急性髓系白血病干细胞研究进展

急性髓系白血病干细胞多数亚型的干细胞具有相似的免疫表型(CD34 、Cd38-、CD90-、CD117-、CD123 )，表达核因子NF—κB。急性髓系白血病干细胞对化疗和放疗均不敏感，是急性髓系白血病复发的原因之一。选择急性髓系白血病干细胞高表达的抗原CD123或核因子NF—κB，作为清除急性髓系白血病干细胞或诱导急性髓系白血病干细胞凋亡的标记，是探索彻底治愈急性髓系白血病的最佳途径。     

急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1、CD34和CD117的表达

背景：血管细胞黏附分子1与白血病浸润密切相关,白血病细胞本身是否表达血管细胞黏附分子1,以及与疾病难治是否相关尚无定论。 目的：分析血管细胞黏附分子1、CD34、CD117在急性髓系白血病细胞表面的表达,3者之间的相互关系及与难治性急性髓系白血病的相关性。 方法：采用流式细胞技术检测16例急性髓系白血病细胞中血管细胞黏附分子1、CD34、CD117的表达,其中难治组6例,非难治组10例;同时以正常骨髓单个核细胞标本作对照。 结果与结论：急性髓系白血病细胞CD34、CD117表达高于对照组(P < 0.05)。难治组急性髓系白血病细胞CD34表达明显高于非难治组(P < 0.05)。难治组与非难治组CD117表达差异无显著性意义(P > 0.05)。急性髓系白血病细胞血管细胞黏附分子1表达与对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。难治组与非难治组血管细胞黏附分子1表达差异无显著性意义(P > 0.05)。表明急性髓系白血病细胞伴CD34表达,为不良预后指标之一,CD117、血管细胞黏附分子1表达与其是否难治无明显相关性。     

流式细胞仪检测急性婴幼儿白血病干细胞

背景：有关儿童急性髓细胞性白血病干细胞含量的测定及急性髓细胞性白血病患儿缓解后白血病干细胞含量与急性白血病微小残留病之间关系的研究国内外未见报道。 目的：通过测定急性髓细胞性白血病干细胞或急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC在儿童急性白血病患儿骨髓单个核细胞中的含量,研究急性髓细胞性白血病患儿缓解后白血病干细胞含量与急性白血病微小残留病水平之间的关联。 方法：收集白血病患儿113例次。采用骨髓单个核细胞分离及单细胞悬液制成单细胞悬液,进行单个核细胞染色、急性髓细胞性白血病干细胞分析及根据初诊免疫表型获得白血病相关表型,并采用该白血病相关免疫表型进行单抗组合和流式细胞术测定分析。 结果与结论：①初诊急性髓细胞性白血病组骨髓单个核细胞中急性髓细胞性白血病干细胞含量明显高于初诊急性淋巴细胞性白血病组和非肿瘤对照组(P均< 0.017),初诊急性淋巴细胞性白血病组骨髓单个核细胞中急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC含量显著高于非肿瘤对照组(P < 0.017)。②对33例次缓解急性髓细胞性白血病患儿急性髓细胞性白血病干细胞和急性白血病微小残留病相关性分析发现,两者存在显著负相关性。结果提示,①急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC也存在于初诊急性淋巴细胞性白血病患儿骨髓细胞中,且当急性淋巴细胞性白血病获完全缓解时急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC含量却没有下降,但非肿瘤对照组标本中急性髓细胞性白血病干细胞-IPIC的含量极微。②急性髓细胞性白血病患儿缓解后骨髓中急性髓细胞性白血病干细胞含量和急性白血病微小残留病水平之间存在着明显的负相关。     

预处理不含抗胸腺细胞球蛋白非血缘脐血移植治疗急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病306例随访评价

