活化小胶质细胞移植后损伤脊髓内TGF-β1 mRNA、蛋白的表达及意义

目的 探讨活化小胶质细胞移植后脊髓组织内TGF-β1mRNA和蛋白表达及意义.方法 应用改良Allen法制造Wistar大鼠脊髓损伤模型,将活化小胶质细胞移植到脊髓损伤模型,测定脊髓组织内TGF-β1mRNA和蛋白表达.结果 各时相点对照组TGF-β1mRNA及其蛋白表达量明显低于移植组(P<0.01).结论 活化小胶质细胞移植后,可以上调损伤脊髓表达TGF-β1;脊髓内TGF-β1蛋白的高表达可能对脊髓损伤修复起促进作用;活化的小胶质细胞可能是TGF-β1的主要来源.     

胚胎脊髓移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 研究大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓（ＦＳＣ）移植是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和伤后大鼠后肢功能的恢复情况。方法 将６０只大鼠分为脊髓半脊髓半切洞损伤＿胚胎脊髓移植组（Ａ组）和单纯脊髓半切洞损伤组（Ｂ组）。伤后１,３,,７,１４,２８天,应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,应用原位杂我和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,并采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果 大鼠脊髓     

细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）的治疗一直是医学界的难题。近年来,随着在细胞和分子水平上对SCI的研究不断深入,应用细胞移植治疗SCI取得了很大进展,成为众多的研究方法中最受瞩目的方法之一。本文将目前可用于此研究的细胞予以综述。     

神经干细胞移植促进大鼠损伤脊髓的修复

笔者建立神经千细胞体外培养体系，经BrdU标记后植入大鼠纽约大学(NYL)脊髓损伤模型，通过BBB运动功能评分法：评价人鼠的运动功能恢复情况，并进行免疫组化鉴定，光学显做镜观察移植神经干细胞的存活、迂移及损伤部位脊髓的修复情况，探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的可行性     

大鼠脊髓星形胶质细胞损伤后的cDNA文库构建及其基因表达变化

目的比较星形胶质细胞损伤前后的基因表达变化。方法提取新生大鼠脊髓星形胶质细胞体外损伤后2d（损伤组）及未损伤细胞（对照组）的总RNA，采用5’端RNA转录开关机制技术和抑制性消减杂交方法，构建大鼠脊髓星形胶质细胞损伤前后差异表达基因的消减cDNA文库，并将差异性表达片段进行序列分析及基因库中的同源性检索，获得大鼠脊髓星形胶质细胞损伤2d后细胞基因的整体变化趋势。结果脊髓星形胶质细胞损伤后2d，热休克蛋白70、钙调素Ⅱ等基因表达上调；同时β-肌动蛋白等基因表达下调。结论在大鼠脊髓星形胶质细胞机械性划痕损伤后的星形胶质细胞反应中，既有热休克蛋白等基因表达上调，也有β-肌动蛋白等基因表达下调。     

少突胶质前体细胞移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响

目的 探讨少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响.方法 采用Allen法制作大鼠T10脊髓损伤模型,亚急性期OPCs移植治疗.通过HE染色、免疫组化染色、髓鞘染色及透射电镜观察等方法,研究OPCs移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响.结果 移植术后8周时大鼠损伤脊髓内检测到移植细胞分布,HE染色显示OPCs移植组大鼠脊髓组织结构较对照组改善,勒克司坚牢蓝(LFB)髓鞘染色表明OPCs移植组大鼠脊髓内髓鞘含量(7 802.42±1 085.58)明显高于对照组(5 055.98±916.74)(P＜0.01),OPCs移植组大鼠脊髓组织内髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平(8 544.44±812.78)较对照组(5 243.83±808.27)显著增高(P＜0.01),透射电镜示OPCs移植组大鼠脊髓组织髓鞘化超微结构改善也较对照组明显.结论 OPCs移植治疗有助于改善大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化情况.     

