转染NF-κB抑制物基因对食管癌细胞系生物活性的影响

目的:将NF-κB抑制物基因pcDNA3/mI κBα S32A/S36A转染食管癌细胞株EC1,观察对NF-κB因子活性及对细胞生长的影响.方法:采用脂质体转染法将pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒转染入EC1细胞进行瞬时表达,检测其对EC1细胞的影响,用Western blot和RT-PCR方法检测转染前后NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达水平的变化.结果:与转染pcDNA3.0质粒和未转染质粒组比较,转染pcDNA3.0/mI κBα S32A/S36A质粒EC1细胞的生长速度受到明显抑制,P＜0.05.转染pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒的EC1细胞,在0、24、48、96小时未见NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达,而转染pcDNA3.0质粒EC1细胞可见核内NF-κB p65和NF-κB p50蛋白表达.结论:转染NF-κB抑制物基因IκBα后可抑制EC1细胞的生长,并抑制细胞NF-κB p65、NF-κBp50基因的表达,该结果提示调节NF-κB的表达可能是食管癌基因治疗的靶点.     

FRNK抑制人乳腺癌细胞体外增殖及机制研究

目的：研究黏着斑相关非激酶（focal adhesion kinase related non—kinase，FRNK）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用及相关机制。方法：通过RT—PCR方法克隆目的基因FRNK，构建pcDNA3．1-FRNK重组质粒；经脂质体分别介导重组质粒（pcDNA3．1-FRNK）、阳性对照质粒（pcDNA3．1-GFP）和空质粒（pcDNA3．1）转染MCF-7细胞，以正常MCF-7细胞作为空白对照；通过检测转染后细胞FRNK蛋白的表达，并结合转染pcDNA3．1-GFP后细胞表达荧光的多寡来评估转染效率；采用MTT法研究转染后12、24、48和72h各时间点细胞的增殖情况；转染质粒48h后，采用流式细胞术分析MCF-7细胞周期，Westernblot法检测细胞核内NF-κBp65的表达。结果：pcDNA3．1-FRNK质粒可经脂质体介导高效转染MCF-7细胞，促进细胞FRNK的表达，FRNK表达量在转染后48h达高峰；转染pcDNA3．1-FRNK后，MCF-7细胞增殖趋缓，且这种抑制增殖呈一定的时间依赖性；转染FRNK基因后，S＋G2／M期的细胞比例较正常细胞显著下降（P〈0．05）；转染pcDNA3．1-FRNK后MCF-7细胞核内NF-teBp65蛋白表达减少。结论：FRNK可抑制MCF-7细胞增殖，其抑制作用与下调NF-κBp65核易位相关。     

NOR1基因对HepG2细胞E-选择素的影响及机制探讨

目的探讨NOR1基因对HepG2细胞E-选择素表达水平的影响及NF—kB通路是否参与了NOR1基因对HepG2的E-选择素的影响。方法将NOR1基因通过脂质体转染入HepG2细胞．分别设立HepG2细胞对照组、HepG2／pcDNA3．1（＋）空白质粒细胞组、HepG2／pcDNA3．1（＋）／NOR1转染阳性克隆细胞组、PDTC处理的HepG2／pcDNA3．1（＋）／NOR1转染阳性克隆细胞组（后简称PDTC处理组）,分别检测4组细胞E-选择素的mRNA水平和蛋白水平：结果基因芯片筛选转染NOR1基因的HepG2细胞E-选择素表达水平上调（cy3／cy5〉2．0）;RT—PCR结果显示转染阳性克隆细胞组E-选择素mRNA的表达水平明显高于空白组、对照组和PDTC处理组（P〈0．01）,ELISA结果显示转染阳性克隆细胞组E-选择素表达水平明显高于空白组、对照组和PDTC处理组（P〈0．01）。结论NOR1基因诱导HepG2细胞E-选择素表达水平增高,NF—kB通路参与了NOR1基因对HepG2细胞E-选择素的影响.     

