血红素加氧酶1对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨血红素加氧酶1（HO-1）对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响及其可能机制。 方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）为正常对照。白蛋白对照组加去脂的小牛血清白蛋白（BSA）30 g/L共同培养。干预组先加钴卟啉（Cobalt protoporphyrin IX,CoPP,血红素加氧酶1诱导剂）5 μmol/L,0.5 h后再加入BSA 30 g/L,作用24 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测CoPP对BSA抑制NRK-52E细胞增殖的影响。细胞免疫荧光染色检测细胞凋亡率。RT-PCR法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax mRNA表达情况。 结果 与正常对照组比较,BSA对细胞增殖具有抑制作用并诱导细胞凋亡,差异有统计学意义（P < 0.05）,而CoPP对BSA引起的细胞毒性作用具有保护作用（P < 0.05）;BSA对照组HO-1 mRNA表达增加（0.44±0.06比0.39±0.05,P < 0.05),差异有统计学意义（P < 0.05）。CoPP预处理后,HO-1 mRNA表达（0.50±0.06）较BSA对照组增加（P < 0.05）。BSA可上调Bax mRNA表达(0.87±0.04比0.67±0.03,P < 0.05）及下调Bcl-2 mRNA的表达（0.25±0.04比0.42±0.02,P < 0.05),当加入CoPP预处理后可抑制上述改变（Bax mRNA：0.75±0.07,Bcl-2 mRNA：0.36±0.03,均P < 0.05）。 结论 BSA可显著增加细胞的凋亡率并直接调控凋亡相关蛋白mRNA的表达,CoPP可抑制上述BSA的作用。HO-1对BSA所致肾小管上皮细胞凋亡具有保护作用,可以抑制细胞凋亡。     

RNA干扰PLK1基因表达对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨靶向PLK1基因在肝癌基因治疗中的可行性。方法采用PLK1小干扰核糖核酸分子(siRNA)转染人肝癌HepG2细胞,分别以荧光实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因和蛋白的表达水平,观察PLK1 siRNA转染对肝癌细胞体外增殖的影响。并于转染不同时间后收集细胞,分别采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL方法检测肝癌细胞的凋亡情况。结果 PLK1基因明显抑制癌细胞体外生长(P0.05)。肝癌HepG2细胞经siRNA转染处理后,PLK1 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P0.05)。DNA电泳出现明显的梯度图谱;转染组癌细胞凋亡指数明显增加。结论 PLK1 siRNA转染可明显抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。本结果为肝癌以PLK1基因治疗提供了一条新的思路。     

TGF—β1对人前列腺上皮细胞增殖与凋亡的调节作用

目的 观察TGF－β对体外培养人前列腺上皮细胞增殖与凋亡的调节作用。方法 建立原代人前列腺上皮细胞株13例,角化蛋白PSA等免疫组织化学染色鉴定培养细胞,绘制细胞生长曲线,运用BrdU方法和细胞凋亡原位染色观察传后细胞生长状况及不同剂量TGF－β1对细胞增殖与凋亡的作用。结果 培养细胞角色蛋白、PSA染色阳性。TGF－β1抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用与剂量成正比,EGF与TGF－β1相互减弱对方的作用。结论 TGF与TGF－β1对前列腺上皮细胞增殖与凋亡状态起重要的调节作用。     

