单克隆抗体在生殖医学及计划生育中的应用

单克隆抗体(McAb)是针对某一抗原决定簇的抗体,McAb技术在生殖医学、计划生育基础理论研究和临床诊治方面已显示出巨大的威力。迄今为止,McAb已应用于生殖免疫、妊娠生理和病理、性激素测定和纯化、甾体和一些蛋白激素受体、妇科肿瘤诊治、避孕机理和节育措施等方面。McAb技术的兴起及在上述领域中的应用,是生殖医学和计划生育学科中的一个巨大进步,它将使人类生殖之谜,避孕机理和妇产科疾病发生机理得以进一步揭示。     

HRP-F1McAb酶免疫染色技术检测小鼠脏器鼠疫F1抗原应用效果评价

目的：评价辣根过氧化酶标记鼠疫F1单克隆抗体（HRP‐F1McAb）酶免疫染色技术检测小鼠脏器鼠疫F1抗原的应用效果。方法通过HRP‐F1McAb酶免疫染色法检测鼠疫菌EV株感染小鼠脏器标本和对照小鼠脏器标本,同时用细菌学、RIHA和ELISA做平行检测。结果 HRP‐F1McAb酶免疫染色法与细菌学一致率为96．36％,阳性检出率差异无统计学意义（χ2＝0,P＞0．05）;HRP‐F1McAb酶免疫染色法和RIHA一致率为98．18％,阳性检出率差异无统计学意义（χ2＝0,P＞0．05）;HRP‐F1McAb酶免疫染色法和ELISA一致率为96．36％,阳性检出率差异无统计学意义（χ2＝0,P＞0．05）。结论酶免疫染色法检测小鼠脏器鼠疫F1抗原特异敏感、简单快速。     

甲基对硫磷单克隆抗体的研制及鉴定

目的研制甲基对硫磷(M1605)单克隆抗体(McAb).方法人工抗原M1605-TTH免疫BALB/C小鼠,用被免疫的脾脏淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在融合剂PEG4000作用下融合.经过HAT培养液选择性培养、间接ELISA法筛选和有限稀释克隆后,鉴定该杂交瘤细胞株和McAb.结果获得2株稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株G12、H02,其培养液和腹水滴度为1103和1105.进一步研究G12发现,该杂交瘤细胞株的染色体数为99～108,其McAb分类为IgM,该McAb的亲和力常数为1.67×105L/mol,且具有较好的特异性.结论获得抗M1605的特异性McAb,为建立M1605简便、快速、特异的生物检测方法提供了必要条件.     

哮喘大鼠外周血单个核细胞CD40、CD40L表达和CD40L单克隆抗体对Th1、Th2细胞因子生成的影响

目的 研究哮喘大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)表面CD40、CD40L表速和CD40L单克隆抗体(CD40L McAb)对其细胞因子生成的影响.方法 应用流式细胞仪检测哮喘大鼠PBMCs表面CD40和CD40L表达;RT-PCR检测哮喘大鼠PBMCsCD40和CD40L mRNA表达;CD40L McAb处理哮喘大鼠PBMCs,ELISA检测细胞培养上清中IL-4、IFN-γ含量.结果 和正常大鼠相比,哮喘大鼠PBMCs CD40、CD40L表达增高(P＜0.05);哮喘大鼠PBMCs经CD40L McAb处理后,和未处理组相比,IL-4水平明显降低(P＜0.05),IL-4/IFN-γ比值明显降低(P＜0.05).结论 哮喘大鼠PBMCs存在CD10、CD40L高表达,CD40L McAb可以降低IL-4水平及IL-4/IFN-γ比值.     

