葡萄籽提取物F2对人恶性胶质瘤U-87细胞的抑制增殖作用及对其甲酰肽受体(FPR)功能的影响

目的探讨葡萄籽提取物F2对人恶性胶质瘤细胞U-87增殖的影响及对其甲酰肽受体(FPR)功能的影响。方法采用MTT法检测F2对U-87细胞成活率的影响。光镜及AO/EB染色观察细胞形态学变化。流式细胞术考察F2对U-87细胞周期及线粒体膜电位的影响。趋化实验方法考察F2对fMLF诱导的U-87细胞趋化的影响。采用Fura-2双波长测定法考察F2对fMLF诱导的U-87细胞钙动员的影响,用westernblot方法考察F2对fMLF诱导的U-87细胞ERK1/2磷酸化的影响,并用激光共聚焦方法考察F2对U-87细胞FPR表达的影响。结果F2能显著抑制U-87细胞的增殖,其作用呈明显的时间和浓度依赖性,药物作用24h、48h、72h的IC50分别为75μg·mL-1、33.6μg·mL-1、25μg.mL-1。光镜及AO/EB观察F2作用48h能使U-87细胞形态发生明显改变,包括细胞变圆,胞浆内出现许多大大小小的空泡。F2能显著降低U-87细胞线粒体膜电位,诱导U-87细胞G2/M期阻滞并能诱导有典型paraptosis形态特征的细胞死亡。非细胞毒浓度的F2还能显著抑制FPR激动剂fMLF(10nM)诱导的U-87细胞趋化,且能显著抑制fMLF诱导的U-87细胞钙动员及ERK1/2磷酸化。而且F2还能显著降低在胶质瘤的增殖、迁移及血管生成中起重要作用的FPR的表达。结论F2不仅能显著抑制U-87细胞的增殖,还能通过抑制FPR激动剂fMLF诱导的U-87细胞的趋化而抑制肿瘤细胞迁移,能抑制其FPR的表达,是一种很有开发潜力的新型抗胶质瘤药物。     

诺帝对人恶性胶质瘤细胞U87甲酰化肽受体功能的影响

探讨手性化合物诺帝对人恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体(formylpeptide receptor，FPR)功能的影响及其意义。以培养的人恶性胶质瘤细胞U87为研究对象，用FPR激动剂fMLF(n-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine)刺激细胞，以双室跨膜迁移模型检测细胞的迁移能力、计数法测定细胞的增殖能力、分光光度法测定细胞内钙流、RT-PCR方法测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)mRNA表达，以ELISA方法检测VEGF蛋白水平，并测定诺帝(25～100 μmol·L^-1)处理瘤细胞后上述功能指标的变化。50 μmol·L^-1诺帝能有效抑制fMLF诱导的细胞增殖、迁移(P<0.05)和细胞内钙流，100 μmol·L^-1诺帝能抑制VEGF mRNA表达，降低VEGF水平(P<0.05)。诺帝能抑制FPR介导的人恶性胶质瘤细胞增殖、迁移和VEGF产生，提示其具有抗肿瘤活性。     

冬凌草甲素抑制人胃腺癌细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的:研究冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT、透射电镜、流式细胞仪等方法对经冬凌草甲素体外作用的BGC-823细胞进行观察和检测。结果:16、32、64μg·mL-1冬凌草甲素能显著抑制BGC-823细胞的生长,并呈浓度-时间依赖性。64μg·mL-1的冬凌草甲素作用24、48、72h的抑制率分别为68·5%、90·8%、94·7%。32μg·mL-1冬凌草甲素作用2h后,电镜下BGC-823细胞的线粒体和内质网增殖肿胀;作用8h后,线粒体和内质网空泡化,内部结构消失,细胞核染色质边集呈凋亡的典型改变;作用24h后,流式细胞仪检测BGC-823细胞G2/M期阻滞,凋亡率为37·8%。结论:冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,生长抑制可能与G2/M细胞周期阻滞有关,诱导凋亡可能通过线粒体和(或)内质网途径起作用。     

原花青素对食管癌细胞的调节

目的 探讨原花青素对食管癌细胞的调节作用.方法 利用(o、10、20、40) μg·mL-1GSP处理细胞,用台盼蓝(Trypan Blue)法检测不同浓度GSP对正常食管细胞处理后的毒性作用;利用(0、10、20、40) μg·mL-1 GSP处理细胞,利用MTT法测定食管癌EC9706鳞癌细胞在体外情况下的增殖抑制水平;利用细胞划痕实验检测食管癌EC9706鳞癌细胞在体外情况下的侵袭迁移力.结果 不同浓度梯度的(0、10、20、40)μg·mL-1GSP对食管癌细胞无明显毒性作用;GSP以剂量依赖(0、10、20、40)μg·mL-的方式抑制A549细胞的增殖;GSP以剂量依赖(0、10、20、40、)μg·mL-1的方式下调细胞侵袭和迁移能力.结论 GSP毒副作用小,但是可有效抑制食管癌细胞的增值,同时也可以有效抑制食管癌细胞侵袭和迁移能力.     

