Fas及其配体在腰椎间盘组织中的表达及意义

目的了解Fas与FasL在正常椎间盘及椎间盘突出症患者椎间盘组织中的表达情况。方法收集20例腰椎间盘突出症患者的椎间盘组织(破裂型与非破裂型各10例)及8例脑死亡者的正常椎间盘组织,通过免疫组织化学观察FasL,Fas的表达情况。结果正常髓核组织中仅有FasL的表达,突出的椎间盘组织中存在FasL,Fas的表达,而且表达程度在正常组与腰椎间盘突出症患者组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论正常髓核组织中存在FasL的表达,提示FasL是使髓核组织产生免疫豁免效应的一个重要因素。当椎间盘突出时(纤维环破裂),则会在局部激发炎症反应,引起髓核细胞凋亡,而髓核细胞通过自分泌或旁分泌途径导致FasL表达增高是可能的机制之一。     

重组质粒介导hTGF-β1基因在体转染模型动物椎间盘髓核细胞的表达

目的观察以质粒为载体的外源治疗基因pACCMV—hTGF—β1在体转染模型动物腰椎间盘髓核细胞后的表达。方法将扩增后的重组质粒基因注射于模型动物的腰椎间盘髓核细胞中,手术后不同时间取出椎间盘,用免疫组织化学方法对椎间盘髓核细胞进行基因表达产物的测定;并利用CMIAS图像分析系统进行半定量观察。结果免疫组织化学染色显示注射pACCMV-hTGF-β1椎间盘,4d组即呈现阳性颗粒。阳性表达可持续至少2周,实验对照组阳性表达仅维持3d,空白组呈阴性反应。结论椎间盘髓核作为靶细胞能够被外源基因转染,并且能在相当长时间内表达TGF-β1蛋白。     

牛磺酸对心肌缺血损伤细胞凋亡与Fas/FasL基因表达变化的影响

目的探讨大鼠心肌缺血损伤心肌细胞凋亡与Fas/FasL基因表达变化及牛磺酸对其的影响。方法结扎冠状动脉制备心肌缺血模型,转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学法检测Fas/FasL蛋白水平,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分析Fas基因mRNA表达变化。结果心肌缺血后心肌细胞凋亡指数、Fas/FasL蛋白阳性染色细胞指数及Fas基因的mRNA表达水平均明显增加,心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量升高,Ca2+-ATP酶活性降低。牛磺酸能明显降低心肌细胞凋亡指数,Fas基因mRNA表达及Fas/FasL蛋白阳性染色细胞指数,抑制心肌组织MDA的生成,提高Ca2+-ATP酶活性。结论牛磺酸对心肌缺血的心肌细胞凋亡与Fas/FasL基因表达水平增高有较好的拮抗作用。     

六味地黄丸对兔退变椎间盘软骨终板细胞的保护作用

目的探讨六味地黄丸含药血清对兔退变椎间盘软骨终板细胞的保护作用。方法选择8月龄成年新西兰兔利用"异常应力负荷及椎间失稳法"建立新西兰兔腰椎椎间盘退变模型。病理切片确认模型成功后,取椎间盘分离下位软骨终板进行细胞培养,将生长良好的细胞随机分为含药组、损伤组与对照组。含药组体积分数为10%的六味地黄丸含药血清加体积分数为10%的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基;损伤组给予体积分数为10%的胎牛血清与浓度为5μg·L-1的TNF-α混合的DMEM培养基;对照组细胞培养用胎牛血清体积分数为10%的DMEM培养基。使用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组兔退变椎间盘软骨终板细胞增殖的变化。TUNEL法计数软骨终板活细胞与凋亡细胞数量,RT-PCR测定其Fas/Fas L的表达水平。结果对照组软骨终板细胞初期正常生长,增殖良好,随着时间延长,软骨终板细胞数量减少,凋亡细胞数量增多,细胞外基质胶原减少,细胞形态变化快。损伤组能够明显抑制椎间盘软骨终板细胞的增殖,软骨细胞及细胞外基质胶原数量减少明显,同一时间点比较,软骨细胞凋亡数量增多,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。而含药组软骨终板细胞增殖缓慢,软骨细胞下降少,细胞凋亡数量减少,细胞外基质胶原成分下降不明显,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组软骨终板内Fas/Fas L的表达水平随时间逐渐增强,同期比较,损伤组Fas/Fas L表达水平高于对照组,而含药组软骨终板水平Fas/Fas L较损伤组表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄丸含药血清能够抑制TNF-α诱导的兔退变椎间盘软骨终板细胞损伤,减少软骨细胞凋亡,起到延缓椎间盘损伤的作用,其机制可能与抑制Fas/Fas L基因在退变椎间盘软骨终板中的过度表达有关。     

