糖尿病大鼠和高糖饮食大鼠肾脏TGF-β1的表达以及形态学变化

目的 探讨高血糖对糖尿病性肾病肾组织中TGF-β1表达与形态学变化的作用.方法 用胰岛素拮抗剂链脲佐茵素(streptozotocin,STZ)复制糖尿病模型,另设高糖饮食大鼠以及正常大鼠为对照.试验16周后检查动物,测定血糖及尿蛋白;观察肾脏组织学变化及超微结构变化;用免疫组化法及Western blot技术检测肾组织TGF-β1蛋白的表达.结果 链脲茵素腹腔注射成功地建立了糖尿病性肾病模型,大鼠血糖浓度显著升高,胰岛缩小,胰岛细胞减少.肾脏:光镜下可见肾小球系膜基质及细胞弥漫增生,肾小管呈灶性萎缩,问质胶原轻度沉积;电镜下见肾小球毛细血管基底膜增厚,节段性加重呈杵状,足突融合、消失,结构不清,系膜基质增多,系膜细胞增生,系膜区扩大,肾小球囊增厚,肾间质胶原沉积.免疫组化显示肾脏组织生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的阳性表达面积明显高于对照组.Western blot结果显示肾组织中TGF-β1蛋白表达的条带灰度强度相应提高.高糖饮食组大鼠血糖持续升高,肾脏显示相似的变化,但程度较轻,TGF-β1蛋白的表达较正常对照组强,但较糖尿病组轻.结论 糖尿病大鼠和高糖饮食大鼠肾组织中TGF-β1的表达增强,肾脏出现糖尿病相应的形态变化,血糖水平升高和肾脏TGF-β1蛋白表达程度与病变程度呈正相关,再次证明高血糖是启动糖尿病性肾病的始动因子.     

补肾益寿片对Thy-1系膜增生性肾炎大鼠肾功能及TGF-β1表达的影响

目的探讨补肾益寿片对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾功能及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法采用免疫法制备系膜增生性肾小球肾炎大鼠模型,测定大鼠24 h尿蛋白定量、血生化指标,光镜下观察肾组织病理形态学改变,并应用免疫组化方法检测各组大鼠肾组织中TGF-β1的表达。结果模型组与正常对照组比较,24 h尿蛋白定量、Scr、BUN及TGF-β1表达明显升高(P<0.01);补肾益寿片组24 h尿蛋白定量、Scr、BUN及TGF-β1均明显低于模型组(P<0.05);肾组织形态学观察显示补肾益寿片组个别区域肾小球系膜细胞轻度增生,系膜区轻度增宽,管腔无挤压现象,较模型组明显改善。结论补肾益寿片能降低系膜增生性肾小球肾炎大鼠蛋白尿、Scr、BUN及TGF-β1水平,减轻系膜细胞增生和系膜外基质增加,延缓或减轻肾组织损伤,保护肾功能。     

糖尿病大鼠肾组织VEGF和TGF-β1的动态表达及意义

目的动态观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织中血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况,探讨它们在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用及其相互关系。方法实验动物随机分为5组,依病程长短分为:(1)A组(2周组);(2)B组(4周组);(3)C组(8周组);(4)D组(16周组);(5)E组(24周组),每组分别设有正常对照组(N组)和糖尿病组(DM组)。注射STZ法复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学方法检测肾组织VEGF、TGF-β1及纤连蛋白(FN)的表达;PAS染色光镜观察肾小球系膜、肾小管基底膜变化及细胞外基质沉积情况等的形态学改变;生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量。结果(1)正常对照组大鼠肾组织VEGF和TGF-β1均有少量表达,而糖尿病大鼠肾组织两者的表达均显著高于正常对照组。(2)糖尿病16周时肾组织VEGF表达与TGF-β1呈正相关。(3)随糖尿病进展,细胞外基质纤连蛋白(FN)在肾小管及肾小球表达增多,24h尿蛋白也增多,并且VEGF、TGF-β1两者都分别和FN、24h尿蛋白呈正相关性。结论糖尿病肾病大鼠肾组织中VEGF及TGF-β1参与了早晚期蛋白尿及肾脏肥大硬化的发生,并且VEGF和TGF-β1相互作用,共同促进了肾病的发生发展。     

α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1在系膜增生性肾炎大鼠中的表达及补肾中药的保护作用研究

目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β1(TGF-β1)在系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织中的表达及补肾益寿片对肾脏的保护作用.方法 采用免疫法制备系膜增生性肾小球肾炎大鼠模型,测定大鼠24 h尿蛋白定量、血生化指标,并应用免疫组化方法检测各组大鼠肾组织中α-SMA及TGF-β1的表达情况.结果 模型...     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠TGF-β_1和Smad2表达的影响

