反义BCR/ABL寡核苷酸体外抑制K562细胞的研究

目的：探讨反义ＢＣＲ和ＡＢＬ融合基因（ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因）寡核苷酸体外抑制Ｋ５６２细胞的作用及机制。方法：采用Ｋ５６２细胞培养,观察反义ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸体外对Ｋ５６２细胞数、台盼蓝拒染率及克隆形成等的影响。结果：经反义ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸ｂ３ａ２（ＡＳｂ３ａ２）处理后培养８ｄ的Ｋ５６２克隆抑制率达６０６９％,液体培养中细胞数从２４ｈ开始较对照组减少,细胞存活率从８ｈ开始即较对照组明显下降,ＢＣＲ／ＡＢＬ寡核苷酸ｂ２ａ２（ＡＳｂ２ａ２）及无义寡核苷酸对Ｋ５６２细胞数和存活率无明显影响;３种寡核苷酸对ＨＬ６０细胞数和存活率也无影响。结论：ＡＳｂ３ａ２对Ｋ５６２细胞有序列特异性的抑制作用。ＡＳｂ３ａ２的这种抑制作用可能在于它诱导Ｋ５６２细胞的凋亡。     

K562及K562/VCR对长春新碱诱导凋亡的敏感性

研究人类白血病细胞株Ｋ５６２及耐长春新碱的Ｋ５６２变异株Ｋ５６２／ＶＣＲ对长春新碱诱导凋亡的敏感性的差异,以探讨抗凋亡在白血病多药耐药性（ＭＤＲ）中的作用。方法将Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ分别用浓度为０、０．００１、０．０１０μｇ／ｍｌ的长春新碱诱导２４ｈ,用流式细胞仪ＰＩ染色法、ＴＵＮＥＬ法及ＥＬＩＳＡ法分别进行细胞凋亡检测。结果经浓度为０、０．００１μｇ／ｍｌ长春新碱诱导后,Ｋ５６２细胞凋亡率分别为（４．１０±０．１７）％、（１３．３０±３．７４）％,而Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞凋亡率分别为（３．６１±０．６９）％、（９．０６±４．２４）％,统计学显示两者差异无显著性（ｎ＝３,Ｐ＞０．０５）。而长春新碱浓度达０．０１０μｇ／ｍｌ时,Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞凋亡率分别为（３６．４８±６．７０）％、（１０．４５±３．７１）％,两者差异有极显著意义（ｎ＝３,Ｐ＜０．０１）。ＴＵＮＥＬ及ＥＬＩＳＡ检测结果与此类似。结论Ｋ５６２及Ｋ５６２／ＶＣＲ对长春新碱诱导细胞凋亡的敏感性不同,耐药细胞对药物诱导细胞凋亡的抵抗性增强可能在白血病ＭＤＲ发生中有重要作用。     

低分子RNA及5—Fu对白血病细胞系K562细胞抑制作用的实验观察

目的：观察低分子ＲＮＡ及５－Ｆｕ在白血病细胞系Ｋ５６２细胞中的作用。方法：在Ｋ５６２细胞培养中加低分子（实验组１）、５－Ｆｕ（实验组２）、低分子ＲＮＡ和５－Ｆｕ（实验组３）及Ｐ．Ｂ．Ｓ（对照组）,观察集落细胞数,死、活细胞计数及细胞蛋白含量。结果：集落细胞数对照组为１４２个,实验组１为７０个,抑制率为５０．７％,实验组２为７１个,抑制率为５０．５％,实验组３为４１个,抑制率为７１．１％;活、死细胞     

