光动力疗法对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外杀伤作用的实验观察

目的:探讨光动力疗法(PDT)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的杀伤效应.方法:以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,以血卟啉衍生物(HpD)为光敏剂,以630 nm波长激光为光源,采用连续照射的方式,将不同浓度HpD处理的MDA-MB-231细胞,照射不同剂量的激光后,用MTT法测定其OD492值,并绘制MDA-MB-231 PDT后的生长曲线,用光镜、电镜观察PDT后不同时间细胞的形态变化.结果:HpD浓度为0.5 mg/L时基本无杀伤作用;在相同的激光照射剂量下,2 mg/L HpD即有较好的杀伤作用,再增大HpD浓度对细胞的杀伤效应增加不明显;在相同的HpD浓度下,激光剂量为5 J/cm2时OD492值降低达平台.光镜、电镜下细胞形态也发生了明显的变化.结论:PDT对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231有明确的杀伤效应,HpD浓度2 mg/L、激光剂量5 J/cm2是本实验PDT的最佳作用参数.     

应用激光扫描散聚焦显微技术观察PDT导致癌细胞内钙水平的变化

目的 肿瘤光动力治疗（ＰＤＴ）是现代癌症治疗中一种新的治疗法,为了更好地认识光动力诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法 用Ｆｌｕｏ－３ＡＭ荧光探针负载培养的人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化。结果 激光单独照射前后ＧＬＣ－８２细胞内Ｃａ＾２＋的浓度变化不大;在ＰＤＴ作用下,激光照射前ＧＬＣ－８２细胞内ＣＡ＾２＋的浓度变化明显。结论 本方法灵敏、简单、快速,能     

光敏剂癌光啉对小鼠骨肉瘤LM-8细胞体外光动力作用的实验研究

目的 观察光敏剂癌光啉(PSD-007)对小鼠骨肉瘤LM-8细胞的体外光动力效应.方法 将不同浓度的光敏剂PSD-007(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μg/mL)与小鼠骨肉瘤细胞株LM-8共同孵育4 h,再以630 nm波长的激光为光源,采用不同激光能量照射LM-8细胞(激光波长为630 nm,光照能量分别为1.5、3.0、6.0、9.0 J/cm2),与空白对照组(不加光敏剂且不接受激光照射)、暗毒性组(加光敏剂但不接受激光照射)、激光组(不加光敏剂但接受激光照射)比较,24 h后采用溴化四氮唑蓝(MTT)法测定其光密度值(D540)值,计算抑制率,并于光学显微镜下观察光动力疗法(PDT)后24 h细胞形态的变化.结果 单独照光或光敏剂孵育均无杀伤效应,光敏剂浓度及激光能量是影响杀伤效应的重要因素.PSD-007浓度为4.0μg/mL、光照能量为6.0 J/cm2时,对LM-8细胞有明显的光动力杀伤效果,抑制率为73.8%.光学显微镜下可见细胞形态发生明显的变化,呈坏死或凋亡样改变.结论 在体外,PSD-007对小鼠骨肉瘤LM-8细胞具有明显的光动力杀伤作用.PDT是很有前景的治疗骨肉瘤的新方法.     

光动力疗法对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的体外实验研究

目的观察光动力疗法(PDT)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的杀伤效果,选择最佳作用参数(光敏剂浓度和光照强度);探讨PDT的作用机制,为PDT在乳腺癌的动物荷瘤模型和临床运用提供理论依据。方法实验分为空白对照组、单纯激光组、单纯光敏剂组和实验组(照光 光敏剂)。对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行HpD-PDT实验,应用MTT法检测其光密度值OD492,观察不同实验条件下对人乳腺癌细胞在体外的抑制作用,并绘制其抑制曲线和观察其形态学变化。结果HpD-PDT组(HpD2μg/ml,5J/cm2)于治疗后24h明显抑制体外培养的人乳腺癌细胞,而空白对照组、单纯使用光敏剂组(HpD2μg/ml)及单纯激光照射组(5J/cm2)对细胞增殖均无明显影响。HpD-PDT后12h,透射电镜可见:实验组细胞内出现大量的核碎裂、核融解、核消失等坏死征象。结论HpD-PDT可明显抑制体外培养的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长,光动力疗法为乳腺癌新的治疗手段提供了理论及实验依据。     

