原位PCR检测肝外胆管癌组织内HCV RNA及其意义

1　材料和方法1 1　材料　 5 1例肝外胆管癌来自解放军总医院 ,常规石蜡包埋。引物位于 5′端非编码区。外引物 :上游引物 ,5′ＧＧＣ ＧＡＣＡＣＴＣＣＡＣＣＡＴＡＧＡＴＣ3′ ,下游引物 ,5′ＧＧＴＧＣＡＣＧ ＧＴＣＴＡＣＧＡＧＡＣＣＴ3′。内引物 :上游引物 ,5′ＣＴＧＴＧＡＧ ＧＡＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＴＣ3′ ,下游引物 ,5′ＣＣＣＴＡＴＣＡＧＧＣＡＧＴＡＣＣＡＣＡＡ 3′。探针 :5′ＡＣＡＣＣＧＧＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＡＣＧＡＣＣＧＧＧＴＣＣＴＴＴＣＴＴＧ3′,生物素标记。原位ＰＣＲ基因扩增仪为ＡｍｐＧｅｎｅＳｙｓｔｅ…     

血清肿瘤标志物联合检测对胃癌的诊断评价

胃癌在消化道恶性肿瘤中发病率占第一位 ,因早期缺乏明显的症状和体征而致诊断困难。作者采用肿瘤特异性生长因子 (ＴＳＧＦ)、胃癌抗原 (ＭＧ7 Ａｇ)及血清消化道癌糖类抗原 (ＣＡ19 9) 3项标志物联合检测 ,以提高胃癌诊断阳性率。1　材料和方法1.1　研究对象　胃癌 62例中 ,男 4 1例 ,女 2 1例 ,平均年龄 5 1岁。均经内窥镜及病理确诊。正常对照组2 0 0例中 ,男 112例 ,女 88例 ,平均年龄 5 7岁。1.2　试剂及方法　ＭＧ7 Ａｇ(Ｂｉｏｃｈｅｃｋ公司产品 )和ＣＡ19 9采用酶免法 (ＣａｎＡｇ公司产品 ) ,ＴＳＧＦ采用福建新大陆生物技术有限…     

兔的单引物PCR指纹分析

本研究结合ＤＮＡ指纹杂交和随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)技术 ,探索了适用于动物基因组的操作简捷、快速以及敏感性可靠性强的分子标记方法———单引物ＰＣＲ指纹技术。应用单引物ＰＣＲ指纹技术 ,采用的 1条小卫星引物Ｍ13(5′ＧＡＧＧＧＴＧ ＧＣＧＧＴＴＣＴ3′)和 2条微卫星引物 { (ＧＴＧ) 5、(ＧＡＣＡ) 4}对Ｖｃ Ⅰ系、Ｖｃ Ⅱ系獭兔、日本大耳白兔 (ＺＤＢ)和青紫蓝 (ＱＺＬ)四个品系各8只 ,总计 32个个体的遗传结构进行了分析。根据结构应用ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃＣｏｍｐｕｔｅｒＴｏｏｌｓ软件计算出四个品系间及 32个个…     

应用MTS法检测人肺腺癌细胞系SPC-A1的增殖

检测细胞增殖是医学领域一项重要的研究方法 ,其中有苔盼蓝染色法、四甲基偶氮唑盐 (ＭＴＴ)法。ＭＴＳ法是近年发展起来的用于检测细胞增殖的新方法 ,本文应用ＭＴＳ法检测肺癌细胞增殖 ,旨在评价这种方法检测细胞增殖的可靠性。1　材料和方法1)　试剂 :ＭＴＳ/ＰＭＳ ,购美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司 ,避光 -2 0℃冷冻保存。2 )　细胞系 :人肺腺癌细胞系ＳＰＣ Ａ1,购自上海细胞生物学研究所。3)　方法 :ｓｐｃ Ａ1在含 10 %小牛血清 ,青霉素和链霉素各 10 0 μｇ/ｍｌ的ＲＰＭＩ 16 4 0培养液中 ,置于 37℃ 5 %ＣＯ2 饱和湿度培养箱 ,待细胞长…     

