大鼠INS-1细胞中IGFBP-2 mRNA的表达调控

目的:研究大鼠胰腺肿瘤β-细胞(INS-1)中,葡萄糖(Glucose)、胰岛素(Insulin)和生长激素(GH)对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)基因的表达调控,探索IGFBP-2基因调节机制及其在维持正常胰腺细胞生理功能中的作用.方法:RNA印迹法(Northern blotting)检测INS-1细胞IGFBP-2 mRNA的表达,酶标法测定INS-1细胞胰岛素分泌量.结果:葡萄糖对IGFBP-2 mRNA调节作用不同;高浓度(10mmol/L)葡萄糖条件下,胰岛素分泌量增加,而IGFBP-2mRNA表达被抑制;低浓度(1～5.6 mmol/L)葡萄糖条件下,胰岛素分泌量无显著性变化,IGFBP-2 mRNA正常表达.INS-1细胞在不完全培养液中,加入GH培养,在不同时间间隔提取培养液进行IGFBP-2 mRNA检测,结果发现,培养16 h以上,IGFBP-2 mRNA表达开始显著下降.外源胰岛素抑制IGFBP-2 mRNA的表达.结论:葡萄糖和生长激素对INS-1细胞中IGFBP-2 mRNA表达的抑制作用是通过胰岛素调控的.     

INS-1细胞中生长激素及催乳素受体和IGFBP-3的表达调控

目的：研究生长激素(GH)和催乳素(PRL)受体在鼠胰腺肿瘤β细胞中的表达和调控及GH调节IGFBP-3的表达调控．方法：Northern，检测PRL，GH和IGFBP-3的mRNA表达．细胞培养，受体蛋白竞争结合实验，检测细胞膜受体特异结合．Western共价杂交，检测INS-I细胞中IGFBP-3蛋白表达．结果：在INS-1中，每个细胞有6600个人生长激素(hGH)受体蛋白结合点．GH受体的mRNA分子为1．6kb，PRL受体mRNA为0．5kb．bGH和rPRL抑制GH受体mRNA的表达，而bGH和rPRL上调促进PRL受体mRNA的表达．在INS-1中GH，PRL和IGF-I对IGFBP-3的mRNA和蛋白表达均有促进作用．结论：GH和PRL控制鼠胰腺β细胞的GH和PRL受体表达，GH对IGFBP-3表达作用不是通过IGF-I发生作用的。     

不同浓度胰岛素对Ishikawa细胞IGFBP-1 mRNA表达的影响

目的 体外研究胰岛素对子宫内膜上皮细胞胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1) mRNA表达的影响.方法 Ishikawa细胞培养液中分别添加雌二醇(E2)200 pg/mL以模拟增殖晚期正常子宫内膜上皮细胞(A组),E2200 pg/mL和孕酮(P)20 ng/mL模拟分泌中期(B组);再将A、B组分别予0、10、30、100 mU/L的胰岛素水平供培养.采用RT-PCR法检测Ishikawa细胞IGFBP-1 mRNA的表达情况.结果 ①A、B组IGFBP-1 mRNA表达均为阳性,B组表达高于A组(P<0.0001).②A、B组不同浓度下,IGFBP-1 mRNA的表达有统计学意义(P<0.0001),且随胰岛素浓度的升高,IGFBP-1 mRNA表达量下降.③A、B组间30 mU/L与100 mU/L胰岛素浓度的IGFBP-1 mRNA表达无统计学意义(P>0.05).结论 ①Ishikawa细胞分泌中期分泌IGFBP-1较增殖晚期增加,孕激素可上调IGFBP-1的表达.②Ishikawa细胞IGFBP-1 mRNA的表达不依赖于胰岛素的作用,但胰岛素可抑制IGFBP-1 mRNA,具有浓度依赖性.③高浓度胰岛素可能可以拮抗孕激素对IGFBP-1 mRNA表达的促进作用.     

