慢病毒介导的E2F-1沉默对人胃癌细胞MGC803中药人参黄芪复方药物敏感性的影响

目的:利用重组慢病毒介导的E2F-1基因沉默载体感染人胃癌MGC-803细胞,观察其对中药人参黄芪复方药物敏感性的影响.方法:将胃癌MGC-803细胞接种于培养板中分为4组:正常组(正常培养基)、空白对照组(中药培养基)、阴性对照LV-RNAi组(中药培养基+感染空载体慢病毒颗粒2.0×109TU/mL)、E2F-1-RNAi-LV组(中药培养基+感染E2F-1基因重组慢病毒颗粒2.0×109TU/mL),分别采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测E2F-1mRNA及蛋白表达;MTT方法检测细胞的增殖抑制率;Giemsa染色检测细胞的克隆形成;流式细胞仪检测细胞的凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果:E2F-1基因沉默蛋白及mRNA表达水平均明显下降,差异有统计学意义(0.384±0.036vs0.883±0.051和0.923±0.049,0.220±0.056vs0.729±0.021和0.712±0.037,P<0.05).中药人参黄芪复方能抑制人胃癌MGC-803细胞生长、诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞克隆形成及迁移;与空白对照组及阴性对照组相比较,E2F-1基因沉默组MGC-803细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著提高,其细胞克隆形成、细胞迁移面积显著降低,差异均有统计学意义(0.789±0.013vs0.484±0.060和0.454±0.006,0.383±0.027vs0.114±0.038和0.089±0.051,0.024±0.003vs0.036±0.004和0.052±0.002,0.553±0.038vs0.897±0.020和0.928±0.051,P<0.05).结论:重组慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默能有效增强中药人参黄芪复方对人胃癌MGC-803细胞的药物敏感性.     

RNAi沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响

目的构建HMGN5基因的shRNA慢病毒载体,并在肺癌A549细胞上鉴定其沉默效率,观察其对细胞增殖能力的影响。方法筛选HMGN5基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA,与LentiLox3.7慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染肺癌A549细胞,设阴性组及干涉组,应用Real-time PCR和Western印迹的方法检测HMGN5在mRNA和蛋白水平的沉默效率,MTT和克隆形成实验观察HMGN5基因沉默对A549细胞增殖的影响。结果构建的shRNA慢病毒颗粒感染A549细胞后,干涉组HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了71.7%,显著抑制其蛋白表达;MTT结果表明细胞增殖能力明显降低,干涉组克隆形成能力较阴性组明显减弱。结论成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,其能够在肺癌A549细胞上有效沉默靶基因。HMGN5基因具有影响肺癌细胞恶性增殖的能力,为肺癌的基因治疗奠定了实验基础。     

沉默ABCC4基因表达对人胰腺癌PANC1、BxPC-3细胞增殖的影响

目的 检测ABCC4基因沉默后对人胰腺癌PANC1、BxPC-3细胞增殖及细胞周期的影响.方法 构建插入靶向ABCC4的shRNA片段的重组慢病毒载体,感染人胰腺癌细胞株PANC1和BxPC-3.采用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测感染细胞的ABCC4 mRNA及蛋白表达,克隆形成实验测定感染细胞形成的克隆数,流式细胞仪检测感染细胞的细胞周期.结果 成功构建了插入靶向ABCC4的shRNA片段的重组慢病毒载体.重组慢病毒感染PANC1及BxPC-3细胞后,细胞ABCC4 mRNA表达被抑制(0.28 0.01比1.00±0.03,0.22 ±0.02比1.00 ±0.03,P值均＜0.05);ABCC4蛋白表达亦显著下调;感染的PANC1细胞克隆形成数量显著减少(4比65,P＜0.05);细胞周期阻滞在G1期[(54.98±1.78)％比(42.93±0.88)％,(68.55±0.75)％比(54.76 ±0.29)％].结论 沉默人胰腺癌PANC1和BxPC-3细胞的ABCC4基因表达可显著抑制癌细胞的增殖,使细胞阻滞于G1期.     