急性白血病Bcl-2反义寡核苷酸基因治疗的实验研究

目的选用２０ｎｔＢｃｌ－２反义硫代磷酸寡核苷酸（Ａｓ－Ｐｓ－ＯＤＮ，ＡＳＰＯ），并以其正义寡核苷酸（ＳＰＯ）为对照做如下问题探讨：（１）普通剂量（５～２０μｍｏｌ）ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞、正常及缺铁性贫血患者骨髓细胞及急性白血病病人骨髓细胞或外周白血病细胞（幼稚细胞≥８５％）的作用；（２）大剂量（１６０μｍｏｌ）正义或反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞作用的特点，并通过ＡＳＰＯ引起ＨＬ６０细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达变化和ＳＰＯ对ＨＬ６０细胞毒性的变化，寻找可能的最佳效应剂量和最小毒性剂量；（３）ＡＳＰＯ联合化疗药物对ＨＬ６０细胞和原代急性白血病细胞的作用。方法台盼蓝拒染试验和克隆培养测定细胞的生长能力；免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Ｐ２６Ｂｃｌ－２蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法检测Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ（Ｂｃｌ－２／β－ａｃｔｉｎ）相对水平；光、电镜下观察凋亡细胞形态，吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率，ＤＮＡ提取及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成；ＭＴＴ法检测ＰＳ－ＯＤＮ及化疗药物的细胞毒作用。结果（１）普通剂量的ＡＳＰＯ即能降低ＨＬ６０细胞及白血病细胞Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达，并抑制ＨＬ６０细胞及１８／２０例白血病细     

慢性粒细胞白血病反义核酸基因治疗的实验研究

目的单独应用ｂｃｒ－ａｂｌ反义硫代磷酸寡聚脱氧核糖核酸（ＡＳＰＯ）或ｃ－ｍｙｂＡＳＰＯ作用于慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）细胞的研究已有报道，但抑制的不彻底性是个主要问题。由于ＣＭＬ的发生是多癌基因协同作用及相互影响的结果，为进一步提高ＡＳ－ＰＯ对ＣＭＬ细胞的作用效果，用互补于两种类型（ｂ２ａ２及ｂ３ａ２）的ｂｃｒ－ａｂｌ基因融合位点两侧各１３个核苷酸的ＡＳＰＯ（ｂ２ＡＳＰＯ和ｂ３ＡＳＰＯ）及ｃ－ｍｙｂ基因起始密码子２－７互补的ＡＳＰＯ（ｍＡＳＰＯ）联合作用于Ｋ５６２细胞株和原代ＣＭＬ细胞。方法硫代磷酸寡核基酸（ＰＳ－ＯＤＮ）的合成由３９２－０５型ＤＮＡ－ＲＮＡ合成仪自动合成，经ＯＰＣ柱纯化；细胞与ＰＳ－ＯＤＮ共培养后２４，４８，９６，１２０ｈ倒置显微镜下活体观察，０．４％台盼蓝拒染法进行死活细胞计数；ＣＦＵ－Ｋ５６２、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ采用０．８％甲基纤维素半固体培养法；采用两对引物ＲＴ－ＰＣＲ半定量法检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ表达；通过流式细胞仪检测及电镜观察细胞凋亡情况。结果（１）ＡＳＰＯ能够特异性抑制ｂｃｒ－ａｂｌ基因表达；经ＲＴ－ＰＣＲ的检测发现１０μｍｏｌＡＳＰＯ作用４８ｈ，两种反义     

重组人肿瘤坏死因子对白血病细胞生长抑制的研究

应用ＭＴＴ比色法研究了重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦα）对白血病细胞株ＨＬ６０和Ｋ５６２生长的抑制作用。实验结果表明，ｒｈＴＮＦα对白血病细胞生长的抑制作用有时相和剂量依赖关系。ｒｈＴＮＦα与ＨＬ６０和Ｋ５６２细胞分别培养１２ｈ，抑制率仅有６．２％和４．３％。当作用时间延长到２４ｈ时，抑制度分别达到５５．４％和４７．１％。ｒｈＴＮＦα的用量由０．０４μｇ／２×１０５细胞增加到５μｇ／２×１０５细胞时，对ＨＬ６０和Ｋ５６２细胞的生长抑制率也分别由１６．８％和６．４％增长到７７．１％和５９．３％。上述两种依赖关系的实验数据经单因素方差处理，有显著性差异。ｒｈＴＮＰα同抗肿瘤药Ｖｐ１６合用对白血病细胞生长的抑制有叠加作用。ｒｈＴＮＦα加入急性粒细胞白血病患者骨髓细胞培养体系后，对白血病细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｌ）的生长有一定抑制作用。当ｒｈＴＮＦα为１μｇ／５×１０５白血病细胞时，对ＣＦＵ－Ｌ的抑制率可达４３．４％。     

