短暂局灶预缺血对脑梗死大鼠脑肝细胞生长因子表达的影响

目的:探讨短暂局灶缺血预处理对脑梗死大鼠脑肝细胞生长因子(HGF)表达的影响及其意义。方法:采取线栓法建立局灶脑缺血模型,预处理组大鼠经10分钟短暂预缺血处理.24h后二次处理造成大脑中动脉闭塞,脑梗死组只在第二次处理造成大脑中动脉闭塞。单纯短暂缺血组只在第一次处理时缺血10分钟。各组均在末次处理24小时后用RT-PCR法检测HGF的表达。结果:单纯短暂预缺血组脑缺血边缘区几乎无HGF的表达.预处理组脑梗死边缘区HGF的表达较单纯脑梗死组HGF的表达增强。结论:短暂局灶缺血预处理引起脑梗死边缘区HGF的高表达可能与缺血耐受的产生有一定的关系,对脑缺血损伤组织的保护及修复可能有重要意义。     

大鼠局灶脑缺血中心区与边缘区VEGF表达及mRNA变化

目的 探讨VEGF、VEGFmRNA在局灶脑缺血中心区和边缘区的表达和动态变化。方法 SD大鼠54只。根据缺血时间和再灌时间分为9组，采用线栓并环扎的方法建立局灶脑缺血再灌模型。LSAB法免疫组化染色观察VEGF免疫阳性表达。RT—PCR法检测VEGFmRNA动态变化。结果 在缺血3～6h，缺血中心区与边缘区VEGF免疫阳性反应达高峰，VEGFmRNA转录水平明显升高，两者24h基本降至正常水平。结论 VEGF在缺血早期的高表达可能与神经细胞和内皮细胞的自身保护作用有关。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注ICRmRNA表达动态变化研究

目的 探讨白细胞介素1-β转化酶（ICE）在局灶性脑缺血再灌注后的表达及作用。方法 线栓法复制大脑中动脉脑缺血再灌注模型。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后ICEmRNA表达。结果 缺血3h及缺血3h再灌注随缺血及缺血再灌注时间延长,缺血中心区与半影区ICEmRNA表达处于动态变化之中,再灌注24h、48h半影区表达持续高水平,而中心区表达下降。结论 局灶性脑缺血再灌注过程中ICEmRNA表达增强,促进神经细胞凋亡,ICE参与局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的调控。     

大鼠局灶性脑缺血皮质白细胞介素1β mRNA的表达

目的:观察大鼠局灶性脑缺血皮质白细胞介素1β(IL-1β)mRNA及其受体和受体拮抗剂表达的动态变化。方法:采用尼龙线栓法大鼠脑缺血模型,逆转录PCR方法观察缺血后其相对表达量。结果:缺血侧IL-1βmRNA在各缺血时间点皆有表达,12～24 h达高峰;IL-1RA在缺血48 h表达最强;IL-RI在缺血侧和缺血对侧均稳定表达(包括假手术组);IL-RⅡ仅在缺血侧有表达,24～48 h表达较高。结论:局灶性脑缺血时IL-1βmRNA表达增高,其受体及受体拮抗剂mRNA表达亦增高;表达程度与时相的差别说明它们在脑缺血中可能起着不同的作用。     

氟美松对成年大鼠持续性局灶性脑缺血后凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究药理剂量氟美松对成年大鼠持续性局灶脑缺血后凋亡及凋亡相关基因Bcl-2表达的影响.方法健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、氟美松组, 分别对应脑缺血3 h、 6 h、 12 h、 24 h、 48 h、 72 h、 120 h等时间点;行左侧大脑中动脉近端电凝术建立持续性局灶脑缺血模型;术后1 h生理盐水组静脉注射生理盐水, 氟美松组静脉注射氟美松(0.5 mg*kg-1*d-1);行常规HE染色, 原位末端TUNEL法标记凋亡细胞, 免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达.结果持续性局灶脑缺血后细胞凋亡、 Bcl-2蛋白表达主要分布在梗死灶的边缘区域, 脑缺血2 d出现细胞凋亡并持续到缺血5 d;氟美松组细胞凋亡出现时间提前到缺血1 d, 而且缺血2 d、 5 d凋亡细胞数量较生理盐水组增加;脑缺血3 h～5 h梗死灶边缘区域都有Bcl-2蛋白表达;氟美松处理组6 h～5 d Bcl-2蛋白表达细胞密度明显低于生理盐水组.结论持续性局灶脑缺血早期给予氟美松可促进梗死灶边缘区的细胞凋亡, 引作用与其下调Bcl-2的基因表达有关.     