目的探讨柴芩肾安方对IgA肾病(IgAN)大鼠肾组织转化生长因子β_1和Smad2表达的影响。方法采用灌服并静脉注射牛血清白蛋白复合感染葡萄球菌肠毒素B的方法制成大鼠IgAN模型,并用柴芩肾安方治疗,以氯沙坦为对照。第15周末,观察肾小球形态学变化和免疫复合物的沉积情况;免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应并结合计算机图像分析,分别检测肾组织TGF-β_1和Smad2蛋白及其mRNA的表达水平。结果模型组大鼠肾组织TGF-β_1和Smad2蛋白及其mRNA表达较正常组均明显升高(P<0.01);柴芩肾安方组大鼠上述指标较模型组均明显降低(P<0.01)。结论柴芩肾安方能够抑制肾组织TGF-β_1和Smad2蛋白及其mRNA的表达,从而延缓IgAN肾脏病变的慢性进展。     

免疫球蛋白A肾病中免疫球蛋白A与乙型肝炎病毒抗原关系的研究

目的观察免疫球蛋白A肾病(IgAN)肾组织中的IgA与乙型肝炎病毒(HBV)抗原(HBVAg)及血清IgA之间的关系。方法用免疫荧光双套染技术配合激光共聚焦显微镜观察IgA在66例不同类型IgAN肾小球中的沉积量;免疫组织化学二步法检测66例IgAN肾组织HBV表面抗原(HBs Ag)、HBV核心抗原(HBc Ag),对比研究IgA沉积量与HBVAg感染及血清IgA的关系。结果免疫荧光双套染法显示IgA主要在肾小球系膜区、少量在毛细血管袢呈颗粒状沉积;HBVAg阳性的肾组织IgA沉积量明显高于HBVAg阴性组(P<0.05)与对照组(P<0.05),且与肾脏病变程度有关。IgA肾病肾组织中IgA沉积量与血清IgA差异无统计学意义。结论 HBVAg阳性的IgA肾病肾组织IgA沉积量与IgA肾病发展存在一定的关系,血清IgA浓度的高低可能不是IgA肾病发生的决定性因素。     

血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂在IgA肾病中的应用

IgA肾病(IgA nephropathy，IgAN)为一免疫病理诊断名称，指IgA或以IgA为主的免疫球蛋白弥漫沉积在肾小球系膜区及毛细血管袢引起的一系列临床症状及病理改变。除IgAN外，一些全身性疾病也可以合并IgA在肾小球系膜区沉积及引起相应的临床症状，如：系统性红斑狼疮，过敏性紫癜等疾病。前者通常称为原发性IgAN，后者则称为继发性IgAN。     

黏膜免疫微环境对IgA肾病影响及中医认识

IgA肾病(Immunoglobulin A nephropathy,IgAN)是全球常见的一类原发性肾小球疾病,临床常以血尿、蛋白尿、肾功能损伤为常见表现,其诊断金标准是肾脏活检,表现为肾小球系膜区IgA等免疫复合物沉积[1].IgAN 常见于青年人群,部分患者预后较差,至少15％～40％的患者于10～20年内进展至...     

贝那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad4表达的影响

目的研究贝那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad4表达的影响.方法用链脲佐菌素诱导的Wistar糖尿病大鼠为模型,随机分为N组、DM组和DM-B组3组,于给药8周后处死,检测各组大鼠的平均动脉压、血糖、肾功能指标及24小时尿蛋白.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1及Smad4 mRNA表达水平.采用免疫组织化学方法检测TGF-β1及Smad4蛋白定位的表达,并用彩色病理图像分析系统进行定量分析.结果与对照组相比,糖尿病大鼠平均动脉压、血糖、肾功能指标及24小时尿蛋白排出均增加;肾小球细胞外基质(ECM)明显增多、系膜区扩大(PAS染色);TGF-β1及Smad4 mRNA表达上调;TGF-β1及Smad4蛋白的表达明显增加.贝那普利治疗后上述指标明显减轻(P＜0.01).结论TGF-β/Smad通路在糖尿病肾病时是激活的,贝那普利治疗可延缓肾脏损害.     