S-雌马酚改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能的研究

目的 研究大豆甙元活性代谢产物S-雌马酚(S-equol,S-Eq)对高糖培养条件下大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞胰岛素分泌功能的影响.方法 采用26.2 mmol/L葡萄糖(高糖组,H)及葡萄糖分别与不同浓度S-Eq(0.1、1、10、100 μmol/L S-Eq+H组)干预INS-1细胞24 h,另设未干预的INS-1细胞为对照组(C).采用CCK-8检测细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,TUNEL法联合Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Real-time PCR和Western blot分别检测前胰岛素原(preproinsulin,PPI)、葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter 2,Glut2)、线粒体阴离子载体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2) mRNA及蛋白表达.结果 S-Eq能显著增加高糖培养条件下INS-1细胞活力(P＜0.05),其中1μmol/L S-Eq效果最为明显.GSIS检测发现,与对照组比较,高糖处理后INS-1细胞胰岛素分泌显著降低,而S-Eq能显著增加高糖处理的INS-1细胞的胰岛素分泌(P＜0.05).同时,0.1、1、10 μmol/L S-Eq均能明显减少高糖培养条件下INS-1细胞凋亡,上调PPI mRNA、Glut2 mRNA和Glut2蛋白表达,而显著抑制UCP2 mRNA及其蛋白的表达(P＜0.05).结论 S-Eq可有效改善高糖培养条件下INS-1细胞胰岛素分泌功能,可能与抑制细胞凋亡,调节Glut2和UCP2表达有关.     

IGFBP-6在维甲酸诱导的软骨细胞凋亡中的表达

目的：对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡病理过程中胰岛素样生长因子结合蛋白-6（IGFBP-6）的表达规律进行研究。方法：1&#215;10^-6mol／L的全反式维甲酸（ATRA）作用体外培养兔的软骨细胞株，观察软骨细胞中Ⅱ型胶原的合成变化，检测软骨细胞株细胞凋亡率。采用实时定量PCR和Western印迹杂交分析软骨细胞中IGFBP-6mRNA和蛋白质的表达。结果：ATRA（1&#215;10^-6mol／L）作用软骨细胞24h，ATRA抑制了软骨细胞中Ⅱ型胶原的合成，并使软骨细胞凋亡率增加了250％（P〈0．05）。ATRA使软骨细胞中IGFBP-6mRNA和蛋白质的表达分别增加了140％和195％（P〈0．05）。结论：维甲酸可能通过负性调控靶基因IGFBP-6的基因转录和翻译，发挥对软骨细胞的促凋亡作用。     

乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨组织中IGF-Ⅰ、IGFBP-3、IGFBP-5表达的影响

目的 探究乳铁蛋白(L F)对去卵巢大鼠骨组织中胰岛素样生长因子Ⅰ(IG F-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)mRNA的表达及其对该模型骨量的影响,探讨LF对绝经后骨质疏松的作用及可能的分子学机制.方法 将70只6月龄雌性SD(Sprague-Dawley...     

硫氧环蛋白相互作用蛋白与糖尿病关系的研究

目的 研究高糖环境下INS-1细胞中硫氧环蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)的表达对胰岛素分泌的影响以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、艾塞那肽(Exenatide,Ex-4)的保护作用.方法 以含11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI 1640培养液培养INS-1细胞,当细胞生长至80%融合时,分别转入含有4.0 mmol/L葡萄糖(NG组)、16.7 mmol/L葡萄糖(HG组)及16.7 mmol/L葡萄糖+10 mmol/L NAC(HG+N组)、16.7 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L Ex-4(HG+E组)的RPMI 1640培养液中继续培养48 h;采用real-time PCR法检测TXNIP、胰岛素基因及胰岛素转录因子MafA的mRNA水平.结果 HG组与NG组比较,TXNIP mRNA的表达明显上升,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01).HG+N组、HG+E组与HG组比较,TXNIP mRNA的表达均明显下降,胰岛素mRNA、MafA mRNA的表达均明显提高,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 高浓度葡萄糖可通过介导TXNIP的过度表达而导致胰岛素基因及MafA表达下降;特异性地抑制高糖下TXNIP的过度表达可以恢复胰岛素基因及MafA的表达.     

