绿色荧光蛋白在胚胎干细胞研究中的应用

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein．GFP)作为一种方便、有效的活性标记物，无需外源反应底物，无需进行细胞或组织的固定和渗透处理．使检测更加方便。是细胞生物学和分子生物学研究的一个重要工具，已得到了广泛的应用。胚胎干细胞(Embryonic StemCell．ES cell)是从早期胚胎中分离得到的多能细胞，在胚胎发育、细胞移植、组织器官构建、药物研制、基因治疗等研究方面发挥着巨大的作用。本文就GFP的特性及其在ES细胞研究中的应用作一简述。     

绿色荧光蛋白在转基因动物研究中的应用

来源于水母(Aequorea Victoria)的绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP),现已成为细胞生物学和分子生物学中应用最广泛的分子标记之一.其内源性荧光基团在受到紫外或蓝光激发时可发现清晰可见的绿光.由于检测方便,对生物体基本没有毒性,在很多领域已有取代LacZ,荧光素酶等传统标记方法的趋势,在制作转基因动物过程中更是如此.本文综述了GFP在标记目的基因、筛选阳性胚胎等方面的应用.     

三种方法浓缩慢病毒后绿色荧光蛋白转染效率的比较

 目的 比较超滤管法、超速离心法及病毒浓缩液法浓缩慢病毒后绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的转染效率。方法 用摇床过夜摇pMD2.G、psPAX2及GFP载体菌种并用试剂盒提取这三种质粒;将pMD2.G、psPAX2及GFP载体质粒与转染试剂按比例混合后转染293T细胞生产病毒;收集病毒上清液并用超滤管法、超速离心法及病毒浓缩液法浓缩慢病毒;将接种的293T细胞分为3组,并向每组接种有293T细胞的培养液中加入2、4、8、16 μl三种方法浓缩的病毒浓缩液,48 h后用荧光显微镜观察和流式细胞仪检测三种方法浓缩慢病毒后转染293T细胞的GFP表达情况。结果 荧光显微镜观察结果显示随着转染量的增加,GFP表达率增加,超滤管法浓缩病毒转染293T细胞后GFP的表达效率最高;流式检测显示病毒浓缩液法组2、4、8、16 μl GFP的表达率分别为(2.4±0.1)%、(3.8±0.3)%、(8.2±0.6)%、(12.2±0.3)%;超滤管法组2、4、8、16 μl GFP的表达率分别为(5.4±0.3)%、(7.4±0.4)%、(12.7±0.1)%、(17.3±0.6)%;超速离心法组2、4、8、16 μl GFP的表达率分别为(0.7±0.1)%、(1.2±0.1)%、(2.1±0.1)%、(0.4±0.2)%。超滤管法组与其他两组比较,P<0.05,差异有统计学意义。结论 不同方法浓缩慢病毒后的GFP转染效率不同,三种慢病毒浓缩方法中超滤管法浓缩慢病毒后的GFP转染效率最高。     

近红外荧光染料在肿瘤特异性成像中的研究

近年来,光学成像以其非侵袭性、实时、分辨率高等优势广泛应用于肿瘤研究领域,可对肿瘤进行早期诊断,反映肿瘤解剖学结构及代谢情况。近红外(near-infrared,NIR)荧光成像是目前光学分子成像领域研究的热点,以合适的荧光探针标记细胞、蛋白质分子或核酸,用特定波长的红光激发     

携带绿色荧光蛋白的可诱导性真核表达载体的构建及其表达

目的　构建携带绿色荧光蛋白 (GFP)的可诱导性真核表达载体。方法　将GFPcDNA片段克隆到可诱导性真核表达载体pMD neo上 ,构建成携带绿色荧光蛋白的可诱导性真核表达载体pMD GFP ;再采用脂质体转染法 ,将GFP基因转入HCC 92 0 4细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达情况。结果　成功构建了携带绿色荧光蛋白的可诱导性真核表达载体pMD GFP ;荧光显微镜观察显示 ,在转染GFP基因的HCC 92 0 4 /GFP细胞中 ,荧光均匀地分布于整个细胞。结论　携带绿色荧光蛋白的可诱导性真核表达载体的构建 ,为进一步观察活体内肿瘤的生长和转移提供了基础。     