背景:脐血造血干细胞移植作为急性白血病的根治手段,应用越来越广泛,但是其在不同白血病的治疗效果尚无对比,通过分疾病的疗效对比,可指导不同患者进行移植方式的选择。目的:对比分析脐血造血干细胞移植治疗急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病的疗效差异。方法:回顾性分析接受非血缘脐血造血干细胞移植治疗的306例急性白血病患者的临床资料,其中急性淋巴细胞白血病194例,急性髓系白血病112例。所有患者均接受不含抗胸腺细胞球蛋白的清髓性预处理方案,预防移植物抗宿主病为环孢素联合吗替麦考酚酯。结果与结论:①除了急性淋巴细胞白血病移植后的复发率比急性髓系白血病略高以外,两组患者在接受非血缘脐血移植术后的疗效基本一致;②在青少年和年轻成人组(年龄15-39岁),急性髓细胞白血病的中性粒细胞和血小板植入速率均快于急性淋巴白血病白血病,其中CD34+细胞数和预处理方案是针对中性粒细胞植入的独立影响因素,而CD34+细胞数同时也是针对血小板植入的独立影响因素,在该年龄组,急性淋巴细胞白血病患者移植后的复发率依然高于急性髓系白血病,其中慢性移植物抗宿主病是独立影响因素;③移植后免疫重建检测提示,脐血移植后4个月时急性髓系白血病患者的脐血CD8+T细胞重建要优于急性淋巴细胞白血病患者;④上述数据说明,预处理不含抗胸腺细胞球蛋白的非血缘脐血移植对于急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病均有良好的疗效。中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)血液科具有干细胞移植资质。     

新疆乌鲁木齐地区142例急性白血病流式细胞术免疫分型研究

目的:研究新疆乌鲁木齐地区急性白血病(AL)患者免疫表型特征及分布特点。方法:选用细胞表面分子CD20、CD14、CD3、CD2、CD33、HLA-DR、CD15、CD10、CD5、CD22、CD7、CD13、CD34、CD11b、CD19、CD117等的单克隆抗体,采用流式细胞仪CD45/SSC双参数散点图设门法对142例AL患者进行免疫表型分析。结果:35例急性淋巴细胞白血病(ALL),其中6例伴有髓系抗原的表达(14.3%)且表达最频繁的为CD13;96例急性髓系白血病(AML),其中21例伴有淋系抗原的表达(21.9%)且表达最频繁的为CD7;11例为FAB难以分类的急性白血病(UAL),兼有淋系和髓系抗原的表达。ALL免疫分型特点在新疆汉族和维吾尔族(简称维族)中差异无统计学意义(P>0.05),在AML中,汉族髓系抗原的表达率依次为CD13>CD33>CD15,维族髓系抗原的表达率依次为CD13>CD15>CD14,且维族患者多伴有淋系抗原CD7的表达。结论:FCM免疫分型是在细胞形态学和细胞染色基础上对AL诊断与分型的重要补充,免疫表型的检测对AL的诊断和治疗有重要意义。     

急性髓系白血病患者外周血单个核细胞Toll样受体9以及血清肿瘤坏死因子和凋亡基因FAS的表达

背景：Toll样受体9(TLR9)、肿瘤坏死因子a、Fas可能共同参与白血病的发生发展过程。 目的：测定TLR9在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达及血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。 方法：从急性髓系白血病患者与正常对照组中分离出外周血单个核细胞,采用反转录-聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中TLR9 mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子α、Fas水平。 结果与结论：在急性髓系白血病患者初治组和难治复发组中,外周血单个核细胞中TLR9 mRNA表达高于正常对照组(P < 0.01),化疗后完全缓解组与正常对照组差异无显著性意义(P > 0.05);各病例组血清肿瘤坏死因子α、Fas水平显著高于正常对照组(P < 0.01)。TLR9 mRNA的表达与血清肿瘤坏死因子α、Fas水平均呈正相关。     

miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达下调

目的探讨miR-31-5p在急性髓系白血病中的表达变化,及其对白血病细胞功能的影响。方法用real-time PCR方法检测miR-31-5p在白血病患者及正常人外周血单个核细胞中的表达;用miR-31-5p模拟物转染人急性髓系白血病细胞系THP-1细胞,通过CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和单核系分化;用荧光报告基因和Western blot方法检测靶基因HuR的表达;用RNAi方法干扰内源性HuR的表达,并检测THP-1细胞的增殖和单核系分化。结果 miR-31-5p在急性髓系白血病患者外周血单个核细胞中的表达显著低于正常对照(P0.05);在THP-1细胞中过表达miR-31-5p可以抑制细胞增殖,并促进细胞向单核方向分化成熟;HuR为miR-31-5p的靶基因;干扰THP-1内源的HuR表达也会对THP-1的增殖和单核分化产生调控作用。结论 miR-31-5p在急性髓系白血病发生中可通过靶向抑制HuR发挥抑癌基因功能。     

白血病干细胞生物学特性的研究

目的通过对白血病原代细胞的体外培养,研究白血病干细胞(LSC)的生物学特性。方法分离18例白血病患者骨髓或外周血中单个核细胞(MNC),在体外进行培养观察,并用流式细胞术方法检测分离的MNC中LSC的数量及和细胞表面标记。结果从白血病患者中分离的MNC在体外培养1周后基本死亡。流式检测分离的MNC中免疫表型是CD34 CD38-CD123 的细胞群约有0.676%(0.03%~2%)。结论白血病干细胞难以在体外培养生长及扩增。外周血及骨髓中分离白血病患者的单个核细胞中,极少部分细胞表达干细胞标志。     

白血病干细胞生物学特性的研究

目的 通过对白血病原代细胞的体外培养,研究白血病干细胞(LSC)的生物学特性.方法 分离18例白血病患者骨髓或外周血中单个核细胞(MNC),在体外进行培养观察,并用流式细胞术方法检测分离的MNC中LSC的数量及和细胞表面标记.结果 从白血病患者中分离的MNC在体外培养1周后基本死亡.流式检测分离的MNC中免疫表型是CD34+CD38-CD123+的细胞群约有0.676%(0.03%～2%).结论 白血病干细胞难以在体外培养生长及扩增.外周血及骨髓中分离白血病患者的单个核细胞中,极少部分细胞表达干细胞标志.     

急性髓系白血病177例免疫分型特点及预后分析

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者免疫分型的特点及临床意义.方法:采用CD45/SSC双参数散点图设门方法对177例急性髓系白血病患者进行三或四色流式细胞术免疫分型分析.结果:177例AML显示,CD33,CD38,CD117,CD13及HLA-DR高度表达,阳性率分别为92.66%,81.36%,75.14%,68.93%和67.80%.40.7%的AML患者伴有淋系抗原表达,最常见的是CD7(22.6%),其次是CD19(7.91%).结论:多色流式细胞仪术免疫分型对AML的诊断及预后具有重要意义.     

急性髓细胞性白血病患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

背景：大量研究显示,肿瘤患者外周血T细胞表面共刺激分子CD28蛋白表达存在差异,提示共刺激通路异常可能与恶性肿瘤的发生进展有关。 目的：观察急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞共刺激信号分子CD28 mRNA在中的表达。 方法：急性髓细胞性白血病患者80例,其中M0型7例,M1型6例,M2型18例,M3型15例,M4型17例,M5型9例,M6型8例。并根据急性白血病疗效标准将80例患者分为完全治愈组、缓解组、未缓解组。采用Taqman探针实时荧光定量PCR检测80例患者及76名健康人群外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达。 结果与结论：急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞M1,M3和M4亚型中的CD28 mRNA表达量低于健康人群 (P< 0.05);急性髓细胞性白血病未缓解组中CD28 mRNA低于健康人群 (P < 0.05),完全治愈组和缓解组中CD28 mRNA表达与健康人群差异无显著性意义。说明急性髓细胞白血病患者外周血单个核细胞存在CD28 mRNA表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后有关。     