三氧化二砷诱导血液肿瘤细胞凋亡的机制研究

目的 了解三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）改变有关及其可能机制。方法 以急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞系ＮＢ４、慢性淋巴细胞性白血病细胞系ＳＫＷ３、Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞系Ｎａｍａｌｗａ及其它２个急性髓性白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｕ９３７为体外模型,应用碘化丙啶（ＰＩ）／Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３（Ｒｈ１２３）双重染色检测ΔΨｍ,通过测定细胞活力、亚Ｇ１     

黄花夹竹桃甙对K562细胞的杀伤作用

目的：选用黄花夹竹桃甙（ＴＳ）作为Ｎａ~＋－Ｋ~＋－ＡＴＰ酶的抑制剂，观察其对体外培养的Ｋ５６２细胞的杀伤作用，初步探讨其作用机制。方法：台盼蓝排染法测定ＴＳ对Ｋ５６２细胞的杀伤作用；８６Ｒｂ示踪法测定ＴＳ对Ｋ５６２细胞Ｎａ~＋－Ｋ~＋－ＡＴＰ酶活性的抑制作用；透射电镜观察ＴＳ对Ｋ５６２细胞形态学的改变。结果：低剂量的ＴＳ（０．００１～０．ｌμｇ／ｍｌ）在体外能够显著杀伤Ｋ５６２细胞，并有剂量依赖性。此种作用需经ＴＳ持续作用８ｈ以上才表现出来，并迅速增强。经０．１μｇ／ｍｌＴＳ处理１２ｈ的Ｋ５６２细胞，其生长受到显著的抑制。体外杀伤细胞浓度的ＴＳ作用１ｈ，对Ｋ５６２细胞的Ｎａ~＋Ｋ~＋－ＡＴＰ酶有明显的抑制作用。电镜观察发现，ＴＳ作用２４ｈ后，Ｋ５６２细胞出现非特异性的形态学改变，并发生溶解性坏死。结论：ＴＳ对Ｋ５６２细胞表现出很强的杀伤作用，其机制可能是抑制膜上Ｎａ~＋－Ｋ~＋－ＡＴＰ酶的活性，引起水盐代谢紊乱和营养物质摄取障碍。     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３） 治疗慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ） 的机制。方法：以ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２ 为模型,通过细胞增殖、活力检测、形态学观察、肿瘤集落形成的琼脂糖凝胶电泳等检验。结果：经≥２．５μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 处理的Ｋ５６２ 细胞可出现增殖受抑和凋亡的形态学改变及ＤＮＡ片段化。结论：Ａｓ２Ｏ３ 能有效地诱导Ｋ５６２ 细胞凋亡。     

切割bcr/abl核酶的逆转录病毒载体的构建及其对K562细胞的影响

目的进一步研究ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因在慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中作用以及探索ＣＭＬ基因治疗的可能性。方法利用ＤＮＡ重组技术将所设计、合成的针对ｂｃｒ／ａｂｌ融合转录本ｂ３ａ２断裂点“锤头型”核酶的基因用ＨＩｎｄⅢ、ｐｓｔⅠ酶切后克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ±质粒相应酶切位点获得ｐＢＲＺ重组子。测定ＲＺ基因序列与设计的一致。用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ从ｐＢＲＺ上切下ＲＺ基因，定向克隆到逆转录病毒载体ＰＬＸＳＮ，得到携带ＲＺ基因的重组逆转录病毒载体ＰＬＲＺＸＳＮ。通过脂质体介导的ＤＮＡ转染法，将ＰＬＲＺＸＳＮ导入慢性粒细胞白血病细胞株Ｋ５６２细胞，通过克隆分析法、ＲＴ－ＰＣＲ、流式细胞仪、ＤＮＡ电泳及电镜观察等方法检测核酶对Ｋ５６２细胞的影响。结果（１）核酶转染４８ｈ后，Ｋ５６２细胞克隆抑制率达８５％；（２）核酶转染７２ｈ后Ｋ５６２细胞Ｐ２１０ｂｃｒ—ａｂｌ蛋白表达率比未转染组低５２％；（３）核酶转染４８ｈ后，Ｋ５６２细胞ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ表达水平比未转染组低７３％；（４）核酶处理的Ｋ５６２细胞发生凋亡，表现为核酶转染Ｋ５６２细胞７２ｈ后，用流式细胞仪可检测到明显凋亡峰，凋亡率为３７．１％，而空载体及脂     