退变腰椎间盘髓核组织中ADAMTS-5蛋白表达的临床意义

目的探讨ADAMTS-5蛋白在退变的腰椎间盘髓核组织中的表达的意义。方法采用免疫组织化学方法检测30例退变突出腰椎间盘患者（退变组）和28例腰椎骨折患者（对照组）腰椎间盘髓核组织ADAMTS-5蛋白表达情况。结果退变组27例（90.0%）表达阳性,对照组3例（10.7%）表达阳性,差异有统计学意义（χ2=17.8,P〈0.05）。结论 ADAMTS-5蛋白高表达可能是腰椎间盘退变突出的重要因素之一。     

富马酸二甲酯对大鼠椎间盘退变髓核中低氧诱导因子-1α表达和功能的影响

目的 建立SD大鼠腰椎间盘退变模型采用测定低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在大鼠模型腰椎间盘髓核中的表达情况及作用,探讨富马酸二甲酯(DMF)对其表达及功能的影响.方法 对大鼠腰椎退变模型行磁共振成像(MRI)扫描后,取L4/L5节段髓核组织行蛋白多糖检测,石蜡包埋、切片后进行HIF-1α的免疫组化染色.结果 MRI结果显示模型对照组(B组)的椎间盘髓核存在明显的退变,T2加权相信号降低 (P<0.05).B组髓核中的HIF-1α呈强阳性,与另两组比较差异有统计学意义(P<0.05).对全部的髓核组织的进行蛋白多糖含量的检测,可见对照组B组的蛋白多糖成分(2.06±0.04) ng·g-1,流失最为严重,富马酸二甲酯用药组(C组)(2.06±0.05) ng·g-1相对较轻,正常对照组(A组)含量为(3.28±0.03) ng·g-1,三组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α在退变的腰椎间盘组织中表达增高,其表达与腰椎的退变密切相关.富马酸二甲酯作为HIF-1α的抑制剂能降低HIF-1α的表达,抑制和延缓腰椎间盘退变的形成和发展.     

富马酸二甲酯对大鼠椎间盘退变髓核中HIF1α表达和功能的影响

目的 在人工创立的SD品系大鼠的腰椎间盘退变模型基础上,采用MRI扫描来筛选并检验模型,免疫组织化学等实验方法测定HIF-1a在实验动物模型的腰椎间盘髓核中的表达情况及作用,以此探讨临床药物富马酸二甲酯对其表达及分泌的影响作用。方法: 实验研究对象为SD品种大鼠48只,依据科研设计将大鼠随机分为三组,正常对照组A(不经任何处理)、模型对照组B(单纯行动物模型处理)、实验组即富马酸二甲酯组C(建立模型后口服药物),每组16只。实验组采用手术方式建立实验模型：麻醉后将实验组大鼠的L1至L6节段的棘上、棘间韧带以及两旁的竖棘肌、棘突关节突等全部切除。实验组动物模型建立手术后2周开始给药,富马酸二甲酯组C组以 50mg/kg/d剂量灌胃给药,持续给药6周,实验对照组B组灌以等剂量的生理盐水,正常对照组A组未行任何干预措施。于建模术后 8周于麻醉下对全部实验对象行MRI扫描,免疫组化检测研究对象的椎间盘髓核组织。 结论: 退变的椎间盘髓核组织中HIF-1α表达加强,其强度与腰椎的退变密切相关。富马酸二甲酯能明显降低髓核组织细胞中的HIF-1α表达强度,在抑制和延缓腰椎间盘的退变和加重方面具有临床意义。     

蠲痹汤对胶原诱导性关节炎大鼠血清和滑膜Fas/FasL系统的影响

目的观察蠲痹汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清及滑膜组织中Fas/FasL系统的影响。方法用造模成功的牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠14只按随机数字表法分为药物组(7只)和模型组(7只),未造模的7只作为对照组。对照组、模型组按10mL/kg灌服0.9%氯化钠注射液,药物组按38.61mg/kg灌服蠲痹汤,每日1次,连续4周。末次灌胃后取材,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中Fas、FasL的浓度,免疫组织化学法检测滑膜组织中Fas、FasL的表达情况。结果与对照组相比,模型组和药物组血清和滑膜组织中Fas表达明显升高,FasL表达降低。与模型组相比,药物组血清和滑膜组织中Fas表达降低,FasL表达升高。结论 FasL在药物组血清和滑膜组织中表达高于模型组,而Fas表达降低,提示蠲痹汤能调节Fas/FasL系统介导的细胞凋亡机制、减缓CIA大鼠的症状,为临床治疗类风湿关节炎提供一定的理论基础。     

