流式细胞术检测肝炎肝硬化患者外周血单核细胞表型的表达

[目的]以健康人和慢性乙型肝炎患者作为对照,通过流式细胞术及细胞因子染色方法阐述不同分期的肝硬化患者外周血单核细胞的表型特点。[方法]采用流式细胞术检测外周血单核细胞表型(CD16,CD80及HLA-DR)。[结果]肝硬化患者外周血单核细胞及其亚型(CD14+CD16+单核细胞)频率均增加,HLA-DR表达水平降低。[结论]肝硬化患者病情越重,则单核细胞及CD14+CD16+单核细胞频率越高,活化程度越低。     

哮喘患者单核细胞胞内分泌IL-10、IL-12水平的改变

目的 研究哮喘患者外周血单核细胞表型及胞内分泌细胞因子IL-10、IL-12水平的情况,探讨其在哮喘发病机制中对哮喘严重程度的影响.方法 分别取健康志愿者及轻、重度哮喘患者全血2 ml,脂多糖(LPS)刺激24 h后,裂解红细胞,采用三色免疫荧光法及流式细胞仪进行胞内细胞因子测定,分析全血中CD14+CD16+细胞比例及CD14+CD16+、CD14+CD16-分别分泌IL-10、IL-12细胞的比例.结果 轻、重度哮喘患者CD14+CD16+细胞占CD14+单核细胞比例明显高于健康志愿者[分别为(19.07±6.17)%比(10.37±3.32)%,(21.83±7.47)%比(10.37±3.32)%,P＜0.01];重度哮喘患者CD10+CD16+中分泌IL-10细胞的比例明显低于健康志愿者及轻度哮喘患考[分别为(5.14±3.09)%比(9.98±3.84)%,(5.14±3.09)%比(9.90±4.22)%,P＜0.05];重度哮喘患者CD14+CD16-中分泌IL-10细胞的比例亦明显低于健康志愿者及轻度哮喘患者[分别为(15.20±8.90)%比(36.71±16.06)%,(15.20±8.90)%比(33.31±14.68)%,P＜0.01];重度哮喘患者CD14+中分泌IL-12细胞的比例明显低于健康志愿者及轻度哮喘患者[分别为(4.40±0.82)%比(6.80±1.46)%,P＜0.01;(4.40±0.82)%比(6.13±1.59)%,P＜0.05].结论 重度哮喘患者单核细胞表型及功能发生改变,对哮喘严重程度起推动作用.     

多发性骨髓瘤患者骨髓CD14~+CD16~+单核细胞表达水平的研究

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓CD14~+CD16~+单核细胞表达水平及其临床意义。方法采用流式细胞术检测多发性骨髓瘤、冒烟型骨髓瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症、意义未明的单克隆免疫球蛋白血症患者和对照组的骨髓CD14~+CD16~+单核细胞表达水平,统计并分析结果差异。结果多发性骨髓瘤患者骨髓CD14~+CD16~+单核细胞水平(%)明显高于冒烟型骨髓瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症、意义未明的单克隆免疫球蛋白血症及对照组,差异均有统计学意义(P0.05);多部位骨质破坏多发性骨髓瘤患者的CD14~+CD16~+单核细胞比例(%)明显高于单部位骨质破坏的患者,差异有统计学意义(P0.05)。结论骨髓CD14~+CD16~+表达水平检测可用于判断多发性骨髓瘤的溶骨病变的严重程度及其与相关疾病的鉴别诊断。     

消化道肿瘤患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞检测的临床意义

[目的]探讨消化道肿瘤患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的表达情况及其与消化道肿瘤发生、发展的关系。[方法]采用流式细胞术检测56例健康成人及56例消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25+Treg的水平,分析和比较两组之间的差异及各指标之间的相关性,并进行统计学分析。[结果]健康成人对照外周血CD4+CD25+Treg比例为(9.35±2.88)%,消化道肿瘤患者比例显著增高为(17.85±3.85)%,两者比较有统计学意义(P﹤0.01)。消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25+Treg比例与淋巴结转移和TNM分期有相关性,淋巴结转移阳性和TNM分期越晚,Treg比例越高。[结论]消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25+Treg比率升高,导致免疫抑制功能增强,可能是消化道肿瘤发生的重要机制;且增高程度与肿瘤临床分期正相关,未来可作为消化道患者病情进展的重要预测指标。     