Kruppel样因子15通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3表达影响胰岛素抵抗实验研究

目的:探讨Kruppel样因子15(KLF15)是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达影响胰岛素抵抗。方法:建立小鼠模型和细胞模型，细胞蛋白电泳检测细胞内目的蛋白表达，聚合酶链反应(PCR)检测KLF15表达量，Western blot检测NLRP3相对表达量，免疫组化法检测组织KLF15表达，免疫荧光染色检测细胞增殖相关蛋白。结果:在链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠模型中，小鼠诱导后1～4个月，血清KLF15 mRNA表达量水平被抑制。用10、20、40 mmol/L葡萄糖诱导HepG2细胞24 h后，细胞内KLF15 mRNA表达量水平随葡萄糖浓度升高而减少(均P<0.05)。小鼠组织中，KLF15、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS1)在空白组表达最高，其次分别为1、2、4个月组；NLRP3在空白组表达最低，1、2、4个月组依次升高(均P<0.05)。在体外模型中，si-NLRP3质粒可以降低NLRP3表达量；抑制NLRP3表达可以减少干扰素-γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL...     

IGF-1和IGFBP-3在非小细胞肺癌患者血清和肺癌组织中的表达及意义

目的检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血清中的含量和肺癌组织局部的表达情况,探讨IGF-1和IGFBP-3与NSCLC发生发展的关系及其在NSCLC辅助诊断、危险性预测和治疗中的临床意义。方法运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺癌组和对照组患者外周血血清中IGF-1、IGFBP-3的水平;运用免疫组化方法检测肺癌组和对照组患者肺组织标本的IGF-1与IGFBP-3表达情况。结果肺癌组血清中IGF-1表达高于对照组(P<0.05),肺癌组血清中IGFBP-3的表达显著低于对照组(P<0.05),IGF-1在肺癌组织中的表达强于对照组(P<0.05),IGFBP-3在肺癌组织中的表达弱于对照组(P<0.05)。结论 NSCLC患者血清IGF-1、IGFBP-3表达在非小细胞肺癌的发生、发展及远处转移中有重要作用,检测其水平变化对肺癌的诊断、判断预后有重要意义。     

体外胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞生长的抑制作用

目的 观察胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞的影响及其对胰岛素样生长因子的调节作用。方法 MTT比色法观察IGFBP-1及与IGF-1预混后对脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)生长影响。结果 IGFBP-1对内皮细胞ECV304的生长具有抑制作用且与剂量成正比；预混后各组IGF-1促细胞生长作用明显被抑制。结论 IGFBP-1既可以直接也可以通过调节IGF-1抑制血管内皮细胞生长。     

Regulation of leptin on insulin secretion and sulfonulurea receptor 1 transcription level in isolated rats pancreatic islets

Objective To investigate the regulation of leptin on insulin secretion and expression of ATP-sensitive potassium channel subunit sulfonulurea receptor 1 (SUR1) mRNA, and to determine whether the effects of leptin are mediated through known intracellular signaling transduction.Methods Pancreatic islets were isolated by the collagenase method from male SD rats. The purified islets were incubated with different concentrations of leptin for 2 h in the presence of different concentrations of glucose. Insulin release was measured using radioimmunoassay. Expression of SUR1 mRNA was detected by RT-PCR.Results In the presence of leptin 2 nmol/L, insulin release was significantly inhibited at either 11.1 or 16.7 mmol/L glucose concentration (both P<0.05), but insulin release was not altered at glucose of 5. 6 mmol/L physiological concentration. The dose-response experiment showed that the maximal effect of leptin on insulin secretion achieved at 2 nmol/L. Exposure of islets to 2 nmol/L leptin induced a significan     

葡萄糖浓度波动对INS-1细胞胰岛素分泌的影响

目的初探葡萄糖浓度波动对大鼠胰岛素瘤INS-1细胞胰岛素分泌功能影响机制。方法将INS-1细胞随机分为正常糖组（5.5 mmol/L葡萄糖培养液培养）、持续高糖组（16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养）、波动组（用16.7 mmol/L葡萄糖培养液培养2 h,再换5.5 mmol/L培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmol/L的培养液中）、N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）＋正常糖组、NAC＋持续高糖组、NAC＋波动组,后3组的培养基中均预先负载终浓度为1.0 mmol/L的NAC,余干预措施相同,均干预72 h。荧光素酶方法检测细胞内三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）含量,放射免疫分析法测定胰岛素分泌水平。结果 INS-1细胞ATP含量及胰岛素分泌水平在持续高糖组及波动组均较正常糖组显著下降,且波动组下降更明显,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。NAC＋波动组及NAC＋持续高糖组细胞ATP含量及胰岛素分泌水平分别较波动组及持续高糖组显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论持续性高糖及波动性高糖损伤INS-1细胞的胰岛素分泌可能与减少细胞ATP含量有关,且波动性高糖较前者更严重,氧化应激可能是波动性高糖及持续性高糖导致INS-1细胞ATP减少的机制。     

