ICAM-1-GFP的构建及其与Molt-4细胞的结合

本研究构建人细胞间黏附分子1（ICAM-1）全长基因的真核表达载体pEGFP—CI—ICAM—1,转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO—K1）细胞株,并检测其在cH0细胞中的表达及与Molt-4细胞的结合。采用RT—PCR法从健康人外周血中分离单个核细胞,钓取ICAM-1全长基因（1622bp）,与pMD18-T载体连接做全自动序列测定。将测序正确的克隆质粒pMD18-T—ICAM-1和表达载体pEGFP—C1分别用HindⅢ和Ⅰ进行双酶切,应用基因重组技术构建ICAM-1全长基因真核表达载体pEGFP—C1-ICAM-1,质粒经Hindm和SacⅡ双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染CHO细胞,并进行G418筛选。用RT—PCR、流式细胞术和荧光显微术检测ICAM-1-GFP的表达及亚细胞的定位,用检测ICAM-1-GFP／CHO细胞与Molt-4细胞的结合能力评价ICAM．1-GFP融合蛋白的功能。结果表明：重组质粒经限制性酶切鉴定得到与ICAM—1全长基因长度-致（1622bp）的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的ICAM-1基因（NM-000201）序列完全-致,表明成功地完成了ICAM-1的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的CHO细胞有绿色荧光蛋白的表达,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞：FACS检测ICAM．1-GFP的荧光转染率为（13±5．5）％,表明ICAM—1—GFP基因进入到CHO细胞并获得了有效表达,成功构建了ICAM-1-GFP／CHO细胞,并且ICAM-1-GFP／CHO细胞能够结合PMA处理的Molt-4细胞。结论：成功构建了ICAM-1-GFP真核表达载体,构建的ICAM—1—GFP真核表达载体在CHO细胞内稳定表达,／CAM—1—GFP／CHO细胞能与M0lt-4细胞结合,这为进-步研究ICAM-1分子的功能打下基础。     

共转染EGFP和hMnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力的影响

目的：人正义、反义MnSOD基因和EGFP共转染恒河猴骨髓源神经干细胞，观察MnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力和报告基因表达的影响。方法：应用NucleofectorTM核转染仪将人正义、反义MnSOD基因和荧光真核表达载体共转染体外培养的恒河猴骨髓源神经干细胞，荧光显微镜下观察荧光蛋白在细胞内的表达，并检测转染细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果：①转染24h后，共转染细胞可见荧光蛋白在骨髓源神经干细胞内有效表达，荧光显微镜下发强绿色荧光，其转染率约为80％。②转染人正义MnSOD基因的细胞的总SOD活性[(8．03&;#177;0.74)NU／mg]与转染人反义MnSOD基因细胞的总SOD活性[7．19&;#177;0．86)NU／mg]差异无显著性意义，但MnSOD活性前者明显高于后者1．89倍。结论：MnSOD基因与EGFP基因共转染骨髓源神经干细胞，均有效表达，提高了细胞内MnSOD活性，为多基因联合治疗帕金森病提供了可行的技术平台。     

氦—氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制

目的：探讨氦－氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制。方法：将培养瘢痕成纤维细胞随机分为转染组，转染对照组和非转染,志染组细胞与绿色荧光蛋白（GFP）质粒cDNA，含目的基因片段的表达载体质粒pcDNA3-FADD-DNcDNA共转,志染对照组细胞与GFP质粒cDNA，空载体质粒pcDNA3共转染，非转染组细胞没有进行转染，转染后24h分别对各组细胞进行氦－氖激光照射（100mW/cm^2照射30min)，1次／d，连续照射3d，然而采用TUNEL技术检测细胞凋亡，结果：转染组，转染对照组与非转染组细胞亡率分别为9．27％，15．73％和12．87％，转染组细胞凋亡率明显小于转染对照组（q=4.55,P&;lt;0.01)和非转染组（q＝4.14,P&;lt;0.05)。结论：FADD－DN基因转染能减少氦－氖激光诱导的瘢痕的瘢瘢痕成纤维细胞凋亡，Fas相关死亡域蛋白（FADD）可能是 －激光激活死亡信号途径的基本元件之一。     