齐留通对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响

[摘要]目的 探讨齐留通阻断5-脂氧合酶（5-LOX）代谢途径对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 将胰腺癌细胞SW1990与不同浓度齐留通（浓度分别为40，30，20，10，5，3和1 μg·mL-1）共同孵育,以不加齐留通的细胞为对照组。采用MTT法检测作用不同时间后齐留通对SW1990细胞的抑制率；倒置显微镜观察齐留通浓度为20 μg·mL-1时细胞形态变化；将SW1990胰腺癌细胞与不同浓度齐留通（浓度分别为80，40，20，10和5 μg·mL-1）作用24 h，对照组加入等量培养基和溶媒，流式细胞仪(FCM)AnnexinⅤ/PI双染法检测各组SW1990细胞增殖指数， FCM检测细胞周期。结果 培养48 h后，40和30 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用明显强于对照组，且均差异有极显著性（均P<0.01）；培养72 h后，40，30和20 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌细胞的抑制较对照组显著增强（均P<0.01）。其他检测结果亦表明，齐留通可抑制SW1990细胞增殖，促进细胞凋亡，该作用呈浓度和时间依赖性。与对照组相比, 20 μg·mL-1齐留通作用18 h后G0/G1期细胞所占比例较对照组明显增高（P<0.01）,G2/M期、S期细胞所占比例降低。结论 齐留通能抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡，使细胞DNA合成受抑制,产生G1期阻滞。     

毛萼乙素抑制人正常及肝癌血管生成的作用研究

目的:研究毛萼乙素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响以及对人肝癌血管生成的影响。方法:采用改良MTT法测试6个浓度的毛萼乙素在体外对原代培养的HUVEC增殖的影响;用人肝癌鸡胚尿囊膜血管复制模型,测定毛萼乙素在器官水平对血管生成的抑制作用。结果:毛萼乙素对HUVEC增殖具有显著的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)=7.27μg·mL-1;抑制效应呈剂量和时间依赖性。在剂量为25、50、100μg·mL-1时对人肝癌鸡胚尿囊膜血管面积比的抑制率分别为14.15%、48.72%、60.63%,抑制作用中等;其中剂量在50μg·mL-1时与阳性对照反应停相当(P>0.05)。结论:毛萼乙素对人脐静脉内皮细胞的增殖有显著的抑制作用,并能显著抑制人肝癌细胞诱导的鸡胚尿囊膜血管生成。     

金雀异黄素对MCP-1诱导人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及c-fos mRNA转录的影响

目的研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)增殖及cfosmRNA转录的影响。方法用不同浓度(10,30,90μmol·L-1)金雀异黄素预作用hUVSMC2h后加入终浓度为10μg·L-1的MCP1作用30min;采用逆转录聚合酶链反应检测细胞中cfos基因的表达;作用48h,用细胞计数检测细胞增殖的情况。结果金雀异黄素在低剂量(10μmol·L-1)即能抑制平滑肌细胞的增殖(P<0.05),在高剂量(30,90μmol·L-1)才能抑制细胞内cfosmRNA的表达(P<0.01,P<0.01)。结论金雀异黄素能抑制MCP1诱导的hUVSMC增殖,其机制可能与降低cfos的表达有关。     