羟基喜树碱在介入治疗肿瘤中的应用研究

羟基喜树碱(ＨｙｄｒｏｘｙＣａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ,ＨＣＰＴ)是喜树碱经结构改造后的半成品。化学结构与喜树碱(Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ,ＣＰＴ)相似,仅第10位碳原子上的氢为羟基所取代。这一微小的差异使其毒副作用明显降低,获得率仅为ＣＰＴ的十分之一,但ＨＣＰＴ较ＣＰＴ抗癌谱广而且作用明显[1]。关于ＨＣＰＴ的动物实验及临床静脉化疗研究已有较多文献报道[24]。但应用ＨＣＰＴ介入治疗肿瘤的研究报道甚少。自1998年12月以来,我科采用湖北省黄石市飞云制药有限公司生产的ＨＣＰＴ,分别与其它抗癌药组成不同的联合化疗方案,通过动…     

PET-CT在肿瘤临床中的应用

PET/CT是将采用正电子放射性示踪剂成像的PET功能与利用成像的CT功能有机结合在一起，使用同一检查和同一图象处理工作站进行全身检查的一体化设备。该设备正成为肿瘤、脑部疾病和心肌活力等检查和指导治疗的重要手段，特别是在肿瘤的诊断、复发、转移判断及治疗方式的选择上均有重要的临床价值，本文拟对此作一简单介绍。     

基于红色荧光蛋白的酵母双分子荧光互补技术的建立

目的 在酵母细胞中建立基于酵母增强型红色荧光蛋白（yEmRFP）的双分子荧光互补技术,用于直观地检测蛋白质相互作用。方法 利用分子克隆技术将yEmRFP的N端片段（1～159 aa,RN159）和C端片段（160～236 aa,RC160）分别与转录因子Jun和Fos的碱性亮氨酸拉链结构域（bZIP）—bJun和bFos或其缺失突变体bFosΔZip相融合,构建重组质粒,其中bFosΔZip与bJun不存在相互作用,可作为阴性对照组,将重组质粒转化酵母细胞后,通过营养缺陷培养基筛选转化成功的酵母菌落,利用荧光显微镜和流式细胞仪检测酵母中重组yEmRFP蛋白质的荧光信号,判定该技术是否可用于检测蛋白质相互作用。结果 成功构建了RN159和RC160与bJun和bFos或bFosΔZip相融合的重组质粒。酵母表达体系中bJun和bFos的相互作用使yEmRFP重新组装为完整荧光蛋白质,通过荧光显微镜检测到强的红色荧光信号,利用流式细胞仪藻红蛋白（PE）通道计数20 000个酵母细胞,其中约有25%酵母细胞具有红色荧光;而阴性对照组未检测到荧光信号,同样在流式细胞仪PE通道中未检测到明显的红...     

高精度介观落射荧光体层成像无创性定量测定小鼠肿瘤的荧光蛋白表达

目的比较介观荧光体层成像(MEFT)和EPRI-照明反射成像(EPRI)来定量评估小鼠肿瘤的大小。方法在注射后14d用MEFT、EPRI、超声(US)和微型计算机体层扫描(μCT)测量结肠癌细胞肿瘤移植绿/红色荧光蛋白(GFP/RFP)的表达(n=6)。MEFT和EPRI彼此之间,并且与US及μCT相关(对照法)。肿瘤体积体外测量用GFP和RFP荧光成像与体内测量进行比较。结果 MEFT与US和μCT之间具有高的相关性和一致性(MEFT/US:GFP,r2=0.96;RFP,r2=0.97,两者P<0.05;MEFT/μCT:GFP,r2=0.93;RFP,r2=0.90;两者P<0.05)。此外,体内MEFT数据和体外成像结果具有高度相关性和一致性(GFP:r2=0.96;RFP,r2=0.99;两者P<0.05)。相比而言,EPRI显著地高估了肿瘤体积(P<0.05),虽然它与US和μCT有显著的相关性(EPRI/US:GFP,r2=0.95;RFP,r2=0.94;两者P<0.05。EPRI/μCT:GFP,r2=0.86;RFP,r2=0.86;两者P<0.05)。结论应用MEFT的荧光分布重构可提供非常精确的三维(3D)肿瘤体积数据,比EPRI更准确。因此,MEFT是在高空间分辨率上定量评估表浅肿瘤荧光分布非常合适的技术。     