共转染EGFP和hMnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力的影响

目的:人正义、反义MnSOD基因和EGFP共转染恒河猴骨髓源神经干细胞,观察MnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力和报告基因表达的影响。方法:应用NucleofectorTM核转染仪将人正义、反义MnSOD基因和荧光真核表达载体共转染体外培养的恒河猴骨髓源神经干细胞,荧光显微镜下观察荧光蛋白在细胞内的表达,并检测转染细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:①转染24h后,共转染细胞可见荧光蛋白在骨髓源神经干细胞内有效表达,荧光显微镜下发强绿色荧光,其转染率约为80%。②转染人正义MnSOD基因的细胞的总SOD活性犤(8.03±0.74)NU/mg犦与转染人反义MnSOD基因细胞的总SOD活性犤7.19±0.86)NU/mg犦差异无显著性意义,但MnSOD活性前者明显高于后者1.89倍。结论:MnSOD基因与EGFP基因共转染骨髓源神经干细胞,均有效表达,提高了细胞内MnSOD活性,为多基因联合治疗帕金森病提供了可行的技术平台。     

FADD—DN基因转染对氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的影响

目的 探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制。方法 将培养瘢痕成纤维细胞随机分为转染组、转染对照组和非转染组，转染组细胞与绿色荧光蛋白（GFP）质粒cDNA、含目的基因片段的表达载体质粒pcDNA3-FADD-DNcDNA共转染，转染对照组细胞与GFP质粒cD-NA、空载体质粒pcDNA3共转染，非转染组细胞没有进行转染，转染后24h分别对各组细胞进行氦氖激光照射（100mW/cm^2照射30min），1次/d，连续照射3d，然后采用TUNEL技术检测细胞凋亡。结果 转染组、转染对照组与非转染组细胞凋亡率分别为9.27%，15.73%和12.87%，转染组细胞凋亡率明显小于转染对照组（q=4.55,P&;lt;0.01）和非转染组（q=4.14,P&;lt;0.05）。结论 FADD-DN基因转染能减少氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡，FADD可能是氦氖激光激活死亡信号途径的基本元件之一。     

Notch分子与其配体在32D细胞分化过程中的作用

目的 探讨Notch信号传导系统的作用机制及其对造血系统的影响。方法 将报告基因TP1瞬时转染Notch－CHO和Notch2－CHO细胞后，分别加入转染有不同Notch配体Deltal,Delta4,Jagged1,Jagged2的CHO细胞及正常未转染的CHO细胞，使Notch分子与其配体充分结合并发挥作用，加入发光底物PGL－100，用Lumat测定发光情况。将Notch1－32D细胞加入含G－CSF培养液的CHO，Jagged2-CHO及Delta4-CHO细胞中，观察Notch1－32D细胞分化及分化抑制情况。结果 5种Notch配体与Notch1结合后均能引起荧光素酶活性增高，Jagged2-CHO,Delta4-CHO1-4,Delta4-CHO1-5尤为明显。对Notch2来讲，5种配体均可引起TP1活性的增高。在G－CSF存在下，Notch1－32D细胞可分化为成熟的粒细胞；通过分化抑制实验发现Jagged2能抑制G－CSF引起的Notch1－32D细胞分化，但Delta4不能抑制GCSF引起的Notch1－32D细胞分化。Jadded2,Delta4为Notch1分子的配体，Delta4不能抑制G－CSF引起的Notch1－32D细胞分化，但Jagged2能抑制G－CSF引起的Notch1－32D细胞分化。     