成骨细胞中3β—HSD活性的检测

在成骨细胞中有雌、雄激素受体[1] ,还有芳香化酶、硫酸酯酶、5 β 还原酶、17β ＨＳＤ的活性[2～ 4] 。推测骨细胞上也可能存在甾体激素代谢系统 ,3 β 羟脱氢酶 ( 3 β ＨＳＤ)是雌、雄激素合成的关键酶。骨细胞是否存在该酶的活性 ,尚未见报道。本文通过体外细胞培养及同位素标记法对此作深入研究。1　材料与方法1 1　材料小牛血清 (ＦＣＳ)、培养液ＭＥＭ ,由ＧＩＢＣＯ提供 ;[1,2 ,6,73Ｈ]ＤＨＥＡ( 3 2 8ＴＢｑ/ｍｍｏｌ)及 [14 Ｃ]ＤＨＥＡ由新英格兰原子核公司提供 (ＢｏｓｔｏｎＭＡ) ;薄层层析板 (ＴＬＣ)、无标记的类固醇激素…     

几种中草药混合制剂抑菌作用的实验观察

将川芎、白芷、防风、细辛、硼砂等中草药提取液制成混合制剂 ,对其抑菌作用进行了实验观察。经检测该中草药制剂对所试细菌、真菌和芽孢均有较好的抑制作用。报告如下。1　材料与方法1 1　药物制备　取川芎 10ｇ、白芷 2 0ｇ、防风 2 0ｇ、细辛 10ｇ、硼砂 40ｇ ,加水 5 0 0ｍｌ,经煎煮、浓缩、过滤至 10 0ｍｌ为 10 0 %原液。1 2　试验菌株　①标准菌株 :金黄色葡萄球菌 (ＡＴＣＣ6 5 38)、大肠杆菌 (ＡＴＣＣ○Ｒｂ2 5 92 2 )、白色念珠菌 (ＡＴＣＣ 10 2 31)和枯草杆菌芽胞 (ＡＴＣＣ 9372 )。②临床标本中分离菌株 :金黄色葡萄球菌 3…     

奥曲肽对SGC-7901细胞中Bcl-2和Bax基因的调控作用

我们以前研究发现奥曲肽可诱导人胃癌细胞株ＳＧＣ 790 1细胞凋亡 ,但其作用机制目前国内外未见报道。为此 ,我们就奥曲肽对ＳＧＣ 790 1细胞中Ｂｃｌ 2和Ｂａｘ基因的调控作用进行了研究。1　材料与方法1.1　主要试剂及仪器　　奥曲肽由瑞士Ｓａｎｄｏｚ药厂惠赠 ,人胃癌细胞株ＳＧＣ 790 1由本科培养 ,逆转录试剂盒ＡｓｃｃｅｓｓＲＴ ＰＣＲＳｙｓｔｅｍ (Ａ12 5 0 )购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司 ,ＴｒｉｐｕｒｅＴＭＩｓｏｌａｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔｋｉｔ购自德国宝灵曼公司 ,2 40 0型ＰＣＲ循环仪为美国Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ公司产品 ,…     

体外检测近交系小鼠HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞方法的建立

通过磷酸钙法用含ＨＢＶＳ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＭＶＳ与含筛选标记基因—ｎｅｏｒ基因的质粒ｐＳＶ２ｎｅｏ对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株—Ｐ８１５细胞进行了质粒共转染，并经Ｇ４１８筛选得到了Ｇ４１８抗性细胞，即Ｐ８１５Ｓ细胞。斑点杂交和免疫组化实验分别证实Ｐ８１５Ｓ细胞内有ＨＢＶＳ基因的存在；Ｐ８１５Ｓ细胞浆内和膜上有ＨＢｓＡｇ的表达。表明了Ｐ８１５Ｓ细胞可作为体外检测ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ的靶细胞。进一步对Ｐ８１５Ｓ细胞成功地进行５１Ｃｒ标记，以及标记靶细胞５１Ｃｒ最大释放值和自然释放值的测定表明：利用５１Ｃｒ释放法体外检测近交系小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ功能的方法被建立。     