不同波长的光源对血卟啉衍生物(HpD)产生光氧化作用的影响(论著摘要)

近年来,应用血卟啉(HpD)加激光的光动力疗法(PDT)治疗肿瘤,在临床上取得较大的进展.由于激光的穿透组织能力有限,因此,试图在PDT治疗中以穿透力强的X线代替激光照射瘤体以提高PDT疗效.PDT是基于HpD的光敏作用,为此本实验以X线、紫外光、黑光及激光四种不同波长的光源照射在加有HpD的肝癌细胞,观察对肝癌细胞膜所产生的光氧化作用来比较四种光源对HpD所产生的光敏效应.     

光敏剂BCPD-17和PSD007对小鼠骨肉瘤的光动力作用

目的：观察630及 670 nm激光激发不同剂量的光敏剂BCPD-17和PSD-007对小鼠皮下移植骨肉瘤的光动力效应,并对两者进行比较,为筛选光动力疗法（PDT）治疗骨肉瘤的新药提供实验数据。方法：C3H小鼠60只,左侧腰骶部接种LM-8小鼠骨肉瘤细胞,待皮下瘤块直径约6～8　mm时,随机分成空白对照组及PDT治疗组。治疗组分为PSD-007组(5 mg•kg^-1,用波长630 nm激光照射)和BCPD-17组;BCPD-17组分设5和10 mg•kg-¹ 2个剂量组,分别用波长630 nm或670 nm激光照射。小鼠尾静脉注射光敏剂后6 h垂直瘤区行激光照射,功率密度200 mW•cm-2、能量密度240　J•cm^-2、照射时间20　min、光斑1.0　cm。照射7　d后测量肿瘤大小,取瘤体称重计算肿瘤抑制率,并行病理检查。结果：病理组织学观察,对照组小鼠骨肉瘤细胞大而深染,核异型明显;PDT治疗组肿瘤细胞出现坏死,细胞内空泡变性,核固缩,BCPD-17组更明显。PDT治疗组小鼠骨肉瘤的肿瘤质量及体积均明显减少,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。在670nm激光照射后,BCPD-17各组的肿瘤抑制率均高于PSD-007组,组间比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：光敏剂BCPD-17和PSD-007对小鼠LM-8骨肉瘤细胞有明确的抑制作用,光敏剂BCPD-17光动力效果更显著。     

内镜下光动力治疗早期喉癌的探讨

目的探讨光动力治疗（PDT）对早期喉癌的治疗效果与喉功能的保护作用。方法从2001年起，我科采用副作用小、正常组织损伤少的PDT630nm对早期喉癌（Ⅰ—Ⅱ）进行光动力治疗，并追踪观察其治疗效果最长时间近4年。本组收集早期喉癌（Ⅰ-Ⅱ）16例，均使用进口半导俸PDT激光机与进口光敏剂PHOTOSAN。于静注PHOTOSAN2mg/kg 48h后，用PDT630激光照射300J／cm，第2天用PDT630激光300J／cm重复照射一次。对于团块增生型，肿瘤局部突起较明显者，先用大功率半导体980nm激光作局部切除，然后再按上述剂量照射PDT630激光。结果所有病人均能耐爱治疗操作，无一发生术中患外（1例术后喉头水肿，需气管切开通气），其中9例一次光动力治疗治愈，3例3～6月复发，经再次光动力治疗治愈，4例因肿瘤残留而改用手术治疗。本组病人随访时间最常近4年，最短者半年，经光动力治愈的患者喉功能保存完好，具有正常人的生活质量。结论光动力治疗副作用小、正常组织损伤少的特．点，经光动力治愈的惠者喉功能保存完好，生活质量高，特别适用于高龄或有手术禁忌证的患者，可以作为早期喉癌的首选方法之一，即使治疗失败，中转手术治疗，也不影响治愈率。     

