大鼠心肌细胞内游离钙的Fura-2荧光测定

Fura-2的化学名为2-[6-双乙酸基-5-（2-双乙酸氨基）-5-甲苯氧乙氧基]-2-苯骈呋喃基-5-恶唑羧酸五钾盐。属于第二代荧光指示剂,是测定细胞内游离钙的重要试剂。用Ca^2＋荧光指示剂Fura-2检测活细胞胞浆中[Ca^2＋]i是十几年来兴起的一门技术,已广泛应用于细胞生理、病理的研究,已有文献报道应用于测定细胞、组织块等内的游离钙。     

用Fura-2测量活细胞胞浆游离钙浓度的方法

Ca^2 作为细胞为Ca^2 信使系统的重要组成成分之一，在生理、生化和疾病的发生发展中起着重要作用。正常机体内，细胞内Ca^2 浓度为100-200nmoL／L。进入八十年代以来，由于人们对细胞内Ca^2 研究深入，迫切希望有较为可靠的[Ca^2 ]i的测定方法。     

Fura-2/AM法测定大鼠脑缺血后细胞内游离钙浓度

目的 :观察大鼠全脑缺血后 3d时的脑细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)水平 ,介绍用Fura - 2 /AM法测定 [Ca2 + ]i的具体测定方法 ,探讨脑缺血后脑细胞内游离钙浓度变化的可能机制 .方法 :2 0只Wistar大鼠随机分成对照组和实验组 ,采用流行的传统四血管阻断法加以修改改良制作大鼠脑缺血动物模型 ,取假手术动物作对照组 ,用新型Ca2 + 荧光指示剂Fura - 2测定全脑缺血后 3d时的脑细胞内游离钙浓度 .结果 :对照组 [Ca2 + ]i为 (2 6 2 83± 90 12 )nmol/L ,实验组 [Ca2 + ]i为 (371 39± 89 0 0 )nmol/L ;用t -检验进行统计学分析 ,P =0 0 143<0 0 5 ,两者差异具有显著性 .结论 :大鼠全脑缺血后 3d时的脑细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)水平明显增高     

用Fura-2测定单个巨噬细胞内游离钙的条件的优化

Fura-2负载后用荧光显微镜成像系统研究单细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)应用已十分广泛,娄淑杰等[1]用此方法检测了PC12细胞内的[Ca2+]i,我们将娄淑杰等的方法应用于腹腔巨噬细胞(PEM),发现不尽理想,因此我们实验过程中对Fura-2的浓度进行了调整,另外PEM作为参与炎症的非兴奋细胞,其活化对[Ca2+]i有很大的影响,而细胞贴壁很可能导致活化,但测定方法又要求只能在贴壁细胞进行.因此,我们使用鼠尾胶缩短贴壁时间,并把检测用的PEM的贴壁时间控制在一定范围之内,取得了比较理想的结果.     

用Fura-2双波长荧光法测定小鼠海马细胞内游离钙

目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)的测定.方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2 荧光指示剂Fura-2双波长荧光法测定[Ca2 ]i.结果:海马细胞存活率超过95%.细胞外Ca2 1.0 mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca2 ]i为(210±10.7)nmol/L.30 mmol/L KCl可显著增加[Ca2 ]i,并且KCl的这种效应呈一定的剂量依赖关系.结论:低浓度胰蛋白酶消化分离小鼠海马细胞简单、可靠;Fura-2建立的双波长荧光法灵敏、可靠.     

应用Fura-2测定血小板内游离钙浓度

应用国产荧光指示剂Fura-2测定20名原发性高血压病人血小板内游离钙水平,结果血小板在静息状态下细胞内游离钙浓度为119.8±27.4nmol/L,批内变异为10.37％,批间变异为12.43％。     

Fura-2/AM荧光探针法用于大肠杆菌胞内游离钙的测定

目的探讨经超声处理后大肠杆菌胞内游离钙的变化。方法超声波作用影响大肠杆菌,用Fura-2/AM探针法测定胞内游离钙的变化。结果经超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高,打开了钙依赖性的离子通道,膜两侧离子交流加速,膜通透性增加。结论Fura-2/AM荧光探针法可用于微生物大肠杆菌胞内游离钙的测定。经一定条件下超声作用后的大肠杆菌胞内游离钙水平升高。     