lncRNA GHET1表达水平对人胃癌细胞MGC-803增殖迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌高表达转录本1(GHET1)对人胃癌细胞MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 以MGC-803细胞作为实验对象,通过慢病毒转染的方法构建lncRNA GHET1过表达和lncRNA GHET1沉默的MGC-803细胞模型,分别为过表达组和沉默组,并设置其对应的阴性对照组。通过荧光显微镜观察慢病毒转染效率。通过实时荧光定量PCR检测各组lncRNA GHET1、miR-105表达水平。通过CCK-8实验检测各组细胞增殖能力。通过Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 荧光显微镜下观察见各组细胞病毒转染率均高于90%。实时荧光定量PCR结果显示,过表达组lncRNA GHET1的相对表达量显著高于过表达对照组（P<0.05）,沉默组lncRNA GHET1相对表达量显著低于沉默对照组（P<0.05）,提示成功建立过表达和沉默lncRNA GHET1的MGC-803细胞模型。CCK-8实验结果显示,过表达组细胞增殖速度较过表达对照组快,而沉默组细胞增殖速度较沉默对照组慢。Transwell实验结果显示,过表达...     

过表达N-cadherin基因慢病毒表达载体的构建及稳定细胞株的建立

目的建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞系。方法从含有N-cadherin的质粒中利用PCR技术克隆N-cadherin基因编码序列。制备并浓缩慢病毒颗粒,将构建好的过表达N-cadherin慢病毒载体感染MGC-803细胞,并稳定遗传,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养5代后鉴定细胞内N-cadherin的表达。结果荧光显微镜下过表达N-cadherin组细胞有绿色荧光表达;PCR扩增得到含N-cadherin基因编码序列的特异性条带;重组的过表达N-cadherin载体中,过表达N-cadherin编码序列与目标序列几乎一致;Western blotting结果显示,在分子量为98 k D处有相应条带。结论成功建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞,此研究为进一步探讨N-cadherin基因的功能提供了良好的研究基础。     

RNAi沉默CD14基因对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的以胃癌SGC-7901细胞为研究对象,在细胞水平观察沉默CD14基因对胃癌细胞增殖、凋亡、周期及下游靶因子TNF-α、IL-8的影响,探讨CD14基因在胃癌中的发病地位。方法重组CD14shRNA慢病毒为载体转染胃癌SGC-7901细胞。实验分3组,正常组、慢病毒阴性对照组(NCshRNA)、CD14沉默组(CD14shRNA)。采用荧光显微镜观察转染效率,确定最佳转染时间;Western blotting检测CD14蛋白的沉默效率;MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Real-time PCR技术检测TNF-α、IL-8表达。结果成功转染慢病毒CD14shRNA的SGC-7901人胃腺癌细胞可表达绿色荧光蛋白,测得在病毒MOI=10时,转染72 h后,慢病毒的转染效率最佳。转染后24 h,正常组细胞增殖率为218.18%,阴性对照组为216.27%,CD14shRNA组为211.63%,各组间相比,差异无统计学意义(P0.05);转染后48 h、72 h,正常组细胞增殖率为427.49%、479.22%,阴性对照组为417.84%、473.37%,CD14shRNA组为345.54%、362.64%,经比较,CD14沉默后细胞增殖率下降(P0.05)。CD14shRNA组细胞早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率均高于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。CD14shRNA组细胞G1期42.57%、S期38.65%、G2期13.22%,正常组细胞G1期35.91%、S期52.60%、G2期11.49%,差异有统计学意义(P0.05)。Western blotting结果显示,在转染胃癌细胞后,CD14shRNA慢病毒载体组细胞CD14蛋白表达相对于正常组及阴性对照组明显减少(P0.05);Real-time PCR结果显示,CD14shRNA转染胃癌细胞后,TNF-α、IL-8 mRNA表达较正常组、阴性对照组明显下降。结论 CD14基因沉默后,胃癌细胞增殖能力减弱,细胞周期阻滞在S期,细胞合成减少,凋亡率增加,TNF-α、IL-8表达下降,这说明CD14基因在胃癌细胞增殖、发展过程中占据重要地位。     

RNA干扰沉默Twist基因对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖能力的影响

目的 探讨Twist基因沉默后对人胃癌SGC7901细胞增殖能力的影响.方法 利用脂质体转染法将携带有Twist干扰片段的pGenesil/Twist载体导入人胃癌SGC7901细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR,Western印迹法检测干扰效果.通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期等反映Twist对SGC7901细胞增殖能力的影响.结果 生长曲线结果显示Twist基因沉默组细胞生长速度较两对照组缓慢.细胞周期结果显示Twist基因沉默组S期细胞数明显较对照组减少,增殖能力下降.结论 Twist基因沉默后可抑制SGC7901细胞的分裂增殖,可能成为临床胃癌基因治疗的新靶点.     