MMP-2、MMP-14、TIMP-2在退变腰椎间盘髓核组织的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-14（MMP-14）和金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）在退变腰椎间盘髓核组织表达的意义。方法应用免疫组织化学法检测36例退变腰椎间盘髓核组织（退变组）、20例腰椎骨折腰椎间盘髓核组织（对照组）MMP-2、MMP-14和TIMP-2表达。结果退变组MMP-2、MMP-14表达明显高于对照组（P〈0.001）,TIMP-2表达无明显改变（P〉0.05）;椎间盘退变等级与MMP-2、MMP-14及TIMP-2表达呈正相关（分别rs=0.710,P〈0.001;rs=0.617,P〈0.001;rs=0.406,P=0.014）;MMP-2与MMP-14、TIMP-2表达呈正相关（分别rs=0.665,P〈0.001;rs=0.516,P=0.001）。结论 MMP-2、MMP-14和TIMP-2表达加强可能是导致椎间盘退变的重要原因之一。     

清热化瘀滋阴方对系统性红斑狼疮外周血淋巴细胞凋亡及Fas、FasL基因表达的影响

目的：探讨中药清热化瘀滋阴方对系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞凋亡及Fas、FasL基因表达的影响。方法：临床筛选SLE患者80例,完全随机分为治疗组（清热化瘀滋阴方配合激素组）和对照组（单用激素组）各40例,服药3个月,淋巴细胞分离液分离治疗前后SLE患者外周血淋巴细胞,采用流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率;采用RT-PCR法检测淋巴细胞Fas、FasL基因表达情况。结果：清热化瘀滋阴方治疗后SLE患者外周血淋巴细胞凋亡率较治疗前明显下降（P〈0.01）,并明显低于对照组（P〈0.01）;两组治疗后Fas、FasL基因的表达均明显下降,治疗组Fas基因的表达明显低于对照组（P〈0.01）。结论：清热化瘀滋阴方可能通过降低SLE患者外周血淋巴细胞凋亡率,下调淋巴细胞Fas、FasL基因的表达水平,改善免疫紊乱而发挥作用。     

鼻咽癌外周血单个核细胞Fas/FasL的表达与预后的相关性研究

目的:研究凋亡相关基因Fas/FasL在鼻咽癌患者诱导化疗前后外周血单个核细胞中的表达,探讨其与鼻咽癌预后的相关性。方法:采用流式细胞仪对2002年收治的38例鼻咽癌诱导化疗前后及15例健康对照组外周血单个核细胞中Fas/FasL的表达进行检测,并结合临床资料进行分析。结果:5a生存率为65.8%(25/38),死亡13例。鼻咽癌患者外周血单个核细胞中Fas/FasL的表达明显高于健康对照组(P<0.05);Ⅲ+Ⅳa期的表达明显高于Ⅱ期(P<0.05)。化疗后与化疗前比较,Fas表达明显增高(P<0.05),FasL表达稍增高(P>0.05)。化疗前死亡组Fas/FasL的表达明显高于生存组(P<0.05);化疗后死亡组Fas的表达明显高于生存组(P<0.05),FasL的表达明显低于生存组(P<0.05)。生存组化疗后Fas/FasL明显高于化疗前(P<0.01,P<0.05)。死亡组化疗后Fas明显高于化疗前(P<0.01),FasL稍低于化疗前(P>0.05)。结论:外周血单个核细胞Fas/FasL的表达及诱导化疗前后的改变与鼻咽癌分期、预后有关,在鼻咽癌患者中对其进行检测可能具有重要临床意义。     

腰椎间盘突出症的超微结构病理研究

目的：从超微结构病理角度研究破碎型腰椎间盘突出症和退变型腰椎间盘突出症的病理机制和病理过程。方法：选取40例腰椎间盘突出症患者的椎间盘手术标本，依术中所见分为破碎型腰椎间盘突出组（破碎组）和退变型腰椎间盘突出组（退变组）。椎间盘标本行光镜和透射电镜检查，对比研究两组形态学差异。结果：光镜检查见破碎组组织破坏，炎细胞浸润，血管化；退变组纤维环增厚，软骨基质增生。电镜检查破碎组见髓核基质溶解，胶原纤维断裂崩解，细胞破碎、坏死；退变组见相对完整纤维环、髓核结构，胶原纤维致密、增生，细胞合成活跃。结论：破碎型腰椎间盘突出症是以组织坏死、基质溶解为主的病理过程。退变型腰椎间盘突出是以增生反应为主反应的病理过程。     