Effect of WT1 gene expression on cell growth and proliferation in myeloid leukemia cell lines

Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒ（ＷＴ１）ｇｅｎｅｉｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎＷｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒｐａｔｉｅｎｔｓＩｔｉｓｌｏｃａｔｅｄｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１１ｐ１３１　ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＷＴ１ｇｅｎｅｉｓａｂｏｕｔ５０ＫｂＴｈｅｒｅａｒｅ２ｓｐｌｉｃｉｎｇｅｘｏｎｓｏｕｔｏｆｉｔｓ１０ｅｘｏｎｓ：ｅｘｏｎ５（ｓｐｌｉｃｅⅠ）ａｎｄｅｘｏｎ９（ｓｐｌｉｃｅⅡ）Ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｔｗｏａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｐｌｉｃｅｓｒｅｓｕｌｔｓｉｎｆｏ…     

铁剥夺对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁剥夺诱导HL 60细胞及对化疗药物诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :HL 60细胞与不同浓度的铁螯合剂 去铁胺 (DFO)、DFO加化疗药物、化疗药物、DFO加化疗药物及三氯化铁、三氯化铁共同培养 6h、12h、2 4h、48h。通过测定细胞活力 ,观察细胞形态学变化 ,应用流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡 ;通过亲和免疫组化方法检测c myc基因表达 ,从而确定DFO及DFO与化疗药物联合应用对HL 60细胞的作用。结果 :DFO单用可降低HL 60细胞活力 ,抑制HL 60细胞增殖 ,诱导HL 60凋亡 ,并可使c myc基因表达增加 ,其作用强度随培养时间延长及DFO浓度增加而增加 ;DFO与化疗药物联合时 ,可增加化疗药物HL 60细胞凋亡的作用 ,该作用可被等摩尔的三氯化铁抵消。结论 :铁剥夺可影响HL 60细胞DNA的合成 ,诱导其凋亡 ,并提高HL 60细胞对化疗药物的敏感性。因此 ,铁剥夺可作为临床上白血病治疗或辅助治疗的方法之一 ,不适当补铁或升高血红蛋白将影响化疗疗效     

环孢菌素A对HL-60和K562细胞增殖的影响

目的 探讨环孢菌素A对HL-60、K562细胞增殖的影响。方法 应用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）观察环孢菌素A对HL-60、K562细胞增殖的抑制率，应用电镜进行凋亡的检测。结果 癌细胞在环孢菌素A作用下，细胞增殖被阻遏，并呈现时间剂量效应关系。同时发现环孢菌素A能诱导HL-60、K562细胞凋亡。结论 环孢菌素A可以通过诱导细胞凋亡而抑制HL-60和K562细胞增殖。     

三氧化二砷通过激活Caspases酶诱导髓性白血病细胞凋亡

目的:明确Caspases酶是否与三氧化二砷(As2O3)诱导的人髓性白血病细胞凋亡有关;明确蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的激活物PMA对As2O3与VP16诱导的细胞凋亡是否有不同的影响.方法:把NB4和HL60细胞株放入有或无Caspases酶抑制剂(Z-VAD.fmk或Y-VAD.Cho)的As2O3中进行培养;凋亡以细胞形态学,DNA梯带和流式细胞分析来评价.多聚的磷酸腺苷聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)裂解被用作Caspases酶激活的标志.结果:NB4和HL60细胞株在As2O3诱导凋亡的过程中均出现了PARP裂解;Z-VAD.fmk--Caspases酶广谱抑制剂,可以阻断As2O3诱导的细胞凋亡和PARP裂解;但Y-VAD.Cho--Caspases酶的选择性抑制剂,没有此效应;在足以激活PKC的条件下用PMA预培养HL60细胞2～8 h,不论对As2O3还是VP16诱导的凋亡均无明显影响.结论:对于培养的髓性白血病细胞,As2O3诱导细胞凋亡是始自瀑布式激活Caspases酶的远端,通过PARP裂解来实现的.PKC的激活,不论对于As2O3还是VP16诱导的细胞凋亡均无影响.     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法:采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果:10和30mmol／L SeO2能抑制3种细胞增生。30mmol／L SeO2作用48h能使54．0％的NB4细胞、46．5％的K562细胞和49．6％的HL-60细胞发生凋亡；能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论:SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