再生障碍性贫血血清IL-2、TNF-α、sFas、IFN-γ及外周血T淋巴细胞亚群变化研究

[目的]探讨再生障碍性贫血血清IL-2、TNF-α、sEas、IFN-γ及外周血T淋巴细胞亚群变化规律. [方法]选取2008年1月～2010年12月于本院进行治疗的32例再生障碍性贫血患者为研究对象,将其设为观察组,同时 选取同期的32名健康人为对照组,后将两组人员的血清IL-2、TNF-α、sFas、IFN-γ及外周血T淋巴细胞亚群水平进行统计及比较. [结果]观察组的血清IL-2、TNF-α、IFN-γ及CD3+高于对照组,sFas、CD3+、CD4+及CD4+/CD8+水平低于对照组,P＜ 0.05或P＜0.01,差异有显著性或非常显著性,且急性患者的变化幅度较慢性患者更大.[结论]再生障碍性贫血血清IL-2、TNF-α、sFas、IFN-γ及外周血T淋巴细胞亚群呈现一定的变化规律,且与严重程度相关.     

MODS患者CD14+单核细胞人类白细胞DR抗原的表达及意义

[目的]探讨MODS患者CD14+单核细胞人类白细胞DR抗原的表达及意义. [方法]选择MODS病人98例,用流武细胞仪测定MODS患者CD14+单核细胞人类白细胞DR抗原(HLA-DR)的动态变化及存活组与死亡组CD14+单核细胞HLA-DR含量的动态对比. [结果]所有患者首次CD14+单核细胞HLA-DR含量均＜30％；死亡组的首次CD14+单核细胞HLA-DR含量的均小于10％,而康复组为小于30％,二者差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]对MODS患者入院时应立即进行CD14+单核细胞HLA-DR动态观察,这对患者预后的判断是有价值的.     

肺结核患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测及意义

[目的]通过对肺结核患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的分析,探讨其在肺结核患者中的临床意义。[方法]采用流式细胞技术多色荧光分析法,测定84例肺结核患者及29例健康体检者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平,观察肺结核患者与健康对照者之间、各型肺结核之间及结核杆菌阳性与阴性者之间的差别。[结果]肺结核患者CD4+CD25+所占比例为(10.81±2.65)%,与健康对照组差异有统计学意义(P0.05);各型结核之间、抗酸杆菌阳性与阴性之间的差异有统计学意义(P0.05);初治肺结核与复治肺结核也有一定的差异,但无统计学意义(P0.05)。[结论]CD4+CD25+调节性T细胞可作为判断肺结核患者免疫功能的指标,它对肺结核患者的免疫状态、指导用药、疗效观察有一定的临床意义。     

输卵管癌患者治疗前后及健康女性CD4~+CD25~+调节性T细胞数量与功能和免疫抑制因子表达水平比较

目的比较输卵管癌患者治疗前后及健康女性CD4~+CD25~+调节性T细胞数量与功能和免疫抑制因子表达水平。方法选取2006年1月-2016年7月徐州市妇幼保健院住院的14例输卵管癌患者为研究组,另选取14例同期健康女性为对照组。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆转化生长因子-β_1(TGF-β_1)与白细胞介素-10(IL-10)水平。采用体外增殖抑制实验计算抑制率来评价两组患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的数量与功能。结果治疗前,研究组与对照组CD4~+CD25~+调节性T细胞数量比较差异有统计学意义(t=2.19,P0.05)。研究组治疗前后CD4~+CD25~+调节性T细胞数量比较差异有统计学意义(t=2.23,P0.05)。治疗前,研究组与对照组抑制率比较差异有统计学意义(t=2.45,P0.05)。研究组治疗前后抑制率比较差异有统计学意义(t=2.53,P0.05)。治疗前,研究组与对照组血浆TGF-β_1与IL-10水平比较差异有统计学意义(t=13.52,P0.05;t=3.07,P0.05)。研究组治疗前后血浆TGF-β_1与IL-10水平比较差异有统计学意义(t=15.23,P0.05;t=4.12,P0.05)。结论输卵管癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞数量较多,功能较强,且与TGF-β_1及IL-10水平相关。治疗可降低外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞数量,使其功能减弱,并降低血浆TGF-β_1与IL-10水平。CD4~+CD25~+调节性T细胞可能通过TGF-β_1与IL-10发挥抑制作用,在调控肿瘤免疫耐受中起重要作用,对输卵管癌的免疫学防治十分重要。     