万古霉素对人肾小管上皮细胞中肾损伤分子-1表达的影响研究

目的:探讨万古霉素对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中肾损伤分子-1(KIM-1)表达的影响及其可能机制。方法:体外培养HK-2细胞,按万古霉素作用浓度和时间分为不同浓度(0、10、20、30、40、50、60μg·mL-1)和不同时间(0、3、6、12、24、48h)组。显微镜观察HK-2细胞形态学变化,反转录-聚合酶链反应检测KIM-1mRNA表达,细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测KIM-1蛋白表达,硫代巴比妥酸法检测HK-2细胞上清液中丙二醇(MDA)的含量。结果:镜下显示,0μg·mL-1组贴壁细胞生长良好,20、40μg·mL-1组部分贴壁细胞脱落和坏死,60μg·mL-1组大部分细胞脱落和坏死;与0μg·mL-1组比较,各浓度组KIM-1mRNA的表达均明显增强(P<0.05或P<0.01),10、20μg·mL-1组KIM-1蛋白表达明显增强(P<0.01),30、40、50、60μg·mL-1组MDA含量明显增强(P<0.01);与0h组比较,24、48h组KIM-1mRNA和蛋白表达、MDA含量均显著增强(P<0.05或P<0.01)。结论:万古霉素刺激可促进HK-2细胞KIM-1mRNA和蛋白的表达,其机制可能与万古霉素致HK-2细胞氧化应激有关。     

斑蝥酸钠维生素B6注射液体外诱导胶质母细胞瘤U87凋亡作用

目的体外实验观察斑蝥酸钠维生素B6注射液(SCV)对人脑胶质瘤细胞系U87的作用。方法铺板细胞随机分为4组,对照组、SCV组、替莫唑胺(TMZ)组、SCV与替莫唑胺双药联合用药组,然后3个用药组内分别设置5个不同浓度,其中SCV组(2,4,8,16,32μmol·m L-1),替莫唑胺组(100,200,300,400,500μmol·m L-1),双药联合用药组(SCV 4μmol·m L-1配伍替莫唑胺100,200,300,400,500μmol·m L-1),CCK-8检测药物作用12,24,36,48 h后4组U87细胞增值情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化;荧光显微镜下检测细胞形态学变化。结果 SCV及替莫唑胺均抑制U87细胞增殖,并呈时间浓度依赖性。SCV可将细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05),诱导U87细胞凋亡。经SCV作用后的U87细胞出现凋亡形态。结论 SCV可于体外抑制U87细胞生长增殖并诱导其凋亡。     

半夏生物碱对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响

目的:研究半夏生物碱对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响。方法:将Bel-7402与半夏生物碱(400、200、100μg·mL-1)共同培养,采用MTT比色法测定半夏生物碱对Bel-7402增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组化SABC染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果:作用24h后,半夏生物碱高、中、低剂量(400、200、100μg·mL-1)对Bel-7402增殖有显著抑制作用,且抑制作用随着药物浓度增加而加强,最高抑制率可达到36.98%。TUNEL结果显示,半夏生物碱高、中、低剂量(400、200、100μg·mL-1)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,且呈量效关系。半夏生物碱高、中、低剂量(400、200、100μg·mL-1)可使Bax表达显著升高而Bcl-2表达显著下降。结论:半夏生物碱对Bel-7402生长有一定的抑制作用,可诱导其凋亡,其作用机制可能为上调Bax和下调Bcl-2。     

双氢青蒿素对恶性胶质母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对人恶性胶质母细胞瘤(U87)细胞增殖和凋亡的影响。方法将10,25,50,100,125μmol.L-1DHA分别作用于体外常规培养的U87细胞24,48和72 h,CCK-8细胞增殖试剂盒实验检测细胞增殖情况并计算DHA不同作用时间半数抑制浓度(IC50);97.04μmol.L-1DHA作用U87细胞24 h后倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞分析细胞周期变化,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,检测Caspase-3蛋白含量变化,双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)变化。结果 DHA浓度、作用时间不同,U87细胞存活率不同,差异有统计学意义(P<0.05),DHA对U87细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖性。DHA作用24 h时IC50为97.04μmol.L-1,48 h为59.76μmol.L-1,72 h为33.20μmol.L-1;97.04μmol.L-1DHA作用24 h后S期细胞减少,G0～G1期细胞增多,凋亡细胞增多,细胞内ROS增多。Caspase-3表达量较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DHA对U87增殖有抑制作用,可诱导细胞凋亡。其机制可能与DHA改变细胞周期,激活Caspase-3通路以及增加细胞内ROS有关。     