重组反义c-myc腺病毒诱导HL-60 细胞分化的作用

目的研究重组反义c-myc腺病毒(Ad-AS-c-myc)对人急性早幼粒HL-60细胞系的诱导分化作用及分子机制,探讨Ad-AS-c-myc用于急性早幼粒白血病基因治疗的可能性.方法采用重组腺病毒Lac-Z(Ad-LacZ)及Ad-AS-c-myc联合多聚阳离子转染HL-60细胞,X-gal染色判断转染效率.采用形态学、MTT试验、RT-PCR、流式细胞仪及免疫细胞化学等方法进行研究.结果多聚阳离子可提高腺病毒对HL-60细胞的转染,Ad-LacZ protamine sulfate转染率达79.8%.Ad-AS-c-myc能抑制HL-60细胞c-myc基因在转录及蛋白水平的表达.Ad-AS-c-myc抑制HL-60细胞生长及活力(抑制率51%),降低其核浆比例,增加其过氧化酶活性,引起其G0/G1阻滞及分化相关基因c-fos基因表达增强.结论Ad-AS-c-myc对HL-60细胞具有抑制生长及诱导分化作用.其生物学作用与HL-60细胞过氧化酶活性及c-fos的表达有关.Ad-AS-c-myc在急性早幼粒白血病基因治疗中具有潜在的临床价值.     

中药"拮新康"对白血病细胞凋亡的影响

为探讨中药“拮新康”对白血病细胞凋亡的影响。采用形态学及DNA凝胶电泳方法观察其对白血病细胞株HL 6 0及K5 6 2细胞凋亡的影响 ,结果示 :①电镜观察可见凋亡细胞和凋亡小体 ,DNA凝胶电泳可见典型的梯形带改变 ;②一定浓度范围内的拮新康经适当作用时间后可诱导白血病HL 6 0 ,K5 6 2细胞凋亡 ,但诱导K5 6 2细胞凋亡所需时间较HL 6 0长且剂量较大。提示拮新康可诱导白血病细胞凋亡 ,与剂量和时间有一定的关系 ,为临床治疗白血病提供了实验依据。     

足叶乙甙诱导HL－60急性早幼粒白血病细胞程序化死亡的实验研究

目的：用不同剂量的ＶＰ－１６诱导急性早幼粒白血病细胞程序化死亡（ＰＣＤ）。方法：通过细胞培养技术获取ＰＣＤ细胞，以ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳确定细胞ＰＣＤ的发生，苔盼蓝拒染法检测细胞活力。结果：不同浓度的ＶＰ－１６在试验条件下于４ｈ内均能诱导ＨＬ－６０细胞发生ＰＣＤ。结论：本实验建立的研究细胞ＰＣＤ的方法可靠，ＶＰ－１６具有良好的诱导细胞产生ＰＣＤ的作用     

异搏定逆转HL-60/ADR细胞株耐药机理的初步探讨

目的 :深入了解异搏定 (VER)对鬼臼乙叉甙 (VP16)耐药逆转作用的机制。方法 :以多药耐药相关蛋白 (MRP)高表达的耐阿霉素人急性髓性白血病细胞株HL 60 /ADR为研究对象 ,应用DNA电泳、流式细胞仪观测细胞凋亡现象 ,用Westernblotting方法测定凋亡相关蛋白BCL 2表达水平。结果 :在作用 2 0h后 ,5mg·L-1VER可使VP16对HL 60 /ADR诱导凋亡作用增强 2 .8倍 ,并可下调BCL 2蛋白表达水平。结论 :VER对VP16的耐药逆转作用可能与其具有增强VP16诱导HL 60细胞凋亡作用有关 ;BCL 2蛋白可能是这一作用的靶点