六味地黄丸对兔退变椎间盘髓核及纤维环的保护作用

目的探讨六味地黄丸对兔退变椎间盘髓核及纤维环细胞的保护作用。方法选择8月龄成年新西兰兔6只利用异常应力负荷及椎间失稳法建立新西兰兔腰椎椎间盘退变模型,病理切片确认模型成功后,取椎间盘分离软骨终板,将髓核及纤维环组织进行细胞培养,将生长良好的细胞随机分为对照组、损伤组与含药组。对照组细胞培养用胎牛血清体积分数为0.01的DMEM培养基;损伤组给予体积分数为0.01的胎牛血清与浓度为5μg/L的TNF-a混合的DMEM培养基;含药组为体积分数为0.01的六味地黄丸含药血清加体积分数为0.01的胎牛血清与浓度为5μg/L的TNF-a混合的DMEM培养基。使用细胞增殖—毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组兔退变椎间盘细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-13基因的表达差别。结果对照组椎间盘细胞初期正常生长,增殖良好,随着时间延长,细胞数量减少,凋亡细胞数量增多,细胞外基质胶原减少,细胞形态变化快。损伤组能够明显抑制椎间盘软细胞的增殖,细胞及细胞外基质胶原数量减少明显,同时间点比较,细胞凋亡数量增多,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),而含药组细胞增殖缓慢,细胞数量下降缓慢,细胞凋亡数量减少,细胞外基质胶原成分下降不明显,3组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,损伤组椎间盘细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达下调增加,基质金属蛋白酶-13基因表达上调明显。与损伤组比较,而六味地黄丸含药血清组椎间盘细胞蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达上调,基质金属蛋白酶-13基因表达下调,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄丸含药血清能够抑制TNF-a诱导的兔退变椎间盘细胞损伤,起到延缓椎间盘损伤的作用。其机制可能与上调蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达及下调基质金属蛋白酶表达有关。     

退变腰椎间盘髓核组织中转化生长因子-α、基质金属蛋白酶-9的表达及意义

目的 观察退变腰椎间盘髓核组织中转化生长因子-α（TGF-α）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达并探讨其意义.方法 标本分别取自退变组和对照组.所有标本一份制作为石蜡切片,用免疫组织化学方法检测TGF-α、MMP-9蛋白表达情况;另一份用RT-PCR方法检测TGF-α、MMP-9 mRNA表达情况.结果 退变组腰椎间盘髓核组织中TGF-α、MMP-9的表达量均较对照组增多（蛋白水平：t=29.114,P＜0.01;t=19.926,P＜0.01.mRNA水平：t=47.642,P＜0.01;t=26.987,P＜0.01）,TGF-α和MMP-9蛋白、mRNA表达均呈正相关关系（蛋白水平：r=0.725,P＜0.01;mRNA水平：r=0.684,P＜0.01）.结论 TGF-α、MMP-9在正常与退变椎间盘髓核组织中表达量不同,退变椎间盘中二者表达量较高,两者可能与椎间盘退变有关.TGF-α对椎间盘退变的调节作用与MMP-9有一定的关系.     

Fas/FasL,Bcl-2/Bax和细胞凋亡在大鼠肾移植急性排斥中的作用

目的　探讨大鼠肾移植急性排斥反应中 Fas/FasL,B细胞淋巴瘤基因 2(Bcl -2)/Bax与细胞凋亡在免疫反应中的作用。方法　应用免疫组织化学法、原位杂交法及原位 DNA片段末端标记法,在大鼠移植后5 d分别检测 Fas/FasL、Bcl- 2/Bax和细胞凋亡在大鼠肾移植模型中的表达。结果　细胞凋亡、Fas/FasL表达及Bcl- 2/Bax mRNA的表达主要在移植肾小管上皮细胞发生,凋亡指数、Fas/FasL和Bax在急性排斥组的表达明显高于对照组,差异有显著意义(P<0. 05),Bcl- 2 的表达在两组之间差异无显著意义(P>0 .05)。结论　肾小管上皮细胞凋亡在大鼠移植肾急性排斥反应所致的移植肾损伤中起重要作用,Fas/FasL及 Bcl- 2/Bax系统可能参与移植肾急性排斥反应,是造成肾小管上皮细胞凋亡的重要因素。     

