应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性研究

目的研究应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性。方法将受试物2，4-二硝基氯苯（DNCB）、三氯乙烯（TCE）、三氯乙酸、抗菌冻胶对小鼠双耳背皮肤进行涂抹，25μl／耳，连续染毒3d，第4天每只小鼠腹腔注射BrdU标记液（0．3ml／只）。第5天取小鼠耳部淋巴结称重，然后制成单细胞悬液，应用BrdU-ELISA法检测淋巴细胞增殖。同时应用豚鼠局部封闭涂皮法检测受试物的致敏性。结果DNCB、TCE各浓度组与AOO溶剂对照组BrdU标记值比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），DNCB各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），而TCE各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。抗菌凝胶组与三氯乙酸分别与空白对照组比较，其中抗菌凝胶组、1％、5％三氯乙酸BrdU标记值差异均无统计学意义，10％三氯乙酸差异则存在统计学意义（P〈0．05）。结论BrdU-ELISA法具有检测化学物皮肤致敏性的能力，但其灵敏性比标准LLNA和传统豚鼠局部封闭涂皮法差，需要进一步优化实验方法。     

BrdU掺入法评估化学物皮肤致敏性的实验研究

目的探讨BrdU掺入法在检测和评价化学物对小鼠皮肤接触致敏性的应用。方法选择24只雌性BALB/C小鼠随机分为6组,受试物为2,4-二硝基氯苯(DNCB)和三氯乙烯(TCE),对照组受试物为AOO溶剂。将受试物连续3d涂抹于小鼠双耳背,第4天腹腔注射BrdU标记液,第5天摘取小鼠耳部淋巴结,称重,然后制备淋巴细胞悬液,用ELISA检测技术测定BrdU掺入淋巴细胞的水平,将实验组的小鼠耳部淋巴结重量和BrdU标记指数分别与对照组进行方差分析比较。结果溶剂对照组的小鼠淋巴结重量为(0.0060±0.0015)g,0.10、0.25、0.50、1.00%浓度的DNCB实验组的淋巴结重量为(0.0120±0.0014)、(0.0137±0.0006)、(0.0156±0.0017)、(0.0241±0.0035)g,20%TCE实验组的小鼠淋巴结重量为(0.0155±0.0017)g;溶剂对照组的BrdU标记指数为0.157±0.023;各浓度的DNCB实验组的BrdU标记指数分别为0.349±0.009、0.412±0.013、0.445±0.009、0.536±0.026;20%TCE实验组的BrdU标记指数为0.433±0.025。DNCB各浓度组、TCE组的淋巴结重量和BrdU标记指数与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论BrdU掺入法作为一种改良的局部淋巴结实验方法,它具有评估化学物皮肤接触致敏性的能力。     

溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法作为皮肤致敏试验替代方法研究

目的 探讨应用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)示踪和酶联免疫吸附测定(ELISA)的局部淋巴结试验(LLNA:Br-dU-ELISA法)替代LLNA(放射法)作为皮肤变态反应试验替代方法的可行性.方法 雌性BALB/c小鼠随机分组,每组4只.选择27种受试物进行测试,每种受试物视情况设3～4个剂量组和1个溶剂时照组.将受试物连续3d涂抹于小鼠双耳背,第5天腹腔注射BrdU标记液,第6天摘取小鼠耳部淋巴结,制备淋巴细胞悬液,采用ELISA技术测定BrdU掺入细胞的水平.选择3种受试物进行3次重复性试验以了解结果的重现性;将27种受试物的LLNA:BrdU-ELISA法与文献报告的LLNA(放射法)结果比较,分析方法的致敏性判别能力及分级结果的一致性和相关性.结果 LLNA:Br-dU-ELISA法结果重现性较好(F=2.890,P＞0.05);与LLNA(放射法)相比,该方法对27种化学物的致敏性判别能力较好(灵敏度= 95.00%,特异度=85.71%,符合率=92.59%),致敏性分级结果有较好的一致性和相关性(Kappa=0.575,Gamma=0.959).结论 LLNA:BrdU-ELISA法可作为皮肤变态反应试验的替代方法应用于化学物皮肤致敏性评价.     

