塞来昔布协同顺铂P13K/Akt途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 塞来昔布(50 μmol/L或100 μmol/L)和(或)顺铂(10 μg/ml)作用骨肉瘤MG-63细胞48 h后,MTT法测定细胞增殖的抑制率,电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测基因水平COX-2表达变化,Western blot检测COX-2及凋亡相关蛋白表达变化.P13K抑制剂Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测蛋白表达变化.结果 塞来昔布导致MG-63细胞阻滞在G1期,通过激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9的内源性凋亡途径诱导细胞凋亡;顺铂单药作用后骨肉瘤MG-63细胞凋亡率为5.93%,而联合应用塞来昔布50μmol/L或100 μmol/L后,凋亡率分别为6.66%和37.15%,与顺铂联合具有明显的协同作用;COX-2蛋白表达未降低.塞来昔布联合顺铂明显降低P13K/Akt、survivin、Bcl-2的表达,检测到caspase-9、caspase-3的激活和PARP裂解片段.Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测到pAkt(Thr308)、Bcl-2、survivin表达下调.结论 塞来昔布可通过非COX-2途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,与P13K/Akt、survivin、Bcl-2蛋白相关,并且PI3K/Akt途径在survivin、Bcl-2表达调控中发挥重要作用.这可能是塞来昔布药物干预的中心环节.     

塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞凋亡与Fas/FasL表达的影响

目的 观察选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其机制.方法 用吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、流式细胞仪(FCM)技术观察不同浓度的塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,用流式细胞仪技术榆测Fas和FasL.蛋白表达.结果 荧光染色法显示塞来昔布在15～120 μmol/L时诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,且呈浓度和时间依赖性.FCM显示不同浓度的塞来昔布作用SGC-7901细胞48 h后.凋亡率分别为8.02%～50.81%,呈浓度依赖性.塞来昔布上凋胃癌SGC-7901细胞Fas蛋白的表达,下调FasL蛋白的表达.结论 塞来昔布可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡;Fas/FasL表达的改变可能是塞来昔布诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制之一.     

塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞NHE1表达及细胞内pH的影响

目的探讨选择性COX-2抑制剂塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞钠氢交换体1(NHE1)表达及细胞内pH的影响。方法以SGC-7901人胃癌细胞为研究对象,不同浓度的塞来昔布(5、12.5、25、50、75和100μmol/L)作用于SGC-7901细胞不同时间后,采用MTT法检测塞来昔布对胃癌细胞生长的抑制作用;采用Western blot技术检测不同浓度塞来昔布对SGC-7901细胞NHE1表达的影响;在此基础上,采用BCECF-AM免疫荧光测定不同浓度塞来昔布对SGC-7901细胞内pH的影响。结果塞来昔布能抑制SGC-7901细胞的生长,在一定范围内,其抑制作用随着塞来昔布浓度的增加而增强;同一浓度条件下,其抑制作用随着作用时间的延长也相应增强(P0.05)。不同浓度塞来昔布(除5μmol/L组外)作用于SGC-7901细胞后,NHE1表达均有下调,并呈浓度依赖性(P0.05)。SGC-7901细胞内pH为碱性,不同浓度(除5μmol/L组外)塞来昔布干预24 h后,SGC-7901细胞内pH较对照组细胞明显下降(P0.05),并且下降情况呈浓度依赖关系(P0.05)。结论塞来昔布对SGC-7901细胞生长抑制作用可能通过下调NHE1表达和降低细胞内pH实现。     

埃罗替尼和塞来昔布协同抑制胆管癌细胞生长

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼(erlotinib)与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胆管癌细胞生长的协同抑制作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测胆管癌细胞株QBC939增殖,流式细胞术检测用药前、后细胞凋亡和细胞周期的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹方法观察用药前、后细胞中COX-2、EGFR下游信号及凋亡、细胞周期相关基因蛋白表达的变化。结果:QBC939细胞表达COX-2 mRNA和EGFR mRNA及相应蛋白。埃罗替尼、塞来昔布抑制QBC939细胞增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。同时,塞来昔布增强了埃罗替尼抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。联合用药显著降低p-MAPK、p-Akt及PGE2表达。结论:塞来昔布和埃罗替尼均可抑制胆管癌细胞的生长,而联合用药具有协同作用,能同时阻断EGFR和COX-2信号通路。在胆管癌治疗中具有一定应用前景。     

α-干扰素和COX-2抑制剂对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用研究

目的研究α-干扰素和环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察不同浓度的塞来昔布和α-干扰素处理对肝癌细胞增殖的影响;通过荧光显微镜检测细胞凋亡。结果实验组与对照组相比,能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,两种药物高浓度联合作用48 h后,对肝癌细胞的生长抑制率可达92.44%±0.98%。α-干扰素和塞来昔布对肝癌细胞的增殖抑制具有协同作用。荧光显微镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。结论 COX-2抑制剂塞来昔布和α-干扰素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖有协同抑制作用,同时能诱导其凋亡,并且呈剂量和时间依赖性,这提示α-干扰素和COX-2抑制剂塞来昔布对HCC的预防和治疗可能有积极意义。     