氨基酮戊酸光动力作用诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的实验研究

目的:探讨光动力疗法(PDT)对体外培养的人宫颈癌细胞系Hela的杀伤效应。方法:将经不同浓度5-氨基酮戊酸(ALA)处理的Hela细胞照射不同剂量的激光,用MTT法测定OD492值,细胞染色观察形态学改变,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率。结果:ALA10-1mM和激光剂量20J/cm2是PDT对Hela细胞杀伤作用的最佳参数。流式细胞术显示PDT组发生了G0-G1期生长停顿,凋亡率为(22.6±4.56)%,显著高于对照组。结论:ALA-PDT通过诱导凋亡对体外培养的Hela细胞产生杀伤作用。     

医学激光技术新进展

英国伦敦消息:在英国医学激光学会第一届年会上,光放射疗法是热门的讨论题。布法罗的罗斯韦尔·派克纪念研究所的Tom Dougherty,详细阐述了他最近进行的光动力疗法(PDT)新技术。 PDT是一种杀死癌细胞的方法,它通过激光照射主要保留在肿瘤的物质,经光化学性产生的单线氧根起作用。 Dougherty说,最初应用的血卟啉衍生物(HPD)现在已制成提纯的形式,从而进一步改进了此技术。虽然PDT目前被保留为治疗用其它治疗方法失败的肿瘤病人,但对许多肿瘤也可获得明     

HMME-PDT对CNE-2细胞增殖的抑制作用

目的探讨血卟啉单甲醚介导的光动力学疗法(HMME-PDT)对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用。方法以血卟啉单甲醚为光敏剂,532nm激光为激发光源的光动力学疗法作用于鼻咽癌CNE-2细胞。细胞用5、10、20!g/ml浓度的光敏剂孵育2h后,用0.6、1.2、2.4、4.8、9.6J/cm2剂量的激光照射;激光功率密度为10mW/cm2。MTT法检测在HMME和激光两种变量下PDT对细胞活性的抑制作用;光镜观察PDT作用后细胞形态的变化;免疫组化法检测PCNA的表达。结果在HMME剂量为5!g/ml、10!g/ml及20!g/ml时,细胞的抑制率随着激光剂量从0.6J/cm2增加至9.6J/cm2而逐渐增加;并且和HMME及激光剂量密切相关;光镜观察结果表明PDT组与对照组相比细胞密度明显减少,细胞核浓聚、碎裂。免疫组化结果显示PDT作用后PCNA表达减少。结论HMME-PDT对CNE-2细胞的增殖有明显的抑制作用。     

人膀胱癌光动力学治疗的电镜观察

电镜观察15例光动力学治疗前后膀胱移行细胞癌的活检材料,证实此治疗对膀胱癌有显著作用。肿瘤组织内的毛细血管对光动力学作用最为敏感,照光20min后即出现明显损伤,24h后,毛细血管几乎完全坏死崩解。癌细胞的破坏出现较晚,迟于毛细血管。治疗4d后肿瘤组织水肿、出血,几全部坏死。治疗21～80d后,瘤床仍水肿并有出血及坏死物质复盖。表明血管的结构损伤与功能障碍在肿瘤光动力学治疗机理中起主要作用。     

国产新型光敏剂CDHS801光动力学杀伤膀胱癌机理的实验研究

目的研究光敏剂CDHSS01光动力学治疗膀胱癌机理。方法将膀胱癌T24细胞与CDHSS01共同孵育,采用激光共聚焦显微镜为成像工具,应用线粒体荧光探针MitoTracker RED CMXRose和MitoTracker Green FM进行CDHS801的亚细胞定位分析。MTT法检测光动力学治疗后存活率,激光共聚焦显微镜丫啶橙／溴化乙锭染色观察T24染色情况,电镜检测细胞超微结构的变化以及流式细胞仪判断细胞凋亡情况。结果激光共聚焦显微镜下,CDHSS01和线粒体荧光探针发出的荧光都位于细胞浆内,在核周呈点状散在分布。PDT后实验组细胞存活率明显降低,细胞膜完整性丧失被染成黄色,流式细胞仪PI染色在sub-G1期出现了凋亡峰,透射电镜下细胞染色质于核膜下浓聚边集形成新月体,细胞发生凋亡,对照组则没有这些表现。结论CDHSS01经膀胱癌T24细胞摄取后,分布在细胞浆内,主要在线粒体内,激光照射后膀胱癌细胞发生了凋亡。     

