic+pcDNA组细胞中miR-124表达水平升高（P＜0.05）,CMTM6 mRNA表达水平降低。培养24、48、72、96 h时细胞OD450降低,侵袭、迁移细胞数量减少,CMTM6、PD-L1蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论　上调miR-124表达可靶向下调CMTM6的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭、迁移。     

谷氨酰胺代谢对巨噬细胞表型极化的调控作用研究

目的 探讨谷氨酰胺代谢对巨噬细胞表型极化的调控作用。方法 以原代巨噬细胞为模型，分别采用添加谷氨酰胺、剥夺谷氨酰胺、谷氨酰胺酶抑制剂方法处理巨噬细胞，RT-qPCR检测巨噬细胞表型M1标志物如IL-12、IL-6、IL-1β、iNOS、M2标志物如Arg1、Chil3、Mrc1 mRNA表达水平。结果 谷氨酰胺剥夺显著促进巨噬细胞M1标志物IL-12、IL-6、IL-1β、iNOS表达增加，谷氨酰胺酶抑制剂显著抑制巨噬细胞M2型标志物Arg1、Chil3、Mrc1表达，促进巨噬细胞M1型标志物IL-1β、iNOS基因水平表达。结论 谷氨酰胺代谢可促进巨噬细胞M2极化。     

一清胶囊联合西帕依固龈液治疗牙龈炎的临床研究

目的 通过探究左西孟旦对巨噬细胞极化的影响,观察其抗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。方法 将45只健康清洁级ApoE-/-小鼠按照数字表法随机分为模型组、左西孟旦（2 mg/kg）组、左西孟旦（2 mg/kg）+脂多糖［LPS,2 mg/kg,Toll样受体4（TLR4）激动剂］组,每组15只,以高脂饲料喂养;取15只健康清洁级C57BL/6小鼠作为对照组,以普通饲料喂养。喂养8周后,ip给药,模型组和对照组ip等体积生理盐水,每天1次,持续4周。全自动生化仪检测血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平;HE染色与Masson染色观察主动脉组织形态变化与纤维化水平,油红O染色检测全主动脉及主动脉根部动脉斑块形成情况;免疫组织化学染色检测主动脉M1型标记蛋白诱导型一氧化氮合酶（iNOS）与M2型标记蛋白分化群206 （CD206）的表达;实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）法检测主动脉M1型巨噬细胞相关基因肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-6）与M2型巨噬细胞相关基因转化生长因子-β（TGF-β）、精氨酸-1（Arg-1）的表达;Western blotting检测主动脉TLR4与磷酸化的核转录因子 kB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TG、TC和LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低（P<0.05）;主动脉内膜增厚,斑块面积显著增加,伴随大量纤维化（P<0.05）;iNOS阳性细胞比例显著升高,CD206阳性细胞比例显著下降（P<0.05）;TNF-α、IL-6 mRNA水平显著上调,TGF-β、Arg-1 mRNA水平显著下调（P<0.05）;同时TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达显著上调（P<0.05）。与模型组比较,左西孟旦组小鼠血清TG、TC和LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著升高（P<0.05）;主动脉病理现象减轻,斑块面积显著减小,纤维化程度显著变小（P<0.05）;iNOS阳性细胞比例显著下降而CD206阳性细胞比例显著升高（P<0.05）;TNF-α、IL-6 mRNA水平显著下调,TGF-β、Arg-1 mRNA水平显著上调（P<0.05）;TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达显著下调（P<0.05）。与LPS联用基本抵消左西孟旦对上述病理现象的改善作用。结论 左西孟旦能够抑制TLR4的表达,阻止下游NF-κB信号途径的激活,调控巨噬细胞极化状态,从而发挥抗AS的作用。     