重组人乳铁蛋白皮肤变态反应和皮肤光变态反应试验研究

目的确定和评价重组表达的人乳铁蛋白作为化妆品原料对哺乳动物引起变态反应或者光变态反应的程度。方法通过豚鼠皮肤变态反应试验和弗氏完全佐剂试验法考察重组人乳铁蛋白的致敏性和光敏性。结果皮肤变态反应试验中,受试物重组人乳铁蛋白未见引起皮肤红斑、水肿等过敏症状反应,且未见其他中毒指标(受试物组中皮肤反应积分≥2的动物数为0例,致敏率为0%);皮肤光变态反应试验中,豚鼠皮肤局部涂抹受试物重组人乳铁蛋白后进行UVA照射,未引起皮肤刺激和过敏等光变态反应(受试物组中皮肤反应积分≥2的动物数为0例,致敏率为0%)。结论重组人乳铁蛋白无皮肤致敏性和光致敏性。     

对苯二胺氧化产物对小鼠经皮肤染毒的亚慢性毒性

[目的 ]研究氧化型染发剂主要成分对苯二胺 (PPD)氧化产物经皮吸收后对小鼠的亚慢性毒作用。 [方法 ]对苯二胺经双氧水氧化后的氧化产物为受试物 ,每隔 3d在小鼠背部皮肤染毒 1次 ,周期 1个月。整个过程中观察小鼠的一般生长情况 ,并于染毒 1个月后观察受试动物血生化指标、血常规、肝肾脾组织病理学改变和遗传毒性。 [结果 ]PPD氧化产物可影响小鼠的肝肾功能 ,随着PPD染毒剂量增加 ,ALT和BUN值逐渐增高 ,与对照组比较差异有显著性 (P<0 0 5或P <0 0 1)。PPD具有遗传毒性 ,能造成骨髓细胞染色体和DNA的损伤 ,并在受试剂量范围内存在剂量 效应关系。 [结论 ]频繁使用氧化型染发剂可能对机体具有潜在的危害     

噻唑蓝比色法测定化学物皮肤致敏性的研究

目的：研究噻唑蓝比色法在检测和评价化学物皮肤接触致敏性中的应用。方法：将致敏物质肉桂醛、DNCB和化妆品纤体精华液、防晒型营养水分别对BALB／c小鼠双耳进行连续3d染毒，第5天取小鼠耳部淋巴结制备单细胞悬液，用噻唑蓝比色法检测淋巴细胞增殖，用方差分析进行比较。同时采用传统实验方法-局部封闭涂皮法对DNCB、纤体精华液与防晒型营养水进行皮肤变态反应试验。结果：与溶剂对照组比较，肉桂醛与DNCB能引起淋巴细胞的显著增殖，与空白对照组比较，纤体精华液与防晒型营养水未引起淋巴细胞明显增殖，经传统实验方法检测证实，DNCB引起75％动物皮肤变态反应，而纤体精华液与防晒型营养水未引起动物皮肤变态反应。结论：噻唑蓝比色法具有评估化学物皮肤接触致敏性的能力，对化妆品皮肤致敏性评价具有较好的应用前景。     

进口染发剂烫发剂的皮肤刺激和变态反应及联合作用研究

目的 对抽取的12种进口染发剂、烫发剂的皮肤刺激性和变态反应性及联合作用进行试验研究,为评估其使用的毒理学安全性提供依据.方法 分别采用家兔和豚鼠进行急性皮肤刺激性试验和皮肤变态反应性试验.结果 12种染发剂、烫发剂的皮肤刺激、变态(致敏)反应及联合作用均为阴性.结论 抽检的12种进口染发剂、烫发剂均无皮肤刺激性,也...     