肝细胞生长因子 转化生长因子-β_1在IgA肾病肾组织的表达及意义

目的对IgA肾病肾组织进行肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子(TGF)-β1水平测定,探讨其与IgA肾病肾脏病理分型、Katafuchi评分及临床指标的关系。方法①76例IgA肾病患者肾脏组织被分为轻度系膜增生(A组)、中到重度系膜增生(B组)、局灶增生或增生硬化性IgA肾病(C组)3组;②采用Katafuchi的半定量标准评分,计算相应的肾小球总积分、系膜增生程度积分、球性硬化积分、血管积分;③检测患者的血压、尿蛋白定量(24h)、血清肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)、血清白蛋白(Alb)和脂蛋白a[Lp(a)];④免疫组织化学及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定患者肾组织切片中HGF、TGF-β1水平,收集数据进行统计分析。结果①随着病变的加重,各病理指标相应积分及血压、Lp(a)、尿蛋白定量(24h)、Scr逐渐增加,Ccr、Alb逐渐降低;②与A组比较,B组肾组织TGF-β1明显增多(P<0.01),C组显著降低(P<0.05);与A组比较,B、C组HGF面积显著降低(P<0.01);③肾组织HGF阳性面积与Ccr、Alb呈正相关(r=0.76、r=0.60),与肾组织TGF-β1阳性面积无相关,与血压、、Scr、Lp(a)、肾小管间质积分、肾小球总积分、系膜增生程度积分、球性硬化积分、血管积分呈负相关(r分别=-0.69、-0.75、-0.70、-0.67、-0.74、-0.69、-0.35、-0.39、-0.32,P<0.01)。结论①各临床病理指标与病理分级有相关性,提示动态监测临床病理指标对判断IgAN的预后有意义;②IGF-β1参与肾纤维化过程;随肾脏病变的加重HGF含量降低,可导致其纤维化作用减弱。     

火把花根对系膜增殖性肾炎模型大鼠单核细胞趋化因子-1与转化生长因子β1表达的影响

目的 观察火把花根对系膜增殖性肾炎（MsPGN）大鼠24 h尿蛋白转化生长因子-β1（TGF-β1）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的影响,探讨其肾脏保护作用的机制。方法 采用抗胸腺细胞血清诱发的系膜增殖性肾炎大鼠模型,将Wistar大鼠随机分为正常对照组、肾炎模型组和火把花根治疗组,14 d后测量24 h尿蛋白,处死大鼠,用PAS染色观察肾脏病理变化;RT-PCR及Western blot检测肾组织中TGF-β1和MCP-1的mRNA及蛋白质表达情况。结果 火把花根治疗组大鼠24 h尿蛋白、肾组织TGF-β1和MCP-1mRNA和蛋白表达明显下降,肾组织病理改变明显改善,与模型组相比均差异有极显著性（均P＜0.01）,与正常对照组比较均差异无显著性（均P＞0.05）。结论 火把花根可显著改善系膜增殖性肾炎大鼠肾脏病变,抑制系膜细胞的增生,减少系膜基质的蓄积,其机制可能与抑制TGF-β1和MCP-1表达有关。     

贝那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad4表达的影响

目的:研究贝那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad4表达的影响.方法:用链脲佐菌素诱导的Wistar糖尿病大鼠为模型,随机分为N组、DM组和DM-B组3组,于给药8周后处死,检测各组大鼠的平均动脉压、血糖、肾功能指标及24小时尿蛋白.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1及Smad4 mRNA表达水平.采用免疫组织化学方法检测TGF-β1及Smad4蛋白定位的表达,并用彩色病理图像分析系统进行定量分析.结果:与对照组相比,糖尿病大鼠平均动脉压、血糖、肾功能指标及24小时尿蛋白排出均增加;肾小球细胞外基质(ECM)明显增多、系膜区扩大(PAS染色);TGF-β1及Smad4 mRNA表达上调;TGF-β1及Smad4蛋白的表达明显增加.贝那普利治疗后上述指标明显减轻(P＜0.01).结论:TGF-β/Smad通路在糖尿病肾病时是激活的,贝那普利治疗可延缓肾脏损害.     

大黄酸对免疫球蛋白A肾病的改善作用及机制研究

目的 基于信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路，研究大黄酸改善免疫球蛋白A肾病（IgAN）模型大鼠的作用及机制。方法 将大鼠随机分为正常对照组、IgAN模型组和大黄酸治疗组（100 mg/kg），每组10只。IgAN模型组和大黄酸治疗组采用牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳联合法复制IgAN模型。造模第7周开始，大黄酸治疗组大鼠灌胃相应药物，正常对照组和模型组大鼠灌胃等量生理盐水，连续4周。末次给药后，检测大鼠尿红细胞数、24 h尿蛋白（24 h-UTP）以及血清中免疫球蛋白A(IgA)、小肠黏液中分泌型IgA(sIgA)的水平；观察大鼠肾皮质和小肠黏膜Peyer结的病理形态学变化以及肾皮质中IgA沉积情况；检测大鼠小肠黏膜Peyer结中白细胞介素17(IL-17)、IL-6和转化生长因子β(TGF-β)的表达水平；检测Peyer结中STAT3和维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)m RNA的表达水平；检测Peyer结中磷酸化STAT3(p-STAT3)和RORγt蛋白的表达水平。结果 与正常对照组比较，IgAN模型组大鼠尿红细胞数、24 h-UTP以及血清中IgA、小肠黏液...     