含硅羟基磷灰石调节巨噬细胞极性促进成骨分化机制研究

摘要：目的　探讨无机骨再生修复材料含硅羟基磷灰石（si-HA）通过调节巨噬细胞极性转换促进小鼠前成骨细胞MC3T3-E1（3T3）的增殖及成骨分化的作用机制。方法　制备羟基磷灰石（HA）和si-HA纳米粒子,以10 mg/L的剂量刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞（RAW,分别为HA组和si-HA组）,另设Control组（10%FBS的DMEM培养基）。分析RAW细胞的极化状态及炎性因子的表达水平。收集完全培养基、HA和si-HA纳米粒子刺激RAW细胞3 d后获得的上清液,制备RAW条件培养基、HA+RAW条件培养基和si-HA+RAW条件培养基,并培养小鼠3T3前成骨细胞（分别为RAW组、HA＋RAW组和si-HA＋RAW组）,并设空白对照组（完全培养基）,检测各组细胞增殖和成骨相关基因［M1极化标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、M2极化标志物Arginase基因及促炎、抗炎因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-10和IL-1ra］的表达水平。结果　si-HA组巨噬细胞iNOS、TNF-α、IL-1β mRNA表达水平低于Control组和HA组,Arginase、IL-10和IL-1ra mRNA表达水平高于Control组和HA组（P＜0.05）;IL-6 mRNA表达水平低于HA组（P＜0.05）,与Control组差异无统计学意义。si-HA+RAW组3T3细胞增殖能力、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成明显强于空白对照组、RAW组和HA+RAW组（P＜0.05）。培养14 d时,si-HA+RAW组3T3细胞ALP、OCN、OPN、Col-1、Runx2 mRNA表达水平均高于其他3组（P＜0.05）。结论　si-HA纳米粒子可诱导巨噬细胞产生较有利的骨免疫微环境,增强3T3细胞的增殖和成骨分化。     

阿尔茨海默病外周血中miR-219和CaMKⅡ-γ的表达

目的 探究阿尔茨海默病（AD）患者外周血中miR-219和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-γ（CaMKⅡ-γ）表达情况及临床意义。方法 选取四川大学华西医院门诊部2016年2月至2019年2月收治AD患者79例,根据临床痴呆表评分将AD患者分为轻度组29例,中度组24例,重度组26例。选择本院同期健康体检者79例为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定各组研究对象外周血血清miR-219、CaMKⅡ-γ水平,采用酶联免疫法检测白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用Pearson分析法分析miR-219水平、CaMKⅡ-γ mRNA、IL-6、TNF-α水平之间相关性。结果 与对照组相比,AD组患者血清CaMKⅡ-γ mRNA、IL-6、TNF-α水平较高,血清miR-219水平较低,差异均有统计学意义（P<0.05）;与轻度组相比,中度组和重度组AD患者血清CaMKⅡ-γ mRNA、IL-6、TNF-α水平较高,miR-219水平较低,差异均有统计学意义（P<0.05）,与中度组相比,重度组AD患者血清CaMKⅡ-γ mRNA、IL-6、TNF-α水平较高,miR-219水平较低,差异均有统计学意义（P<0.05）。Pearson分析显示miR-219与CaMKⅡ-γ、IL-6、TNF-α呈负相关（r=-0.546、-0.584,P<0.05）,CaMKⅡ-γ与IL-6、TNF-α呈正相关（r=0.523、0.603,P<0.05）。结论 阿尔茨海默病患者血清CaMKⅡ-γ mRNA水平上调,miR-219水平下调,与病情严重程度有关,可能与阿尔茨海默病发生进展存在一定关系。     

梓醇对AGEs刺激肾系膜细胞介导巨噬细胞极化的影响

目的探讨梓醇对晚期糖基化终末产物(AGEs)刺激肾系膜细胞介导巨噬细胞极化的影响。方法将巨噬细胞(RAW264.7)置于Transwell上层小室,肾系膜细胞(MMCs)于下层孔板进行体外共培养,设置模型组、0-BSA对照组、梓醇组(0.1、1.0、10.0μmol·L~(-1)),另设氨基胍组(1.0μmol·L~(-1))作为阳性对照。加入各药物预孵下层系膜细胞1 h后,用AGEs(100 mg·L~(-1))刺激,继续孵育23 h,采用ELISA法检测系膜细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的分泌水平;Western blot法检测巨噬细胞M1型标记蛋白i NOS、CD16/32、TNF-α、COX-2和M2型标记蛋白CD206、Arg-1的表达水平;流式细胞仪检测巨噬细胞i NOS与CD206蛋白表达百分率。结果 AGEs可提高系膜细胞MCP-1的分泌水平(P<0.01),上调巨噬细胞i NOS、TNF-α、CD16/32、COX-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),下调CD206和Arg-1蛋白表达;而梓醇(0.1、1.0、10.0μmol·L~(-1))预孵能降低系膜细胞MCP-1的分泌水平(P<0.01),下调i NOS、TNF-α、CD16/32、COX-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),上调CD206和Arg-1蛋白表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论梓醇可通过调控AGEs刺激系膜细胞分泌MCP-1的水平,抑制巨噬细胞的M1型极化,并促进其向M2型极化,减轻炎症反应,缓解糖尿病肾损伤。     