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞生物学行为的影响

背景与目的INK4a／ARF基因是重要的细胞周期调控基因，其表达产物p16INK4a和p14ARF蛋白分别在Rb和p53通路中发挥重要调节作用。本研究将野生型INK4a／ARF基因同时转染到该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞中，研究其对该细胞生物学行为的影响。方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术，将含有人全长野生型INK4a／ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3-p16INK4a和pcDNA3-p14ARF同时导入A549细胞系中，确定所编码蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达；在设立空白组和空质粒转染组的情况下，进行了转染前后细胞生长曲线、克隆形成率、周期分布、凋亡指数等指标的检测和分析。结果转染INK4a／ARF基因后的细胞G0／G1期比例为59．9％，与未转染（51．2％）及空质粒转染（50．3％）细胞相比差异显著（P值分别为0．043和0．025），同时S期和G2／M期的比例下降；转染后细胞克隆形成率为63％，未转染细胞和空质粒转染细胞分别为85％和87％（P值均〈0．01），凋亡指数明显增加，转染INK4a／ARF基因后的细胞凋亡率为8．0％，另两种细胞均为2．7％，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论阳离子脂质体可以有效地将INK4a／ARF基因导入A549细胞，并可以抑制A549细胞的生长，促进凋亡作用的增强，为将来肺癌的基因治疗提供了实验依据。     

CD151对人宫颈癌Hela细胞增殖反应的影响

目的：探讨CD151对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法：利用脂质体分别将pcDNA3．1-CD151、pcD—NA3．1-antiCD151和pcDNA3．1-GFP重组质粒转染Hela细胞。Westernblot分析细胞CDl51及核增殖抗原（PCNA）的表达；MTT法检测细胞增殖反应；流式细胞仪分析细胞周期变化。结果：转染pcDNA3．1-CD151与未转染组及转染pcDNA3．1-GFP对照组比较，Hela细胞CD151表达显著上调（P〈0．01）；细胞增殖反应显著提高（P〈0．01）；增殖期S＋G2/M细胞比例增高（P〈0．05）；PCNA表达亦明显增强（P〈0．01）。而转染pcDNA3．1-antiCD151后，Hela细胞CD151表达明显下调（P〈0．01）；细胞增殖反应及PCNA表达明显下降（P〈0．01）；S＋G2／M细胞比例降低（P〈0．05）。结论：CD151的表达对肿瘤细胞的增殖反应起重要作用，通过反义CD151基因干预．可下调细胞中CD151的表达，抑制肿瘤细胞增殖。     

人MAGE-3真核表达载体的构建与表达

目的 克隆人黑色素瘤特异性抗原MAGE-3基因，构建真核表达载体，建立MAGE-3阳性细胞株，制备肿瘤核酸疫苗。方法 用RT—PCR方法扩增MAGE-3cDNA，以pcDNA3．1 为载体，构建重组表达质粒pcDNA3．1／MAGE-3。重组质粒用脂质体转染鼠B16细胞，经RT—PCR、细胞免疫染色及免疫印迹法鉴定转化细胞中MAGE-3的表达。结果 正确构建了pcDNA3．1／MAGE-3重组质粒，并且在转化细胞中检测到了MAGE-3的表达。结论 成功构建了pcDNA3．1／MAGE-3真核表达质粒，建立了稳定表达人MAGE-3的鼠B16细胞株。     