用Fura-2/AM测定益康唑诱导鼠白血病WEHI-3细胞凋亡后细胞质游离钙浓度

目的　通过体外实验 ,研究益康唑 (Econazole)是否可触发鼠白血病细胞株WEHI 3细胞胞质 [Ca2 ]i浓度的改变。方法　用Ca2 荧光探针 (Fura 2 /AM )负载WEHI 3细胞后测定Econazole作用WEHI 3细胞 12、 18、2 4h的胞内 [Ca2 ]i浓度。结果　Econazole作用WEHI 3细胞 12、 18、 2 4h后的胞内 [Ca2 ]i均高于对照组(80 6± 15 3)nmol/L ,分别为 (131 2± 11 2 ) ,(15 6 5± 2 0 1) ,(182 1± 13 6 )nmol/L。结论　提示Econazole作用WEHI 3细胞可增加细胞质内 [Ca2 ]i浓度。     

用原位杂交技术检测血单个核细胞白细胞介素2mRNA

用地高辛素（ＤＩＧ）标记人白细胞介素２（ＩＬ－２）ｍＲＮＡ的ｃＤＮＡ探针，在外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）涂片上进行原位杂交，并用鼠抗人ＩＬ－２单克隆抗体检测ＩＬ－２分泌细胞。结果显示，终末期肾衰（ＥＳＲＤ）接受血液透析（ＨＤ）治疗患者的ＩＬ－２ｍＲＮＡ及ＩＬ－２阳性单个核细胞数与正常对照组、原发性肾小球疾病（简称肾病）组和ＥＳＲＤ未接受透析治疗组相似，但是，ＨＤ后ＩＬ－２基因表达显著增加（Ｐ＜０．０５）。     

用Fura-2双波长荧光法测定低剂量电离辐射对小鼠脾细胞游离钙的影响

目的：探讨低剂量电离辐射免疫增强效应的机理。方法：采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ 双波长荧光测定法研究了低剂量电离辐射全身照射后小鼠脾Ｔ淋巴细胞内游离钙离子浓度（〔Ｃａ２＋ 〕ｉ）对次佳浓度Ｃｏｎ Ａ（５ ｍ ｇ／Ｌ）反应性的变化。结果：静息状态下的小鼠脾淋巴细胞内游离钙离子浓度为９５．０±１４．０ ｎｍ ｏｌ／Ｌ,ＣｏｎＡ 可使小鼠脾Ｔ淋巴细胞内游离钙离子浓度增加６９．４±７．６ ｎｍ ｏｌ／Ｌ,上升至峰值时间为７９．２ ｓ。７５、１００ 和２００ ｍ Ｇｙ 全身照射后２４ ｈ,Ｃｏｎ Ａ 诱导的小鼠脾Ｔ淋巴细胞内游离钙离子动员明显高于假照射组（Ｐ＜ ０．０１）。结论：低剂量电离辐射的免疫兴奋效应与其增强淋巴细胞内〔Ｃａ２＋ 〕ｉ动员等信息传递过程有关     

应用Fura-2/AM作血小板胞浆游离钙浓度检测的方法学探讨

本文对应用荧光染料Fura－2／AM（国产）测定血小板胞浆游离钙浓度的某些实验条件进行了探讨，结果表明；实验最适pH范围为7．35－7．45。实验不受溶血、黄疸及高酯血样品的干扰。批内C．V；4．98％，批间CV：5．6％。正常成人参考值为167．75±20．66nmol／L。与使用进口Fura－2／AM（Sigrna公司生产）检测结果比较，结果无统计学差异，相关系数：r－0．98。     