胃癌VEGFmRNA表达水平的研究

肿瘤内的血管形成受到多种生长因子的调节，血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在肿瘤血管形成中发挥重要作用［１］。应用ＲＴ－ＰＣＲ方法从分子水平探讨胃癌ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达与肿瘤侵袭转移的关系。１　材料与方法１．１　材料标本：手术前内镜检查活检胃癌标本３５例，全部由内镜下取肿瘤组织和癌旁上皮各１块，置－８０℃冰箱保存备用。引物：在ＶＥＧＦ的上游转录起始端和下游非编码区分别设计５′端和３′端引物，引物序列为Ｐ１５′－ＣＡＣＡＴＡＧＧＡＧＡＧＡＴＧＡＧＣＴＴＣ，Ｐ２３″－ＣＣＧＣＣＴＣＧＧＣＴＴＧＴＣＡＣ…     

Strategies of myocardial protection during cardiac surgery.

ＳＴＲＡＴＥＧＩＥＳＯＦＭＹＯＣＡＲＤＩＡＬＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮＤＵＲＩＮＧＣＡＲＤＩＡＣＳＵＲＧＥＲＹＣｈａｒｌｅｓＣ．Ｈｓｉ，ａｎｄＲｕｓｅｌＦ．ＳｔａｈｌＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｈｉｓｔｏｒｙ．Ｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏｐｅｒｆｏｒｍｃｏｍ...     

血细胞比容对血糖监测仪全血血糖测定值的影响

血糖监测仪作为血糖自我监测的重要工具 ,在家庭及临床应用日趋广泛 ,但血糖监测仪测毛细血管全血血糖 (ＣＢＧ)的影响因素很多。现就血细胞比容 (ＨＣＴ)对其的影响加以分析 ,以利于血糖监测仪的正确使用。一、材料与方法1.标本来源 :为本院门诊病人及正常体检者 ,空腹抽取静脉血。2 .方法 :抽静脉血 2ｍｌ ,取 1滴血立即用ＯＮＥＴＯＵＣＨⅡ型血糖监测仪及配套试纸 (ＬＩＦＥＳＣＡＮ公司产品 )监测静脉全血血糖 (ＶＢＧ) ;余血经ＥＤＴＡ-Ｎａ2 抗凝后 ,取 0 .5ｍｌ用ＣｏｕｌｔｅｒＪＴ -ＩＲ血细胞分析仪及配套试剂测定ＨＣＴ ;剩余血…     

凝血因子Ⅷ在FFP制备过程中受时间和温度的影响

为了探讨不同条件下制备和存放血浆对ＦⅧ :Ｃ活性的影响 ,笔者采用了不同时间、温度条件下试验 ,结果报道如下。1　材料与方法1.1　仪器　ＳＹＳＭＥＸＣＡ - 50血凝仪、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ加样器 5～ 4 0 μｌ、4 0～ 2 0 0 μｌ。1.2　试剂　ＤＡＤＥＢＥＨＲＩＮＧ试剂盒 (缓冲液、乏ＦⅧ :Ｃ血浆、ＡＰＴＴ试剂 )、0 .0 2 5ｍｏｌ/ＬＣａＣｌ2 溶液。1.3　方法　血浆 5μｌ 缓冲液 4 5μｌ 乏ＦⅧ :Ｃ血浆50 μｌ保温 1分钟 ＡＰＴＴ试剂 50 μｌ保温 3分钟 ＣａＣｌ2溶液 50 μｌ检测 (保温、时间控制、检测在ＣＡ 50血凝仪上进…     