光动力疗法治疗恶性肿瘤光剂量的实验研究

目的 探索光动力疗法对恶性肿瘤杀伤作用的最低安全有效光剂量。方法 应用光动力疗法对接种Louis肺癌的60只昆明小鼠作肿瘤杀伤的对比实验研究。结果 通过组织学和抑瘤检测证实：光动力疗法能选择性杀伤癌细胞，在治疗后24小时内就可以见到癌细胞出现空泡变性，核固缩、破裂、溶解、坏死。随着时间推移坏死更加明显。结论 证实这种光动力疗法对正常细胞和组织没有损伤，激光应垂直连续照射，最低安全有效激光剂量为36J／cm^2。     

基因治疗与化疗联合应用对人肺腺癌GLC-82细胞作用的实验研究

目的 探讨基因治疗和化疗联合应用提高肿瘤疗效的可能性和初步机制。方法 将重组腺病毒载体（Ａｄ）介导的ｐ５３基因（Ａｄ－ｐ５３）与化疗药顺铂（ＣＤＤＰ）或三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）联合,通过细胞生长和存活的抑制实验,流式细胞分析,末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记检测,逆转录－聚合酶链反应,免疫组织化学检测,以及裸鼠皮下移植瘤模型的治疗实验,观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用及可能机制。结果 Ａ     

三氧化二砷诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的机制。方法建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖模型。通过透射电镜、流式细胞仪观察As2O3作用后细胞凋亡形态学和细胞胞浆游离钙离子(Ca^2 )浓度的变化。结果经As2O3处理的VSMCs电镜下呈现凋亡的特征性改变,形态学上表现为细胞胞膜完整、染色质固缩及核碎裂。流式细胞仪分析显示,VSMCs在As2O3作用后出现凋亡峰,而As2O3能通过促进细胞外Ca^2 内流和细胞内Ca^2 池的释放提高胞浆游离Ca^2 浓度。结论As2O3可诱导VSMCs凋亡,并可能与胞浆游离Ca^2 浓度升高有关。     

5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学治疗胃癌的实验研究

目的探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的光动力学对人胃癌细胞MGC-803的治疗作用.方法将不同浓度的5-ALA加入细胞培养基中,随之给予相同剂量的激光辐射;之后用固定浓度的5-ALA处理细胞,并给予不同剂量的激光辐射.MTT法测定细胞生存率.结果在相同的辐射剂量下,经0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L的5-ALA处理的细胞生存率分别为(70.07±5.37)%、(50.04±4.99)%、(34.53±5.30)%、(26.89±4.44)%和23.90%±2.80%,除2.0和4.0 mmol/L5-ALA两组间外,其余各组间具有显著性差异(F=266.39,P＜0.001).在相同的5-ALA的浓度下,辐射剂量为6.25、12.5、25.0、50.0、100 J/cm2的细胞生存率分别为(83.50±10.43)%、(67.96±9.23)%、(33.80±8.26)%、(23.31±5.98)%和(14.96±3.50)%,各组之间有显著性差异(F=226.31,P＜0.0001).而单用5-ALA处理细胞,对应于其浓度为0.25、0.5、1.0、2.0,和4.0 mmol/L时的细胞生存率分别为(96.46±6.72)%、(97.48±5.27)%、(98.33±6.67)%、(99.47±6.97)%和(95.66±7.72)%,各浓度之间无显著性差异(F=0.79,P=0.5383).单纯激光辐射,其剂量为6.25、12.5、25.0、50.0、100.0 J/cm2时的细胞生存率也无显著性差异(F=0.61,P=0.6551).结论在较低的浓度范围内,5-ALA介导的光动力学治疗对人胃癌MGC-803细胞的杀伤作用随着5-ALA浓度的增加而增加,在较高浓度时则存在饱和现象,杀伤力与光剂量成正比.单纯激光不能产生光动力效应,5-ALA本身对细胞无毒性作用.5-ALA介导的光动力学治疗是很有希望的胃癌治疗方法.     

