用斑点免疫结合法测定登革病毒单克隆抗体亲和力

建立斑点免疫结合法（ＤＩＡ）测定抗体相对亲和力。用此法出定了登革病毒Ⅱ型非结构蛋白ＮＳ１四株单克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）的相对亲和力，４株ＭｃＡｂｓ对ＮＳ１的亲和力各不相同。按５０％最大结合浓度分析，抗体株６─１／Ｃ为０．０５μｇ／ｍｌ．１─７／Ｆ为０．６７μｇ／ｍｌ．５Ｄ为２５．００μｇ／ｍｌ，３─１１／Ｃ为５７．００μｇ／ｍｌ。以上结果为应用这些单克隆抗体提供了依据。同时，说明用ＤＩＡ法测定ＭｃＡｂ相对亲和力的可行性。     

小鼠腺病毒单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤技术获得４株分泌抗小鼠腺病毒（ＭｕｒｉｎｅＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＭＡｄ）单克隆抗体细胞株，并对其特性进行分析。经鉴定，它们所分泌的抗体类型均为ＩｇＭ，腹水效价为１０－３～１０－６。相对亲和力分别为０．１μｇ／ｍｌ（Ａ９）、０．６５μｇ／ｍｌ（Ｂｌ）、１２．５μｇ／ｍｌ（Ｇ４）和２３μｇ／ｍｌ（Ｄ４）。与其他１０种鼠源性病毒均无交叉反应，表明ＭｃＡｂ具有良好的特异性。单抗标记ＦＩＴＣ后用于人用鼠源性单抗制品及各种传代细胞和原代细胞中ＭＡｄ检测，获得良好的实验结果。     

抗CD3McAb和rhGM—CSF对再障患者CFU—GM生长的体外影响的研究

用ＣＦＵ－ＧＭ单固体琼脂培养技术研究了抗ＣＤ３单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和重组人集落刺激因子对再生障碍性贫血（ＡＡ）患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长进行研究。结果表明：１０μｇ／ｍｌ的抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和０．１μｇ／ｍｌ的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ均可增加ＡＡ患者ＣＦＵ－ＧＭ的集落数,抗ＣＤ３ＭｃＡｂ作用较ｒｈＧＭ＝ＣＳＦ显著,且不同患者对抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的敏感性不同,对ＡＡ患者,临床治疗时,应先行     

抗CD_3McAb和rhGM-CSF对再障患者CFU-GM生长的体外影响的研究

用ＣＦＵＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗ＣＤ３单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和重组人集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）对再生障碍性贫血（ＡＡ）患者骨髓ＣＦＵＧＭ体外生长进行研究。结果表明：１０μｇ／ｍｌ的抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和０．１μｇ／ｍｌ的ｒｈＧＭＣＳＦ均可增加ＡＡ患者ＣＦＵＧＭ的集落数（Ｐ＜０．０１）,抗ＣＤ３ＭｃＡｂ作用较ｒｈＧＭＣＳＦ显著（Ｐ＜０．０１）,且不同患者对抗ＣＤ３ＭｃＡｂ和ｒｈＧＭＣＳＦ的敏感性不同。对ＡＡ患者,临床治疗时,应先行药敏试验,再根据其结果制定治疗方案     

ATG和抗CD_3McAb对再障患者CFU－GM生长的体外影响研究

用ＣＦＵ－ＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗人胸腺细胞球蛋白（ＡＴＧ）和抗ＣＤ３单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对１８例再生障碍性贫血（ＡＡ）患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长的影响。结果表明，１．加入１６．７μｇ／ｍｌＡＴＧ或１：５０抗ＣＤ３ＭｃＡｂ，体外均可增加ＡＡ患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的集落数（Ｐ＜０．０５），两者的作用无显著差异（Ｐ＞０．０５）。２．ＡＴＧ和抗ＣＤ３ＭｃＡｂ对ＡＡ患者干细胞缺乏型和免疫介导型的作用无显著差异（Ｐ＞０．０５）。用此项技术对ＡＡ患者作药敏试验，并加测外周血ＣＤ８＋、ＤＲ＋细胞比值，可作为选择免疫抑制疗法的参考。     