树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖及对酪氨酸激酶活性的影响

目的探讨树舌多糖对人胃癌MGC-803细胞增殖、细胞周期分布及其对酪氨酸激酶表皮生长因子受体(EGFR)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)表达的影响。方法 MTT法检测树舌多糖对胃癌细胞MGC-803增殖抑制;流式细胞仪检测树舌多糖作用后MGC-803细胞的周期分布、EGFR及PDGFRβ表达变化;荧光显微镜下观察细胞EGFR、PDGFRβ表达情况。结果树舌多糖对胃癌MGC-803细胞增殖具有抑制作用,并呈时间及剂量依赖性。2mg/ml树舌多糖作用MGC-803细胞2h后,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,与对照组细胞比较有差异(P0.05)。树舌多糖下调MGC-803细胞EGFR、PDGFRβ的表达,与对照组细胞比较有差异(P0.05);荧光显微镜和流式细胞仪检测结果一致。结论树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖,下调酪氨酸激酶EGFR、PDGFRβ表达和阻止胃癌细胞由G1期进入S期,延缓细胞周期进程。     

生存素siRNA表达质粒对MGC-803细胞增殖的影响

目的:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,观察 RNA干扰沉默生存素基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响．方法:用脂质体介导将生存素siRNA表达质粒转染 MGC-803细胞,通过倒置显微镜观察转染后细胞形态学的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期的变化,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测生存素mRNA的表达水平．结果:生存素siRNA表达质粒转染组MGC-803细胞变圆、浮起,生存素siRNA表达质粒明显下调MGC-803 细胞内生存素mRNA的表达,与空白对照组相比降低了48．2％,阻断细胞周期在G1期(77．4％),显著抑制细胞增殖,siRNA转染组细胞吸光度比空白组显著降低 (24 h:0．272±0．048 vs 0．576±0．018;48 h:0．270±0．060 vs 0．809±0．027;72 h:0．143±0．046 vs 1．015±0．075;均 P<0．01)．转染24,48和72 h后的抑制率分别为53．4％, 66．7％和86.3％．结论:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,可有效下调生存素在MGC-803细胞中的表达,并在体外抑制细胞的增殖．     

ZNF217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性和克隆形成能力的影响

目的研究锌指蛋白(ZNF)217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性及克隆形成能力的影响。方法以Real-time PCR和Western印迹检测ZNF217在非小细胞肺癌细胞和正常人肺上皮细胞中的表达变化。短发夹RNA(shRNA)-ZNF217慢病毒干扰载体感染非小细胞肺癌细胞,Real-time PCR和Western印迹检测干扰效果。MTT检测细胞增殖变化,细胞克隆实验检测细胞克隆能力变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,Western印迹检测细胞中p21、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果非小细胞肺癌细胞中ZNF217表达水平明显高于正常人肺上皮细胞(P0.05)。shRNA-ZNF217慢病毒干扰载体可以成功下调非小细胞肺癌细胞中ZNF217的表达水平。沉默ZNF217后的非小细胞肺癌细胞的增殖能力降低,细胞克隆能力也降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率也升高,细胞中p21蛋白水平升高,Cyclin D1蛋白水平下降,Bax蛋白水平也升高。结论 ZNF217在非小细胞肺癌细胞中高表达,沉默其表达可以抑制非小细胞肺癌细胞增殖和克隆形成能力,阻碍细胞G1期向S期进展,诱导细胞凋亡。     

慢病毒介导的CyPA基因沉默对非小细胞肺癌细胞生长的影响

目的 构建特异性沉默CyPA基因的慢病毒颗粒,体外观察其对非小细胞肺癌H1299细胞生长的影响. 方法根据已筛选的特异性沉默CyPA基因靶序列寡核苷酸,合成一对正义反义寡核苷酸DNA,采用基因克隆技术分别插入PGCL-GFP慢病毒载体,以脂质体法将重组PGCL-GFP与病毒包装载体pHelper1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,制备假包装病毒颗粒(Lv-shCyPA)并感染非小细胞肺癌H1299细胞,4 d后采用RT-PCR、Western-blot及MTT分别检测CyPA基因mRNA、蛋白表达水平及H1299细胞增殖状态.结果 构建的LV-shCyPA慢病毒颗粒感染H1299细胞,CyPA mRNA及蛋白表达显著下调,H1299细胞生长明显减缓,与未转染病毒、阴性对照病毒转染的H1299细胞比较有显著差异(P＜0.05).结论 成功构建了沉默CyPA基因慢病毒载体,其产生的假包装病毒颗粒能特异地沉默CyPA基因,抑制H1299细胞增殖,提示CyPA可能在非小细胞肺癌的发生发展中发挥一定的作用.     

siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19转录、表达的影响

目的 研究siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19的影响.方法 利用前期已合成的siRNA-Med19慢病毒载体,感染A549细胞,并以无病毒感染组作为空白对照组,以慢病毒载体感染组作为阴性对照组.采用荧光图片和白光图片对比方法判断细胞的感染率;RT-PCR法检测细胞Med19mRNA的转录水平; Western 印迹法检测细胞Med19蛋白表达水平.结果 慢病毒载体对人肺癌A549细胞的感染率在80%以上,siRNA-Med19慢病毒感染组Med19mRNA转录水平明显降低,敲减效率大于70%,Med19蛋白表达量也明显降低.结论 siRNA-Med19慢病毒载体可以高效感染人肺癌A549细胞,siRNA-Med19对A549细胞Med19的转录和表达具有明显的抑制和消减作用.     

沉默miR-345联合5-FU对胃癌MGC803细胞增殖能力及凋亡的影响

目的 观察沉默miR-345联合5-FU对胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响。方法 采用脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803以沉默miR-345表达。应用40μg/ml 5-FU单独处理胃癌细胞MGC803或联合miR-345沉默组,克隆形成实验观察细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果 脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803可以抑制miR-345的表达;细胞克隆形成实验显示,反义miR-345+5-FU联合组与单独5-FU处理组相比,克隆形成率[(4.29±0.83)%vs(7.68±0.34)%]显著降低(P0.01);流式细胞凋亡检测表明,反义miR-345+5-FU联合组细胞凋亡率显著高于反义miR-345组、5-FU组(P0.01)。结论 沉默miR-345联合5-FU能抑制5-FU对MGC803细胞增殖能力,并促进其凋亡。     

shRNA抑制EZH2基因表达对膀胱癌细胞增殖的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术下调EZH2基因表达对膀胧癌细胞增殖的影响。方法设计、合成EZH2基因小发夹RNA（shRNA）表达载体,用脂质体包裹并转染膀胱癌EJ细胞。RT-PCR和免疫组化法检测基因沉默效果,细胞克隆形成检测细胞生长情况,流式细胞仪测定细胞周期。结果EZH2的shRNA表达载体能有效下调EJ细胞的EZH2基因表达,并显著抑制EJ细胞生长,EJ细胞周期发生G1期阻滞。结论RNAi技术可显著下调EJ细胞的EZH2基因表达,阻止EJ细胞进入S期并抑制其增殖。     

慢病毒携带的短发夹RNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶基因表达的沉默作用

目的通过构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,探讨慢病毒携带的shRNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶(HPA)基因表达的沉默作用。方法采用RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,将构建5对shRNA重组慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western印迹检测HPA-shRNA对MDA-MB-231细胞HPA蛋白表达水平的影响;用CCK-8的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞的生长抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌细胞的杀伤作用,运用transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。进一步,运用流式分析的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞周期的影响。建立小鼠转移瘤模型,检测HPA-shRNA在体内对乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果成功构建HPA-shRNA重组慢病毒载体。在体外,实验组HPA-shRNA1组、HPA-shRNA3组、HPA-shRNA4组有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达,HPA蛋白表达明显降低(P<0.05)。HPA-shRNA1对乳腺癌细胞的生长具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能够增加乳腺癌细胞对5-Fu的敏感性。此外,HPA-shRNA1能够诱导乳腺癌细胞在S期发生细胞周期阻滞。在体内,HPA-shRNA1组HPA基因mRNA相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05),HPA-shRNA1能够沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表达。在体内HPA-shRNA1同样能够抑制乳腺癌细胞生长。结论 HPA-shRNA重组慢病毒载体可有效抑制乳腺癌HPA基因的表达,进而发挥良好的抗肿瘤作用。     