缬沙坦对IgA肾病大鼠血清IgA1异常糖基化的影响

目的观察IgA肾病（IgAN）大鼠血清IgA1异常糖基化的程度及缬沙坦对其影响。方法将6sD大鼠随机分为正常对照组、IgAN组、缬沙坦组、泼尼松组,每组12只。采用口服牛血清白蛋白（BSA）和尾静脉注射BSA和葡萄球菌肠毒素（sEB）的方法建立IgAN大鼠模型,缬沙坦组给予缬沙坦30mg·kg-1·d-1,泼尼松组给予泼尼松5mg·k-1·d-1,灌胃给药。分别于1,8,12周测24h尿蛋白量;12周处死大鼠取血,ELISA法测血清IgA含量,凝集素亲和ELISA法检测血清IgA异常糖基化的程度;肾组织切片观察病理学改变。结果造模8周后IgAN组、缬沙坦组、泼尼松组大鼠尿蛋白较正常对照组显著增多,第12周时缬沙坦组及泼尼松组尿蛋白较IgAN组显著减少。IgAN组血清IgA水平较正常对照组显著升高,缬沙坦组及泼尼松组均较IgAN组显著减少。IgAN组大鼠光镜下肾系膜基质增生,系膜细胞增多,部分毛细血管攀闭塞;荧光下IgA呈团块状在系膜区沉积;缬沙坦组及泼尼松组病理较IgAN组显著改善,正常对照组未见病理改变。IgAN组IgA异常糖基化程度最重,缬沙坦组较IgAN组显著改善,泼尼松组无明显改善。结论缬沙坦能显著降低血清IgA的水平,改善血清IgA1异常糖基化程度,改善临床及病理损伤。可见改善igA1异常糖基化程度可能是缬沙坦治疗IgAN的重要机制之一。     

罗格列酮对多柔比星肾病大鼠肾脏转化生长因子-β1表达的影响

目的 观察多柔比星肾病大鼠肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)激动药--罗格列酮对TGF-β1表达的影响,探讨罗格列酮对肾脏的保护作用.方法 将实验大鼠30只随机分为正常组、多柔比星肾病模型组、治疗组各10只,观察检测各组24 h蛋白尿,血液生化指标(包括肾功能、血脂、血清蛋白),肾脏病理改变;免疫组化方法检测TGF-β1、PPARγ表达,并进行相关分析.结果 模型组表现为高脂血症、低蛋白血症及大量蛋白尿;治疗组24 h尿蛋白定量和血脂降低,血浆蛋白升高,与模型组比较差异有显著性,肾组织病理损害明显减轻,PPARγ表达上调,TGF-β1表达显著低于模型组.结论 罗格列酮通过上调PPARγ表达,降低肾脏TGF-β1,具有抗纤维化肾脏保护作用.     

流式细胞仪检测尿自然杀伤细胞在IgA肾病中的临床意义

<正>IgA肾病(IgAN)是以肾小球系膜区IgA沉积为特征的肾小球肾炎,其发病机制尚未完全清楚。自然杀伤(NK)细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,是机体抗御感染和防止细胞恶性转化的重要免疫调节细胞。既往研究发现在IgAN患者外周血中NK细胞比健康对照组显著降低[1,2]。     

