2006-2017年贵州省脑膜炎奈瑟菌多位点序列分型北大核心

目的了解2006-2017年贵州省脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)分离株的血清群和基因型特征。方法采用细菌分离培养和多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)技术,对2006-2017年贵州省Nm分离株进行血清群复核鉴定,对Nm的7个管家基因序列进行检测以确定克隆群(Clonal complex,CC)和序列型(Sequence type,ST),并构建遗传进化图谱以分析菌株间进化关系。结果共获得33株Nm,其中A群15株(45.5%)、C群4株(12.1%)、B群3株(9.1%)、W135群7株(21.2%)、不可分群4株(12.1%);得到6种CC和9种ST。A群、C群、W135群菌株的ST/CC基因型分别以ST-7/ST-5 Complex/subgroupⅢ(93.3%)、ST-4821/ST-4821 Complex(75.0%)、ST-6933/ST-174 Complex(85.7%)为主,B群基因型较分散。ST-5 Complex、ST-174 Complex基因型相对稳定,ST-4821 Complex具有遗传多样性;ST-5和ST-4821为高致病性克隆群。结论2006-2017年贵州省Nm存在多种基因型流行,A群、C群分别以ST-7/ST-5 Complex、ST-4821/ST-4821 Complex为优势基因型,B群基因型分散且活跃;需持续加强Nm分子流行病学监测。     

2017年—2020年北京市朝阳区健康人群携带脑膜炎奈瑟菌分子特征分析

目的 对北京市朝阳区健康人群携带的脑膜炎奈瑟菌进行血清基因型和多位点序列分型研究，了解菌群病原学特征。方法 收集2017年—2020年北京市朝阳区健康人群咽拭子标本中分离的21株脑膜炎奈瑟菌，进行生化鉴定和种特异性基因复核，并采用real-time PCR方法进行血清基因分群，采用多位点序列分型方法对菌株进行分子分型，使用MEGA5.1软件构建系统进化树，分析分离株与全球高致病性克隆群的关系。结果 经鉴定21株菌均为脑膜炎奈瑟菌，血清群结果为B群11株，X群3株，不可分群7株。21株脑膜炎奈瑟菌共有16种序列型，其中14株属于4个已定义的克隆群，cc4821 (8株)、cc5(2株)、cc198(2株)、cc175 (2株),7株为无序列群，分别是ST-7962(2株)、ST-5586(3株)、ST-5613(1株)、ST-5863(1株)。基于管家基因序列的系统发生树，结果表明分离株ST型别多样化，存在全球高致病性克隆群cc4821和cc5,以B群cc4821为优势克隆。划为无序列群的2株B群的ST-7962分离株与cc4821关系较近，可能与B群分离株ST-4897(cc4821)...     

湖南省C群及W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征分型

目的了解湖南省C群和W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征。方法收集2006—2016年湖南省流行性脑脊髓膜炎患者的血液或脑脊液、患者密切接触者以及健康人群的咽拭子标本中分离到的脑膜炎奈瑟菌菌株,进行生化检测、血清学分群。选取其中的C群和W135群部分菌株进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型以及多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行分子分型,分析其流行病学特征。结果经生化和血清学确认后,选取22株C群脑膜炎奈瑟菌和9株W135群脑膜炎奈瑟菌进行药敏试验,结果显示对大部分检测抗菌药物全部敏感,但对复方磺胺甲口恶唑C群菌株全部耐药,而W135群菌株的耐药率为55.56%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=7.61,P=0.006)。经PFGE分型后,22株C群脑膜炎奈瑟菌共分为5种PFGE带型,其中5株HNC-01带型和13株HNC-02带型属同一亚型;2006年湖南省第1例C群患者分离菌株的PFGE带型为HNC-02,与2012、2013年患者以及患者密切接触者分离菌株的图谱完全一致,与带型为HNC-01的2008、2010、2013年的患者分离菌株仅有一个带型的差异,均属于优势带型。9株W135群脑膜炎奈瑟菌PFGE分型后共分为2个带型,其中首例患者与2013、2016年患者分离菌株的带型一致,均为HNW-01型。选取其中优势带型菌株经MLST后,结果 C群脑膜炎奈瑟菌为ST4821型,W135群脑膜炎奈瑟菌为ST11型,均属于脑膜炎奈瑟菌的高致病性克隆群。结论湖南省C群流脑和W135群流脑自首例病例出现后,各自都成为了该群病例的优势流行克隆群,C群流脑近年有减少态势,但出现了新的流行型别;W135群自2012年起成为我省新的流脑流行株,其优势菌株与国际上侵袭性的W群分型一致,可能引起新的大流行,应及时制定相应的防控政策。     