少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响

目的 研究少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响.方法 采用Allen's打击法制作大鼠脊髓损伤(T10)模型.96只SD大鼠随机分为移植组、对照组、单纯损伤组及假手术组,每组24只.脊髓损伤后第7天时移植组进行少突胶质前体细胞移植治疗,对照组给予等量生理盐水,单纯损伤组未予任何治疗.通过运动功能评分及运动诱发电位、体感诱发电位检测评价少突胶质前体细胞移植对神经功能恢复的影响.结果 脊髓损伤后大鼠脊神经功能明显障碍,运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果明显低于假手术组.随伤后时间延长,脊髓损伤大鼠神经功能均有不同程度的恢复,但运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果显示,少突胶质前体细胞移植治疗组大鼠的神经功能恢复情况明显优于对照组.结论 少突胶质前体细胞移植治疗能够促进大鼠脊髓损伤神经功能的恢复.     

脊髓损伤后星型胶质细胞活化与线粒体融合蛋白2表达变化

目的探索脊髓损伤后星型胶质细胞(AS)活化与线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达规律及其意义,为脊髓损伤修复寻求合适的干预靶点及时机。方法建立成年SD大鼠脊髓损伤(SCI)模型,运用免疫荧光和Western Blotting方法,检测Mfn2及AS活化相关蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化。清洁级成年雄性SD大鼠48只,随机分为两组:假手术组(sham组,n=24),脊髓损伤组(SCI组,n=24),SCI组采用Allen’s法建立大鼠胸段脊髓损伤模型,sham组只行椎板切除术,分别于术后第1天、第3天、第7天、第14天4个时间点分批处死大鼠,取大鼠胸段脊髓组织,行组织免疫荧光染色观察脊髓形态变化,Western Blotting检测各个时间点Mfn2与GFAP的表达变化。结果脊髓损伤后,大鼠胸段脊髓灰质两背角之间会形成结构紊乱、边界不清的损伤灶;Western Blotting及免疫荧光结果显示脊髓损伤后,大鼠胸段脊髓Mfn2蛋白表达从第1天开始下降,与sham组相比,脊髓损伤组胸段脊髓Mfn2表达整体呈下降趋势,术后第3天开始明显下降,差异有统计学意义(P0.05);而GFAP表达随时间延长则逐渐增加,术后第3天开始差异有统计学意义(P0.05)。结论脊髓损伤后,AS的特异性标志物GFAP表达整体呈上升趋势,提示此时AS出现大量增殖;与此相反,Mfn2(增殖抑制基因)表达产物则明显减少。     

少突胶质前体细胞移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响

Objective To investigate the effects of transplantation of oligodendrocyte precursor cells (OPCs) on axonal myelination after spinal cord injury in a rat model. Methods A rat model of spinal cord injury at the tenth thoracic vertebral level (T10) was produced by Allen weight-drop impact method. OPCs implantation was performed at the subacute stage of spinal cord injury. Effects of OPCs transplantation on axonal myelination after spinal cord injury were evaluated by HE staining, immunohistochemistry, myelin staining and transmission electron microscopy. Results The implanted cells were still observed in lesioned segments of spinal cord eight weeks after transplantation. The results of HE staining clearly showed better structure of spinal cord in OPCs-transplanted group than that of control group.Myelin staining also demonstrated that the amount of myelin in white matter of lesioned cord in the OPCs-transplanted group (7 802.42 ± 1085.58) was higher than that of the control group (5 055.98 ± 916.74)(P ＜0.01 ). Expression of myelin basic protein (MBP) was significantly increased in the OPCs-trans-planted group (8 544.44 ±812.78) as compared with that of the control group (5 243.83 ±808.27)(P＜0.01). Moreover, transmission electron microscopy further confirmed the improvement of micro-structure of myelination in OPCs-treated rats. Conclusion OPCs transplantation can improve axonal myelination in rat with spinal cord injury.     