苦豆碱对宫颈癌Hela细胞的增殖、凋亡的影响

摘要：目的:考察苦豆碱（ALO）对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用CCK-8法检测ALO对Hela细胞增殖的影响,实验设置对照组（不作给药处理）以及ALO浓度分别为80,90,100,110,120,130μg·ml-1的实验组,给药时间设置为24 h和48 h。采用流式细胞术检测ALO对Hela细胞凋亡的影响,根据CCK-8结果,设置实验分组为:对照组、ALO低(90μg·ml-1)、中(110μg·ml-1)、高(130μg·ml-1)浓度组; Western blot法测定ALO对Hela细胞中凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和周期蛋白G1/S-特异性周期蛋白-D1（Cyclin D1）相对表达量的影响,实验分组同流式细胞术。结果:与对照组相比,ALO各浓度组细胞在培养24和48 h后,增殖抑制率显著升高（P<0.05或P<0.01）,各实验组细胞凋亡均明显增多（P<0.05或P<0.01）,各实验组ALO作用于Hela细胞48 h后,均能够显著增加凋亡蛋白caspase-3的表达（P<0.01）,下调细胞周期蛋白表达量（P<0.01）,各指标变化呈剂量和时间依赖性。结论:ALO能够明显抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,同时抑制周期蛋白表达,进一步抑制细胞增殖。并促进其凋亡蛋白的表达,进而促进凋亡。     

鬼臼毒素纳米脂质体对人白血病细胞的凋亡诱导作用

目的研究鬼臼毒素纳米脂质体对人白血病细胞K562的凋亡诱导效应。方法薄膜超声分散法制备鬼臼毒素纳米脂质体。不同浓度的鬼臼毒素和鬼臼毒素纳米脂质体分别处理K562细胞,MTT法检测细胞的增殖活性,细胞形态学改变和AnnexinⅤ/PI染色检测细胞凋亡。结果鬼臼毒素纳米脂质体对K562细胞增殖的抑制作用明显高于鬼臼毒素,24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.71、0.02、0.003μg·ml-1,而鬼臼毒素为1.50、0.12、0.05μg·ml-1;0.01μg·ml-1鬼臼毒素纳米脂质体处理24、72h,AnnexinⅤ/PI染色K562细胞凋亡率分别为91.1%和92.7%,但72h时以晚期凋亡为主;而0.01μg·ml-1鬼臼毒素处理的细胞凋亡率分别为63.4%和66.8%。鬼臼毒素纳米脂质体和鬼臼毒素处理后,K562细胞出现皱缩、胞膜起泡、凋亡小体等典型的细胞凋亡形态学改变。结论鬼臼毒素纳米脂质体较鬼臼毒素对白血病K562细胞具有更强的增殖抑制和凋亡诱导效应。     

半边旗提取物5F-Na盐溶液的制备及体外抑癌作用研究

目的:制备5F-Na盐,并观察其对肺癌细胞株NCL-H460和肝癌细胞株BEL-7402的杀伤作用。方法:加入0.5mol·L-1NaOH使半边旗提取物5F完全溶解,稀HCl调节pH值为7.4,加入磷酸盐缓冲液使其pH值稳定,高效液相色谱法测定5F-Na盐溶液中5F的含量。通过MTT法检测所制备5F-Na盐溶液对肺癌细胞株NCL-H460和肝癌细胞株BEL-7402的杀伤作用。结果:所制备5F-Na盐溶液中5F为标示量的(100.51±2.18)%,其对NCl-H460细胞株24、48、72h的IC50分别为23.7、14.2、7.0μg·mL-1,对BEL-7402细胞株24、48、72h的IC50分别为157.3、41.5、21.0μg·mL-1。结论:本研究制备的5F-Na盐溶液能有效抑制癌细胞株生长增殖。     

盐酸小檗碱诱导Jurkat细胞凋亡的研究

目的本研究旨在观察盐酸小檗碱能否抑制Jurkat细胞的增殖、并对其作用机制进行初步探讨。从而为临床上应用治疗急性T淋细胞白血病提供实验依据。方法MTT比色法检测盐酸小檗碱对Jurkat细胞增殖的影响;AO／EB染色法观察细胞凋亡的形态学改变;TUNEL方法检测细胞凋亡的生化功能变化。结果盐酸小檗碱对Jurkat细胞的生长有抑制作用,呈现明显的剂量和时间依赖性,24h、48h、72h、96h、120h的IC50分别为107．5567μg·mL^-1、23．5600μg·mL^-1、10．8069μg·mL^-1、9．2660μg·mL^-1和2．7121μg·mL^-1盐酸小檗碱处理Jurkat细胞可见典型的细胞凋亡形态学改变;TUNEL可见深棕色凋亡细胞。结论盐酸小檗碱能有效地抑制体外Jurkat细胞的增殖,其作用可能是通过诱导Jurkat细胞凋亡有关。     