钙指示剂Fura－2／AM对血小板功能及细胞内游离钙测定结果的影响

本实验结果表明，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载家兔洗脱血小板，当Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的浓度低于２μｍｏｌ／Ｌ时，３μｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ花生四稀酸（ＡＡ）诱导的血小板聚集（透光度增加：７２．５±７．８４％）及释放反应（ＡＴＰ释放：１．１２±０．２１μｍｏｌ／４×１０５血小板）不受影响，但随Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度增加，ＡＡ的聚集和释放反应明显减弱（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度对单一血小板内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）的静息水平无影响，但Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为２μｍｏｌ／Ｌ时，ＡＡ诱导的［Ｃａ２＋］ｉ动员最明显。另外，标本中血小板的数量也明显影响［Ｃａ２＋］ｉ的测定结果（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。提示，Ｆｕｒａ－２／ＡＭ浓度过高，很可能导致过多的钙离子被螯合，降低了血小板的功能，同时，细胞内游离钙与Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的结合过程存在着饱和性。     

KCl和Iso对培养乳鼠单个心肌细胞游离钙浓度影响的研究

目的　测定培养大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i) ,观察KCl、异丙肾上腺素 (Iso)对心肌细胞 [Ca2 + ]i的影响 ,初步探讨其作用机制。方法　采用Fura - 2作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的心肌细胞 ,结合阳离子测定系统检测心肌细胞 [Ca2 + ]i。结果　静息时 ,心肌细胞 [Ca2 + ]i为 83 3±11 6 7nmol/L ,30mmol/L、 5 0mmol/L、 70mmol/LKCl使心肌细胞 [Ca2 + ]i升高 ,且呈剂量依赖性 ;同时10 μmol/L异丙肾上腺素使心肌细胞 [Ca2 + ]i升高。结论　Fura - 2 /AM结合阳离子测定系统可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度 ,KCl、异丙肾上腺素升高心肌细胞 [Ca2 + ]i的作用机制不同。     

蛋白酶激活受体-2介导A549细胞胞浆游离钙的释放

目的：研究蛋白酶激活受体(PAR)-2激动剂(SLIGKV和tc-LIGRLO)、胰蛋白酶及其抑制剂(SBTI、α1-AT)对A549肺上皮细胞胞浆内钙离子浓度([Ca^2 ]i)的影响。方法：用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜检测不同因素处理的A549肺上皮细胞[Ca^2 ]i。结果：胰蛋白酶、SLIGKV、tc-LIGRIO均能引发A549肺上皮细胞[Ca^2 ]i的增加，平均荧光强度分别比加入试剂前增加92％，47％和130％。SBTI和α1-AT可抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca^2 ]i的增加。结论：PAR-2可介导A549肺上皮细胞[Ca^2 ]i的释放增加，SBTI和α1-AT可抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca^2 ]i的增加。     

骨髓单个核细胞移植治疗2型糖尿病小鼠急性心肌梗死的研究

目的 研究骨髓单个核细胞(BMMNCs)对T2DM小鼠心肌梗死的疗效.方法 小鼠分为4组:正常小鼠注射盐水组(NS组),正常小鼠注射细胞组(NM组),糖尿病小鼠注射盐水组(TM组),糖尿病小鼠注射细胞组(TS组).取材后通过HE、Masson's、vWF、Isolectin、WGA免疫染色观察疗效.结果 正常组和糖尿病组细胞移植后VEGF表达水平相当,差异无统计学意义(P＞0.05);细胞组梗死面积较盐水组小,胶原面积较盐水组的少,血管密度较盐水组大,心肌细胞肥大较盐水组轻,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 骨髓单个核细胞对心肌损伤组织的修复、梗死边缘区细胞的肥大增生、血管新生方面有明显的改善作用.     

脐血单个核细胞体外扩增的实验研究

目的 :采用集落刺激因子体外扩增脐血单个核细胞 (CBMC) ,研究集落刺激因子对CBMC增殖活性的影响。方法 :用RPMI1 640培养液加入集落刺激因子IL - 3、SCF、GM -CSF及其组合 ,体外扩增CBMC ,健康成人外周血单个核细胞 (PBMC)作为对照组。结果 :加入不同集落刺激因子体外培养CBMC与PBMC后 ,增殖活性均有不同程度的升高 ,以加入IL - 3、SCF、GM -CSF组最为显著 ;CBMC的增殖活性与PBMC比较有显著性差异 (P<0 .0 5)。结论 :集落刺激因子可在体外扩增CBMC ,IL - 3、SCF、GM -CSF之间有明显的协同作用 ;与PBMC相比 ,CBMC有更高的增殖潜能