大鼠脊髓星形胶质细胞体外划痕损伤模型的建立

星形胶质细胞(astrocytes，Ast)培养和损伤模型是体外研究中枢神经系统损伤修复的基础和热点之一。长期以来，人们对大脑皮层及其他部位的Ast在中枢神经系统损伤修复中的功能做了较多的研究，而对脊髓的Ast有关研究较少。笔者采用机械划痕的方法，制备有效的脊髓Ast体外损伤模型，以便对脊髓Ast在损伤后的基因表达变化作进一步全面分析。     

骨髓间充质干细胞移植治疗成鼠脊髓损伤的研究

目的:研究骨髓间充质干细胞移植治疗成鼠脊髓损伤的可行性。方法:选取成年雌性SD大鼠32只,2只用以提取骨髓间充质干细胞,其余大鼠随机分为细胞移植组、PBS缓冲液组及空白对照组。骨髓间充质干细胞分离传代培养后Hoechst33342标记,损伤1周后采取局部注射移植于大鼠脊髓损伤区,移植6周后用免疫荧光法检测细胞的存活与分化。移植后1~6周对各组动物进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分。结果:细胞移植组BBB评分提高显著,与其他两组差异有统计学意义;免疫荧光显示,移植细胞在体内大量存活,多数细胞神经元特异性标记物NSE、NF-200表达呈阳性,少数细胞GFAP表达呈阳性。结论:局部移植的骨髓间充质干细胞可以转化为神经元样细胞,并有助于大鼠脊髓损伤后的功能恢复。     

大鼠脊髓损伤后死亡原因分析

目的 探讨大鼠Allen脊髓损伤模型动物死亡的原因.方法 选用120只Wistar成年大鼠,采用Allen打击模型(25 g·cm),在T10段造成急性脊髓损伤,对损伤后死亡动物进行统计和解剖.结果 死亡25例,死亡率为21%,其中5只死于苏醒前,解剖未发现异常;12只死于损伤后3 d内,3只死于损伤后3～7 d,解剖发现肺部均有出血、水肿.部分动物有膀胱积血;3只死于8～14 d,1只死于损伤后15～21 d,解剖发现分别有肺部感染和泌尿系感染.3周后无死亡.结论大鼠Allen脊髓损伤模型动物早期死亡的主要原因是肺淤血和肺水肿,晚期死亡的主要原因是肺部和泌尿系感染.

Abstract：

Objective To investigate the causes for death in rats after spinal cord injury.Methods A total of 120 adult Wister rats were selected for the study. The animal model with acute spinal injury at T10 was established by using Allen' s combat (25 g · cm). The dissection analysis was performed in death rats. Results Of all, 25 patients died, with mortality rate of 21%. Of death rats, five rats were died before awakening, with no abnormal anatomy; 12 rats died within three days after injury and three died of injuries 3-7days injury. Anatomy found pulmonary bleeding and edema, even hematocele bladder in some rats. There were three rats died within 1-2 weeks, one died of injury only after 2-3 weeks, with lung infection and urinary tract infection. There was no death after three weeks. Conclusions The early causes for death of rats with spinal cord injury is mainly due to lung congestion and pulmonary edema, whereas the leading cause of late death of rats is pulmonary and urinary tract infection.     