乐果单克隆抗体制备的初步研究

目的:制备特异性抗乐果单克隆抗体(McAb)。方法:采用生产乐果的中间体硫磷酯与1,4-二氨基丁烷反应合成乐果半抗原,利用碳二亚胺法,将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和包被原。将免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,通过杂交瘤技术,制备特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,并通过有限稀释法克隆化3次。用间接ELISA检测该McAb的效价和亲和性,用间接竞争ELISA检测与其他结构类似物的交叉反应率。结果:通过偶联,获得免疫原和包被原,半抗原与BSA和OVA的偶联比分别为13:1和11:1。通过杂交瘤技术,获得1株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,其培养上清与腹水效价分别为1:32和1:1024,McAb亲和常数为1.4×104L/mol,与氧化乐果的交叉反应率为10.6%,与其他所测结构类似的农药交叉反应率均小于0.5%。结论:通过杂交瘤技术,获得1株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,但McAb效价、亲和力都较低,与制备试剂盒的要求尚有较大的差距。     

抗人尘细胞单克隆抗体用于低SiO2粉尘所致尘肺的诊断研究

目的研究抗人尘细胞单克隆抗体(McAb)用于低SiO2粉尘所致尘肺病人的特异性及灵敏度检测.扩大抗人尘细胞McAb在尘肺诊断中的应用范围.方法用人体巨噬细胞体外加SiO2培养、提纯抗原免疫BALB/C小鼠获取致敏的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化,筛选出两株分泌抗人尘细胞McAb的杂交瘤细胞,用其分泌的McAb分别测定了138例各期尘肺病人的血清,其中矽肺58例,电焊工尘肺33例,煤工尘肺39例,石棉肺8例以及84例0+观察者、54例非接尘作业的正常人,32例肺科病人.结果矽肺、低SiO2尘肺与抗人细胞MoAb反应的均值无显著性差异(P＞0.05),各类尘肺与正常人之间有明显的界限值分别为(1.77±0.41)g/L,(0.98±0.34)g/L.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期各类尘肺间无明显的剂量反应关系.结论机体接尘后所产生的异性蛋白具有同源性,相对抗人细胞McAb是同一种抗原.抗人细胞McAb不仅可用于矽肺的检测诊断,同样也可用于低SiO2粉尘所致尘肺的检测诊断.     

应用流行性出血热病毒单克隆抗体对地方株病毒抗原的分析

近年来,我市EHF 发病人数不断增加,临床表现复杂,病情轻重不一,宿主动物种类也较多,而且在家鼠型疫源地褐家鼠鼠肺中分离的病毒,用单克隆抗体(McAb)检测时,发现其带有野鼠病毒型的抗原成分。为了进一步探讨我市EHFV 的抗原特点,我们新近从不同疫源地的病人血清及尿中分离出3株EH-FV,并用14个EHFV McAb 进行了抗原分析,报告如下。1 材料与方法1.1 McAb 组特异性McAb L_(13)F_3、     

双单抗夹心ELISA方法检测EPF活性

目的 建立双单抗夹心酶联免疫吸附试验法用于测定早孕因子(EPF)。方法筛选可稳定分泌抗EPF单克隆抗体的细胞株，制备腹水型单抗(McAb)并分离纯化，用改良碘化钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗，分析McAb的结合位点，通过抗体配对试验选择合适的捕获和检测McAb，建立双McAb-ELISA检测方法。结果筛选出二株稳定分泌抗EPF抗体的单克隆细胞株；两株单抗识别不同的抗原表位；双McAb夹心ELISA法测EPF活性灵敏度可达0．01udml，线性测定范围在0．01～10ug/ml，2份同批血清标本分别重复8次测定，平均批内变异系数为7．7％，2份不同批血清分别重复6次测定，平均批间变异系数为5．8％。建立的双McAb-ELISA法灵敏度90．2c％和特异度为92．8％。结论 建立的双McAb夹心ELISA法，有优异的灵敏度和特异度，稳定性强，而且简便、快速，适用于血清EPF检测，并有一定的临床应用前景。     

McAb血球和RPHA试剂检测血清HBsAg的比较

为了寻求一种优选的诊断试剂,我们用 McAb 血球和 RPHA 试剂分别对263份血清标本进行 HBsAg 检测,以探讨二种试剂的特异性、灵敏性、假阳性、假阴性等。263份血清标本均来自饮食从业人员,每人抽血 2ml 分离血清。方法及结果判定按各诊断试剂说明书进行,均以≥1:16为阳性,阳性终点为(?)。1、McAb 血球与 RPHA 试剂检测结果的对比:将血清标本分别用 McAb 血球和 RPHA 试剂作初筛试验。阳性标本再分别做中和试验,结果表明:263份血清标     