牛磺酸减轻碘海醇诱导的人肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨牛磺酸能否减轻碘海醇导致的HK-2细胞（人近端肾小管上皮细胞）损伤及作用机制。 方法 不同碘浓度（25、50、100、125 gI/L）的碘海醇作用HK-2细胞6 h;碘浓度为100 gI/L的碘海醇作用HK-2细胞不同时间（2 h、4 h、6 h）,观察细胞损伤程度。选用碘海醇（100 gI/L、6 h）作为刺激组,用不同浓度牛磺酸（3、12、24 mmol/L）共孵育进行干预。细胞增殖-毒性试剂盒（CCK-8）测定细胞活力。Hoechst33342染色、荧光显微镜下观察细胞凋亡形态。流式AnnexinⅤ-FITC-PI双染和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性比色法观察细胞凋亡。Western印迹检测Bcl-2、Bax的表达。流式DCFH-DA细胞内标记法测定细胞内活性氧（ROS）。 结果 碘海醇呈碘浓度和时间依赖性诱导HK-2细胞活力下降、凋亡增加（P ＜ 0.05）。碘海醇（100 gI/L、6 h）导致HK-2细胞ROS升高（P ＜ 0.05）。牛磺酸呈浓度依赖性增加HK-2细胞活力,减轻凋亡。牛磺酸（3、12、24 mmol/L）干预组与碘海醇刺激组比较,细胞活力分别为（88.0±1.00）%、（91.33±0.58）%、（95.67±1.52）%比（76.67±1.53）%（均P ＜ 0.05）;细胞凋亡率分别为（8.84±1.75）%、（7.86±1.82）%、（6.30±1.50）%比（11.98±0.39）%（均P ＜ 0.05）;caspase-3的活性分别为（1.33±0.10）、（1.27±0.0）、（1.10±0.04）比（1.42±0.1）（均P ＜ 0.05）。牛磺酸上调HK-2细胞Bcl-2表达,降低了细胞内ROS的升高（均P ＜ 0.05）。 结论 碘海醇可致HK-2细胞凋亡增加。氧化应激参与了HK-2细胞损伤。牛磺酸通过减轻细胞内氧化应激、促进Bcl-2表达上调,减轻碘海醇诱导的HK-2细胞凋亡和损伤。     

肾移植急性排斥反应中肾小管上皮细胞凋亡的观察

目的 探讨肾移植急性排斥小以细胞凋亡与移植排斥的关系。方法 选用近交系ＤＡ大鼠,ＬＥＷ大鼠进行原位左肾移植。实验组：异基因移植组（ＤＡ－ＬＥＷ）,对照组;基因移植组（ＬＥＷ→ＬＥＷ）。于手术后第２、４、６天分别取移植肾进行病理学检查及电镜扫描,采用ＴｄＴ介导的脱氧核苷酸原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测移植肾脏中的凋主血清肌酐水平。结果 病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第２、４、６天分别发生轻、中     

红细胞生成素对高糖诱导肾小管细胞凋亡的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）是否可以抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡及其相关机制。 方法 传代培养大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分为正常对照组（NC组）、渗透浓度对照组（OC组）、高糖组（HG组）、高糖+EPO 50 U/ml组（E1组）和高糖+EPO 100 U/ml组（E2组）。免疫荧光检测NRK-52E细胞有无EPO受体（EPOR）表达。Western印迹检测高糖对EPOR表达的影响。流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡指数。荧光探针CM-H2DCFDA检测细胞内活性氧（ROS）的水平。RT-PCR检测bcl-2、bax、capases-3 mRNA的表达。 结果 （1）NRK-52E细胞表达EPOR,且高糖可刺激EPOR表达增加。（2）高糖可诱导NRK-52E细胞凋亡,与葡萄糖相同渗透浓度的甘露醇不能明显诱导细胞凋亡。E1、E2组细胞早、晚期凋亡率显著低于HG组（P < 0.05）。（3）高糖刺激 NRK-52E细胞后,细胞内ROS产生增多,bcl-2 mRNA的表达下调,bax、caspase-3 mRNA的表达上调。EPO可以抑制细胞内ROS的产生,上调bcl-2 mRNA 表达,下调bax、caspase-3 mRNA 表达。 结论 EPO可能通过EPOR的介导,缓解高糖诱导的氧化应激,上调bcl-2 mRNA表达,下调bax、caspase-3 mRNA表达,抑制NRK-52E细胞凋亡。     