GC-MS法测定染色头发中对苯二胺残留的不确定度评定

<正>对苯二胺是用于永久性染发剂中的化妆品头发染料中间体。研究表明,含有对苯二胺的染发剂无致癌性,但有相当数量的人群对其致敏[1]。目前对于头发中染发剂残留的检测尚不多见,本文建立了染色头发中对苯二胺残留的GC-MS测定方法,     

某抑菌卫生巾的抑菌效果与刺激性评价

[目的]对抑菌型卫生巾进行毒理学安全性及抑菌效果评价,以了解该样品的安全性。[方法]利用新西兰白兔和豚鼠分别对该样品进行阴道黏膜刺激试验和皮肤变态试验;并进行了大肠杆菌金黄色葡萄球菌抑菌试验。[结果]家兔阴道黏膜刺激试验刺激指数为2.8;皮肤变态试验致敏率为0;对大肠杆菌作用2 min,抑菌率〉50%,作用5 min,抑菌率〉90%;对金黄色葡萄球菌作用2 min,抑菌率〉90%。[结论]该受试物对新西兰兔阴道黏膜刺激试验为轻刺激性;皮肤变态反应试验结果未见皮肤变态反应,为弱致敏物,但对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较强抑菌作用。     

染发剂对豚鼠肝细胞的影响

[目的]了解市售的染发剂的慢性毒性作用。[方法]采用动物实验观察不同剂量染发剂对豚鼠肝脏的影响。[结果]染发剂对豚鼠体重增加有影响;可引起肝脏肝细胞索紊乱,肝血窦不清,肝细胞水肿,弥漫性水样变性、坏死等病变,对照组与染发剂浓度为50﹪、100﹪组肝脏病理改变差异有统计学意义（H=22.46,P﹤0.001）。[结论]≥50﹪浓度的染发剂可导致豚鼠肝脏发生病理改变,并能影响动物的生长发育。     

金属硫蛋白抗辐射的实验研究

目的 :　研究口服金属硫蛋白 (metallothionein,MT)对机体抵御电离辐射能力的影响。方法 :　采用灌胃方式给予受试小鼠 MT,连续灌胃 30 d后分别接受 7Gy、8Gy60 Co-γ一次性辐照及每周一次 1 Gy小剂量连续 8次辐照。于照后不同时间取血测定各组小鼠白细胞和淋巴细胞 ,并记录 8Gy一次性辐照后小鼠存活时间。结果 :　 (1 ) 7Gy辐照的实验条件对于抗辐射保健食品功能的观察较为适宜。 7Gy辐照后淋巴细胞的下降趋势与白细胞基本一致 ,淋巴细胞可以作为评价抗辐射保健食品实验的一项观测指标。 (2 )灌胃 MT0 .6mg/kg bw和 3mg/kg bw30 d的小鼠经 7Gy一次辐照后 ,白细胞和淋巴细胞数量明显高于未服 MT的辐照对照组。 (3)经 8Gy照射后服用 MT的小鼠比辐照对照组小鼠平均存活时间提高了 72 % (P<0 .0 5)。 (4)每周一次 1 Gy小剂量60 Co-γ射线照射小鼠 ,7次 (累计剂量 7Gy)和 8次 (累计剂量 8Gy)照射之后 ,服用 MT的小鼠白细胞和淋巴细胞数量明显高于未服 MT的辐照对照组小鼠。结论 :　口服 MT能够延长一次性大剂量电离辐射小鼠的存活时间 ,降低一次性大剂量和多次小剂量电离辐射对免疫系统的损伤     

手部湿疹接触性致病因素探讨：320例皮肤斑贴试验结果

320倒手部湿疹采用欧洲标准斑试系列,169例(52.81%)显示对一种或一种以上试剂阳性。女性对镍及钴的反应率高于男性,而男性对黑橡胶(含PPD)及对苯二胺的反应率则高于女性。职业性湿疹组对铬、镍、钴的阳性率高于非职业性湿疹组。对几种金属盐的敏感性在本组病例中显示特殊作用。皮肤斑试系列在探索手部湿疹接触性致敏因素中起重要作用。     