益气固本胶囊对哮喘小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量及IL-33、TNF-α表达水平的影响

目的观察不同剂量益气固本胶囊对哮喘小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量及白细胞介素-33 (IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响。方法将32只雄性SPF级Balb/c小鼠随机分成正常对照组、模型组、益气固本胶囊低剂量组和益气固本胶囊高剂量组,每组8只。除正常对照组外将其他组中小鼠应用卵白蛋白和氢氧化铝混合液腹腔致敏和激发复制哮喘模型,于第21天开始,在每次激发前1 h分别对正常对照组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃,用药各组小鼠给予药物灌胃,连续10 d。应用ELISA双抗体夹心法测定血清中IL-33、TNF-α水平,流式细胞仪检测脾淋巴细胞中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg/CD4+T比例。结果模型组小鼠血清中IL-33水平较正常对照组水平低(P0. 05),而血清中TNF-α水平较正常对照组明显增高(P0. 01)。益气固本胶囊低剂量组和高剂量组血清中的IL-33水平高于模型组(P0. 05),血清中的TNF-α水平低于模型组(P0. 05)。模型组脾淋巴细胞中的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg/CD4+T细胞比例与正常组比较明显减少,而益气固本胶囊高剂量组明显高于模型组(P0. 05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg参与哮喘的发病过程,益气固本胶囊可能通过上调CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量及降低TNF-α水平及升高IL-33水平,调节免疫失衡,减轻哮喘炎症。     

支气管哮喘患儿CD4~+CD25~+Foxp3~+IL-10~+ T淋巴细胞水平变化和意义

目的:探讨对尘螨过敏的轻度持续支气管哮喘患儿淋巴细胞增殖情况及CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平变化。方法:选择30例对尘螨过敏的轻度持续支气管哮喘患儿作为实验组,同时选择30例健康儿童作为对照组。分离所有入选者的外周血淋巴细胞,给予户尘螨浸出液刺激48 h后检测淋巴细胞增殖的刺激指数以及CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平变化。结果:支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞接受户尘螨浸出液刺激后淋巴细胞增殖的刺激指数显著高于对照组(P<0.01),支气管哮喘患儿CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:支气管哮喘患儿接受过敏原刺激后发生明显的增殖反应,支气管哮喘患儿存在CD4+CD25+Foxp3+IL-10+ T淋巴细胞功能障碍。     

内皮细胞微粒与CD8~+ CD25~+ FoxP3~+调节T细胞对子痫前期发生发展的作用探究

目的通过探讨子痫前期患者外周血内皮细胞微粒(endothelial microparticles,EMPs)与CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+调节T细胞(regulatory T cell,Treg)之间关系,阐明EMPs对Treg功能影响及其在子痫前期发病过程中的机制。方法选取2017年6月至2018年5月在上海市嘉定区妇幼保健院行产检的子痫前期孕妇60例为研究组,其中38例非重度子痫前期患者为A组,22例重度子痫前期患者为B组;同时随机选取60例健康孕妇为对照组。收集所有孕妇外周血,应用流式细胞仪检测外周血EMPs、CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+ Treg、FoxP 3 mRNA表达水平及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白介素(Interleukin,IL)-10、IL-6、IL-17血清浓度。比较各组之间以上指标差异并研究其相关性。结果与对照组比较,A、B组EMPs水平显著升高,且B组高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,A、B组CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+ Treg比例及FoxP 3 mRNA表达水平显著降低,且B组较A组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,A、B组TGF-β、IL-6、IL-17的血清浓度均升高,其中IL-6、IL-17在B组中水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β在A组与B组间差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者IL-10水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析结果显示,B组EMPs水平与CD 8~+ CD 25~+ FoxP 3~+ Treg、FoxP 3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.379、-0.427,P=0.001、0.004),与TGF-β、IL-6、IL-17呈正相关(r=0.376、0.427、0.257,P=0.024、0.005、0.037),与IL-10不相关(r=0.173,P=0.217)。结论 EMPs在子痫前期患者血浆表达水平上升,在子痫前期发病机制中起到一定的作用,为临床诊断及治疗提供新的思路。     