广东首株W135群流行性脑脊髓膜炎奈瑟菌的分子特征分析

目的 分析广东首次从患者脑脊液分离到的W135群流行性脑脊髓膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,N. meningitidis) 的分子特征.方法 复苏培养并用奈瑟菌生化鉴定系统(API NH)生化鉴定从患者脑脊液分离到的1株W135群N.meningitidis,以本地近年分离的1株C群和3株A群N. meningitidis 为对照;通过DNA序列测定分析外膜蛋白编码基因(porA、porB)可变区型别;通过多位点序列分型(multilocus sequence typing,MIST),采用Splits Tree在线软件分析进化关系,研究其分子特征.结果 该W135群N.meningitidis的porA可变区(va)型别为P1.5,2,属主要致病型别之一;porB的可变区Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ分别为1、1、1、17型,无可变区Ⅵ、Ⅷ;MIST等位基因谱为:2、123…4 38、4、6,序列型(ST)为2960,属ST-11/ET-37 克隆系.4株对照菌株porA的VR型别均为P1.20,porB可变区Ⅳ为7型,无可变区Ⅶ;C群对照株属ST-4821克隆系,3株A群属ST-5克隆系.结论 该W135群N.meningitidis的分子特征与国外分离株相同,而与本地流行的A群及C群菌株不同.     

广州市两例B群流脑病例分离株的MLST分型研究

目的对从广州市报告的两例B群流行性脑脊髓膜炎（流脑）病例中分离的4株脑膜炎奈瑟菌（Neisseria meningitidis,Nm）进行多位点序列分型（multi—locus sequence typing,MLST）研究。方法分纯并提取菌株DNA、运用MI。ST分析对7个管家基因进行扩增并测序,确定菌株的序列型,对其相关性进行分析。结果两例病例分离株7个管家基因位点序列均不相同,第一例病例分离株的序列型为ST-7型,属高致病性ST-5complex／subgroupIII克隆系;第二例病例分离株的序列型为新发现的ST一9804型。结论广州两例B群流脑病例虽然发生时间相近,但分属不同的序列型,无同源性。MLST分型技术对研究不同流脑病例间的流行病学关系有重要意义。     

2013年湖南省一起B群流脑聚集性疫情菌株分子分型分析

目的了解湖南湘西地区B群流脑聚集性疫情中病例及其密切接触人群中分离到的B群脑膜炎奈瑟菌的分子分型特征及其流行关系。方法对病例的血液标本及其密切接触者的咽拭子标本进行分离、培养及生化鉴定,确认为脑膜炎奈瑟菌后,对菌株进行血清学分群和药敏试验;采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)以及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法对菌株进行分子分型。结果共分离到3株B群脑膜炎奈瑟菌,均对复方磺胺甲恶唑(SXT)耐药,对青霉素(PEN)和氨苄青霉素(AMP)的药敏结果为中介度,对其他9种抗生素米诺环素(MIN)、头孢曲松(CRO)、头孢噻肟(CTX)、利福平(RIF)、阿奇霉素(AZM)、氯霉素(CHL)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LVX)和美洛培南(MEM)均敏感,PFGE结果显示3株菌株为同一带型,MLST结果显示3株菌株均为ST-4821 complex高致病克隆群。结论该起湖南湘西地区B群流脑聚集性疫情中病人与其密切接触者中分离到的B群脑膜炎奈瑟菌在分子分型实验中呈现高度一致性,提示为同一来源。流脑菌在湖南省的菌群已经发生变迁,带致病性克隆群的B群菌株可能成为优势菌株,引起流脑的暴发流行。     

合肥市2012～2013年W135群流脑病原学检测结果分析

目的了解2012~2013年合肥市W135群流脑死亡病例及密接接触者病原学特征。方法对送检的2份死亡病例和9份密切接触者标本进行生化鉴定、血清分群、PCR检测和药物敏感性试验。对阳性菌株中的管家基因采用多位点测序分型(MLST)进行DNA测序。结果实验室证实11份标本均为W135群脑膜炎奈瑟氏球菌;测序结果显示这11株阳性菌株均属于ST-11 complex/ET-37 complex克隆群,为ST-11型;5株菌株对萘啶酸、环丙沙星、磺胺甲基异恶唑耐药。结论合肥市流脑死亡病例和密切接触者分离到W135群脑膜炎奈瑟氏球菌,出现流脑菌群变迁。     

河北省2012年-2013年流脑病例病原学监测及分子分型研究

目的对河北省2012年-2013年流行性脑脊髓膜炎(流脑)病例病原学监测结果进行分析,了解脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)的菌群种类及分子分型特征。方法对2012年-2013年从流脑病例中分离的脑膜炎奈瑟菌菌株进行培养、生化鉴定、血清学鉴定、种属及分群的荧光定量PCR检测以及多位点序列分型(MLST)和por A基因分型研究;并对2012年-2013年流脑病例的脑脊液和血清标本进行种属、分群的荧光定量PCR检测及MLST分析。结果2012年-2013年,从流脑病例中共检测出B群5例,C群14例,W135群2例;MLST结果显示除1例没有所属的克隆群外,其余16例标本均属于ST-4821克隆群;6株Nm菌株的por A基因分属于不同的型别。结论河北省2012年-2013年流脑病例以C群为主,B群流脑呈现增长趋势,本省首次出现了W135群流脑病例,病例大都为高致病性ST-4821克隆群,提示应加强本省Nm的监测。     