阳离子交换色谱—步法制备级纯化单克隆抗体

目的：应用快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立一种一步法制备级纯化单克隆抗体方法．方法：将ＭｃＡｂ腹水用ｐＨ６．０，０．０ｌｍｏ１／ＬＰＢ透析或稀释８倍后直接上ＳＰ－４０ＨＲ阳离于交换色谱柱，用ＰＢ－ＮａＣｌ二元线性离子梯度洗脱，即得到纯化的ＭｃＡｂ．结果：每次上样量７０～８０ｍｌ腹水，可获得纯化ＭｃＡｂ５００～５８０ｍｇ，得率７～７．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为７０％～７５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测纯度为大于９２％，ＡＢＣ染色法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏ１／Ｌ），一次纯化周期仅需５０ｍｉｎ。结论：本方法操作简单，既具有常压色谱的制备量，又具有ＨＰＬＣ的纯化速度，是获得高纯度、高活性ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的实用纯化方法。     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５重组蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组ＨＣＶＮＳ５区蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行融合,经有限稀释克隆３次后制备分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,并用酶免疫（ＥＩＡ）法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出６株能稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株,命名为２Ｃ８,２Ｄ２,１Ｄ６,２Ｇ２,１Ｆ５和１Ｆ１０。这６株ＭｃＡｂ与ＮＳ５重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的ＥＩＡ抗体滴度为１∶４００～１∶１６００,其中１株诱生的同系小鼠腹水滴度为１∶８００００。这６株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１亚型。结论该ＭｃＡｂ的制备,可为ＨＣＶ感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。     

含天花粉蛋白的抗人大肠癌免疫毒素制备及其细胞毒性研究

用异型双功能连接剂ＳＰＤＰ，将核糖体抑制蛋白一天花粉蛋白（ＴＣＳ）共价连接在单克隆抗体ＮＤ－１上，制成免疫毒素，此单抗与人大肠癌细胞表面抗原一大分子表面抗原（ＬＥＡ）有高度亲合能力。连接物ＮＤ－１－ＴＣＳ用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析纯化。间接免疫荧光试验结果表明，ＮＤ－１－ＴＣＳ保留了较高的抗体活性。体外细胞毒性试验表明，ＮＤ－１－ＴＣＳ对人大肠癌细胞ＣＸ－１的ＩＣ＿（５０）。为０．３６μｇ／ｍｌ．细胞毒性ＮＤ－１和ＴＣＳ混合物高１０倍。ＮＤ－１－ＴＣＳ对人大肠癌细胞的细胞毒性比非抗原携带细胞ＳＰ＿（２／０）高６０倍。此免疫毒素在人大肠癌的治疗方面有应用前景。     

系统性红斑狼疮患者血清,尿β微球蛋白的测定

对２６例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患的血清，尿β２微球蛋白（β２－Ｍ）行放射免疫测定，发现ＳＬＥ患血β２－Ｍ平均值为４．２６±０．４μｇ／ｍｌ，尿β２－Ｍ平均值为１．７９±０．７１μｇ／ｍｌ均明显高于正常值，同时作了血清抗核抗体（ＡＮＡ）及抗双链ＤＮＡ抗体（Ａｎｔｉ－ｄｓＤＮＡ）的测定。结果表明：血，尿β２－Ｍ升高与ＳＬＥ病情活动，肾损害程度呈高度相关（ｒ＝０．９７）。与ＡＮＡ滴度呈中度相关（ｒ     

ATG和抗CD3McAb对再障患者CFU—GM生长的体外影响研究

用ＣＦＵ－ＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗人胸腺细胞球蛋白和抗ＣＤ３单克隆抗体对１８例再生障碍性贫血患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长的影响。结果表明，１．加入１６．７μｇ／ｍｌＡＴＧ或１：５０抗ＣＤ３ＭｃＡｂ，体外均可增加ＡＡ患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的集落数，再者的作用无显著差异。     

阳离子交换色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

应用快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立一种一步法制备级纯化单隆抗体方法。方法：将ＭｃＡｂ腹水用ｐＨ６．０，０．０１ｍｏｌ／Ｌ ＰＢ透析或稀释８倍后直接上ＳＰ－４０ＨＲ阳离子交换色谱柱，用ＰＢ－ＮａＣｌ二元线性离子梯度洗脱，即得到纯化的ＭｃＡｂ。结果：每次上样量７０～８０ｍｌ腹水，可获得纯化ＭｃＡｂ５００～５８０ｍｇ，得率７～７．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为７０％～７５％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测纯度为     

