沉默RohA基因对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2增殖和侵袭的影响

目的:探讨沉默RohA基因对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞株ACC-2增殖和侵袭的影响。方法:培养ACC-2细胞,分为siRNA-RhoA组、siRNA-对照序列组和空白对照组,实时荧光定量PCR技术检测细胞中Rho基因表达,Western blot法检测细胞中RohA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-RhoA组细胞中RohA mRNA和蛋白相对表达量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-RhoA组细胞在24、48、72、96h时吸光度A值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,si RNA-RhoA组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,si RNARhoA组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性沉默RohA基因表达可明显减弱ACC-2增殖能力,促进细胞凋亡,抑制细胞转移和侵袭能力。     

miR-181a对唾液腺腺样囊性癌细胞株侵袭和迁移的影响

目的研究与唾液腺腺样囊性癌（SACC）侵袭转移相关的微小RNA（miRNA）,探讨miR-181a对SACC侵袭和迁移的影响。方法选择1对不同侵袭迁移能力的SACC细胞株（SACC-LM/SACC-83）,采用miRNA芯片技术分析细胞株中miRNA的表达差异,初步筛选出与SACC侵袭转移相关的miRNA。再通过过表达或沉默细胞株中miR-181a的表达,进行细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P〈0.05为差异具有统计学意义。结果 miRNA芯片结果显示,高侵袭迁移能力的SACC细胞株miR-181a表达明显下降。细胞划痕和Transwell实验结果表明,SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后体外侵袭迁移能力明显受到抑制（t=-5.235,P〈0.05）;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后体外侵袭迁移能力有所提高（t=7.713,P〈0.05）。结论不同侵袭迁移能力的SACC细胞株中存在多种miRNA的差异表达。miR-181a的表达降低可能导致SACC细胞侵袭迁移能力的增强。     

体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法 体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83,采用脂质体载体瞬时转染的方法,将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组),并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率;Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix met...     

蛋白激酶D抑制剂CRT0066101对唾液腺腺样囊性癌细胞迁移能力的影响

观察蛋白激酶D（PKD）的抑制剂CRT0066101对唾液腺腺样囊性癌（SACC）细胞迁移能力的影响,并探讨其相关机制,为SACC治疗提供新策略。     

沉默法尼基转移酶对人涎腺腺样囊性癌细胞迁移、侵袭及上皮间充质转化的作用

目的　通过体外实验探讨法尼基转移酶（FTase）对涎腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞迁移侵袭及上皮间充质转化（EMT）的作用及其机制。方法　针对人FTase基因序列设计构建3条小干扰RNA（si-RNA）,采用处于对数生长期的SACC-LM及SACC-83细胞,经脂质体瞬时转染技术抑制细胞FTase表达,分别命名为FTase-siRNA-1组、FTase-siRNA-2组、FTase-siRNA-3组,同时设置阴性对照组（NC-siRNA）,空白对照组（仅加入转染试剂）。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测FTase、HRAS的mRNA表达,选择沉默效率最高的FTase-siRNA进行后续实验;蛋白质免疫印迹法检测FTase、HRAS、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT、p65、磷酸化p65（Ser563）、上皮钙依赖黏附蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的蛋白表达以及HRAS膜蛋白表达;Transwell小室及细胞划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力。结果　与空白对照组及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组mRNA及蛋白相对表达量均降低（P<0.05）,HRAS mRNA和总蛋白表达的差异无统计学意义（P>0.05）,HRAS膜蛋白相对表达量降低（P<0.05）,上皮钙依赖黏附蛋白相对表达量升高（P<0.05）,波形蛋白相对表达量降低（P<0.05）,MMP-9蛋白相对表达量降低（P<0.05）,RAS/PI3K/AKT/核因子-κB信号通路相关蛋白AKT、p65相对表达量的差异无统计学意义（P>0.05）,但磷酸化AKT、磷酸化p65蛋白相对表达量降低;与空白及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组细胞侵袭及迁移能力显著下降（P<0.05）。结论　体外沉默FTase可有效抑制人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83的侵袭、迁移能力,其作用可能是通过干扰HRAS膜蛋白的定位,调控RAS/PI3K/AKT/核因子-κB信号通路,介导EMT而实现。     

沉默DNA结合抑制蛋白-1基因对腺样囊性癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的 探讨DNA结合抑制蛋白-1(Id-1)基因在腺样囊性癌细胞生长和侵袭行为中的作用.方法以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M和ACC-2为研究对象,免疫荧光检测Id-1基因的表达;用小干扰RNA进行Id-1基因的RNA干扰:于干扰前后应用RT-PCR和Western blot检测2个细胞系Id-1表达情况:于干扰前后应...     

p120连环蛋白对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨p120ctn-shRNA对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及p120ctn-shRNA对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。方法 选取人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83细胞系进行培养,p120ctn-shRNA慢病毒表达载体转染SACC-83,同时转染空载体NC shRNA作为对照组,嘌呤霉素筛选稳定表达p120ctn-shRNA的细胞系。通过RT-PCR和Western Blot检测敲低效果。分别通过CCK8、划痕实验、迁移实验和侵袭实验观察p120连环蛋白基因敲低对人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响。通过RT-PCR和Western Blot检测p120连环蛋白基因敲低对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,实验组p120连环蛋白的基因表达量和蛋白表达量都大幅度降低。与对照组相比,实验组的增殖能力明显降低（P<0.05）,与对照组相比,实验组的迁移能力明显降低。与对照组相比,实验组的侵袭能力明显降低（P<0.01）。E-钙粘蛋白表达略微下降,N-钙粘蛋白表达显著下降。结论 抑...     