Wilms瘤1基因在肾小管上皮细胞转分化中的表达及作用

目的 探讨Wilms 肿瘤1基因(WT1)在肾小管上皮细胞(TEC)向肌成纤维细胞转分化中的可能作用&#65377;方法 将体外原代培养TEC分别置含IL-1α(10 ng/ml)&#65380; IL-1α+抗WT1中和抗体(10 μg/ml)的DMEM/F12培养基中培养, 观察TEC的形态变化及免疫学特征&#65377;采用RT-PCR检测各组TEC中WT1及α-SMA的表达&#65377;结果 经IL-1α掺入培养5 d后,体外培养的TEC形态特征趋于成纤维细胞化,细胞拉长&#65380;梭形变,失去原有的呈铺路石样的生长方式&#65377;电镜下细胞极性丧失,表面微绒毛消失&#65377;正常情况下,成年TEC不表达WT1&#65377;经IL-1α掺入培养1 d后,TEC重新表达WT1,同时伴有α-SMA的表达;3 d后WT1表达消失,呈一过性特征,而α-SMA的表达则随时间的延长而逐渐增强&#65377;在培养中掺入抗WT1抗体以中和WTl基因产物后,尽管仍给予IL-1α刺激,TEC大都保持原有特征不变,α-SMA及WT1 mRNA仅呈微弱表达&#65377;结论 高浓度IL-1α可导致TEC向肌成纤维细胞的转分化&#65377;在TEC的转分化过程中,WT1基因的重新&#65380;一过性表达可能起着重要作用&#65377;成年TEC重新获得WT1表达,可能是其发生转分化的内在启动机制&#65377;体外中和WT1的基因产物可明显抑制TEC的转分化进程,并可能籍此影响肾脏的纤维化发生&#65377;     

脯氨酸羟化酶2 siRNA对抗霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨是否脯氨酸羟化酶2 (PHD2) siRNA 通过减少缺氧诱导因子(HIF)1的降解而减轻缺氧引起的肾小管上皮细胞凋亡。方法 构建针对人PHD2的表达质粒,将其转染到培养的人肾小管上皮细胞系(HKC)中。用RT-PCR方法观察其对PHD2表达的抑制作用。Western印迹观察HIF-1α的表达。培养的HKC细胞分为对照组、模型组和siRNA组、siRNA组经PHD2 siRNA转染后与模型组同时用抗霉素诱导,用Western印迹方法观察3组细胞HIF-1α的表达,用流式细胞仪观察3组细胞的凋亡情况。 结果 经PHD2 siRNA转染的HKC细胞PHD2 mRNA表达明显下调(P < 0.01),HIF-1α蛋白表达明显上调(P < 0.05)。经抗霉素处理后,模型组和siRNA组HIF-1α蛋白表达均明显高于对照组(P < 0.01),但siRNA组HIF-1α蛋白表达高于模型组(P < 0.05。与模型组相比,siRNA组细胞凋亡明显减轻(P < 0.05)。 结论 通过RNA干扰技术抑制PHD2的表达可以增强HKC细胞HIF-1的蛋白表达,从而增强其在缺氧条件下的抗凋亡能力。     

小檗碱预先给药对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨小檗碱预先给药对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 培养人肾小管上皮细胞(HK-2),以1×106个/ml密度接种于培养皿(2 ml/皿)和96孔培养板(200μl/孔),采用随机数字表法,将其分为4组(n=30):正常对照组(C组)、小檗碱组(B组)、缺氧/复氧组(H/R组)和缺氧/复氧+小檗碱组(H/R+B组).B组和H/R+B组加入10 μmol/L小檗碱孵育2h,随后H/R组和H/R+B组进行缺氧24h复氧3h.测定细胞活力、细胞凋亡率、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、caspase-3、活化caspase-3、细胞色素c、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达,并计算Bax表达与Bcl-2表达的比值(Bax/Bcl-2).结果 与C组比较,H/R组和H/R+B组细胞活力、SOD活性和caspase-3表达降低,细胞凋亡率、MDA浓度和Bax/Bcl-2升高,活化caspase-3、细胞色素c、GRP78和CHOP表达上调(P＜0.05),B组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与H/R组比较,H/R+B组细胞活力、SOD活性和caspase-3表达升高,细胞凋亡率、MDA浓度和Bax /Bcl-2降低,活化caspase-3、细胞色素c、GRP78和CHOP表达下调(P＜0.05).结论 小檗碱预先给药可抑制缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡,其机制与抑制线粒体应激通路和内质网应激通路有关.     