实验性局灶性脑缺血不同脑区VEGF、VEGFR-1、2表达及意义

目的 通过探索血管内皮生长因子及其受体在局灶性脑缺血中的表达，进而探求血管内皮生长因子在局灶性脑缺血中的作用。方法 应用左侧颈总动脉结扎加缺氧诱导的方法，建立SD大鼠永久大脑中动脉闭塞模型，应用免疫组化方法检测血管内皮生长因子及其受体(VEGF、VEGFR-1、2)的表达，同时观察局灶性脑缺血后血管型成情况。结果 VEGF及VEGFR-1、2在局灶性脑缺血后6h表达增强，24h达高峰，在1周、2周恢复到对照水平。VEGF主要在缺血半影区(IP)神经元、胶质细胞及血管内皮细胞表达；VEGFR-1、2主要在缺血半影区血管内皮细胞表达。在缺血后48h半影区周边出现血管增生，1周后达高峰。结论 在局灶性脑缺血早期VEGF及VEGFR-1、2在神经细胞、胶质细胞、血管内皮细胞等均有表达，可促进缺血半影区的血管增生，对改善缺血半影区血供有重要作用。     

GM1对高血压大鼠脑缺血再灌注后DNA损伤修复的影响

目的探讨GM1对局灶性脑缺血再灌注后神经元凋亡作用的机制。方法运用双肾双夹法建立肾血管性高血压大鼠模型,采用线栓法制备高血压大鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注模型,免疫组化法检测再灌注过程中鼠脑DNA损伤修复蛋白XR—CC1、TUNEL法检测凋亡。结果与假手术组相比,脑缺血再灌注3h至24h在缺血区皮质XRCC1表达出现显著减低（P〈0.05）;再灌注24h缺血区皮质神经细胞发生凋亡,神经细胞XRCC1的表达强度与凋亡呈负相关。GM1治疗后缺血区皮质XRCC1的表达显著升高,凋亡显著减少（P〈0．05）。结论GM1通过提高肾血管性高血压大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞XRCC1的表达,发挥了抗神经细胞凋亡的作用。     

一氧化氮合酶与脑缺血早期神经损伤关系研究

目的:探讨大鼠脑缺血早期脑内3种亚型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达及作用。方法:采用免疫组织化学方法,用三型NOS的多克隆抗体检测大鼠局灶性脑缺血15、30min及1、2、3、6 h NOS在脑内的表达情况。结果:局灶性脑缺血1 h内缺血侧基底节区内神经元型NOS(nNOS)表达上调;脑缺血1 h内在缺血区小血管壁及3 h时在缺血边缘区小血管壁出现内皮型NOS(eNOS)两次上调。局灶性脑缺血6 h内神经组织中未见诱生型NOS(iNOS)表达。结论:在脑缺血的超早期出现结构型NOS(nNOS及eNOS)的上调表达,此时可能同时存在nNOS的神经损伤作用及eNOS的神经保护作用。     

大鼠持续性脑缺血后小胶质细胞变化及其与神经元凋亡的关系

目的 研究成年大鼠持续性局灶脑缺血后小胶质细胞的变化及其与缺血后凋亡的关系。方法 采用单侧大脑中动脉近端民凝术建立成年大鼠持续性局灶脑缺血模型。在手术后3h、6h、12h、24h、48h、72h和120h取材,分别用IsolectinB4凝集素标记小胶质细胞和原位末端TUNEL法标记凋亡细胞。结果 缺血后凝集素阳性小胶质细胞和TUNEL阳性小胶质细胞都分布在梗死灶周边区。缺血12h在梗死灶的边缘密集分布凝集素标记阳性细胞,24－72h凝集素阳性小胶质细胞数量增加（P＜0．05）,120h阳性细胞数量减少（P＜0．01）。脑缺血48h、72h、120h在梗死灶边缘区域分布TUNEL阳性凋亡细胞,TUNEL阳性细胞以神经细胞为主。结论 持续性局灶脑缺血后活化小胶质细胞主要分布在梗死灶周边区,可能对缺血后神经元凋亡产生作用。     

大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase—9 mRNA及Apaf—1mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase-9 mRNA及Apaf-1 mRNA表达的动态变化.方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血后再灌注模型,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测caspase-9 mRNA及Apf-1 mRNA的表达.结果缺血2 h后再灌注,缺血皮质中caspase-9 mRNA的表达在再灌注后24h达高峰,48h仍保持高水平,而Apaf-1 muRNA的表达无明显改变.结论局灶性脑缺血后再灌注48h内caspase-9 mRNA表达增强.     