化疗泵在肿瘤治疗中的应用

化疗药物对敏感肿瘤细胞的杀伤效果主要取决于药物浓度和有效的接触时间，因此设法使药物在肿瘤病灶局部尽可能地高浓度、长时间的存在，是提高局部治疗效果的关键。经皮下埋植化疗泵系统(SIPS)重复地进行化疗药物灌注，可大大提高局部的药物浓度，从而可以进一步提高部分肿瘤的疗效。     

介入性超声在胃肠道肿瘤诊断中的应用

1976年，Walls及Lutz首先报道了胃肠肿块的超声诊断。自1981年以来．国内外众多学者应用超声和CT扫描对胃肠肿瘤的图像特征进行了深入探讨。在超声图像中“假肾征”（pseudo－kidneysign）、“面包围征”（doughllutSign）和“靶环征”（f。rgetSign）等是消化道管壁增厚性改变的常见证象．＊上要见于盲肠肿瘤，但某些胃肠非特异性炎性病f沮L引d管港增厚而出现上述征象。二者鉴别有时地对＊。’Zy。引年D。w’s和M。ce小。n首先报也”乙＞7．祟》－．S，－。（）冲地W钢针穿刻获得成功、IJ引年已。。。；、。。、卜。【，。。。。。杜…     

肿瘤蛋白指纹技术在消化道肿瘤诊断中的作用研究进展

我国居民每死亡5人中,即有1人死于癌症.近年来,随着环境的变化,人们生活方式的改变和生活压力的增加,我国癌症的发病年龄提前了15～20年,35～55岁发病群体比率趋于上升[1].不仅影响了人们的生活质量而且大大减小了人均寿命值.所以癌症的早期诊断无疑在治疗与预后上有着不可替代的重要性,而许多恶性肿瘤直至晚期甚至已经出现严重并发症才得以诊断,特别是消化道恶性肿瘤起病隐匿,症状和良性疾病相似,所以容易被患者和医生忽略.消化道恶性肿瘤在所有恶性肿瘤的发病和死亡中占据前列.因此做好消化道恶性肿瘤的防治工作在一个地区的癌症控制规划中占有很重要的地位.     

端粒酶在肿瘤临床诊治中的应用前景

端粒酶与肿瘤关系密切。近年来，相关的实验研究为临床应用端粒酶作为肿瘤诊断的标志物、端粒酶抑制剂作为抗肿瘤药物、以及端粒酶作为放疗中的重要影响因素提供了更加清晰的线索和有用的资料。     

螺旋CT在胰腺肿瘤诊断中的临床应用

常规ＣＴ增强扫描是以往对胰腺肿瘤诊断的主要方法 ,其优点在于能够显示肿瘤的形态、内部结构 ,并可进行随访观察。对胰腺癌的诊断准确率超过 90 %。随着ＣＴ技术的快速发展和螺旋ＣＴ的广泛应用 ,图像分辨率明显提高 ,各种扫描技术日臻成熟 ,对胰腺肿瘤诊断和手术可行性的准确评估必将进一步提高。螺旋ＣＴ扫描技术螺旋ＣＴ(ｓｐｉｒａｌＣＴ ,ＳＣＴ) 1次屏气 (15～ 30ｓ)就可以对胰腺进行 1次完整的扫描 ,避免了呼吸运动伪影 ,保持了层面的连续性 ,不重叠亦无遗漏 ,并且可任选重建间隔 ,有利于小病灶的检出 ,更好地分辨细微结构如胰周小…     