白藜芦醇通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路抗糖尿病肾病

目的观察白藜芦醇对大鼠糖尿病肾病的干预作用,并探讨其对肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad2信号通路的影响。方法雄性SD大鼠29只,随机分为对照组(n=5)、模型组(n=12)和白藜芦醇组(n=12)。链脲佐菌素(STZ)65 mg.kg-1造模,白藜芦醇组自造模前1 d至造模后28 d给予白藜芦醇5 mg.kg-1,ig,qd,对照组和模型组给予同体积生理盐水灌胃。检测各组大鼠体重、空腹血糖、血尿素氮(BUN)水平,计算肾脏指数,HE、Pas及Masson染色观察肾脏病理形态变化;real-timePCR法检测肾脏TGF-β1、Smad2、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连接蛋白(FN)mRNA表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠体重下降,肾脏结构出现紊乱和间质纤维化,肾脏指数、空腹血糖和血BUN水平升高(P<0.01),TGF-β1、Smad2、CTGF、FN mRNA表达量均上调(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,白藜芦醇组大鼠体重升高,肾脏异常病理有所改善,而肾脏指数、空腹血糖和血BUN水平降低,TGF-β1、Smad2、CTGF、FN mRNA的表达水平也下调,差异均有显著意义(P<0.05或P<0.01)。结论白藜芦醇能改善STZ诱导的DN,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关。     

新型多肽AMPP2在TGF-β1诱导的系膜细胞增殖中的作用及其机制

目的 探究新型多肽AMPP2在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠系膜细胞增殖中的作用及相关机制。方法 体外用TGF-β1(10μg/L)及AMPP2(10 ng/L)干预系膜细胞,分为Control组、AMPP2组、TGF-β1组及TGF-β1+AMPP2组。CCK-8法检测各组系膜细胞增殖活力;Western blot法检测各组细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)-4、CDK-6、细胞增殖核抗原(PCNA)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)及磷酸化的SMAD同源物3/SMAD同源物3(p-SMAD3/SMAD3)的蛋白表达水平;qPCR法检测各组α-SMA、COL-Ⅰ、FN的m RNA表达水平。结果 与Control组相比,TGF-β1组系膜细胞增殖活力增加(P<0.05),与TGF-β1组相比,TGF-β1+AMPP2组系膜细胞增殖活力下降(P<0.05);与Control组相比,TGF-β1组CDK-4、CDK-6、PCNA蛋白以及α-SMA、COL-Ⅰ、FN蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05),与TGF...     

糖皮质激素联合低分子肝素钠对IgA肾病小鼠的疗效观察

摘要：目的初步探索糖皮质激素（GC）联合低分子肝素钠（LMWH）对IgA肾病（IgAN）小鼠的疗效及可能的作用机制。方法应用“口服牛血清白蛋白（SBA）加葡萄球菌肠毒素B（SEB）尾静脉注射”法复制小鼠IgAN模型。设正常组、模型组、泼尼松组、低分子肝素纽、泼尼松联合低分子肝素钠组5组。实验结束取血、尿及肾组织标本,测24h尿蛋白含量、凝血功能（血浆凝血酶原时间PT、活化部分凝血活酶时间APTT）、肾功能（肌酐、尿素氮）,观察肾脏病理变化、系膜区IgA沉积及转化生长因子-β（TGF-f1）、血小板衍化生长因子（PDGF）表达情况,比较各组小鼠蛋白含量、凝血功能、肾功能、肾脏病理等的差异。结果模型组小鼠蛋白含量、肾功能、肾脏病理变化、系膜区IgA荧光强度、TGF-β、PDGF表达均明显高于正常组,PT、APTT低于正常组。泼尼松、LMWH组及联合治疗组上述指标除凝血功能外均低于模型组（P〈0．05）,联合治疗组除凝血功能外均低于单用泼尼松及LMWH组（P〈0．05）,联合治疗组凝血功能指标较泼尼松组增高（P〈0．05）,与LMWH组比较无明显差异。泼尼松组与LMWH组比较后者凝血功能指标升高（P〈0．05）,其余指标无明显差异。结论泼尼松能明显减少IgAN小鼠的蛋白尿、改善肾功能、’肾脏病理、IgA沉积程度,但也能加重高凝状态,LMWH不但能改善凝血功能和肾功能,减轻蛋白尿,还能通过抑制系膜细胞增生和基质沉积起到抑制肾小球硬化的作用,两者联合应用能进一步减少蛋白尿,肾功能及肾脏病理改善亦较单用泼尼松及LMWH明显,对肾病本身的高凝状态及泼尼松所致的凝血异常均有明显改善作用,在IgAN治疗中,泼尼松低分子肝素钠联合应用的疗效优于单用泼尼松及LMWH。     

不同类型IgA肾病细胞增殖与凋亡关系的研究

<正>IgA肾病(IgAN)是以肾小球系膜区IgA沉积为特征的免疫复合物肾小球肾炎,是我国慢性肾脏病的主要类型。研究表明,在病理情况下,肾小球内增殖的固有细胞和浸润细胞可通过细胞凋亡的形式被清除[1],肾小球内系膜细胞和浸润的白细胞参与吞噬清除凋亡细胞的过程[2]。因此在肾小球增