重组人肿瘤坏死因子α分泌型真核表达载体的构建及表达

目的构建人肿瘤坏死因子rhTNF—α分泌型真核表达载体,并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以pGEM—T／sig—tumstatin为模板,扩增与TNF带重叠区的Ⅳ型胶原信号肽sig基因片段,以PBV220-TNF为模板,扩增与sig带重叠区的TNF基因片段,以上述2个扩增产物片段为模板,重叠区扩增拼接法（SOEing）扩增得到sig—TNF。sig—TNF片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定,对获得的sig—TNF基因片段及重组载体进行验证。将重组sig—TNF真核表达载体转染到CHO—K1,并对其表达状况进行检测。结果所获得的sig—TNF片段（558bp）序列与报道的序列完全一致,酶切鉴定结果表明含人肿瘤坏死因子的重组pIRESneo3／sig-TNF表达载体构建成功,转染重组pIRESneo3／sig—TNF的CHO—K1分泌表达了人肿瘤坏死因子rhTNF—α。转染了pIRESneo3／sig—TNF真核表达载体和空载体的CHO—K1和未转染CHO—K1细胞的生长速度没有差别。结论成功构建了重组人肿瘤坏死因子rhTNF—α分泌型真核表达载体,并获得能稳定表达rhTNF—α的CHO—K1,为开展下一步的实验奠定了基础。     

白细胞介素2基因和白细胞介素3基因共转染白血病瘤苗的抗白血病作用的实验研究

目的：研究白细胞介素２（ＩＬ－２）和白细胞介素３（ＩＬ－３）基因共转染的白血病细胞瘤苗对白血病小鼠的治疗效果。方法：用ＩＬ－２重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－２）和（或）ＩＬ－３重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－３）转染红白血病细胞株ＦＢＬ－３，６０Ｃｏ照射后制备成瘤苗对实验性白血病小鼠进行治疗，观察肿瘤生长，小鼠生存期及治疗后小鼠腹腔巨噬细胞、ＮＫ细胞、诱导杀伤性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤活性，并与低剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）合用，观察其抗肿瘤作用。结果：用ＩＬ－２或ＩＬ－３基因转染瘤苗治疗的白血病小鼠肿瘤生长明显减缓，生存期显著延长（Ｐ＜０．０５），用联合转染ＩＬ－２和ＩＬ－３基因的瘤苗治疗较单独转染ＩＬ－２或ＩＬ－３基因的瘤苗治疗效果更佳，与低剂量ＣＴＸ合用后抗肿瘤效果最佳。治疗后小鼠腹腔巨噬细胞、ＮＫ细胞、ＣＴＬ细胞杀伤活性显著增强。结论：ＩＬ－２、ＩＬ－３基因转染的瘤苗能够有效地通过诱导机体抗肿瘤免疫功能而发挥抗肿瘤作用，与低剂量ＣＴＸ合用后，抗肿瘤效果更佳。     

人GM—CSF基因转染小鼠肝癌细胞及其致瘤性研究

为建立以腺病毒为载体的ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗，并研究其体内抗肿瘤作用，应用携带有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组腺病毒（Ｒ－Ａｄ５）载体转染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠肝癌细胞株（Ｈ２２），体外应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ法），检测ＧＭ－ＣＳＦ表达水平，以ＧＭ－ＣＳＦ基因转染的Ｈ２２细胞进行致瘤性研究。结果：（１）重组腺病毒载体能成功地介导ＧＭ－ＣＳＦ基因转染Ｈ２２细胞并能持续有效表达２６￣３１天，瘤苗的辐照处     

IL—6基因转染的白血病细胞不同条件下小鼠体内外分泌IL—6水…

为了解白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的高分泌ＩＬ－６的ＦＢＬ－３红白血病细胞（ＦＢＬ－３－ＩＬ－６）株体内外的生物学特性，动态观察在不同剂量＾６０Ｃｏγ射凰其ＩＬ－６的分泌水平，同时动态观察经腹腔、局部皮下注射途径将其移植入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内后，血清和局部细胞培养上清液中ＩＬ－６含量。结果表明，ＦＢＬ－３－ＩＬ－６细胞以８Ｇｙ照射剂量为制备瘤苗的最佳照射剂量。照射后２周内一直保护较高水平的Ｉ     