洋地黄毒甙体外抗人癌细胞株的作用

目的：探讨洋地黄毒甙体外抗肿瘤作用。方法：以台盼蓝排染法、中性红活染法和克隆形成实验测定洋地黄毒甙（ＤＴ）对多种人癌细胞株的细胞毒作用。结果：０．０１～１．２５μｇ／ｍｌＤＴ在体外能显著杀伤ＨＬ－６０．Ｋ５６２．ＳＭＭＣ－７７２１，ＳＧＣ－７９０１细胞，并呈剂量依赖性，药物作用２４ｈ．ＩＣ５０分别是０．１３２．０．１８２．０．２６５．０．４８９μｇ／ｍｌ。对正常成纤维细胞株ＨＬＦ的ＩＣ（５０）为４．２８８μｇ／ｍｌ．明显高于癌细胞，对癌细胞具有选择毒性作用。克隆形成实验中，０．０１～１．２５μｇ／ｍｌＤＴ处理１２ｈ，对ＨＬ－６０和ＳＧＣ－７９０１细胞集落形成有明显的抑制作用，ＩＣ５０分别是０．０５６．０．ｌ１９μｇ／ｍｌ。结论：应用洋地黄毒甙及其他Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶抑制剂防治肿瘤是一个值得探讨新方向。     

血吸虫循环免疫复合物解离后抗原及抗体的免疫反应性研究

将血吸虫循环免疫复合物（ＣＩＣ）用新方法解离后，特异性测定其上的抗原（Ａｇ）及抗体（Ａｂ），并以可溶性血吸虫卵抗原（ＳＥＡ）、多克隆、单克隆抗体（Ｐｃａｂ、ＭｂＡｂ）用间接法对比测定感染者血清中循环抗原（ＣＡｇ）及循环抗体（ＣＡｂ）通过１０２例日本血吸虫病人及４５名健康人ＣＩＣ解离后和血清的特异性对比测定结果表明，ＣＩＣ解离后的Ａｇ及Ａｂ水平（ＯＤ均值）测定，显示满意的特异性和敏感性，与用抗ＳＥＡ－和抗ＣＣＡ－ＭｃＡｂ测定ＣＡｇ水平（ＯＤ均值）相比较，具有优于或相似的检测效果，采用抗ＳＥＡ－ＰｃＡｂ和ＳＥＡ测定血谱中的ＣＡｇ及ＣＡｂ水平（ＯＤ均值）时，均取得很好效果，且其ＣＡｇ水平均显著地高于用２种ＭｃＡｂ检测ＣＡｇ的水平。上述制剂测定ＣＩＣ解离后及血清中的Ａｇ、Ａｂ及ＣＡｇ、ＣＡｂ，可起着互补诊断的效果。本项研究结果可为今后选用适宜的血吸虫病血清学诊断的检测途径，提供重要的参考依据。     

系统性红斑狼疮患者血清、尿β_2微球蛋白的测定

对２６例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者的血清、尿β２微球蛋白（β２－Ｍ）行放射免疫测定，发现ＳＬＥ患者血β２－Ｍ平均值为４．２６±０．４μｇ／ｍｌ，尿β２－Ｍ平均值为１．７９±０．７１μｇ／ｍｌ均明显高于正常值。同时作了血清抗核抗体（ＡＮＡ）及抗双链ＤＮＡ抗体（Ａｎｔｉ－ｄｓＤＮＡ）的测定。结果表明：血、尿β２－Ｍ的升高与ＳＬＥ病情活动、肾损害程度呈高度相关（ｒ＝０．９７），与ＡＮＡ滴度呈中度相关（ｒ＝０．４６），提示血、尿β２－Ｍ的测定可作为判断病情活动、疗效观察及预后的有效指标。     

不饱和脂肪酸对肺癌细胞的抑制作用

不饱和脂肪酸（ＬＡ）浓度为２５μｇ／ｍｌ，对人肺腺癌细胞系（ＳＰＣ－Ａ１）细胞和二倍体人胚肺细胞系（ＨＬＦ）细胞抑制率分别为：９８．４±２．２％，１８．０±２．１％（Ｐ＜０．００１）。表现为对恶性细胞的选择性抑制作用。ＳＰＣ－Ａ１对５μｇ／ｍｌ ＬＡ无反应，１μＭ丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）对ＳＰＣ－Ａ１细胞抑制率为４３．４±２．９％而当用１μｍ ＭＭＣ处理这种对５μｇ／ｍｌ ＬＡ无反应的ＳＰＣ－Ａ１时，     