酒精对小鼠胚胎脑线粒体发育的影响

目的探讨孕期酒精染毒对后代脑线粒体发育的影响。方法ICR孕鼠随机分成3个酒精染毒组和一个空白对照组,染毒期为孕6～15天,孕18天剖腹取胎,提取胎鼠脑线粒体,测定线粒体膜电位、呼吸酶活性、ATP合成酶活性和线粒体内ATP含量。结果随着酒精染毒剂量的增高,胎鼠头体重比逐渐降低,中、高剂量组出现小头畸形;流式细胞检测显示胚胎脑线粒体幼稚群的比例逐渐增多,由对照组的18%上升到34%;在中、高剂量组呼吸酶复合体Ⅰ和Ⅳ的活性均较对照显著降低,30g(kg·d)染毒组分别相当于对照的917%和879%,60g(kg·d)染毒组分别相当于对照的724%and697%,呈剂量反应关系;60g(kg·d)染毒组胎鼠脑线粒体ATP合成酶的活性较对照显著降低,相当于对照的803%;30g(kg·d)和60g(kg·d)染毒组胎鼠脑线粒体内ATP的含量均较对照组显著降低。结论孕期酒精染毒能够影响胚胎脑线粒体的发育和功能成熟,可能与酒精所致神经管畸形有关。     

对苯二胺对小鼠骨髓细胞致突变的影响

[目的]探讨对苯二胺(PPD)对小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)致突变的影响。[方法]选择健康的昆明种小鼠50只,随机分为5组,每组10只。PPD高剂量组(215.00mg/kg),次高剂量组(107.50mg/kg),中剂量组(53.75 mg/kg),低剂量组(26.88mg/kg),采用腹腔注射0.2ml法染毒,每天1次,连续2d;给对照组注射生理盐水0.2ml。染毒后,测定并计算小鼠PCE的微核率;用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定骨髓细胞的彗星细胞数和彗尾长度。[结果] PPD可致小鼠PCE微核率明显增加,引起拖尾细胞数相应增加。且都存在剂量-反应关系。[结论]PPD对小鼠PCE具有较强的致突变性。     

牛初乳片对小鼠细胞免疫及体液免疫功能的影响

目的研究牛初乳片对小鼠免疫调节功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用清洁级雌性昆明种小鼠48只,随机分为对照及低、中、高剂量组,每组12只,给药途径为经口灌胃。牛初乳片剂量分别为1.0、2.0和3.0 mg/kg,对照组灌胃等体积去离子水,1次/d,连续30 d观察小鼠的迟发型变态反应（DPH）、脾脏淋巴细胞转化、脾脏抗体生成细胞数、半数溶血值（HC50）和脏器系数。对4组实验数据进行F检验。结果 3个剂量组小鼠的足跖肿胀度分别为（0.84±0.22）、（0.93±0.26）和（0.97±0.26）mm,分别与对照组[（0.61±0.26）mm]比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;中和高剂量组的HC50与对照组相比,差异也有统计学意义（P〈0.05）;对脾脏和胸腺脏器系数无影响。结论该牛初乳片可以显著增强小鼠的细胞免疫功能和体液免疫功能。     

荆州市沙市城区卡介苗初免儿童结核菌素试验结果分析

[目的]了解我市卡介苗初免儿童的免疫状况,为改善卡介苗接种工作提供依据。[方法]应用结核菌素试验(PPD),对我市沙市城区730名卡介苗接种3个月后的3个月～1岁儿童,进行PPD阳性率调查与影响因素分析。[结果]本组儿童PPD阳性率91.5%,无性别差异;分析影响本组试验阳性率的因素有:有卡介苗接种史者高于其接种史不详者;有卡疤者高于无卡疤者;在接种门诊与医院产房接种卡介苗者高于村镇卫生室与街道卫生院接种;有结核病接触史者高于一般人群。[结论]PPD监测结果表明,本组儿童卡介苗接种质量较高。消除影响PPD试验阳性率的因素,可提高卡介苗免疫质量。     