表达血小板膜糖蛋白GPIb—IX复合物的中国仓鼠卵巢细胞株研究模型的建立

本研究旨在建立表达重组野生型和突变型血小板膜糖蛋白GPIb—IX复合物的中国仓鼠卵巢（Chinese Hamster Ovary,CHO）细胞研究模型,为进行GPIb-Ⅸ生理功能的相关研究奠定基础。从表达野生型或缺失突变型GPIbα的大肠杆菌宿主茵中抽提质粒并用EcoRI酶切鉴定,然后将分别表达GP／bα、GPIbβ和GP／X3种基因的质粒共转染到中国仓鼠卵巢细胞中,通过免疫共沉淀、Western blot和流式细胞仪检测其表达效果。结果表明,转染48小时后,CHO细胞裂解物和细胞表面均可检测到GPIb-Ⅸ复合物的表达。结论：成功构建了表达血小板膜糖蛋白GPIb—IX复合物的CHO细胞研究模型。     

IL-6基因转染的白血病细胞不同条件下小鼠体内外分泌IL-6水平的研究

为了解白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的高分泌ＩＬ－６的ＦＢＬ－３红白血病细胞（ＦＢＬ－３－ＩＬ－６＋）株体内外的生物学特性，动态观察在不同剂量６０Ｃｏγ射线照射后其ＩＬ－６的分泌水平，同时动态观察经腹腔、局部皮下注射途径将其移植入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内后，血清和局部细胞培养上清液中ＩＬ－６含量。结果表明，ＦＢＬ－３－ＩＬ－６＋细胞以８Ｇｙ照射剂量为制备瘤苗的最佳照射剂量，照射后２周内一直保持较高水平的ＩＬ－６分泌量。体内移植时，经腹腔途径注入后可测得一定浓度的血清ＩＬ－６，皮下注入时注射局部细胞培养上清中亦有一定水平的ＩＬ－６。为将该细胞作为治疗白血病瘤苗及其注射间隔时间提供了实验依据。     

外源过氧化氢酶基因在晶体上皮细胞中的表达及其抗氧化能力

目的：构建外源过氧化氢酶基因表达载体并使其在晶体上皮细胞中稳定表达，从而提高晶体上皮细胞的抗氧化能力减少白内障的发生。方法：克隆过氧化氢酶基因，测序确定。构建过氧化氢酶基因pIRESneo3表达载体。利用转染的方法将过氧化氢酶基因导入晶体上皮细胞SRAO1／04中，筛选稳定表达克隆。以SRAO1／04细胞和稳定转染过氧化氢酶基因的SRAO1／04细胞为研究对象，使用过氧化氢为处理因素，MTT方法测定过氧化氢对晶体上皮细胞的半数致死量。结果：经上述方法处理后，获得过氧化氢酶高表达晶体上皮细胞SRAO1／04-CAT，其过氧化氢酶的表达水平是SRAO1／04细胞的3．5倍。过氧化氢对SRAO1／04细胞的IC50是32．24μmol／L，对SRAO1／04-CAT的IC50是85．32μmol／L，转染过氧化氢酶基因后SRAO1／04细胞对过氧化氢的耐受能力提高2．65倍。结论：外源过氧化氢酶基因能够在晶体上皮细胞中稳定表达并使晶体上皮细胞的抗氧化能力提高。     

在HeLa细胞中表达人βIVS-Ⅱ-nt 654C→T突变基因

目的：建立一个能表达人βＩＶＳ－Ⅱ－ｎｔ６５４Ｃ→Ｔ突变基因（β６５４基因）的ＨｅＬａ细胞模型。方法：应用长片段多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术从一例β６５４突变基因纯合子的基因组ＤＮＡ中扩增出β６５４基因全长片段，重组进ｐｃＤＮＡ３．１真核表达载体质粒中。经ＤＮＡ测序证明序列中确实含有β６５４突变后，将重组表达质粒用脂质体方法转化ＨｅＬａ细胞，用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测β６５４突变基因在转染细胞中表达的ｍＲＮＡ。结果：该重组表达质粒能在ＨｅＬａ细胞中转录β６５４突变基因，并剪接成正常和异常两种ｍＲＮＡ（对应于１８３ｂｐ和２５６ｂｐ两种ＲＴ－ＰＣＲ产物），而对照组无扩增条带出现。结论：重组表达质粒转化的ＨｅＬａ细胞能表达β６５４基因。     