高压氧干预对绿色荧光蛋白小鼠骨髓间充质干细胞培养及增殖分化的影响CSCD

目的 探讨骨髓间充质干细胞培养及高压氧对其增殖分化的影响.方法 采用全骨髓细胞贴壁培养法提取绿色荧光蛋白小鼠骨髓间充质干细胞进行培养,取P3代骨髓间充质干细胞,用神经节苷脂和胶质细胞源性神经生长因子诱导液进行成神经元样细胞诱导,并在培养及诱导时进行高压氧干预,1次/d,为高压氧干预组（高压氧组）.采用免疫荧光检测神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase,NSE）表达,绘制细胞生长曲线.未进行高压氧干预的为对照组.结果 贴壁培养法分离培养骨髓间充质干细胞,经多次换液后可纯化细胞.高压氧组间充质干细胞对数生长期提前,进入平台期后细胞数量多于对照组,高压氧干预后细胞于24 h内出现轴突、树突,48 h后2组对比,高压氧组80％以上细胞出现突起,且细胞突起较长、较粗.对照组突起的细胞比例不足80％,细胞分散,突起短,未连成网状.结论 骨髓间充质干细胞全骨髓贴壁培养法操作简单,细胞繁殖能力强,经高压氧干预后骨髓间充质干细胞生长加快.在细胞诱导时联合高压氧干预,细胞分化数量多,突起长.提示高压氧能促进体外骨髓间充质干细胞向神经元样细胞增殖和分化.     

蛋白质芯片在肿瘤研究中的应用

蛋白质芯片是继基因芯片之后发展起来的一项快速、高效、灵敏的蛋白质分析技术,为蛋白质的功能研究提供了强有力的工具,在肿瘤研究方面的应用尤为突出。它可以同时检测样本中多个肿瘤标志物表达水平的变化,将这些与肿瘤相关的标志物综合分析,可以显著提高诊断的准确性。蛋白质芯片与质谱技术联合应用对未知蛋白的检测,在诊断学的应用中已显示出光明的前景。本文对蛋白质芯片概况及其在肿瘤研究方面的应用作一综述。     

激光诱发自体荧光技术在肿瘤诊断中的作用及现存问题

荧光物质在一定波长光的照射下可产生荧光 ,由于被激发物质的结构或成分不同 ,所产生的荧光特征也各有不同。人体肿瘤组织与正常组织有着明显的结构和成分上的差异 ,故在光的激发下 ,它们产生的荧光也应不同。根据这个原理 ,人们应用弱光检测技术、光电倍增技术和荧光显像技术对动物和人体内、外肿瘤组织的激光诱发自体荧光 (ｌａｓｅｒ ｉｎ ｄｕｃｅｄａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ,ＬＩＡＦ)进行了大量研究和观察。经过2 0余年的探索 ,初步发现了肿瘤组织与正常组织的不同荧光特征 ,并逐步将该技术推向了实用阶段。然而 ,由于各研究…     

金属硫蛋白在生殖系统肿瘤中的研究进展

金属硫蛋白(MT)是一类低分子量、富含胱氨酸的细胞内蛋白质,在防止DNA损伤、细胞凋亡、氧化应激中起重要作用。研究表明MT表达与多种肿瘤的进展、药物抵抗有关。本文就MT的结构与功能、其在男、女性生殖系统肿瘤中的表达以及对放化疗的影响诸多方面的研究进展进行了综述,旨在为同道提供参考。     

含绿色荧光蛋白基因的子宫内膜异位症体外模型的建立

目的 由腺病毒介导绿色荧光蛋白基因转染子宫内膜细胞,构建子宫内膜异位症体外模型.方法 取5例正常子宫内膜组织,分离子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞,进行形态学观察和免疫荧光鉴定.用携带有绿色荧光蛋白基因的腺病毒转染细胞,比较转染后12、18、36、42h细胞的绿色荧光蛋白表达阳性率和凋亡率的差异.结果 分离培养获得高纯度的子宫内膜腺上皮细胞(90%)和基质细胞(接近100%).两种细胞均表达绿色荧光;与腺上皮细胞比较,基质细胞转染率明显增高(F=8.362,P=0.020),凋亡率明显降低(F=46.119,P<0.001);转染对细胞的凋亡率无明显影响(F=4.208,P=0.057).结论 利用腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因载体转染子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,可获得相对稳定的体外荧光子宫内膜异位症模型.