N-乙酰半胱氨酸对碘海醇诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对碘海醇引起人肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的保护作用及机制。 方法 将体外培养的HK-2细胞分为4组：对照组、碘海醇组、NAC组、NAC预处理＋碘海醇共作用组。用细胞增殖/毒性检测法（CCK-8）测定细胞存活率;核染色、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;二氯二氢荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）荧光结合流式细胞法检测细胞内活性氧（ROS）的产生;免疫荧光（IF）、Western印迹法检测相关信号转导途径。 结果 碘海醇呈剂量和时间依赖性诱导HK-2细胞凋亡,降低细胞存活率。碘海醇使细胞内ROS升高至对照组的1.3倍。NAC（5、10、15 mmol/L）预处理与碘海醇共作用后, HK-2细胞存活率分别增至104%、118%、130%,与碘海醇组（63%）差异有统计学意义（P < 0.05）;凋亡率分别降为13.51%、13.46%、12.23%,与碘海醇组（24.41%）差异亦有统计学意义（P < 0.05）;活性氧分别降为对照组的1.05、0.93、0.86倍,与碘海醇组（对照组的1.3倍）差异亦有统计学意义（P < 0.05）。碘海醇作用于HK-2细胞,引起p53磷酸化,上调Bax,下调Bcl-2的表达,促进线粒体内细胞色素C（CytC）释放到胞质,进而引起半胱天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3活化,导致细胞凋亡。NAC降低细胞内ROS浓度,下调Bax表达,上调Bcl-2表达,减少caspase-3活化,从而减轻细胞损伤。 结论 碘海醇增加细胞内ROS生成,引起p53磷酸化,进而影响Bcl-2家族蛋白表达,促进CytC从线粒体释放和激活caspase-3信号通路,导致细胞凋亡。NAC通过清除氧自由基,降低细胞内ROS浓度,进而减轻碘海醇诱导的氧化应激所致细胞损伤及凋亡。     

马兜铃酸诱导的人肾小管上皮细胞凋亡的可能机制

目的 探讨马兜铃酸(AA)诱导人肾小管上皮细胞株(HK-2)凋亡的可能机制.方法 (1)应用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测AA的细胞毒作用.(2)应用Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡指数(AI).(3)应用RT-PCR观察细胞p53 mRNA表达.(4)应用分光光度法检测细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性.结果 (1)80,160μg/ml浓度AA刺激细胞48h后,LDH释放率显著性增高(P＜0.01).(2)20、40μg/mL浓度AA刺激细胞48h后,可明显抑制细胞生长并诱导其凋亡.(3)AA诱导细胞凋亡时,p53 mRNA表达无明显变化(P＞0.05).(4)AA诱导细胞凋亡时,Caspase-3酶活性显著升高(P＜0.01).结论 体外条件下,AA可明显抑制HK-2细胞生长并诱导其凋亡;AA诱导HK-2凋亡途径可能是非p53依赖途径;凋亡过程中存Caspase-3酶的激活.     

CD131在促红细胞生成素抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 检测大鼠肾小管上皮细胞是否表达CD131并探讨其在促红细胞生成素(EPO)抑制大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用.方法 传代培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,将NRK-52E细胞随机分为正常对照组、高糖组、高糖+EPO组、高糖+EPO+Scramble siR-NA 组、高糖+EPO+EPO受体(EPOR)siR...     

全反式维甲酸对大鼠肾小管上皮细胞缺氧性损伤保护作用的体外研究

目的 探讨全反式维甲酸(atRA)对大鼠肾小管上皮细胞缺氧性损伤的保护作用及其相关机制.方法 对大鼠肾小管上皮细胞进行体外培养,根据研究需要分四组,分别为对照组、CoCl2刺激组、atRA刺激组以及CoCl2与atRA共同刺激组,做如检测:用凝胶电泳迟滞分析(EMSA)测定各组别细胞NFκB活性,用qRT - PCR和Western blo分别检测各组别细胞NFκB亚单位p65,Scpep1、VEGF mRNA与蛋白表达水平,用免疫共沉淀检测NFκB亚单位p65与Scpep1相互作用.结果 CoCl2刺激组中VEGF mRNA与蛋白水平的表达明显高于对照组(P＜0.01).atRA刺激组中VEGF的mRNA与蛋白水平表达明显低于对照组(P ＜0.05).CoCl2刺激组中p65 mRNA与蛋白水平的表达明显高于对照(P＜0.01).atRA刺激组中VEGF 的mRNA与蛋白水平表达明显低于对照组(P＜0.05).共同刺激组中p65的表达受到抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).CoCl2刺激组中NFκB的DNA结合力明显高于正常组(P＜0.01).而atRA刺激组中NFκB的DNA结合力受到显著抑制,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).在共同刺激组,NFκB的活性同样受到抑制,与对照组比,差异有统计学意义(P＜0.05).atRA刺激组中Scpep1mRNA与蛋白水平的表达水平显著高于对照组(P＜0.01).与对照组比较,CoCl2刺激组中Scpep1的mRNA与蛋白水平表达无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).免疫沉淀结果显示,p65与Scpep1存在相互关联.结论 atRA通过Scpep1对NFκB复合物形成及其活性产生抑制效应,从而减弱VEGF的表达,对缺氧性损伤的肾小管上皮细胞发挥保护作用.     