共聚物在超声介导基因转染中的新功能

目的探讨超声和共聚物在促进基因转染中是否有协同作用.方法应用3种水溶性不同的共聚物F127,L61和P85.超声参数设定为1 MHz,1～3 W/cm^2,脉冲作功周期为20%.选用C2C12,3T3-MDEI,和CHO 3种细胞系为研究对象.质粒DNA为可产生绿色荧光蛋白的GFP.应用荧光显微镜和流式细胞仪（FACS）评价转染率,台盼蓝染色评价细胞的成活率.每一实验结果至少重复3次以上.结果与以前的研究结果相同,超声可介导基因转染,但随着超声能量的增加,细胞的破坏也增加;单独应用3种共聚物未观察到基因转染.但当与超声同时应用,在较低浓度时共聚物可使超声介导的基因转染率提高2～4倍.结论在较低浓度时,共聚物可显著提高超声介导的基因转染作用.     

人GM-CSF基因转染小鼠肝癌细胞及其致瘤性研究

为建立以腺病毒为载体的GM－CSF基因转染瘤苗，并研究其体内抗肿瘤作用，应用携带有人GM－CSF基因的重组腺病毒（R－Ad5）载体转染BALB／c小鼠肝癌细胞株（H22），体外应用酶联免疫吸附试验（ELISA法）．检测GM－CSF表达水平，以GM—CSF基因转染的H22细胞进行致癌性研究。结果：（1）重组腺病毒载体能成功地介导GM－CSF基因转染H22细胞并能持续有效表达26～31天，瘤苗的辐照处理并不明显影响GM－CSF表达水平。（2）GM－CSF基因转染瘤苗体内致癌性显著降低。该结果揭示了应用GM－CSF基因转来瘤苗进行肿瘤基因治疗的可行性，为进一步研究肿瘤的GM－CSF基因治疗提供了依据．     

在不同细胞系中共聚物对超声介导基因转染的影响

目的 探讨超声和共聚物在不同细胞系中对基因转染的协同作用.方法 应用三种水溶性不同的共聚物F127,L61和P85;超声频率为1 MHz,脉冲重复频率100 Hz,占空系数为20%,用1 w/cm2声强照射20 s.选用C2C12,3T3-MDEI,CHO和H2K四种细胞系为研究对象.质粒DNA为可产生绿色荧光蛋白的GFP.应用荧光显微镜和流式细胞仪评价转染率,台盼蓝染色评价细胞的成活率.结果 超声可介导所有四种细胞系的基因转染.在C2C12,3T3-MDEI和CHO细胞系,共聚物可显著促进超声介导的基因转染效率(P＜0.01),对H2K细胞系共聚物不但不能促进超声介导的基因转染、,其中疏水性共聚物P85和L61反而使超声介导的基因转染效率降低(P＜0.05).结论 共聚物对不同细胞系超声介导的基因转染效率产生不同的影响,这种差异可能与细胞膜蛋白缺陷有关.     

超声微泡介导野生型p53基因转染Y79细胞的实验研究

目的研究超声微泡介导wtp53（wild type p53）基因转染视网膜母细胞瘤（Y79）细胞的效率及作用效果。方法以一定能量的超声介导wtp53转染Y79细胞,分为（1）质粒＋微泡＋超声照射组;（2）质粒＋脂质体组;（3）质粒＋超声照射组;（4）空白对照组。RT-PCR检测wtp53mRNA,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果超声微泡介导的wtp53基因对Y79细胞的转染效率明显高于其他实验组,检测到的细胞凋亡率也明显高于其他组。结论超声微泡可达到高效的基因转染目的,wtp53对Y79细胞有明显抑制生长的作用。     