骨关节炎患者CD163+巨噬细胞的分布、表型及临床相关性

  目的  分析骨关节炎(osteoarthritis，OA)患者CD163+巨噬细胞在滑膜及外周血的分布特征，探讨CD163+巨噬细胞及胞内肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor，TNF)、白细胞介素-10(interleukin-10，IL-10)表达水平与OA病程、炎症水平、体重指数(body mass index，BMI)的相关性。  方法  流式细胞术检测OA患者滑膜及外周血CD163+巨噬细胞及胞内TNF-α+、IL-10+表达水平；免疫荧光观察OA患者滑膜中CD163+巨噬细胞。  结果  (1) OA患者和骨折患者外周血和滑膜中CD163+巨噬细胞表达差异均有统计学意义(均有P < 0.05)。(2)OA病程 < 10年组患者滑膜及外周血中CD163+巨噬细胞内TNF-α+表达比例明显高于OA病程≥ 10年组及骨折组(均有P < 0.05)；OA病程 < 10年组患者滑膜及外周血中IL-10+表达比例明显低于OA病程≥ 10年组及骨折组(均有P < 0.05)(3)OA病程 < 10年组患者C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)与BMI呈正相关(r=0.680，P < 0.001)，OA病程≥ 10年组患者CRP与BMI不相关(r=0.084，P=0.187)。(4)免疫荧光共聚焦显微镜显示OA患者滑膜组织血管周围有大量CD163+巨噬细胞浸润。  结论  病程不同的OA患者CD163+巨噬细胞在滑膜及外周血中的分布存在差异，并呈现差异化细胞亚型。     

系统性红斑狼疮患者自体外周血造血干细胞移植前后外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化

目的观察SLE患者自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)前后CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及Th1、Th2细胞亚群的变化。方法对4例行APBSCT的重症SLE病人分别采集不同时间段的外周血,分别用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+细胞、T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD69+、CD95+细胞)及用ELISA方法检测细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β以判断患者免疫功能的变化。结果病人症状明显改善,自身抗体转阴。IL-4、IL-10在移植后明显低于动员前水平,"Th2优势"得到纠正。移植后CD4+细胞回升缓慢,CD4+/CD8+持续降低;CD4+CD25+/CD4+在移植后降低。结论初步观察APBSCT后重症SLE病人"Th2优势"得到纠正,CD4+CD25+/CD4+降低。     

CD14~+/HLA-DR~+及纤维蛋白原在肺癌中的表达及其与预后的关系

目的观察外周血CD14~+单核细胞中人白细胞DR抗原(CD14~+/HLA-DR~+)表达水平及纤维蛋白原(Fib)浓度变化,探讨炎性标记物检测对肺癌患者预后的评估价值。方法应用流式细胞术及免疫比浊法检测CD14~+/HLA-DR~+水平及Fib浓度,并分析其与肿瘤病理特征及无病生存期的相关性。结果肺癌外周血中CD14~+/HLA-DR~+的水平较对照组明显降低(t=-3.174,P0.01),而Fib浓度较对照组明显升高(t=3.46,P0.01);肺癌患者CD14~+/HLA-DR~+水平与Fib浓度呈负相关性(r=-0.515,P0.01)。患者治疗前CD14~+/HLA-DR~+水平与吸烟史、TNM分期、淋巴结转移有关(P0.05),Fib浓度与吸烟史、TNM分期、淋巴结转移、肿块大小、脉管癌栓及病理类型等有关(P0.05)。在肺癌中,CD14~+/HLA-DR~+低表达水平组和(或)Fib高浓度组的患者无病生存期明显降低(P0.01);Cox比例风险模型多因素分析显示,TNM分期及CD14~+/HLA-DR~+水平是影响肺癌患者无病生存期的独立预后因素(P0.01)。结论CD14~+/HLA-DR~+水平及Fib浓度可作为判断肺癌恶性程度的指标;TNM分期及CD14~+/HLA-DR~+水平是影响肺癌患者无病生存期的独立预后因素。     