塞来昔布抑制胃癌多药耐药基因表达的研究

目的探讨选择性环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布对胃癌细胞株BGC823多药耐药(MDR)1表达的影响。方法 BGC823细胞株经不同浓度的塞来昔布处理后,用ELISA法检测胃癌细胞前列腺素E2(PGE2)的分泌;24,48h后用RT-PCR检测多药耐药MDR1mRNA的表达,48h后用免疫细胞化学染色法检测P-gp的表达。结果塞来昔布可显著抑制胃癌细胞株BGC823的PGE2分泌,并呈浓度依赖性(P0.05)。不同浓度塞来昔布作用于细胞后,胃癌细胞株BGC823的MDR/P-gp表达受不同程度抑制,100μmol/L的塞来昔布对MDRlmRNA表达抑制作用强于10μmol/L(P0.01)。作用48h与24h相比,塞来昔布对MDRlmRNA表达的抑制作用更强(P0.01)。结论塞来昔布可抑制BGC823MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。其可能通过抑制COX-2活性而抑制PGE2表达,最终抑制P-gp的表达。     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对膀胱癌T24细胞杀伤作用的研究

目的：体外观察塞来昔布对人膀胱癌T24细胞株的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法i采用MTT法检测塞来昔布对T24细胞的生长抑制作用;采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态;采用Western印迹法检测塞来昔布作用前后T24细胞COX-2蛋白的表达变化;采用RT—PCR法检测塞来昔布作用前后T24细胞Bcl-2及Bax基因的表达变化。结果：塞来昔布（≥100μmol／L）作用24h及48h后能明显抑制T24细胞的生长并诱导凋亡;塞来昔布100μmol／L作用,24h及48h后,T24细胞COX-2蛋白表达量下降,Bcl-2基因表达亦下调,而Bax基因在塞来昔布作用24h后变化不明显,48h后表达上调。结论：塞来昔布能抑制T24细胞增殖并诱导其凋亡,可能与下调Bcl-2、上调Bax基因表达有关。     

塞来昔布对PC12细胞的凋亡作用及对血管内皮生长因子表达的影响

目的体外探讨COX-2抑制剂塞来昔布对PC12细胞的生长影响及血管内皮生长因子VEGF的表达的调控。方法应用噻唑蓝（MTT）比色法观察塞来昔布对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞的生长抑制作用;Wrights-Giemsa染色法观察细胞形态学;流式细胞技术观察细胞在各时间点的凋亡率;Western blot检测VEGF-165蛋白的表达变化。结果塞来昔布呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞,24h半数抑制浓度（IC50）为100μmol/L;各点凋亡率均高于空白对照组;塞来昔布能抑制PC12细胞的VEGF-165蛋白表达,且跟时间正相关。结论 COX-2抑制剂塞来昔布能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。     

人重组TNF相关凋亡诱导配体联合塞来昔布诱导胆囊癌细胞凋亡的作用研究

目的于体外实验观察人重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)联合环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对胆囊癌的疗效,初步探讨产生疗效的机制.方法用western-blot法检测塞来昔布作用于胆囊癌细胞株后,抗凋亡蛋白c-FLIP和死亡受体DR4、DR5表达状况.rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞株SGC-996后,采用3种方法检测细胞凋亡状况:(1)细胞的相差显微镜观察;(2)caspase 3、7活性检测;(3)Annexin染色后凋亡细胞流式细胞仪检测.结果塞来昔布可下调SGC-996细胞c-FLIPs的表达,上调DR5的表达,且呈浓度、时间依赖性.rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞后,细胞凋亡水平明显高于单独用药组和对照组.结论塞来昔布可通过下调c-FLIPs表达和上调DR5表达,显著增强rhTRAIL诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡的作用.     

特异性环氧合酶-2抑制剂与不同抗癌药联用对胶质瘤细胞生长的影响

目的 观察特异性环氧合酶-2抑制剂依托昔布和塞来昔布(celebrex)与长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)、鬼臼噻吩甙(VM-26)等抗癌药联用对胶质瘤细胞增殖的影响.方法 30 μmol/L依托昔布、100 μmol/L塞来昔布与不同浓度的VCR、DDP、VM-26单用、联用48 h.噻唑蓝(MTT)比色法检测各组抑制率,中效原理和金正均法评价特异性环氧合酶-2抑制剂与各抗癌药联用的效果.结果 30μmol/L依托昔布和100 μmol/L塞来昔布单用对胶质瘤细胞增殖抑制率分别为(40.87±1.88)%和(46.81±2.37)%;不同浓度(1、10、100 mg/L)的VCR、DDP、VM-26单用对胶质瘤细胞增殖均有不同程度的抑制作用;依托昔布和塞来昔布与不同浓度VCR、DDP、VM-26联用组的抑制率均高于各药物单用组,具有协同作用.结论 依托昔布和塞来昔布与抗癌药联用后起协同作用,特异性环氧合酶-2抑制剂可作为抗癌药的化疗增敏剂.