小鼠胚胎干细胞NT3基因转染后移植对脊髓损伤的恢复作用

目的:由胚胎干细胞分化的神经细胞移植能够在一定程度上恢复脊髓损伤模型动物的功能,此发现使胚胎干细胞成为一种用于移植学研究的重要工具.观察经NT3基因转染修饰的小鼠MESPU35(ES-NT3)胚胎干细胞株移植对脊髓损伤动物脊髓结构和功能重建的恢复效果.方法:实验于2004-09/12在解放军第三军医大学组织胚胎学教研室实验室完成.①材料:清洁级成年Wistar大鼠36只,随机数字表法分为模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组,12只,组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.移植所用MESPU35细胞株和ES-NT3细胞株均由本室冻存.②实验方法:复苏MESPU35和ES-NT3细胞株,采用经典维甲酸4-/4 法诱导两种胚胎干细胞神经定向分化,收集分化9 d后的细胞,调整细胞终浓度至5×1010L-1备用.各组大鼠均建立L4脊髓损伤模型,在脊髓完全横断后10 min内,基因转染细胞移植组分多点缓慢注入ES-NT3胚胎干细胞悬液,2μ L/点,细胞总数约4×105个,注射位置为损伤区域白质与灰质交界处;未转染细胞移植组同法注射MESPU35胚胎干细胞悬液,模型对照组注射等量生理盐水.③实验评估:各组大鼠分别于术前、术后即刻、术后15 d和30 d进行后肢运动功能Tarlov评分检测,分数越低表示运动功能恢复越差.后肢运动功能检测30 min后进行斜板实验,检测大鼠抓握和维持姿势能力.微型注射器将25%的辣根过氧化物酶2μL注入大鼠坐骨神经内,2d后取L1-L4脊髓常规冰冻切片,参照Mesulam法进行过氧化物酶逆行追踪.结果:因细菌感染,模型对照组、未转染细胞移植组、基因转染细胞移植组各死亡2只、1只、2只.①后肢运动功能检测:各组大鼠术后即刻后肢运动功能评分为0.术后15 d,30d与模型对照组比较,未转染细胞移植组后肢运动功能评分升高(P＜0.01),但未达到正常水平;基因转染细胞移植组恢复程度最高,后肢运动功能评分基本接近正常水平,明显高于未转染细胞移植组(P＜0.05).②斜板试验:与后肢运动功能检测结果基本相似.③辣根过氧化物酶逆行追踪情况:模型对照组未见阳性神经元.术后30 d基因转染细胞移植组阳性神经元增至最多,脊髓结构恢复情况优于未转染细胞移植组.结论:经NT3基因转染修饰的鼠MESPU35胚胎干细胞向神经定向诱导分化后,移植治疗脊髓损伤大鼠能更好地促进脊髓功能恢复和结构重建.     

绿色荧光蛋白(GFP)融合于人整合蛋白αⅡb C端不影响αⅡbβ3复合物在CHO细胞正常表达

本研究选择αⅡb作为靶蛋白观察绿色荧光蛋白(GFP)标记对αⅡbβ3复合物生物合成过程和表达的影响。从人αⅡb表达载体p3．1—2b中经PCR扩增的αⅡb基因全长cDNA，插入表达载体pEGFP—N1中构建αⅡbGFP融合蛋白表达载体，测序正确后利用脂质体将重组质粒与表达人整合蛋白B，亚基的真核表达质粒p3．1—3a共转染CHO细胞，对转染后细胞用Western blot方法鉴定αⅡbGFP基因在CHO细胞中的表达并用激光共聚焦显微镜确定融合蛋白的细胞内定位，结果表明：经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒，Western blot证明转基因CHO细胞有人αⅡbGFP基因的表达，融合蛋白细胞内定位研究显示αⅡbGFP可以由内质网转运至高尔基体．．结论：成功构建了人αⅡbGFP融合蛋白真核表达载体；GFP融合于αⅡbC端不影响αⅡbβ3复合物在CHO细胞的正常表达。