血必净注射液对重症脓毒症患者机体炎性反应和细胞免疫功能的影响

目的 评价血必净注射液对重症脓毒症患者机体炎性反应和细胞免疫功能的影响.方法 选择2008年9月至2009年8月ICU收治的62例确诊重症脓毒症患者,按随机数字表法分为治疗组30例和对照组32例,两组均给予脓毒症集束化治疗,治疗组加用血必净注射液100ml静脉滴注,2次/d,连续使用7d,观察两组患者治疗前后血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、C反应蛋白(CRP)以及外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+CD8+和CD14+单核细胞人类白细胞抗原(HLA)-DR表达的变化.结果 两组患者治疗前血清TNF-α、IL-6、IL-10和CRP水平以及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD14+单核细胞HLA-DR表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,治疗组治疗后血清TNF-α、IL-6、IL-10、CRP水平显著降低[(64.4±13.5) ng/L比(96.1 ±22.1) ng/L,(153.8 ±23.8) ng/L比(180.1 ±21.7) ng/L,(73.8±13.8) ng/L比(101.1±11.7)ng/L,(53.7±18.8) mg/L比(91.3±32.8) mg/L,P＜ 0.05],而外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+升高(0.311±0.021比0.424±0.035,0.201±0.017比0.238±0.038,1.78±0.21比1.56±0.18,P＜ 0.05 ),CD14+单核细胞HIA-DR表达上调[(38.4±11.5)％比(18.1±12.1)％,P＜0.05].结论 血必净注射液可降低重症脓毒症患者机体炎性反应,纠正细胞免疫功能紊乱,有助于改善患者病情.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+T细胞亚群变化及意义

[目的]探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化及意义。[方法]入选病例为我院从2006年6月到2008年12月共59例原发性胆汁性肝硬化患者(活动期36例、稳定期23例),同时以30例健康体检者为对照,借助双色荧光标记技术对外周血CD4+CD28-T细胞和CD4+CD25+占CD4+T细胞比例进行流式细胞术测定。[结果]活动期PBC患者外周血CD4+CD25+细胞比例(1.66±0.83)%低于稳定期(2.53±1.06)%和正常组(4.06±2.36)%(P﹤0.05);而CD4+CD28-细胞比例(4.15±1.89)%则高于稳定组(3.66±0.7)%和正常组(1.54±0.99)%(P﹤0.05)。[结论]活动期PBC患者外周血CD4+CD25+T细胞比例减少而CD4+CD28-T细胞比例升高,CD4+CD25+比例降低可能使外周免疫耐受失去平衡,参与了PBC疾病的发生发展。     

重症感染患者外周血CD14+单核细胞HLA-DR抗原的表达意义

目的 探讨重症感染患者外周血CD14+单核细胞表面HLA-DR抗原的表达.方法 用流式细胞术(FCM)对40名健康体检者及59例重症感染患者外周血CD14+单核细胞表面HLA-DR的表达进行检测并比较.结果 重症感染患者外周血CD14+单核细胞表面HLA-DR阳性百分率较正常对照组显著降低,经统计学分析,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 重症感染患者外周血CD14+单核细胞表面HLA-DR表达量显著降低,提示患者处于免疫抑制状态.检测外周血CD14+单核细胞表面HLA-DR的表达量,对于临床上的药物治疗和免疫调理都有着重大的指导意义.     