雌激素影响急性大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的相关性实验研究

目的在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,观察不同时间点雌激素对脊髓胶质细胞,神经元凋亡的影响,以期为临床急性脊髓损伤的治疗提供理论依据。方法健康成年大鼠72只,随机分为两组,其中单纯损伤组（单纯打击损伤）36只,雌激素组（手术加雌激素）36只。脊髓损伤动物模型的制备：用自制Allen打击器25gcm致伤力撞击脊髓,制成脊髓损伤动物模型。雌激素组每日肌注雌激素（100μg／kg）直至处死,单纯损伤组仍每日肌注生理盐水0．5ml直至处死。组织切片的制备：脊髓损伤后1d、3d、5d、8d、14d、21d共6个时间段分批处死动物。4％多聚甲醛心肌灌注固定24h,切取每只大鼠T5～T13节段脊髓组织,常规制成切片,给于Bcl－2检测,TUNEL原位末端标记,检测大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的情况。脊髓损伤后2周给予Gale评分及斜板维持试验。结果Bcl－2蛋白检测：在脊髓损伤后的第1天,脊髓组织即开始较高表达Bel－2蛋白。单纯损伤组Bcl－2高峰发生在损伤后3天,而雌激素组伤后8天达到高峰,此时Bcl－2蛋白不仅表达在神经细胞中,更多的在胶质细胞中大量表达,且此状态一直维持到伤后14天才开始下降,伤后21天仅少量表达（P〈0．05）。TUNEL原位标记检测：单纯损伤组24小时已出现不少阳性细胞,以胶质细胞为主．3～8天达到高峰,此后逐渐回落,但21天时仍有阳性细胞,应用雌激素治疗后,凋亡细胞明显减少（P〈0．05）。脊髓损伤后2周Gale评分及斜板维持率雌激素组优于单纯损伤组（P〈0．01）。结论雌激素在脊髓损伤中通过改善微循环,促进Bcl－2蛋白的表达,清除氧自由基,抗氧化作用能够抑制脊髓损伤早期神经细胞和胶质细胞的凋亡,从而减轻脊髓继发性损伤．促进脊髓神经功能的恢复。所以脊髓损伤后早期应用雌激素配合其它药物阻止神经细胞和胶质细胞的凋亡可能有助于减轻脊髓损伤的损害程度,促进脊髓神经功能的恢复,为SCI的治疗提供一个新的途径。     

大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶羧基末端PDZ结合配体mRNA的表达

目的 探讨大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶（nNOS）羧基末端PDZ结合配体（carboxy-terminal PDZ ligand of nNOS，CAPON）mRNA的表达变化及其意义。方法采用脊髓横断模型，用实时荧光定量聚合酶链式反应（realtime-PCR）及原位杂交与免疫荧光技术结合的方法检测正常成年大鼠脊髓内以及脊髓损伤后不同时间点损伤段脊髓组织中CAPONmRNA的表达，采用cresylviolet染色计数脊髓组织内存活神经元。结果 CAPON mRNA在对照组大鼠脊髓内呈低水平表达于前角神经元，脊髓损伤后表达于灰质各部分神经元及白质。在损伤早期2h表达开始升高，于8h达到高峰，随后1d有下降趋势，3d时稍有上升，损伤后14d恢复至正常水平。而nNOSmRNA在损伤后2h迅速上调，于8h达高峰，随即下降至正常水平。在此过程中，有神经元凋亡现象的发生。损伤后2h存活神经元的数量即减少，随后稍有增多，但仍少于对照组，3d后存活神经元再度减少，持续至14d。结论 大鼠脊髓损伤后CAPONmRNA表达发生变化，提示CAPON可能通过调节nNOS的活性及亚细胞定位而影响神经元的凋亡，在脊髓损伤病理过程中发挥积极的调节作用。     

辐射对大鼠脊髓损伤的研究进展

放射治疗可以诱发脊髓损伤,如何降低脊髓损伤的发生率而又提高肿瘤的控制率是临床肿瘤放疗非常棘手的难题。射线诱发损伤具有3个时相的反应,不同损伤阶段具有不同的生物化学反应,探讨各种生物化学反应之间是否具有相关关系,如何通过剂量率的变化而改变损伤作用机制,将对临床治疗具有很大的指导意义。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后炎症因子的影响