单克隆抗体用于鼠疫的特异诊断

以单克隆抗体(McAb)作为试剂,应用于鼠疫的诊断、监测,现已着手研究。与鼠疫菌(Yersinia Pestis)封套抗原特异部分1 (F1)起反应的McAb,已经应用于放射免疫测定(RIA),酶联免疫吸附试验(ELISA)和被动血疑试验。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为提高弓形虫感染的特异性免疫诊断水平，作者用杂交瘤技术制备抗弓形虫单克隆抗体（McAb）。经有限稀释法克隆3次和2个月的连续传代及液氮保存试验，获得6株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株。其培养上清SPA—ELISA效价高者达1:6250，能被特异性抗弓形虫血清所阻断，证明该McAb具有抗弓形虫的特异性。     

亚、欧、美洲汉坦病毒代表株的单克隆抗体反应模式

自从1975年Kohler与Milsteia首先报道用杂交瘤技术产生单克隆抗体(McAb)以来,这一技术已被广泛应用于医学各学科,特别是医学生物学的研究。M.C.Franko等首先将此技术应用于汉坦病毒的抗原性分析。他们的6株抗76—118株的McAb能将南朝鲜的李株和76—118株区分开来;而此6株McAb均不与美国的Prospect Hill病毒和北欧的流行性肾病病毒起反应。     

单克隆抗体对甲_1型流感病毒的抗原分析和快速诊断的研究

用宁夏地区分离的甲,型流感毒株宁防86—27(H_1N_1)制备了抗甲_1型流感病毒血凝素的McAb39株,其血抑滴度在1:2000—1:256000,Ig亚类为IgG_1、IgG2a、IgG2b。用自制的McAb对宁夏历年分离的甲_1型毒株的抗原分析表明:抗原漂移存在,且以1981和1987年的毒株抗原漂移明显。用我们的McAb对甲_1型毒株的间接免疫荧光试验,证实此法特异性好,敏感性高,确有早期快速诊断的意义。     

甲型肝炎病毒H2株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 为甲型肝炎病毒(HAV)的诊断和相关研究提供高效价的抗体来源. 方法 用细胞培养获得的H_2株HAV免疫BALB/C小鼠,经细胞融合技术,ELISA筛选和有限稀释克隆化培养. 结果 获得3株能稳定分泌抗HAV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,命名为6-A8、6-F2和1-H3.经鉴定,其上清和腹水的抗体效价分别为1∶(2048～16 824)和1∶(65 536～524 288).6-A8和6-F2属IgG2a亚型,1-H3属IgG1亚型.染色体数分布在92～98之间.3株细胞株McAb分别能与HAV不同抗原位点结合. 结论 3株能稳定分泌抗HAV McAb的杂交瘤细胞株成功建立,并获得高效价的抗HAV McAb.     

抗-EHFV McAb对人工感染小白鼠乳鼠保护作用的研究

本文研究了抗-EHFV McAb 对人工感染 EHF 病毒的小白鼠乳鼠的保护和治疗作用。结果表明:抗-EHFV McAb-B_9、H_(11)等具有血凝抑制活性,它们对乳鼠的中和指数分别为4.5和0.7.且对不同来源的病毒株感染的乳鼠均有中和效应。实验还表明,McAb 无论中和指数如何,多株混合后,都能大大提高感染鼠的保护作用。在保护效应的观察中,我们发现在攻毒前24h 到攻毒后7天内使用 McAb,均能使感染鼠存活96.2%,即使有部分鼠发病,其发病时间也向后推迟2～5天,并能自愈。     

抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体对急性胰腺炎大鼠肠道完整性的影响

目的：探讨抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体（anti-TNFαMcAb)对急性胰腺炎大鼠所致道完整性的影响。方法：SD大鼠32只,制备急性胰腺炎模型后,随机分为对照组（n=16)及实验组（n=16),对照组给予全肠外营养支持,实验组给予相同配方的全外营养支持;并予anti-TNFαMcAb静脉内注射。于建立急性胰腺炎模型后第1天及第5天处死,检测大鼠肠道通透性、吸收功能、空肠粘膜湿重、微绒毛高度和面积、双糖酶活性以及肠道细菌移位率。结果：两组动物间肠道通透性,吸收功能、空肠粘膜湿重、微绒毛高度和面积、双糖酶活性以及肠道细菌移位率均无显著差别。结论：anti-TNFαMcAb对急性胰腺炎大鼠肠道完整性无明显影响。     

McAb快速ELISA诊断旋毛虫病

作者应用抗人IgG McAb酶结合物,吸附面积较大的聚氯乙烯载体和无毒底物3,3′,5,5′四甲基联苯胺来研究简便、恢速的ELISA方法,其诊断旋毛虫病的效果良好。McAb快速ELISA诊断旋毛虫病具有以下的优点:1.采用吸附表面积较大的PVC载体,提高了试验的敏感性,而且PVC薄膜载体价廉,成本较原来的降10倍;2.此法以目视判断为主,可以不要任何仪器设备。PVC载体孔间距离大,可防止PS反应板因光线衍射对目视判断结果的干扰;3.采用抗人IgG McAb酶结合物,不仅酶结合物效价高,而且反应的本底很清晰,便于观察判断结果;4.用无毒底物TMB代替OPD,不需在临用前新鲜配制,省时间又安全;5.本研究采用预固相抗原方法,减少了试验操作程序,同时通过提高反应系统浓度来缩短孵育时间,使本法达到了操作简便、反应快速。     

McAb-ELISA检测丝虫特异IgG4的应用研究

目的 探讨McAb－ELISA检测丝虫特异IgG4在丝虫感染监测中的应用价值。方法 利用生化免疫技术，经细胞融合，建立起7株对IgG4表现为单一反应性的单克隆抗体（McAb）。以此为探针，采用ELISA方法检测丝虫特异IgG4。结果 检测班氏生丝蚴血症血清的敏感性为96．3％（104／108），测得IgG4的最低限量为0．01ul/ml；检测丝虫病流行区健康、肠道线虫感染、华支睾吸虫感染和襄虫病患等血清均呈阴性，未出现交叉反应，特异笥为100％。经现场应用研究，同样获得良好的实用性，有效地反映出当地丝虫病流行与感染状况。结论 该技术是监测丝虫感染的理想方法。     

阳性鼠肺内汉滩病毒分型的原理和方法

应用单克隆抗体(McAb)对流行性出血热(EHF)的病原体汉滩病毒(HTV)进行分型与反应谱及其滴度的研究一般是在受染 VeroE6细胞抗原片上进行的。然而分离病毒株和制备抗原片费时、费力,而且不易普及。因此,在80年代,国内外许多研究者     

利用3种抗体流式分选母血中胎儿细胞的比较

目的比较单克隆抗转铁蛋白受体抗体(CD71McAb)、单克隆抗血型糖蛋白A抗体(GPAMcAb)和抗血红蛋白-ξ抗体(ξ-Hb)3种胎儿有核红细胞(FRBCs)特异性抗体在流式细胞仪上分选母血中胎儿细胞的检出率,评价分选胎儿细胞的最适方法。方法收集55例孕妇外周血,利用淋巴细胞分离液从中分离出单个核细胞层后,每例标本分为5组,分别加入不同抗体第1组CD71Mchb单用;第2组GPAMcAb单用;第3组ξ-Hb单用;第4组CD71+GPA联用;第5组CD71+GPA+ξ-Hb联用,孵育后流式细胞仪进行分选,应用PEP-PCR检测分选后的胎儿细胞的SRY基因。结果5组FNRBC的阳性细胞检出率及鉴定符合率分别为2.74%,77.14%;5.25%,65.4%;0.22%,95.7%;0.72%,98.6%;0.02%,60%。结论利用CD71McAb和GPAMcAb双重标记胎儿细胞进行分选或者利用抗ξ-Hb特异性McAb分选FRBCs是更有效的分选方法。