A20转染对大鼠肾脏缺血再灌注后肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 观察和分析A20基因转染对大鼠肾脏缺血再灌注后诱发的肾小管损伤及凋亡的影响。 方法 通过构建人源的A20基因表达载体pcDNA3.1-A20及空质粒载体pcDNA3.1,并将其表达载体及pcDNA3.1空质粒载体转化到感受态大肠杆菌。大肠杆菌采用固体LB培养基划盘,37℃恒温培养箱培养12～16 h,挑取单菌落,接种于5 ml 含氨苄青霉素的LB液体培养基中,置37℃恒温摇床,转速210 r/min,培养12～16 h,后接种于200ml含氨苄青霉素的LB液体培养基中继续培养12～16 h,提取质粒DNA,并对其进行1%琼脂糖凝胶电泳,以确定是目的基因。雄性SD大鼠24只,随机分为3组：生理盐水组、A20组、空质粒组,每组8只大鼠。术前48 h,脂质体Lipofectamine 2000包裹DNA,即脂质体pcDNA3.1-A20 + 生理盐水至250 ul (15 ul脂质体加10 ug构建的质粒DNA混匀后加入生理盐水至250 ul)、脂质体-pcDNA3.1 + 生理盐水至250 ul (方法同上), 混匀室温静置30min,分别通过大鼠尾静脉注射。手术方法：打开腹腔,分离左侧肾脏动脉和静脉,夹闭左侧肾脏动静脉45 min,观察大鼠左侧肾脏缺血后颜色变化,期间行右肾切除术,后左侧肾血管再灌注,制成大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型。术后24 h收获大鼠,采用全自动生化分析仪检测肾功能,肾组织HE染色行病理学检测,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡的情况。 结果 A20组Scr、BUN水平明显低于空质粒组和生理盐水组（P均 ﹤0.05）,差异有统计学意义。各组肾小管都有不同程度的损伤,A20组与生理盐水组及空质粒组比较,肾小管扩张,肾小管上皮细胞刷状缘脱落、坏死,蛋白管型等肾脏组织病理损伤明显减轻（P均 ﹤0.05）,差异有统计学意义;空质粒组与生理盐水组比较,差异无统计学意义（P＞ 0.05）。肾小管上皮细胞凋亡多见于远端小管,A20组与生理盐水组和空质粒组比较,凋亡细胞数明显减少,差异有统计学意义（P均 ﹤0.05）;生理盐水组和空质粒组比较无显著性差异（P ＞0.05）。 结论 A20基因转染能明显减轻肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。     

Polo样激酶1在结肠直肠癌组织中的表达及其在结肠直肠癌细胞增殖中的作用

目的：探讨Polo样激酶1（PLK1）在结肠直肠癌组织中的表达及体外RNA干扰抑制plk1对结肠直肠癌细胞增殖的影响。方法：应用免疫组化法测56例结肠直肠癌病人的癌组织和癌旁正常组织中PLK1及PCNA的表达;用Western印迹法测肠癌主要细胞株中PLK1的表达;针对plk1基因设计3条小干扰RNA片段,瞬时转染高表达结肠直肠癌细胞株,采用实时定量PCR及Western印迹法测转染后PLK1的基因及蛋白的表达水平;CCK-8法测细胞增殖能力。结果：结肠直肠癌组织中PLK1、PCNA的表达明显高于癌旁正常组织（P〈0.05）,两者的表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度均有相关性（P〈0.05）,且两者间的表达呈正相关（P〈0.05）。Western印迹法筛选出SW1116细胞株PLK1表达最高,下调PLK1表达后,其增殖能力较对照组都有所下降（P〈0.05）。结论：PLK1在结肠直肠癌组织中呈过表达,可能在结肠直肠癌细胞增殖调节失衡中起重要作用,并进一步促进其迁移和浸润,其有望成为评估结肠直肠癌进展及预后的一个重要指标。     