Rhodaminel23介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响

目的　探讨Rhodamine12 3(Rh12 3)介导的光动力学疗法对小鼠淋巴细胞增殖及骨髓干祖细胞集落形成的影响。方法　以C5 7B/ 6小鼠为供鼠 ,BALB/c小鼠为受鼠 ,脾脏淋巴细胞混合培养 ,比较单纯Rh12 3、单纯激光照射、光动力学疗法对小鼠混合淋巴细胞增殖 (MTT法 )及骨髓粒单核巨噬细胞集落形成 (CFU -GM)的影响 (甲基纤维素培养基法 ) ;流式细胞仪检测混合淋巴细胞中CD3 CD6 9 阳性率。结果　Rh12 3组及单纯激光组对细胞增殖无显著影响 ,光动力学组 2 0mW/cm2 以下剂量激光对细胞增殖无明显影响 ,30mW/cm2 以上明显抑制细胞增殖 ;30mW/cm2 以下剂量对CFU -GM集落无明显影响。光动力学疗法后细胞培养 2 4h ,CD3 CD6 9 表达明显下降。结论　光动力学疗法在 30mW/cm2 激光照射时可抑制淋巴细胞增殖 ,降低早期活化T细胞表达 ,但不影响骨髓CFU -GM集落形成     

叶绿素衍生物光动力学疗法对不同肿瘤细胞的体外杀伤效应

目的 :研究叶绿素衍生物 (CPD4 )光动力学疗法 (PDT)对人卵巢癌细胞、肝癌细胞、胆囊癌细胞的体外杀伤效应。方法 :应用MTT比色分析法研究PDT CPD4对人卵巢癌细胞 (3AO)、肝癌细胞 (HCC)、胆囊癌细胞 (GBC SD)的光动力杀伤效应。结果 :PDT对人卵巢癌细胞、肝癌细胞、胆囊癌细胞杀伤效应明显 ,CPD4的光动力学杀伤效应与药物浓度呈正相关 ,并与激光能量有关。结论 :光动力学疗法对人卵巢癌细胞、肝癌细胞、胆囊癌细胞有明显杀伤效应 ,且与激光能量、药物浓度有关     

低能量激光对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响

目的 观察低能量激光照射对体外培养的兔角膜内皮细胞超微结构的影响.方法 传代的兔角膜内皮细胞分为两组:一组为处理组,采用低能量激光照射,1次/d,连续7 d;另外一组为对照组,不行激光照射.通过扫描电镜及透射电镜等检测观察兔角膜内皮细胞经激光照射前后形态学超微结构的变化.结果 扫描电镜和透射电镜检测表明,与对照组相比,激光照射组内皮细胞表面可见丰富的微绒毛,细胞核较大,细胞核膜结构清晰,核仁明显且数目较多,染色质丰富,胞浆内细胞器发达.结论 角膜内皮细胞经低能量激光照射后的超微结构变化表明其增殖活性提高.     

Interaction between gene p53 and oncogene mdm2 in human glandular lung cancer cell line GLC-82

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｏｎｃｏｇｅｎｅｍｄｍ２ａｎｄｗｐ５３ｉｎｈｕｍａｎｇｌａｎｄｕｌａｒｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＧＬＣ８２．ＭｅｔｈｏｄｓＢｙｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅｍｅｄｉａｔｅｄＤＮＡｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ,ｗｐ５３ａｎｄｍｄｍ２ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｓｅｐａｒａｔｅｌｙｏｒｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＧＬＣ８２ｃｅｌｌｓｖｉａｒｅｔｒｏｖｉｖａｌｖｅｃｔｏｒｐＤＯＲｎｅｏ,ａｃａｒｒｉｅｒｏ…