大鼠PAX2基因RNA干扰慢病毒载体的构建及沉默效果

目的构建PAX2特异性shRNA干扰慢病毒载体并观察其对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)中PAX2基因的沉默效果。方法采用PAX2基因RNAi靶点序列合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与pGCSIL-GFP载体连接产生shRNA慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆进行DNA测序鉴定。用脂质体转染法将质粒共转染293T细胞,将包装产生的慢病毒颗粒感染NRK52E细胞,RT-PCR、Western印迹检测PAX2 mRNA和蛋白的表达。结果 PCR与DNA测序证实合成的含PAX2 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。经RNA干扰后的靶细胞PAX2 mRNA及蛋白表达水平明显降低。结论成功构建人PAX2基因RNA干扰慢病毒载体,为以PAX2基因为靶点的梗阻性肾病基因治疗研究奠定了基础。     

口虾蛄提取物对胃低分化黏液腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨口虾蛄提取物体外对人胃低分化黏液腺癌细胞MGC-803增殖的影响及其机制,为其临床应用提供依据。方法采用不同浓度的口虾蛄提取物干预MGC-803细胞。分别于干预后24、48、72 h采用MTT法及流式细胞术测定细胞增殖抑制率及细胞周期。结果口虾蛄提取物作用后细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度及时间依赖性;G1期、G2/M细胞明显减少、S期细胞明显增多（P〈0.01）,呈浓度及时间依赖性。结论口虾蛄提取物可抑制胃癌MGC-803细胞的生长;其作用机制可能为使细胞周期阻滞于S期。     

大蒜素对人胃癌细胞系MGC-803增殖的影响及其作用机制

目的通过大蒜素作用于人胃癌细胞系MGC-803,探讨其对胃癌细胞增殖的影响及机制。方法通过细胞培养技术检测大蒜素作用胃癌细胞后细胞增殖抑制率;免疫组化及RT-PCR法检测胃癌细胞中p16INK4因子表达变化。结果大蒜素作用于MGC-803细胞后,对其增殖表现出了明显的抑制作用,且呈浓度依赖性：大蒜素处理的MCC-803细胞p16蛋白及p16INK4 mRNA表达明显强于未应用大蒜素处理组（P〈0．05）。结论大蒜素可以抑制MGC-803细胞的增殖,其机制之一可能为上调了细胞抑癌基因p16INK4的表达。     

靶向人BRG1基因的慢病毒载体构建及效率验证

目的:构建靶向人BRG1基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体并验证其沉默效率。方法:设计3个针对人BRG1基因的特异性shRNA序列(shBRG1),构建于pLKO.1慢病毒载体中,并与psPAX2和pMD2.G质粒共同转染293T细胞以包装成慢病毒颗粒。将包装好的慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞(HASMC),应用实时荧光定量PCR和western blot检测BRG1 mRNA和蛋白表达水平,判断其沉默效率。结果:3种shBRG1干扰序列均成功插入慢病毒载体中且测序正确,3种慢病毒均可有效降低BRG1 mRNA表达水平(P均0.01)。其中shBRG1-3的沉默效率最高,其感染HASMC后BRG1蛋白表达水平较对照组显著下降(P0.01)。结论:靶向人BRG1基因的shRNA慢病毒表达载体构建成功,shBRG1-3慢病毒能够有效降低BRG1 mRNA和蛋白表达水平。     

MiR-199a/b-3p通过下调PAK4/MEK/ERK通路对胃癌细胞MGC-803的抑制作用

目的观察MiR-199a/b-3p基因对人胃癌细胞株MGC-803增殖的影响。方法利用q PCR法检测胃癌组织和对应的癌旁组织的MiR-199a/b-3p表达水平。转染MiR-199a/b-3p mimics和PAK4si RNA以明确它们对MGC-803增殖的作用。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法分析转染细胞的生物学行为。Western blotting检测相应基因的表达水平。结果同癌旁组织相比,癌组织中MiR-199a/b-3p基因的表达水平显著减少(P0.05)。过表达MiR-199a/b-3p和沉默PAK4都明显抑制MGC-803细胞增殖以及减少p-MEK和p-ERK的活化。此外,过表达MiR-199a/b-3p减少MGC-803细胞的PAK4表达。结论 MiR-199a/b-3p通过下调PAK4/MEK/ERK通路可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖,它可作为一种新的胃癌预后生物标志物和生物治疗靶点。