内皮素-1对高糖溶液培养下肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨内皮素-1对高糖溶液培养肾小管上皮细胞转分化的影响和可能的机制.方法 采用甲基噻唑法检测0.1～1 000 nmol/L内皮素-1对肾小管上皮细胞增殖的影响.采用无小牛血清的低糖DMEM培养基（一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基）同步化肾小管上皮细胞24 h,分为4组,分别采用低糖DMEM、高糖DMEM、高糖DMEM加100 nmol/L内皮素-1、高糖DMEM加100 nmol/L内皮素-1和转化生长因子-β1中和抗体培养肾小管上皮细胞.分别检测肾小管上皮细胞内转化生长因子-β1、α-平滑肌肌动蛋白和E-钙黏蛋白mRNA和蛋白的表达.结果 0.1～1 000nmol/L内皮素-1对肾小管上皮细胞增殖无明显影响,内皮素-1明显上调大鼠近端肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白mRNA和蛋白表达,下调E-钙黏蛋白mRNA和蛋白的表达;内皮素-1明显升高大鼠近端肾小管上皮细胞转化生长因子-β1 mRNA和蛋白的表达;转化生长因子-β1中和抗体干预后,大鼠近端肾小管上皮细胞表达的E-钙黏蛋白和mRNA明显高于内皮素-1组,而α-平滑肌肌动蛋白和mRNA明显低于内皮素-1组.结论 糖尿病肾脏病中,内皮素-1可促进肾小管上皮向肌成纤维细胞及间质细胞转分化,可能通过转化生长因子-β1发挥作用.     

PLK1基因siRNA的构建及对甲状腺未分化癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 构建保罗样激酶-1(PLK1)基因小干扰RNA(siRNA),并观察其对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计合成5个PLK1 siRNA(S1、S2、S3、S4、S5),转染人甲状腺癌ARO细胞后,采用实时定量RT-PCR方法筛选下调PLK1 mRNA效果最好的siRNA;然后以该siRNA转染ARO细胞后,分别以实时定量RT-PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因表达情况;以MTT法检测对各组细胞增殖的影响;分别以caspase-3活性和TUNEL方法明确甲状腺癌细胞凋亡情况.结果 5个siRNA均明显下调PLK1 mRNA水平,以S4效果最好,抑制率达91.5%.MTr结果显示,S4 siRNA转染对甲状腺癌细胞增殖均有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05).与对照组比较,S4 siRNA转染组癌细胞caspase-3活性明显升高,且呈浓度和时间依赖性(r=0.919;r=0.957);TUNEL结果显示,S4 siRNA转染组出现明显的凋亡现象,且呈浓度依赖性(r=0.932).结论 PLK1基因在甲状腺未分化癌细胞增殖中具有重要的调控作用.PLK1 siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖,诱导凋亡是其重要机制之一.     

重组大鼠肝再生增强因子对肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR）对体外培养的肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞株（HK2）分组，分别加入不同浓度的庆大霉素（GM）或（和）m～LR，^3H-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）掺入法检测HK2细胞的增殖：吖啶橙／溴乙啶（AO／EB）染色和钙磷脂结合蛋白／碘化丙啶（annexin V／PI）双标记流式细胞术检测上述各组HK2细胞的凋亡。结果（1）rrALR对常规培养条件下的HK2细胞有直接的促增殖作用。并具有量效关系（在25ng／ml～50μg／ml的浓度范围内逐渐增强，P〈0．01）和时效关系（培养12h即有该作用，48h达到高峰，以后逐渐下降，P〈0．05）；（2）rrALR能够促进GM损伤后的HK2细胞增殖，有明显剂量依赖性（P〈0．05）；（3）rrALR呈剂量依赖性抑制GM诱导的HK2细胞凋亡（P〈0．01）。结论rrALR能够促进体外常规培养和GM损伤后的肾小管上皮细胞增殖．抑制GM诱导的小管上皮细胞凋亡，提示ALR可能对小管上皮细胞的中毒性损伤有改善作用。