藤茶总黄酮体外抗人肝癌细胞作用研究

目的:研究藤茶总黄酮体外抗人肝癌细胞的作用。方法:以MTT法、细胞生长曲线法、集落形成法观察藤茶提取物对人肝癌BEL7404细胞的体外抑制作用。结果:藤茶总黄酮能显著抑制体外培养的BEL7404细胞的生长。MTT法测得的半数抑制浓度(IC50)为28·59μg·mL-1;细胞生长曲线法提示藤茶总黄酮对BEL7404细胞的生长有显著的抑制作用;集落形成法提示当药物浓度在22·22μg·mL-1以上时IC50为100%,当药物浓度在14·81μg·mL-1时IC50为58·05%。结论:藤茶总黄酮对体外培养的BEL7404细胞有显著的抑制作用。     

海兔素对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的研究海兔素(Aplysin)对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法MTT法测定海兔素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞生长状态的变化;HE染色检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测SGC-7901细胞中COX-2mRNA的表达。结果经60、120、240、480mg.L-1海兔素作用24、48h后,SGC-7901细胞的生长增殖均明显受到抑制,呈量效依赖性。延长作用时间,抑制作用差异无显著性(P>0.05);120、240mg·mL-1海兔素作用24h后,细胞生长状态明显下降;经120、240mg·mL-1海兔素处理18h后,细胞凋亡率分别为(15.0±2.12)%和(18.4±2.30)%,与对照组(1.4±0.55)%比较差异均有显著性(P<0.05);60、120、240mg·mL-1海兔素处理24h后,SGC-7901细胞COX2mRNA水平有下调趋势,但差异无显著性(P>0.05)。结论海兔素对人胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

舟山黄海葵粗提物抗人肺癌SPC-A1细胞的活性研究

目的:研究舟山黄海葵(黄海葵)粗提物体外抗人肺癌SPC-A1细胞的活性。方法:通过反复冻融、丙酮沉淀等方法制备黄海葵粗提物。以质量浓度分别为0(空白对照)、0.625、1.25、2.5 mg/ml的黄海葵粗提物作用于SPC-A1细胞24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞活力,计算增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50);24 h后分别通过HE染色、AO/EB荧光染色观察SPC-A1细胞形态学变化。结果:MTT法测定结果表明,黄海葵粗提物对人肺癌SPC-A1细胞具有显著的增殖抑制作用,随着黄海葵粗提物质量浓度的增加以及作用时间的延长,其对SPC-A1细胞的抑制率逐渐增高;作用24、48、72 h后的IC50分别为1.81、1.32、1.18 mg/ml;HE、AO/EB染色结果显示,相较于空白对照组,加药组细胞出现了细胞形态缩小、胞质内出现空泡、核固缩和核消失等明显的凋亡形态学改变。结论:舟山黄海葵粗提物对人肺癌SPC-A1细胞的增殖具有抑制作用。     

遍地金提取物对大鼠脑突触体[3H]-去甲肾上腺素再摄取抑制作用

目的 :研究遍地金提取物对大鼠脑突触体去甲肾上腺素重摄取的抑制作用。方法 :采用大鼠下丘脑细胞研究遍地金提取物对 [3H]标记的去甲肾上腺素重摄取的影响。结果 :遍地金提取物 0 .76mg·mL- 1 与St.John’sWort 0 .87mg·mL- 1 抑制率相当 (抑制率为 5 3 % ) ,前者的IC50 为 7.5 0 μg·mL- 1 ,后者的IC50 为 19.41μg·mL- 1 。结论 :遍地金提取物在 0 .76～ 2 4.3 3mg·mL- 1 浓度范围内可抑制大鼠下丘脑组织对去甲肾上腺素重摄取。     

华蟾素诱导HL-60细胞凋亡及机制研究

目的：观察华蟾素（cinobufacini）对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用的机制。方法：以HL-60细胞为研究对象，采用MTT法观察细胞增殖作用；Annexin V-FITC／PI双染和吖啶橙／溴乙锭（AO／EB）荧光染色法检测细胞凋亡；罗丹明染色法检测线粒体膜电位；分光光度法检测Caspase-3活性。结果：在0．78～6．25μg&#183;ml^-1，华蟾素能明显的抑制HL-60细胞的增殖；华蟾素作用24h后，AnnexinV阳性的细胞从7．81％增加至66．02％，而且在荧光显微镜下可以明显观察到凋亡细胞；线粒体膜电位下降和Caspase-3活性升高。结论：华蟾素能够抑制HL-60细胞增殖，这种作用与其诱导细胞凋亡破坏线粒体功能和激活Caspase-3有关。