PLCζ在INS-1细胞中的表达及功能初步分析

目的:探讨磷脂酶Cζ(Phospholipase Cζ,PLCζ)在INS-1细胞中的表达,并初步分析PLCζ对葡萄糖刺激胰岛素分泌(Glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响.方法:(1)设计6类PLC的引物,RT-PCR检测INS-1细胞中各类PLC的表达.(2)设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100 mmol/L,分别刺激INS-1细胞40 min,ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素的含量,确定最适葡萄糖刺激浓度,设定时间梯度:20、40、60、80、120min,以最适葡萄糖浓度刺激后ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定最适刺激时间.(3)用最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,半定量RT-PCR、Western Blot检测PLCζ 的表达变化.结果:(1)6类PLC中PLCβ、PLCγ、PLCζ、PLCζ、PLCη在INS-1细胞中表达,PLCε不表达.(2)用40 mmol/L 葡萄糖刺激60 min,INS-1细胞的胰岛素分泌量最大,半定量RT-PCR、Western Blot检测葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达上调.结论:(1)先前发现在精子中特异表达的PLCζ在INS-1细胞中有表达.(2)葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达明显增加,提示PLCζ可能参与GSIS信号转导.     

低糖状态对大鼠增食欲素及受体的影响

目的　研究急性葡萄糖水平的下降对大鼠下丘脑及培养胰岛细胞中增食欲素 (orexin)及其受体(OX1 R、OX2 R)的影响。方法　应用单次皮下注射胰岛素并伴 (或不伴 )禁食的方法 ,构建急性低血糖大鼠模型 ;体外原代培养胰岛细胞并调整培养液的葡萄糖浓度 (8 3mmol L及 2 8mmol L) ;应用反转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测下丘脑组织和胰岛细胞中orexin系统的变化。结果　在胰岛素 (伴禁食 )诱导的急性低血糖大鼠模型中 ,下丘脑orexin的mRNA表达较对照组增加约 1 5 0 % (P <0 0 1 ) ,OX1 R的mRNA表达减少 30 % (P <0 0 1 ) ,但是OX2 R的mRNA表达没有明显变化 (P >0 0 5 ) ;在培养胰岛细胞体外实验中 ,培养基中葡萄糖浓度由 8 3降至 2 8mmol L ,6h后胰岛细胞的orexinmRNA表达增加 1 0 0 % (P <0 0 1 ) ,而OX1 RmRNA表达对培养基中葡萄糖浓度的急性波动不敏感。结论　急性葡萄糖水平降低将刺激大鼠下丘脑中orexin的表达 ,其受体的变化相反 ;进食将会抑制orexin系统的这一反应。体外实验中发现培养胰岛细胞在葡萄糖浓度改变时发生类似变化     

胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞凋亡及小窝蛋白-1表达的影响

目的:探讨不同浓度的胰岛素对高糖条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡及小窝蛋白(caveolin,Cav)-1表达的影响?方法:体外培养HUVEC,分为A组(对照组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L)?B组(高糖组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L)?C组(高糖+低浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/+胰岛素浓度20 mU/L)?D组(高糖+高浓度胰岛素组,葡萄糖浓度33.3 mmol/L+胰岛素浓度1 000 mU/L)?采用流式细胞仪检测细胞凋亡比例及细胞周期,免疫组化检测HUVEC的Cav-1表达?结果:在高糖条件下,HUVEC凋亡比例显著升高,停滞于G0/G1期细胞增加,Cav-1表达减少;低浓度胰岛素使细胞凋亡比例减少,Cav-1表达增加;加入高浓度胰岛素不能改变细胞凋亡比例及细胞周期,Cav-1表达亦无明显改变?结论:低浓度胰岛素可抑制高糖导致的内皮细胞凋亡,而高浓度胰岛素无此作用,其机制可能与Cav-1表达有关?     