Inductions of hepatocyte growth factor and its activator in rat brain with permanent middle cerebral artery occlusion

Hepatocyte growth factor (HGF) is a potent pleiotrophic peptide which has a trophic role for neuronal cells. As it exerts its effect only after a conversion to its heterodimeric active form, the activation step, which is catalyzed by an enzyme serine protease named HGF activator (HGFA), is of great importance. HGF activated by HGFA may act as a protecting agent in injured brain. In the present study, we investigated expression of immunoreactive HGF and HGFA in rat brain after permanent middle cerebral artery (MCA) occlusion. By immunohistochemical analysis, HGF and HGFA were normally expressed only in ependymal cells and choroid plexus. At 1 h after MCA occlusion, neurons in the ischemic penumbra region of the cerebral cortex slightly expressed immunoreactive HGFA. HGF was not induced at that time. At 3 h of ischemia, however, immunoreactive HGF as well as HGFA became detectable in neurons of the ischemic cerebral cortex and caudate. Immunoreactivity for HGF continued to increase until 24 h, while that for HGFA remained almost constant from 3 to 24 h. No glial or vascular endothelial cells expressed HGF nor HGFA. By Western blot analysis for HGF, a single band of molecular weight (MW) 34 kDa became apparent at 24 h, corresponding to the light chain of the active form HGF. The present study suggests that HGF and HGFA were induced in neurons under permanent ischemia with slightly different temporal profiles. Through activation by HGFA, the active form of HGF could serve as a neurotrophic factor in ischemic brain.     

神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

目的探讨神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。方法采用线栓法制作缺血再灌注大鼠模型,分别用神经节苷脂(治疗组)和生理盐水(对照组)腹腔注射。观察两组大鼠缺血90min、缺血90min再灌注24h的脑梗死面积、神经功能缺损程度、细胞凋亡数、细胞凋亡率。结果治疗组大鼠于相同时间点脑梗死面积较对照组明显减小,仅表现轻度的神经功能缺损,且神经细胞的凋亡数较对照组显著减少(均P<0.01)。结论神经节苷脂能明显减小大鼠实验性脑缺血的脑梗死面积,减轻脑缺血再灌注后神经功能缺损程度,显著减轻缺血区神经元损害,具有显著的脑保护作用。     

Therapeutic time window in the penumbra during permanent focal ischemia in rats: changes of free fatty acids and glycerophospholipids

To better define a therapeutic time window for reducing the extent of damage in ischemic penumbra, the time courses of changes in the glycerophospholipid and free fatty acid (FFA) levels were determined in the rat cerebral cortex following induction of the permanent focal ischemia. Focal ischemia induced a biphasic increase in FFA levels in the cerebral cortex, which had been recognized as the ischemic penumbra during the early stages after permanent occlusion of the middle cerebral artery (MCA). The first increase in FFA levels, in which the polyunsaturated fatty acid (PUFA) contained a large number of arachidonic acid (C20:4) molecules, began at 30 min and reached a peak at 1 h, followed by transient return to each sham level 2-6 h after the onset of MCA occlusion. Thereafter, the delayed increase in FFA levels, showing more increases of docosahexaenoic acid (C22:6) molecules than the C20:4 in PUFA compositions, occurred at 24 h. In contrast, the levels of phosphatidylinositol 4-phosphate (PIP) and phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PIP2) decreased rapidly at 30 min of ischemia and returned transiently to each sham level at 1-6 h. The levels of phosphatidylcholine (PC) and phosphatidylethanolamine (PE), including polyphosphoinositides (PIPs), began to decrease significantly during the late stages, i.e., 24 h after induction of ischemia. These results suggest that the time-dependent changes in FFA and PIPs levels during the early stages of ischemia (until 6 h after induction) might be an important determinant of the subsequent neuronal death in the ischemic penumbra and that the breakdown of glycerophospholipids in the later stages after the induction of focal ischemia was associated with the development of infarction in the cerebral cortex.     