Hematopathology in Sprague–Dawley Rats Following Sub-Chronic Topical Application of Para-Phenylenediamine

The aim of the present study was to analyze the hematological profile of male SD rats treated topically with aqueous solution of para-phenylenediamine (PPD), a component of almost all hair dye formulations. The rats were painted with different concentration of PPD (0, 1, 2 and 3 mg Kg⁻¹Day⁻¹) for 90 days and then sacrificed. The hematological profile indicated severe anemia characterized by significant (p < 0.05, 0.001) reduction of total RBC count (59%), packed cell volume (PCV, 50%) and haemoglobin level (70%) in the peripheral blood of PPD treated animals when compared to control group. The leucocytes profile exhibited an overall elevation of around twofold as compared to the control group with significant lymphocytosis (44.4%) and a higher percentage of blast cells (8.5%) as well as smudge (10.3%) and hairy cells (6.2%) in the peripheral blood of treated animals. Histopathological examination of spleen from treated rat’s exhibit red pulp congestion, expansion of the germinal centre, hyperplasia of the membrane capsule and extensive accumulation of hemosidderin pigments in the red pulp of the spleen. Overall this study indicated an abnormal pathophysiological condition indicating adverse effect of PPD in the treated animal groups. The risk assessment of hair dye formulation needs to be reviewed in view of widespread usage of paraphenylenediamine in almost all hair dye formulation.     

亚麻子油对兔肝功能的影响

目的：探讨亚麻子油对肝功能及组织形态学的影响。为全面认识其生理作用及合理利用剂量提供实验依据。方法：在饲料中加入0、3%、6.0%三种含量的亚麻子油喂养新西兰雄兔3个月，检测其肝功各项指标的动态变化并观察肝脏组织形态学变化。摄入3.0%亚麻子油饲料时，兔血溏、ALT等指标的影响较轻，肝脏未见明显的病理性损伤；6.0%亚麻子饲料使兔血糖、ALT、AST明显增高，且肝细胞浊肝、坏死、炎细胞浸润发生率均很高。结论：过量摄入亚麻子油对兔肝脏有损伤。     

丙二醇对预防5.5 Gy 60Co γ射线全身照射小鼠辐射损伤的初步探讨

目的 初步探讨小分子化合物丙二醇对C57BL/6J小鼠辐射损伤的防护作用。方法 将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组：正常组、照射组、丙二醇照射前1h给药组、照射前3 h给药组和照射前6h给药组,5.5 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射后10 d采集外周血,检测外周血WBC,RBC,PLT的变化。将36只雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组：对照组、照射组和丙二醇照射前1 h给药组。在照射后7 d,10 d,18 d称量小鼠体重,处死小鼠,计算脾脏指数和胸腺指数;观察照射后10 d小鼠脾脏结构的病理变化;检测照射后7 d的小鼠血清总超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果 丙二醇照射前1 h给药显著升高照射后10 d小鼠外周血WBC,PLT（t=2.53、3.72,P<0.05）。丙二醇照射前1h给药显著提高5.5 Gy照射后10 d小鼠的体重（t=2.86,P<0.05）;提高照射后7 d小鼠的脾脏指数（t=2.95,P<0.05）,和照射后7 d、18 d小鼠的胸腺指数（t=2.74,6.81,P<0.05）;减轻辐射导致的小鼠脾脏损伤,对辐射导致的小鼠血清SOD减少有缓解作用,但无统计学意义。结论 丙二醇照射前1 h给药对⁶⁰Co γ射线照射导致的小鼠辐射损伤具有一定的保护作用,其保护作用机制可能是提高机体造血、免疫功能,降低氧化应激。