miR-339-5p调控IGF2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激的影响

摘要：目的:探讨微小RNA（miRNA）-339-5p是否通过调控胰岛素样生长因子2（IGF2）,影响肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和内质网应激。方法:逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）测定1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞A549中miR-339-5p和IGF2 mRNA表达。在A549细胞中转染miR-339-5p mimic、si-IGF2或共转染miR-339-5p mimic与pcDNA IGF2,并以1×108CFU·ml-1肺炎链球菌感染。流式细胞术评检测细胞凋亡,免疫印迹实验（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和活化转录因子6（ATF6）蛋白表达,比色法检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平。双荧光素酶报告实验验证miR-339-5p对IGF2的靶向作用。结果:miR-339-5p在肺炎链球菌处理的A549细胞中低表达,IGF2 mRNA高表达,差异有统计学意义（P<0.05）。过表达miR-339-5p或敲低IGF2后,肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡率、Bax蛋白、CHOP蛋白、ATF6蛋白、MDA、LDH水平减少,Bcl-2蛋白、SOD、GSH-Px水平增加,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-339-5p靶向调控IGF2 mRNA表达。过表达IGF2逆转了miR-339-5p对肺炎链球菌处理的A549细胞凋亡及内质网应激的影响。结论:miR-339-5p可能通过靶向调控IGF2,抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和减轻内质网应激。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体对炎症微环境中巨噬细胞 表型及软骨细胞的调控作用

目的 研究骨髓间充质干细胞来源外泌体（BMSCs-Exo）在炎症微环境中对巨噬细胞表型极化及软骨修复的调控作用。方法 差速离心法提取BMSCs-Exo，透射电镜观察外泌体形态，Western blot检测Alix、TSG101表达；使用不同浓度的BMSCs-Exo（10 μg/mL 和50 μg/mL）处理M1巨噬细胞及IL-1β刺激的软骨细胞，CCK-8测定BMSCs-Exo促巨噬细胞增殖能力，Western blot和qRT-PCR验证BMSCs-Exo对M1型巨噬细胞表型极化的影响，炎症相关基因IL-1β、IL-6的表达水平，以及成软骨相关因子COL II、MMP-13、TGF-β1的表达水平。结果 BMSCs-Exo为圆形双层囊泡，表达Alix、TSG101，可促进巨噬细胞增殖。与对照组比较，M1型巨噬细胞经BMSCs-Exo处理后，M1型极化标记物（iNOS）的表达水平降低，M2型极化标记物（Arg-1）的表达水平升高（P<0.05）；炎症相关基因IL-1β、IL-6的表达水平显著降低（P<0.05），炎症软骨细胞中的COL II、TGF-β1表达升高，MMP-13表达水平降低（P<0.05）。结论 BMSCs-Exo可调控M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化，降低炎症因子表达水平，促进炎症微环境中软骨修复。     

麻黄-大黄药对抑制肺泡巨噬细胞M1极化防治急性肺损伤的作用机制

目的 探讨麻黄-大黄(Mahuang-Dahuang, MD)药对抑制肺泡巨噬细胞M1极化,减轻炎症损伤,治疗急性肺损伤的作用和机制。方法 Wistar大鼠分为正常对照组(NC)、模型组(MC)、MD高(MD-H)、中(MD-M)、低剂量组(MD-L)阳性药对照组(DXMS),脂多糖腹腔注射制备急性肺损伤模型,造模后给予MD灌胃,观察肺组织病理变化;免疫组织化学法检测肺泡巨噬细胞标记物F4/80表达,F4/80和CD80、CD80和IL-6的共表达;流式细胞术检测肺组织F4/80和CD80含量的变化;PCR检测肺组织中IL-6、INOS、TNF-αmRNA相对表达;Western blot检测肺组织中CCR2、CCL2、p-p65、p65、p-p38MAPK、p38MAPK蛋白表达。结果 与NC组比较,MC组大鼠肺泡结构破坏,肺间质水肿、增厚、炎细胞浸润,其中巨噬细胞数量明显增多,CCR2、CCL2蛋白表达增强,肺组织M1肺泡巨噬细胞数量增多、表达增强,炎症因子IL-6、INOS、TNF-αmRNA相对表达上调,p-p65/p65,p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达上调;与MC...     