神经营养素-3对腺样囊性癌细胞体外迁移能力的影响

目的研究神经营养素-3对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M体外迁移能力的影响.方法应用Transwell培养小室测定不同浓度NT-3对ACC-M细胞的体外迁移能力的影响.结果 ACC-M细胞与2.5,5,10 ng/ml的NT-3共培养10 h后迁移细胞数均明显多于未加NT-3组;而与浓度为100 ng/ml的NT-3共培养10 h后迁移细胞数却明显少于未加NT-3组.结论 NT-3对ACC-M细胞体外迁移能力的影响存在浓度依赖性.一定浓度的NT-3能够增强ACC-M细胞的体外迁移能力.     

涎腺腺样囊性癌细胞侵袭鼠胶原的实验观察

为了研究涎腺腺样囊性癌对Ｉ型胶原的侵袭能力，本实验利用鼠尾胶原作培养基，接种涎腺腺样囊性癌细胞系ＡＣＣ－２和高转移细胞株ＡＣＣ－Ｍ，以研究其侵袭能力。结果发现，肿瘤细胞紧密粘附胶斫，部分形成单层或复层，高转移细胞（ＡＣＣ－Ｍ）形成侵袭灶，并形成类似腺管结构，说明高转移细胞株对Ｉ型胶原具有更强的侵袭能力。     

NT-3对腺样囊性癌细胞系ACC—M体外侵袭能力的影响

目的:研究NT-3对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M体外侵袭能力的影响.方法:应用Transwell培养小室测定不同浓度NT-3对ACC-M细胞的体外侵袭能力的影响.结果: ACC-M细胞与2.5、5、10 ng/ml浓度的NT-3共培养20 h后侵袭细胞数均明显多于未加NT-3组;而与浓度为100 ng/ml的NT-3共培养20 h后侵袭细胞数却明显减少.结论:NT-3对ACC-M细胞系体外侵袭能力的影响存在浓度依赖性.一定浓度的NT-3能够增强ACC-M细胞系的体外侵袭能力.     

体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶基因对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过构建异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(ICMT)小分子干扰RNA(siRNA)沉默ICMT,研究沉默ICMT基因对舌鳞状细胞癌(TSCC)迁移和侵袭的影响.方法 通过脂质体转染的方法将siRNA转染至人TSCC CAL-27和SCC-4细胞(ICMT-siRNA组),并设阴性对照组(转染NC-siRNA)和空...     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

Survivin基因在人涎腺腺样囊性癌中的表达

目的：研究survivin基因在人涎腺腺样囊性癌（SACC）中的表达及其临床意义。方法：用免疫组化（S-P法）染色技术对38例SACC组织和8例癌旁正常腮腺组织标本进行survivin基因表达的检测和分析。结果：SACC组织中survivin的阳性表达率为68.4%,而癌旁正常腮腺组织无1例表达。survivin的表达与年龄、性别、部位、病理类型、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移无明显相关（P〉0.05）,但survivin表达阳性组术后5年生存率显著低于表达阴性组（P〈0.05）。结论：survivin基因与SACC的预后有关,其高表达提示SACC预后不良;survivin基因有望成为涎腺腺样囊性癌诊断和基因治疗的新靶点。     

体外RNA干扰RhoA基因对舌癌细胞侵袭的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113和SCC-4中RhoA基因的表达,探讨RhoA基因表达下调对舌癌细胞侵袭的影响。方法登录Genbank数据库确定人RhoA基因序列,针对RhoA的基因序列设计短链RNA,利用Lipofectamine2000介导法将RhoA-siRNA转染至舌癌Tca8113和SCC-4细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后的舌癌细胞中RhoA mRNA的表达,蛋白质印迹法检测RhoA、半乳糖凝集素-3（galectin-3）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果舌癌细胞转染RhoA-siRNA后,RhoA的基因和蛋白表达下降,galectin-3和MMP-9蛋白表达下降,细胞体外侵袭能力降低。结论RhoA-siRNA可以有效地抑制舌癌Tca8113和SCC-4细胞中RhoA的表达,通过降低galectin-3和MMP-9的表达从而降低细胞的侵袭能力。RhoA在舌癌的侵袭和转移中可能发挥重要的作用。     