鼠脑缺血时氧化还原因子-1蛋白的表达

目的：观察大鼠永久性脑缺血后不同时相脑组织氧化还原因子－1蛋白的表达特性。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断模型,以尾壳平面为模板,采用免疫组化方法,观察正常对照组,假手术及缺血1、6、12、24和48h氧化还原因子－1蛋白阳性染色细胞的分布部位及数量。结果：免疫组织化学染色显示,正常对照组、假手术组、左侧大脑半球氧化还原因子－蛋白在细胞核表达,而缺血组,在梗死中心的坏死区无氧化还原因子－1蛋白表达,在半暗带区,氧化还原因子－1蛋白表达随缺血时间的延长而下降,各时间点间差异有显著意义。结论：脑缺血后,半暗带区氧化还原因子－1蛋白免疫活性下降和DNA修复机制的失效,考虑与局灶性脑缺血半暗带区细胞凋亡的发生有关。     

大鼠局灶性脑缺血半暗带葡萄糖转运子3 mRNA的表达

目的 研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间皮质半暗带和中心区葡萄糖转运子3（GLUT3）转录水平的表达规律。方法 用插线法建立大鼠局灶性脑缺血模型，剥取缺血半暗带及中心区皮质组织，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），测定GLUT3mRNA水平的变化。结果 缺血半暗带GLUT3mRNA在缺血3小时升高，24小时达到高峰，96小时后基本恢复正常。缺血中心区GLUT3mRNA在缺血后3小时有一短暂的升高，随后迅速下降呈低水平表达。结论 GLUT3在缺血半暗带的表达上调，有可能是机体对缺血损伤的保护性反应。     

大鼠局灶性脑缺血β淀粉样前体蛋白mRNA在缺血半暗带的表达变化

目的 :研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间皮质半暗带和中心区淀粉样前体蛋白 (APP)在转录水平表达规律。方法 :用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型 ,剥取缺血半暗带及中心区皮质组织 ,采用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,测定APPmRNA水平的变化。结果 :半暗带APPmRNA在缺血后 48h升高 ,缺血 72h达到高峰 ,缺血 1周后仍高于正常。缺血中心区APPmRNA在缺血后 72h和 96h高于正常水平。结论 :APPmRNA在缺血半暗带的表达上调 ,有可能加重缺血损伤。     

尼莫地平对局灶性脑缺血鼠脑血影蛋白的影响

目的 观察大脑中动脉（MCA）缺血后血影蛋白的动态变化,寻找反映脑缺血程度的形态学依据。并评价尼莫地平的脑保护作用。方法 制作大鼠MCA局灶性脑缺血模型。免疫组化法检测血影蛋白含量。缺血后10min,30min,3h,6h和48h观察血影蛋白动态变化。结果 缺血后10min缺血区域血影蛋白表达降低。24h达高峰,尼莫地平可减少缺血区神经元血影蛋白的降解,具有脑保护作用。结论 检测血影蛋白可反映神经元缺血损伤后的早期形态学改变,钙离子拮抗剂一尼莫地平有重要的脑保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后CAD表达与细胞凋亡的关系

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带 Caspase-3激活的 DNA酶 (CAD)基因的表达变化与细胞凋亡的关系。方法　线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)及再通模型。应用 RT-PCR技术检测MCAO再通后不同时相缺血半暗带皮质 CAD基因的表达 ,同时利用 TU NEL法观察对应区域细胞凋亡的动态变化规律。结果　脑缺血再灌注 6h,半暗带皮质 CAD m RNA显著升高 ,密度比值为 0 .74± 0 .0 4,再灌注 2 4h达到高峰 (1.13± 0 .11)。对应各时相均可见神经细胞凋亡 ,凋亡细胞以再灌注 48h组为最高 (113 .10± 13 .88)。结论　脑缺血再灌注可致 CAD基因表达上调 ,可能参与了缺血后神经细胞凋亡过程     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后FADD mRNA及其蛋白的表达变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内Fas死亡结构域相关蛋白（FADD）mRNA及蛋白的表达变化。方法用半定量的逆转录PCR（RT-PCR）法检测缺血2h再灌注不同时间点缺血半暗带皮质内FADD mRNA的表达,Western blot检测FADD蛋白表达的变化。结果缺血半暗带脑皮质内FADD mRNA及其蛋白的表达于缺血灌注后3h明显升高,再灌注后12h达高峰（P＜0．01）,至再灌注后24h明显下降。结论脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质内FADD mRNA及蛋白表达均明显增加,提示FADD可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用。