RNAi抑制NF—κB通路相关基因对喉鳞癌凋亡及转移的影响

目的：用RNA干涉方法探讨NF—κB通路参与喉癌发生、发展的可能机制。方法：RT—PCR、West—ern Blot检测喉鳞癌组织中NF—κB通路中相关基因表达，RNA干涉方法抑制p65，p50表达，流式细胞仪，TUNEL方法检测细胞凋亡，Transwell检测细胞侵袭力。结果：36例喉鳞癌组织中21例p65 mRNA表达上调（58．33％）高于癌旁组织（P=0，012），13例出现p50 mRNA表达上调（36.11％），但与癌旁组织比较无显著差异（P=0．602）。喉鳞癌组织的p65蛋白表达明显较癌旁组织增强（P=0．044），而p50蛋白表达无显著差异。特异siRNA转染Hep2细胞明显抑制p50，p65基因表达，该作用可持续10天。RNAi抑制p65基因表达使Hep2细胞凋亡率增加，在转染后第7天最高达29．89％，与对照组比较升高超过10倍（P=0．020）；同时使Hep2细胞侵袭力明显下降（P=0．003），而干涉p50基因对细胞凋亡及细胞侵袭性影响不明显。结论：RNAi抑制p65表达诱导Hep2细胞凋亡、抑制细胞侵袭力，提示抑制p65表达与常规治疗结合可能成为改善喉癌预后的选择。     

人MT1H 基因对肺腺癌细胞A549 增殖的影响及其机制

 目的 研究外源性人金属硫蛋白1H（MT1H）基因稳定转染对肺腺癌细胞A549生长的影响及其机制。方法 构建MT1H基因真核表达质粒pcDNA3．1（-）-MTIH，以脂质体法转染A549细胞，经G418筛选，获得阳性单克隆细胞。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后MT1H mRNA和蛋白表达，MTT实验检测其增殖能力的变化，流式细胞仪分析细胞周期时相分布。然后RT-PCR检测cy-clinD1的表达。结果 MT1H在A549细胞中获得表达。与未转染组和空质粒转染组比较，pcDNA3．1（一）～MT1H转染组细胞增殖速度明显增快，G0／G1期细胞减少，S期细胞增多，cyclinD1 mRNA水平明显升高。结论 MT1H能够促进肺腺癌细胞A549增殖，可能和上调cyclinD1促使细胞进入S期增多有关。     

p73基因过量表达对人肺癌细胞A549凋亡及其化疗敏感性的作用

背景与目的：部分非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）表达野生型p53基因（wild-type p53,wt-p53）,因此在基因治疗中克服这些NSCLC对wt-p53的抵抗机制就非常重要。P53基因家族的新成员p73是p53的同源体,本研究旨在探讨对wt-p53基因治疗抵抗的人肺腺癌细胞A549在外源p73基因转染或联用化疗药后凋亡程度和对化疗药物敏感性的变化。方法：将真核表达重组质粒pcDNA3-HA-p53或pcDNA3-HA-p73α转染入A549细胞,G418筛选,Western blot检测P53或P73α的表达。MTT法分析转染细胞对顺铂和阿霉素的敏感性,用流式细胞术、TUNEL法和DNA片段法分析化疗药作用下转染细胞的凋亡变化,克隆形成实验观察细胞生物学性状的改变。结果：转染p53或p73α基因的A549细胞可以稳定高表达p53或p73α蛋白。转染p73α的A549细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度（6．25μmol／L的顺铂或0．25μmol／L的阿霉素）作用下生长明显受到抑制。顺铂的IC50值从22．65μmol／L降至3．75μmol／L,阿霉素的IC50值从4．20μmol／L降至0．06μmol／L。p73能使A549细胞受顺铂和阿霉素诱导的细胞凋亡增加。而p53没有明显作用。流式细胞术显示p73α基因转染后,顺铂诱导的细胞凋亡率从10．6％升高到36．8％（P〈0．01）,阿霉素诱导的细胞凋亡率从13．0％升高到41．1％（P〈0．01）。克隆形成实验显示．p73α基因转染能明显降低顺铂和阿霉素作用后A549细胞的克隆形成数（P〈0．01）。对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为2．0和2．4倍。结论：外源性p73基因的导入增加了wt-p53型A549细胞对顺铂和阿霉素等化疗药的敏感性。该作用可能与p73基因能不依赖于p53基因诱导细胞凋亡有关。p73基因可用于治疗wt-p53不能发挥作用的恶性肿瘤。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。