通心络对巨噬细胞极化的影响

目的研究通心络对巨噬细胞向M2、M1型极化的影响及其对Notch信号通路的作用。方法采用PMA分别联合IL-4、LPS诱导THP-1细胞分别向M2、M1型巨噬细胞极化并给予通心络进行干预,检测其标志分子IL-10、TNF-α、IL-6的表达及巨噬细胞极化相关Notch信号通路蛋白的表达。结果 M2组细胞培养上清中IL-10水平升高,IL-6、TNF-α的水平差异无统计学意义;M1组细胞培养上清中IL-10水平明显降低,IL-6、TNF-α水平明显升高;通心络组细胞培养上清中IL-10水平升高,IL-6、TNF-α水平下降。M2组细胞active Notch-1、DLL4、Hes-1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义,M1组细胞active Notch-1、DLL4、Hes-1蛋白表达明显升高,通心络组细胞active Notch-1、DLL4、Hes-1蛋白表达明显降低,各组Notch-1蛋白表达差异无统计学意义。结论通心络可抑制巨噬细胞向M1型极化,其机制可能与抑制Notch-1信号通路活化有关。     

巨噬细胞极化对心肌成纤维细胞活化的影响

目的 观察巨噬细胞极化上清对心肌成纤维细胞活化的影响。方法 提取SD大鼠的骨髓细胞和心肌成 纤维细胞。利用巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）处理骨髓细胞后,加入刺激因子：M0（无刺激因子）、M1（100 μg/L脂 多糖+10 μg/L干扰素-γ）、M2（20 μg/L白细胞介素-4）诱导巨噬细胞极化。将极化后的不同型别巨噬细胞及其培养 上清分别与心肌成纤维细胞共培养,分别设空白对照组、M0组、M1组和M2组,通过细胞免疫荧光检测心肌成纤维细 胞中纤维化蛋白的表达水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测巨噬细胞和成纤维细胞特征分子的表达; Western blot检测纤维化相关蛋白及转化生长因子β受体（TGFβR）、血小板衍生生长因子受体（PDGFRs）信号通路活 化情况。结果 经M-CSF及相应刺激因子诱导,成功获得M1和M2型巨噬细胞。细胞共培养结果显示,与M0组相 比,M1组上清培养的心肌成纤维细胞中胶原蛋白1（Col1a1）和Col3a1的mRNA水平以及平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表 达水平显著降低（P＜0.05）,而M2组上清培养的心肌成纤维细胞中Col1a1和Col3a1的mRNA水平以及α-SMA、结缔 组织生长因子（CCN2）表达水平显著升高（P＜0.05）。M1组上清培养的心肌成纤维细胞中PDGFRβ蛋白磷酸化水平 显著低于 M0 组（P＜0.01）,而 M2 组上清培养的心肌成纤维细胞中 PDGFRβ 蛋白磷酸化水平显著高于 M0 组（P＜ 0.05）。结论 M1型巨噬细胞上清能够抑制心肌成纤维细胞活化,而M2型巨噬细胞上清能够激活心肌成纤维细胞。 M1型巨噬细胞抑制纤维化的作用可能与抑制PDGFRβ通路的活化有关。     

LncRNA GAS5靶向miR-103减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制 #br#

目的 探究长链非编码RNA（LncRNA）生长抑制特异因子5（GAS5）靶向微小RNA（miR）-103,从而减轻 3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗（IR）的机制。方法 培养并诱导分化3T3L1小鼠前脂肪细胞,油红O染色鉴定细胞分化 情况。建立3T3L1脂肪细胞IR模型。实验分为对照组、模型组、空载体组（转染pEGFP-C1空载体）、GAS5过表达组 （转染 pEGFP-C1-GAS5 载体）、GAS5 过表达+mimic NC 组（转染 pEGFP-C1-GAS5+mimic NC）、GAS5 过表达+miR- 103 mimic组（转染pEGFP-C1-GAS5+miR-103 mimic）。实时荧光定量PCR检测细胞中GAS5、miR-103 mRNA水平; 液体闪烁法检测葡萄糖摄取能力;蛋白质免疫印迹检测细胞中胰岛素受体底物-1（IRS-1）、p-IRS-1、过氧化物酶体 增殖物激活受体γ（PPARγ）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT蛋白表达水平;双荧光素酶鉴定 miR-103与GAS5的靶向位点。结果 诱导后脂肪细胞呈圆形、胞体变大,胞浆丰富,含有大量脂滴,油红染色明显, 呈“指环样”结构,模型构建成功。与对照组比较,模型组、空载体组、GAS5过表达+miR-103 mimic 组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,细胞中miR-103 mRNA水 平升高（P＜0.05）;与模型组、空载体组比较,GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平升高,而miR-103 mRNA水平降低（P＜0.05）; 与GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组比较,GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖 摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT 蛋白水平降低,miR-103 mRNA 水平升高（P＜0.05）。miR- 103与GAS5存在互补的结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论 过表达GAS5后靶向下调miR-103的表达 可减轻3T3L1脂肪细胞IR。