活动性结核患者结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征

目的探讨活动性结核病患者外周血结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征。方法选取2015年11月-2017年3月医院收治的活动性结核病患者、肺部感染/肿瘤患者及同期来健康体检的正常人50例作为对照组。采用γ干扰素释放试验(IGRAS)和流式细胞技术检测CD4+辅助性T细胞1(Th1细胞)和CD8+细胞毒性T细胞(CTL)分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)的分泌情况和分布特征。结果 ESAT-6刺激单个核细胞后,每106个细胞的SFU为84.4±18.1;而CFP-10刺激为54.2±10.8。50例活动性结核病样本中,36例(72.0%)对ESAT-6和CFP-10有反应,14例(28.0%)仅对1种肽有反应。CD4+Th1细胞和CD8+CTL分泌的TNF-α、IFN-γ和IL-2三种细胞因子特征类似。活动性结核病组CD4+Th1细胞分泌TNF-α低于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05),而IFN-γ、TNF-α+IL-2、TNF-α+IFN-γ+IL-2均高于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05)。活动性结核病组CD8+CTL分泌的TNF-α低于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05)。IFN-γ、IL-2、TNF-α+IL-2、TNF-α+IFN-γ+IL-2均高于肺部感染/肿瘤组和健康对照组(P<0.05)。结论活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞(CD4+Th1和CD8+CTL)分泌的IFN-γ+TNF-α+IL-2对于鉴别活动性结核病、肺部感染/肿瘤有一定价值。     

IL-4诱导CD8~+T细胞分化为IL-10分泌性CD8~+T细胞

目的体外诱导CD8+T细胞,以期诱导分化出一种IL-10分泌性CD8+调节性T细胞,为用细胞疗法进行自身免疫性疾病的预防及治疗奠定基础。方法以tiger转基因小鼠(以其GFP+细胞代表IL-10+细胞)为实验动物,流式细胞仪分选幼稚CD8+T细胞,然后在细胞培养体系中加入ConA或抗CD3以及IL-2,IL-4加或不加,培养48 h对细胞进行诱导分化,继而,细胞继续扩大培养,至96 h时,加入佛波酯和离子霉素对细胞进行再刺激6 h,流式检测CD8+T细胞GFP的产生情况。同时,为验证IL-4对IL-10分泌性CD8+T细胞的诱导分化作用,在培养体系中加入抗IL-4,流式检测CD8+T细胞IL-10的表达情况。结果经流式细胞仪检测幼稚CD8+T在未经诱导分化时不产生IL-10;而在ConA或抗CD3的刺激及IL-4的诱导下,幼稚CD8+T可分化为IL-10分泌性细胞,且其比例分别占CD8+T细胞的31.16%(ConA组)和32.20%(抗CD3组);培养体系中加入抗IL-4后,IL-10分泌性CD8+T细胞的分化被抑制,其比例降为11.2%。结论 IL-10分泌性CD8+T细胞可由CD8+T诱导分化而来,IL-4是诱导IL-10产生的关键细胞因子。     

CD4+CD25+调节性T细胞与子宫内膜癌的相关性及其在免疫逃逸中的作用机制研究

目的 探讨子宫内膜癌患者外周血及癌组织CD4+ CD25+ Treg细胞水平与子宫内膜癌发生发展的关系,及其在肿瘤免疫逃逸中的作用机制.方法 26例子宫内膜癌患者外周血经Ficoll梯度离心分离单个核细胞,同时取手术切除的新鲜肿瘤组织进行肿瘤浸润性淋巴细胞和非肿瘤浸润性淋巴细胞制备.应用流式细胞仪分析CD4+ CD25+ Treg细胞的分布比例,并与25例年龄相匹配的健康对照者的外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例为对照,并用ELISA方法检测同标本血中Treg细胞分泌的抑制性细胞因子IL-10和转化生长因子(TGF-β)水平及趋化因子受体CCR4水平.结果 子宫内膜癌患者CD4+CD25+ Treg细胞比例明显高于癌旁组织及对照组(P ＜0.05);IL-10、TGF-β水平明显高于对照组,提示Treg通过分泌IL-10和TGF-β等抑制性细胞因子及细胞接触依赖的抑制途径,抑制免疫效应细胞,进一步促进肿瘤细胞的免疫逃逸.结论 子宫内膜癌患者CD4+ CD25+ Treg细胞明显上调,且在肿瘤组织局部表现更为明显,这可能参与了肿瘤的免疫逃逸,促进肿瘤生长和演进,机制可能与IL-10、TGF-β及CCR4表达上调有关.