ESBLs菌株的流行情况和耐药特点

随着第三代头孢菌素在临床上广泛应用 ,出现了β 内酰胺酶 (ＥＳＢＬｓ)的耐药菌株。为了解我院ＥＳＢＬｓ菌的流行情况和耐药特点 ,作者对 13 9株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌做了ＥＳＢＬｓ检测 ,分析其对抗菌药物的耐药性。现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　材料　试验菌株 (13 9株 )是从我院住院和门诊病人送检标本 (血液、痰、尿及其他体液 )中分离到的大肠埃希菌 (80株 )和肺炎克雷伯菌 (5 9株 )。质控菌株为大肠埃希菌ＡＴＣＣ2 5 92 2和肺炎克雷伯菌ＧＹ2 0 0 0。1.2　仪器　采用由法国生物梅里埃公司生产的ＡＴＢ鉴定仪。1.3　方…     

刺五加注射液对重型颅脑损伤患者的疗效观察

重型颅脑损伤 (Ｓｅｖｅｒｅｃｒａｎｉｏｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｊｕｒｙ ,ＳＣＩ)约占颅脑伤的 2 0 % ,病死率高达 2 0 %～ 5 0 % ,创伤后脑继发性缺血缺氧损害是重要原因 ,为救治重点[1～ 3] 。为探讨刺五加注射液 (Ｉｎｊｅｃｔｉｏａｃａｍｔｈｏｐａｎａｃｉｓｓｙｎｔｉｃｏｓｉ,ＩＡＳ)治疗重型颅脑伤的机制和效果 ,我们从 1997年 7月至 1998年 12月对 30例急性期ＳＣＩ伤者行ＩＡＳ治疗前后的临床 (Ｇｌａｓｇｏｗｃｏｍａｓｃａｌｅ ,ＧＣＳ)、血液流变指标 (ＨＩ)、ＢＥＡＭ、ＴＣＤ及预后 (Ｇｌａｓｇｏｗｏｕｔｃｏｍｅｓｃａｌ…     

急性胆管炎各主要器官ATP和GSH水平变化的实验研究

本实验采用大鼠胆道梗阻及急性胆管炎模型 ,观察肝、肾、肺、心组织三磷酸腺苷 (ＡＴＰ)及还原型谷胱甘肽 (ＧＳＨ)水平的动态变化。1　材料与方法1.1　动物分组与模型制作　　Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ ,随机分为 3组 :(1)急性胆管炎 (Ａｃｕｔｅｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ ,ＡＣ)组 :动物以 1%戊巴比妥钠 (2 5ｍｇ/ｋｇ体重 )腹腔内注射麻醉后 ,无菌条件下作上腹正中切口 ,游离并双重结扎胆总管 ,同时胆管内注入 0 .2ｍｌＯ111Ｂ4 大肠杆菌菌液 (5× 10 9ｃｆｕ/ｍｌ) ,缝合切口。 (2 )胆道梗阻 (Ｂｉｌｉａｒｙｏｂｓｔｒｕｃ…     

类风湿性关节炎伴系统性红斑狼疮2例

例 1　女 ,9岁。因间断性发热伴四肢关节肿痛 1年半第 2次入院。查体 :Ｔ38 5℃ ,面颊部可见圆形充血性皮疹。双腕近指关节梭形肿胀畸形 ,压痛 ,双踝关节肿胀 ,活动受限 ,伴有晨僵 ( >1ｈ) ,双下肢轻度水肿。实验室检查 :尿蛋白( )～ ( ) ;Ｈｂ90 ｇ/Ｌ ,ＷＢＣ4.5× 1 0 9/Ｌ ;ＥＳＲ1 2 4ｍｍ/ｈ ;ＲＦ( ) ;血ＩｇＧ2 2 .7ｇ/Ｌ ,Ｃ30 .54 ｇ/Ｌ ,Ｃ4Ｏ .1 ｇ/Ｌ ,ＡＮＡＬ :1 0 0 ,抗Ｓｍ( ) ,ｄｓ -ＤＮＡ ( - ) ,ＢＵＮ ,Ｃｒ正常。双手Ｘ线检查 :近指关节周围软组织肿胀 ,关节间隙轻度狭窄 ,骨质疏松。肾活检病理诊断 :狼疮性…     

Acute lower respiratory tract infections in children in China.