黄芪皂甙对培养心肌细胞损伤的影响

从蒙古黄芪的根中提取黄芪皂甙（ＡＳ），研究ＡＳ对培养的新生大鼠心肌细胞损伤的影响。在培养基中加入黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶（Ｘ－ＸＯＤ）和丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ），损伤心肌细胞以及用缺氧－复氧的方法造成心肌细胞损伤。实验组加入不同剂量的ＡＳ（１～５０μｇ／ｍｌ），对照组用培养基代替ＡＳ两组加入ＸＯＤ和ＭＭＣ以及缺氧３ｈ复氧３０ｍｉｎ后，对照组心肌细胞内ＬＤＨ的漏出明显增加，而线粒体活性值明显受抑。ＡＳ（１～２５μｇ／ｍｌ）可以保护心肌细胞，减轻Ｘ－ＸＯＤ，ＭＭＣ及缺氧－复氧所致的损伤，使ＬＤＨ的释放量显著低于对照组，而线粒活性值有较大的恢复（Ｐ＜０．０５）。在１～２５μｇ／ｍｌ剂量范围内ＡＳ的抗损伤作用呈剂量相关性增加。但使用５０μｇ／ｍｌ的ＡＳ没有能观察到这种抗损伤作用。结论：ＡＳ（１～２５μｇ／ｍｌ）对培养的新生大鼠心肌细胞具有抗自由基损伤及ＭＭＣ损伤的作用。     

恶性疟原虫抗独特型抗体的初步研究

用抗恶性疟原虫单克隆抗体１３Ａ２，制备兔抗血清，经ＢＡＬＢ／ｃ－ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ和１３Ａ２ＭｃＡｂ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱提纯，得到抗独特型抗体（Ａｂ２）。免疫双扩散试验和ＥＬＩＳＡ试验表明：抗独特型抗体仅与１３Ａ２ＭｃＡｂ反应。４ｉ试验显示：当恶性疟原虫抗原浓度为８０μｇ／ｍｌ，对１３Ａ２Ｉｄ－Ａｎｔｉｌ３Ａ２Ｉｄ系统产生８１％的抗体结合抑制率，而伯氏疟原虫和诺氏疟原虫抗原检测，抗体结合抑制率分别为２７％和２．５％。兔抗血清中抗Ａｂ２抗体（Ａｂ３）滴度为１：６４０，提示此抗独特型抗体可替代原始抗原诱生抗恶性疟抗体。     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

高效液相色谱法同时测定生物体液中TMP、SMZ、Ac-SMZ的含量

建立了同时测定生物体液中磺胺甲基异恶唑、乙酰磺胺甲基异恶唑和甲氧苄啶的反相高效液相色谱分析方法。药物在ＯＤＳ柱上分离，流动相为甲醇－０．０６７ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲溶液（３５：６５Ｖ／Ｖ），检测波长为２２５ｎｍ，ＴＭＰ，ＳＭＺ和Ａｃ－ＳＭＺ的检测限可分别达到０．４μｇ／ｍｌ，０．１μｇ／ｍｌ和０．３μｇ／ｍｌ。原型和代谢产物均可用有机酸经简单提取，该法精确、灵敏，并适用于药代动力学研究。     

青霉烷砜酸和头孢哌酮复合剂体外抗菌效果的观察

作者对青霉烷砜酸（ＳＢＴ）与头孢哌酮（ＣＰＺ）的复合剂（ＣＰＺ－ＳＢＴ）进行体外ＭＩＣ和体内ＥＤ５０的测定。ＣＰＺ－ＳＢＴ对产β内酰胺酶的金黄色葡萄球菌１－９３株、大肠杆菌３－３９株和不产β内酰胺酶的金黄色葡萄球菌２５９２３株、大肠杆菌２５９２２株、肺炎链球菌９３０６２４株、铜绿假单胞菌９４０４１６株感染小鼠的ＥＤ５０分别为０．８３１２、１．０５２２、１．１９７７、１．５６３４、０．７７８３、１．２２０７ｍｇ／ｋｇ，ＣＰＺ分别为１．８４１８、２．５５３９、１．５７７８、１．８４１８、０．９７８１、１．４１５９ｍｇ／ｋｇ，ＳＢＴ几乎无任何抗菌活性。ＣＰＺ－ＳＢＴ对金黄色葡萄球菌１．９３株和大肠杆菌３９３株的ＭＩＣ分别为８和１６μｇ／ｍｌ，ＣＰＺ分别为３２和６４μｇ／ｍｌ，ＳＢＴ均＞１２８μｇ／ｍｌ。实验结果表明ＳＢＴ是活性很强的β内酰胺酶抑制剂，与ＣＰＺ合用对产β内酰胺酶的细菌有强大的体内、外抗菌作用。