Effects of glucose and insulin on the H9c2 （2-1） cell proliferation may be mediated through regulating glucose transporter 4 expression

Background The change of glucose transporter 4 （GLUT4） expression could influence glucose uptake in the myocardial cells and then effect myocardial metabolism, which maybe one of the factor for the diabetes cardiovascular disease. This study aimed to explore the influence of glucose and insulin at different concentrations on H9c2 （2-1） cell proliferation and its GLUT4 expression in vitro, and evaluate the correlation between myocardial cells proliferation and GLUT4 expression. This might be helpful for understanding the relationship between glucose metabolism and cardiovascular disease. Methods According to glucose concentrations in culture medium, cultured H9c2 rat myocardial cells were divided into five groups： control group （NC, glucose concentration 5.0 mmol/L）, low glucose group （LG, glucose concentration 0.1 mmol/L）, high glucose group 1 （HG1, glucose concentration 10 mmol/L）, high glucose group 2 （HG2, glucose concentration 15 mmol/L）, high glucose group 3 （HG3, glucose concentration 20 mmol/L）. Then according to different insulin concentrations in culture medium, each group was further divided into two subgroups： normal insulin subgroup （INSc, insulin concentration 3.8 mU/L）, high insulin subgroup （INSh, insulin concentration 7.6 mU/L）. H9c2 （2-1） cells were cultured for 1, 2, 3 days, the proliferation of cells were assayed by cell counting Kit-8 assay, the expressions of GLUT4 mRNA and protein were detected with RT-PCR and Western Blotting technique, and the relation between myocardial cells proliferation and GLUT4 expression was evaluated.     

MicroRNA-181b对2型糖尿病胰岛素分泌调节的作用及其机制研究

目的 探讨microRNA-181b(miR-181b)能否通过靶向调控NDRG2参与2型糖尿病胰岛素分泌的调节。方法 选用小鼠胰岛β细胞进行体外传代培养,构建NDRG2野生型（NDRG2WT-1uc）与突变型（NDRG2MUT-1uc）荧光素酶报告基因质粒并进行转染,转染结束后进行双荧光素酶报告分析。构建NDRG2过表达和敲低质粒并转染小鼠胰岛β细胞,检测NDRG2 mRNA和蛋白表达、胰岛素分泌量。未转染的小鼠胰岛β细胞培养48 h后采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-181b和NDRG2 mRNA的表达。采用葡萄糖刺激的胰岛素释放试验检测5 mmol/L和20 mmol/L葡萄糖条件下的小鼠胰岛β细胞分泌的胰岛素。结果 (1)荧光素酶报告基因实验检测发现,各组相对荧光强度比较,差异有统计学意义（P <0.05）。miR-181b模拟物可以明显抑制NDRG2WT-luc的3’端非翻译区的表达,但对NDRG2-MUT组和Control组无明显影响;miR-181b inhibitor可以加强NDRG2WT-luc的3’-端非翻译区的表达,但对NDRG2-MUT组和Contr...     

硫代乙酰胺诱导的肝硬化大鼠生长激素/胰岛素样生长因子-1轴的变化

目的探讨硫代乙酰胺诱导的肝硬化大鼠GH/IGF-1轴的变化.方法设正常组大鼠6只、肝硬化组大鼠6只,测大鼠肝功能、血糖和血清GH、IGF-l、IGFBP-3水平,用RT-PCR法检测肝ALBmRNA、IGF-l mRNA、IGFBP-3 mRNA表达.肝组织行HE染色和Ki67免疫组化染色.结果肝硬化组大鼠血清AST、ALT、ALP明显高于正常组,血清TBIL、ALB、血糖两组间无明显差别,血清GH水平明显高于正常组,而血清ICF-1、IGFBP-3水平明显低于正常组,肝ALB mRNA、IGF-1mRNA、IG阳P-3 mRNA表达水平明显低于正常组.肝硬化组大鼠镜下见假小叶形成,肝Ki67指数明显高于正常组.结论肝硬化大鼠存在GH/IGF-1轴的变化.