髓核细胞及其生物力学研究进展

<正>随着社会的老龄化进程,退行性疾病的发病率有所上升,腰椎间盘突出症在成人中的发生率较高,主要原因是椎间盘退变。首先纤维环、髓核细胞逐渐衰老、凋亡,并导致细胞结构改变和细胞外基质成分减少[1]。对髓核细胞力学特性的研究可阐明力学因素在髓核蜕变发病过程中的机制,同样     

踝三针治疗腰椎间盘突出症根性痛技术

腰椎间盘突出症系由于腰椎间盘纤维环退变或外伤发生裂隙,在外力作用下,使髓核等椎间盘组织向正后或后外方膨出或突出,刺激、压迫脊神经根,进而导致神经根炎症、神经根营养障碍和传导特性损害,出现腰痛、坐骨神经痛,甚     

补阳还五汤对兔腰椎间盘退变模型中软骨终板的影响

目的观察补阳还五汤对兔退变椎间盘中软骨终板的蛋白多糖（简称：PG）含量的影响,探讨其对椎间盘退变的治疗作用。方法①建立兔腰椎间盘退变模型,并用病理切片论证造模是否成功。②将造模后的兔子随机分成对照组（n=10）和治疗组（n=10）,分别予生理盐水和补阳还五汤治疗;治疗后1、2月各处死4只兔子取腰4/5椎间盘下位软骨终板做蛋白多糖（PG）含量测定。结果①造模后2月,椎间盘病理切片证明造模成功。②治疗组软骨终板中蛋白多糖逐渐含量增加;而对照组组软终板内蛋白多糖含量逐渐减少,组间和组内对比具有显著差异（P〈0.05）。结论补阳还五汤具有提高退变椎间盘软骨终板中蛋白多糖含量、抑制和治疗软骨终板退变的作用,是防治椎间盘退变新的途径。     

补阳还五汤对兔退变椎间盘中软骨终板血管芽的影响及意义

目的 观察补阳还五汤对兔退变椎间盘中软骨终板血管芽数目的影响,探讨其对椎间盘退变的治疗作用.方法 ①建立兔腰椎间盘退变模型,并用病理切片论证造模是否成功.②将造模后的兔子随机分成对照组(n=10)和治疗组(n=10),分别予生理盐水和补阳还五汤治疗;治疗后1、2月各处死4只兔子取腰4/5椎间盘下位软骨终板做软骨终板内血管芽数目测定.结果 ①造模后2个月,椎间盘病理切片证明造模成功.②治疗组软骨终板内血管芽数目逐渐增加;而对照组组软终板内血管芽数目逐渐减少,组间和组内对比具有显著差异(P＜0.05).结论 补阳还五汤具有促进退变椎间盘软骨终板中血管芽再生和改善软骨终板血供的作用,是防治椎间盘退变新的途径.     

氟比洛芬酯对兔腰椎间盘突出症的影响

目的:观察氟比洛芬酯注射液(flurbiprofen axetil injection,FAI)对腰椎间盘突出症兔椎间盘髓核组织中磷脂酶A2(PLA2)、前列腺素E2(PGE2)水平的影响,探讨FAI对腰椎间盘突出症的治疗作用及其机制。方法:雄性6月龄新西兰大白兔,于L3-4和L4-5节段椎间盘用18G针头行纤维环穿刺,制作兔腰椎间盘突出症动物模型。术后3周行计算机断层扫描(CT)检查,确认造模成功32只,随机分为治疗组和对照组,每组16只。采用硬膜外注射给药,治疗组注射FAI,对照组注射等量生理盐水。比较治疗前后的自由行走痛行为学评分;治疗结束后第7天处死动物,获取椎间盘组织,ELISA法测定其中的PLA2、PGE2水平,HE染色行形态学学观察。结果:与对照组比较,治疗后痛行为学评分治疗组显著下降(P<0.05),治疗组椎间盘髓核组织中PLA2和PGE2水平显著降低(P<0.05);HE染色显示:对照组椎间盘髓核及纤维环组织内可见肉芽组织生长,并有大量炎性细胞浸润;治疗组椎间盘髓核及纤维环组织内无肉芽组织生长及炎性细胞浸润。结论:FAI能显著降低腰椎间盘突出症兔椎间盘髓核组织中PLA2和PGE2水平,降低腰椎间盘组织病理损伤,在椎间盘突出症的治疗中发挥抗炎镇痛作用。