广东省2003-2011年35株C群脑膜炎奈瑟菌多位点序列分析

流行性脑脊髓膜炎(流脑)近年来在广东省发病维持在低水平,但流行菌群有不断变迁趋势,B、C群菌株已成为主要致病菌群之一.本研究采用多位点序列分析(MLST),对2003-2011年广东省保存的35株C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)分离株开展分子流行病学研究,探讨菌株间遗传进化关系.     

广东省首例W135群流脑的病原学分析

目的 对2007年5月广东中山发现的1例W135流脑病例进行病原学分析.方法 标本进行常规鉴定、乳胶凝集、PCR鉴定、测序等,同时对菌株进行药敏试验.结果 该病例证实为W135群脑膜炎奈瑟菌引起的脑膜炎病例,采用多位点测序分型(MLST)对该株菌的基因组7个管家基因进行DNA测序,其序列型为ST-2960,属于ST-11/ET-37 complex序列群.该菌株对头孢噻肟、氨苄青霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑等药物均敏感.结论 该病例为广东省自20世纪70年代以来首次从脑脊液分离到病原菌的W135群流脑病例,提示我们要加强流脑病原学监测.     

云南省6株C群脑膜炎奈瑟菌分子生物学特征分析

目的了解云南省分离出的C群脑膜炎奈瑟菌的分子特征。方法对C群菌株进行脉冲场凝胶电泳分型（PF-GE）、多位点测序技术（MLST）分型。结果对6株C群脑膜炎奈瑟菌进行脉冲场凝胶电泳,发现6种带型;6株C群做了MLST分型,分属5种,有4种MLST在当时的数据库中未找。结论云南省C群脑膜炎奈瑟菌的基因具有高度多样性,且没有典型的流行菌群。     

Characterization of Neisseria meningitidis isolates from Egypt using multilocus sequence typing

To characterize Neisseria meningitidis isolates collected from cerebrospinal fluid of meningitis cases in Egypt (1998-2003) as part of surveillance studies, 67 isolates were serogrouped, tested for antibiotic sensitivity and analyzed using multilocus sequence typing (MLST). Results show that isolates expressing serogroup B (50.7%) and serogroup A (34.3%) antigens were predominant in Egypt during the surveillance period, possibly due to suppression of other serogroups by meningococcal vaccines in current use. Intermediate resistance to penicillin was observed in 71% of the isolates, suggesting a need for physicians to shift to third-generation cephalosporins during the empirical treatment of infection. Recurrent lineages of N. meningitidis in Egypt appear to originate from Europe and other Middle Eastern countries. Of 19 sequence types detected, five were unique to Africa and 10 were not observed previously in the MLST database. The information obtained illustrates the changing dynamics of meningitis after vaccine introduction in Egypt.     

山东省首例C群流行性脑脊髓膜炎死亡病例病原学分析

目的 对山东省首例C群流行性脑脊髓膜炎(流脑)死亡病例进行病原学分析.方法 对山东省首例C群流脑病例进行流行病学调查,标本采集,菌株分离、鉴定、血清学分群及药物敏感性检测,并进行脉冲场凝胶电泳(Pulse Field Gel Electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(Muhilocus Sequence Typing,MLST)分析.结果 山东省首次从流脑病人脑脊液中分离到C群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria Meningitidis,Nm),该菌株对环丙沙星、左氧沙星、复方新诺明耐药.PFGE分析为AH30型,MLST分析为ST-3200型.结论 从山东省首例C群Nm引起死亡病例的腩脊液中分离的菌株,其基因型为ST-3200型,是中国首次发现的C群ST-3200型菌株.应加强对C群Nm的监测,密切关注C群流腩的发病及流行趋势.     

The population structure of Neisseria meningitidis serogroup A fits the predictions for clonality.