BDNF/TrkB在唾液腺腺样囊性癌上皮-间质转化过程中的表达及意义

目的 研究BDNF、TrkB和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌（SACC）细胞系中的表达,初步探讨BDNF、TrkB和E-cadherin与SACC高转移性及神经侵袭性之间的关系。方法 以SACC高、低转移细胞系SACC-LM和SACC-83为研究对象,利用实时荧光定量 PCR和Western 免疫印迹技术检测BDNF、TrkB和E-cadherin在其中的表达差异;在SACC-83细胞系中加入外源性BDNF因子、TrkB抑制剂k252a,分析BDNF/TrkB通路在SACC侵袭转移过程中的生物学作用;利用实时荧光定量 PCR、Western 免疫印迹、细胞形态观察、细胞迁徙和侵袭实验评估SACC细胞上皮-间质转化（EMT）进程。应用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 BDNF 和TrkB在SACC-LM中的表达高于SACC- 83,E-cadherin在SACC-LM中的表达低于SACC- 83;外源性BDNF刺激能有效诱导TrkB的激活和表达,降低E-cadherin的表达,提高N-cadherin的表达,使细胞形态呈长梭形改变,促进SACC-83细胞的迁徙、侵袭能力;而TrkB受体抑制剂k252a可有效抑制BDNF的各种作用,降低SACC-83细胞形态变化和迁徙、侵袭能力。结论 BDNF/TrkB信号通路通过介导SACC的EMT过程,促进SACC的迁徙、侵袭能力。     

辛伐他汀联合干扰miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞迁移和侵袭的影响

目的: 探讨辛伐他汀（simvastatin, SIM）联合干扰miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞株（SACC-LM）迁移、侵袭的影响。 方法: 体外培养SACC-LM细胞,随机分为阴性对照组（negative control,NC）、IC₅₀辛伐他汀组（SIM）、miR-21抑制剂转染组（simiR-21）和联合处理组（simiR-21+SIM）。利用qRT-PCR检测4组细胞中 miR-21的表达水平,CCK8法检测不同浓度辛伐他汀（0、10、20、30、40、50、60 μmol/L）作用48 h后的细胞活性,得出48 h的IC₅₀;观察干扰miR-21后SACC-LM对辛伐他汀的耐药性变化。Transwell法观察细胞迁移（不加基质胶）、侵袭能力（加入基质胶）的变化。Western免疫印迹检测EMT途径相关蛋白E-Cadherin、Snail1的表达。应用SPSS 22.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。 结果: 与阴性对照组相比,转染组及联合作用组中miR-21表达显著下调（P<0.01）,单独药物组中miR-21表达无显著变化（P>0.05）。辛伐他汀使SACC-LM细胞的生长受到明显抑制,与药物浓度呈正相关关系。干扰miR-21后,SACC-LM对辛伐他汀的耐药性显著降低（P<0.05）。联合作用组中细胞的迁移、侵袭活性较其他处理组相比均受到显著抑制 (P<0.01),Western免疫印迹结果显示,联合作用组中E-Cadherin蛋白的表达较其他对照组显著升高（P<0.01）,Snail1蛋白表达显著降低（P<0.001）。 结论: 干扰miR-21能有效降低SACC-LM对辛伐他汀的耐药性,通过与辛伐他汀的联合作用,SACC-LM细胞的迁移、侵袭能力受到明显抑制,其机制可能与Snail1表达下调、E-Cadherin表达上调有关。     

人涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭的动物实验研究

目的 探讨人涎腺腺样囊性癌对神经的侵袭情况.方法 将30只裸鼠平均分为三组,采用Acc-M,Tca-8113及Eca-109三种细胞系分别接种于10只裸鼠的坐骨神经附近,28天后同时处理所有被接种的裸鼠,以对比这三种细胞系成瘤后对神经的侵袭情况.结果 Acc-M组有90%发生神经侵袭,远远高于Tca-8113组15%及Eca-109组10%(P＜0.001).结论 腺样囊性癌嗜神经侵袭是其特征性生物学行为.     

体外沉默法尼基转移酶对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过RNA干扰沉默法尼基转移酶（FTase）,探讨沉默FTase对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响及其相关机制。方法 针对FTase设计并构建3条小干扰RNA（siRNA）,转染人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞（实验组）,同时设置阴性对照组（转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞FTase、HRAS的mRNA表达,根据FTase mRNA的表达量,选取沉默效率最高的FTase-siRNA转染组作为进一步研究的实验组。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞FTase、HRAS、p65、p-p65(S536)、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组FTase的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,HRAS的mRNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）,p-p65(S536)、MMP-9、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降（P<0.05）,p65蛋白表达无明显变化（P>0.05）;实验组的细胞侵袭和迁移能力降低（P<0.05）。结论 体外沉默舌鳞状细胞癌细胞FTase,可以抑制细胞体外迁移和侵袭能力,为FTase可能作为舌癌治疗的分子靶点提供了一定的理论和实验依据。