目的 观察高压氧对大鼠脊髓损伤后外周血中炎症细胞因子及其运动功能恢复的影响。方法采用改良Allen’s法制作大鼠脊髓损伤模型。75只SD大鼠,随机分为三组：假手术组（n=15）,对照组（n=30）和高压氧组（n=30）。分别于治疗后4h、12h、1d、3d及5d时间点,利用BBB评分法对大鼠进行运动功能评分,同时应用放射免疫检测技术测定各时间点大鼠外周血中TNF-α、IL-6、IL-8及IL-10的含量。结果对照组和高压氧组的各炎性细胞因子水平,较假手术组均有不同程度升高（P〈0．05）;高压氧组BBB评分较对照组升高（P＜0．05）;高压氧组外周血中上述炎性细胞因子在各时间点均较对照组降低（P＜0．01）。结论高压氧可抑制外周血中炎性细胞活性,降低各炎性细胞因子水平,促进损伤恢复,具有保护受损脊髓组织的作用。     

脊髓损伤后下丘脑部分核团c-fos蛋白表达的实验研究

目的通过观察脊髓损伤后中枢下丘脑室旁核、视上核c-fos样蛋白免疫反应了解中枢与脊髓损伤之间的关系.方法成年大鼠56只,体重(270±20)g,分为脊髓损伤组(20只)、假手术组(20只)、正常对照组(16只).损伤模型为双后肢不全瘫.伤后1,6,12,24h对下丘脑室旁核、视上核组织进行冠状面切片,运用c-fos漂片免疫组化方式对阳性细胞计数.结果脊髓损伤后不同时间组的下丘脑室旁核、视上核均有明显的c-fos阳性表达.伤后1,6,12,24 h室旁核c-fos阳性表达细胞数与假手术组、正常对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);伤后12,24h视上核c-fos阳性表达细胞与假手术组、正常对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论脊髓损伤影响正常神经信号在大脑中枢传导,下丘脑室旁核、视上核可产生明显反应.     

多种神经组织修复成鼠脊髓损伤的实验研究

目的 探讨 不同神经组织移植修复成鼠急性脊髓损伤（SCI）的能力。方法 成鼠脊髓损伤后，分别移植游离正中神经（EPN组）、带血管蒂正中神经（VPN组）、孕、14天胚胎脊髓（FSC组）、游离正中神经加胚胎脊髓（P＋F组）、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓（V＋F组）。术后8周行神经解剖及电生理检查。结果 V＋F组再生轴突和存活雪旺氏细胞数目、胚胎脊髓体积增长速度和神经元密度显著高于对照组（P＜0．01），细胞分化较好，突触较成熟。体感诱发电位（SEP）的P1、N1波潜伏期显著缩短（P＜0．01）。结论 带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，在解剖和电生理上均优于其他组织，对FSC的生长发育和损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

髓鞘碱性蛋白微基因修饰雪旺细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白-43表达的影响

目的　研究pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞 (Schwanncell,SC)对大鼠脊髓损伤 (spi nalcordinjury,SCI)后神经生长相关蛋白 - 4 3 (growthassociatedprotein - 4 3 ,GAP - 4 3 )表达的影响。　方法　采用 12 0只大鼠脊髓半横切损伤模型 ,随机分为三组 :pSVPoMcat微基因修饰SC移植组 (A组 )、单纯SC移植组 (B组 )、损伤对照组 (C组 )。应用免疫组织化学方法动态观察SCI后GAP - 4 3的表达 ,同时采用联合行为记分 (CBS)观察大鼠神经功能恢复情况。　结果　SCI损伤后 1周 ,A、B、C三组间GAP - 4 3表达差异无显著性意义 ;SCI后 2 ,4 ,8周 ,三组间表达顺序为A >B >C ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;其间A组在 2周时达到最高峰 ,此后逐渐下降 ,12周时A、B、C三组间差异无显著性意义。A组大鼠神经功能恢复最好。　结论　pSVPoMcat微基因修饰SC移植有促进SCI后GAP - 4 3表达和大鼠神经功能恢复的作用