The population structure of Neisseria meningitidis is supposedly epidemic according to. The model predicts that linkage disequilibrium in N. meningitidis populations is only temporary and arises due to the outgrowth of highly successful clonal genotypes from an essentially sexual population. These clones should disappear after a few years because of frequent recombination. In contrast, multilocus enzyme electrophoresis (MLEE) data had previously been interpreted as showing that serogroup A meningococci are truly clonal and possess only limited genetic variability (Wang et al., 1992). The two interpretations are contradictory. In order to elucidate the true population structure of serogroup A meningococci, we analyzed data for a representative group of 84 serogroup A isolates obtained by MLEE, random amplified polymorphic DNA (RAPD) and multilocus sequence typing (MLST). Analysis of linkage disequilibrium and bootstrap analyses of cluster analysis showed a strongly structured population with highly significant linkage disequilibrium. This was not due to the overrepresentation of certain genotypes, in contrast to the expectations for an epidemic population. The analyses identify two main clades, within each of which linkage disequilibrium was also highly significant, thus, excluding a cryptic speciation model. These observations support a population structure based on clonal evolution, in which clones are much more stable than expected for epidemic clonality. We propose that serogroup A meningococci may possess a different population structure from other serogroups of Neisseria meningitidis.     

The evolution of genetic structure in the marine pathogen, Vibrio vulnificus

Multi-locus sequence types (MLST) from a global collection of Vibrio vulnificus isolates were analysed for the contribution of recombination to the evolution of two divergent clusters of strains and a human-pathogenic hybrid genotype, which caused a disease outbreak in Israel. Recombination contributes more substantially than mutation to generating strain diversity. For allelic diversity within loci, the ratio of recombination to mutation events is approximately 2:1. The role of recombination relative to mutation in the generation of new MLST variants of V. vulnificus within the clusters is comparable to that of other highly recombining bacteria such as Neisseria meningitidis. However, across the divide between the two major clusters of V. vulnificus strains, there is substantial linkage disequilibrium, lower estimates for recombination rates and shorter estimates of recombination tract length. We account for these differences between V. vulnificus and N. meningitidis by attributing them to the presence of the unusual genetic structure within V. vulnificus. The reason for the presence of distinct and divergent genomes remains unresolved. Two possible explanations put forward for future study are first, ecologically based population structure within V. vulnificus and second, a recombination donor from a phenotypically differentiated species.     

中国脑膜炎奈瑟菌中插入序列1301的分布与分子流行病学研究

目的 研究中国脑膜炎奈瑟菌(Nm)中插入序列IS1301的分布与分子流行病学特征.方法 设计IS1301引物,应用PCR方法检测2007年1月至2008年10月收集全国16个省、市、自治区219株Nm菌株的IS1301,对IS1301扩增产物进行DNA测序和序列比对,PCR扩增IS1301阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析及核酸印迹杂交,研究不同Nm菌株中IS1301的分布特征.结果 219株Nm菌株中,34株携带IS1301(15.53%),A、B、C群和不可分群的Nm菌株IS1301阳性率分别为11.11%、20.75%、6.17%和28.57%;IS1301扩增产物测序结果与GenBank登记编号ZA9092.1的Nm菌株序列相似度为94%～100%,进化树分析可分为两簇;C群Nm菌株与其他血清群菌株IS1301序列存在较大差别;研究的Nm菌株基因组中至少存在6～17个IS1301拷贝,相同PFGE带型Nm菌株所携带的IS1301拷贝数具有多态性特征.结论 IS1301在中国Nm菌株中的分布具有遗传多态性.     

Multilocus sequence typing of Neisseria meningitidis directly from cerebrospinal fluid

MLST typing of Neisseria meningitidis directly from clinical material was introduced in the National Reference Laboratory for Meningococcal Infections in Prague. Four cerebrospinal fluid samples were obtained from patients with suspected meningococcal invasive disease. In all samples, all classical laboratory methods gave negative results and the only positive method was PCR, which revealed Neisseria meningitidis group C (two specimens) and group B (two specimens), respectively. MLST performed directly from cerebrospinal fluid revealed that the strains causing the two group C infections were of sequence type (ST) 11, while the two group B infections were characterized as ST-32 and ST-33 respectively. Multi-locus sequence typing of meningococci directly from clinical material offers the opportunity to improve further the surveillance of meningococcal disease and has now been introduced into the routine portfolio of tests employed at the national reference laboratory of the Czech Republic.     

中国流行性脑脊髓膜炎流行菌群变化趋势分析

目的研究中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同)流行性脑脊髓膜炎(流脑)流行菌群的变迁趋势。方法对中国1956~2006年分离的1 819株流脑菌株的血清群构成进行分析。结果1956~2002年的922株流脑菌株中,A群占69.20%,B群占27.55%,C群占0.97%,其它群2.28%。2003~2006年的897株流脑菌株中,A群占35.90%,B群占29.21%,C群占23.97%,其它群占10.92%。C群流脑病人来源菌株比例由0.88%上升至48.67%,A群流脑病例菌株比例由80.4%下降至50.44%。健康人群鼻咽部携带C群流脑菌株比例由1.07%上升至20.41%,A群由58.33%下降至33.80%。结论中国流脑病人及健康人群携带菌株中,C群流脑菌株的比例呈上升趋势,流脑流行菌群正在发生从A群到C群的变化。