ＡＣＵＴＥＬＯＷＥＲＲＥＳＰＩＲＡＴＯＲＹＴＲＡＣＴＩＮＦＥＣＴＩＯＮＳＩＮＣＨＩＬＤＲＥＮＩＮＣＨＩＮＡＺｈａｏｒｉＧｅｔｕ照日格图ＢｅｉｊｉｎｇＰｅｄｉａｔｒｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＢｅｉｊｉｎｇＣｈｉｌｄｒｅｎ’ｓＨｏｓｐｉｔａ...     

消炎止血栓抑菌及抗大鼠直肠溃疡的作用

1　实验资料　消炎止血栓 (ＸＹＺＳＸ)水提取浸膏经喷雾干燥后所得颗粒 ,每ｇ相当于原生药 6ｇ ,由本所制剂室提供 (批号2 0 0 0 112 8) ;质控菌株 :金黄色葡萄球菌 (ＡＴＣＣ 2 5 92 3) ,大肠杆菌 (ＡＴＣＣ 2 5 92 2 ) ,绿脓杆菌 (ＡＴＣＣ 2 785 3)均由卫生部药品生物制品检定所提供 ;Ｍ Ｈ肉汤、血液琼脂平皿为市购 .ＳＤ雄性大鼠 5 0只 ,体质量 2 2 0～ 2 5 0ｇ ,由第四军医大学实验动物中心提供 .采用液体试管法[1] 进行抑菌、杀菌试验 .细菌不生长的最高药物稀释度为最低抑菌浓度 (ＭＩＣ) ,杀死细菌的最高药物稀释度为最低杀菌浓度…     

服务性行业从业人员无症状HBsAg携带者血清、唾液、尿液中HBV-DNA情况调查及分析

我国是乙型肝炎高发区 ,无症状乙肝表面抗原携带者(ＡＳＣ)高达 2 0 % [1 ] ,对乙肝病毒感染和传染作出准确的诊断 ,是有效控制乙型肝炎流行的前提 ,在公共卫生学方面尤其重要。应用ＰＣＲ技术检测服务性行业从业人员ＨＢｓＡｇ携带者血清、唾液、尿液中乙肝病毒ＤＮＡ ,对检出情况进行分析。ＡＳＣ血清学感染标志物组合模式 ,Ａ型 :ＨＢｓＡｇ、Ａｎ ＨＢｅ、Ａｎ ＨＢｃ均阳性 ;Ｂ型 :ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、Ａｎ ＨＢｃ均阳性 ;Ｃ型 :ＨＢｓＡｇ、Ａｎ ＨＢｃ均阳性 ;Ｄ型 :ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性[2 ] 。1　材料与方法1.1　材料　…     

恶性肿瘤特异性生长因子与甲胎蛋白联合检测诊断原发性肝癌

目前对原发性肝癌 (ＰＨＣ)的诊断除了“Ｂ”超 ,ＣＴ ,ＭＲＩ等影像学方法 ,血清甲胎蛋白 (ＡＦＰ)是最通用的肝癌诊断指标 ,但仍有 30 %左右的ＰＨＣ患者ＡＦＰ为阴性或低浓度 ,且假阳性很高[1] 。我们应用恶性肿瘤特异性生长因子 (ＴｕｍｏｒＳｐｅｃｉｆｉｃＧｒｏｗｔｈＦａｏｔｏｒ,ＴＳＧＦ)为标志物 ,对本市 31例ＰＨＣ、2 9例良性肝病患者进行ＴＳＧＦ对照检测 ,重点是评价ＴＳＧＦ对早期肝癌临床辅助诊断指标的价值和意义。1　材料与方法1.1　检测对象　全部病例均符合临床及病理诊断 ,均为启东籍居民。ＰＨＣ组 31例 ,男 2 5例 ,…