急性髓系白血病细胞条件培养液对间充质干细胞的生物学影响

背景：目前,关于急性髓系白血病骨髓微环境中的骨髓间充质干细胞生物学功能及分子改变尚不完全清楚。目的：综合生物信息学和细胞实验探究急性髓系白血病患者来源骨髓间充质干细胞的生物学功能改变,并探讨急性髓系白血病细胞条件培养液在其中的作用。方法：从GEO数据集中筛选差异基因进行富集分析,并构建蛋白质互作网络和获取Hub基因。培养急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞,使用急性髓系白血病细胞条件培养液处理健康供者的骨髓间充质干细胞,对各组细胞进行成脂诱导分化、成骨诱导分化、β-半乳糖苷酶染色、细胞周期检测和Hub基因的验证。结果与结论：(1)从GSE84881中获取急性髓系白血病患者和健康供者的骨髓间充质干细胞基因表达数据,筛选出184个上调基因和140个下调基因。(2)富集的生物学功能主要包括细胞周期、脂肪细胞分化、细胞代谢过程和MYC通路。根据Degree算法筛选出上调的10个Hub基因和下调的10个Hub基因。(3)通过体外细胞实验发现,与健康供者的骨髓间充质干细胞相比,急性髓系白血病患者骨髓间充质干细胞表面抗原未发生改变,但其成脂分化能力增强、成骨分化能力减弱、β-半乳糖苷酶阳性...     

白血病和正常血细胞的一些细胞因子及受体表达的比较研究

目的:研究白血病细胞和正常血细胞的细胞因子及相应受体(R)的表达及其意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应方法检测红白血病细胞系(HEL、K562)、髓系白血病细胞系(HL-60)、单核细胞白血病细胞系(U937)、巨核细胞白血病细胞系(DAMI、MEG-01)、T淋巴瘤细胞系(HUT78)及EB病毒感染的B细胞系(CA)和正常血细胞(CD34⁺造血干细胞、外周血单个核细胞、成熟粒细胞、巨核细胞及血小板)的多种细胞因子及受体的表达。结果:①CD34⁺造血干细胞同时表达IL-1(α、β)、IL-3、IL-6、GM-CSF、G-CSF及相应受体和干细胞因子受体(SCFR)、血小板生成素受体(MPL)基因,在成熟粒细胞仅表达IL-6、IL-6R、G-CSFR、GM-CSF,巨核细胞、血小板仅表达IL-3R、IL-6、IL-6R、MPL。而TGFβ₁、TNFα及相应受体在上述正常血细胞均有持续表达。②HEL、K562、HL-60、U937、DAMI、MEG-01、HUT78及CA可同时表达至少两种以上正调控因子及相应受体,而负调控因子TGFβ₁、TNFα及受体在上述各细胞系均有表达。结论:白血病细胞株细胞存在正性多自泌环节,白血病细胞的正、负自分泌因子失衡与白血病发病有重要关系。     

高白细胞性急性白血病临床表现与免疫表型研究

目的分析、比较各型高白细胞性急性白血病患者临床症状和白细胞分化的免疫表型,为该疾病的诊断、预后等提供依据。方法采用流式细胞术,对高白细胞性急性淋巴细胞性白血病(HLALL)和高白细胞性急性骨髓系白血病(HLAML)(共25例)、非高白细胞性急性淋巴细胞性白血病(NHLALL)和非高白细胞性急性髓系白血病(NHLAML)(共85例)的临床表现及免疫表型做比较分析。结果与NHLA比较,HLAL发病呈现急性及髓外发展的临床特征;对白血病细胞表面免疫学标记研究发现CD13和CD33为髓系细胞较特异表型,而HLALL可以同时出现多种免疫表型。结论 HLAL发病呈现急性、髓外发展且预测性差,CD33和CD13在白细胞免疫分型的髓系细胞中为较特异标志。     

CD7阳性在急性髓细胞白血病中表达的临床意义

随着系列单克隆抗体的应用,白血病细胞免疫分型的广泛开展及其研究的深入,伴有CD7抗原表达的急性髓细胞白血病（CD7^＋AML）不断被发现。认为CD7^＋AML是一类独特的急性髓细胞白血病亚型,具有与不伴有CD7抗原表达的急性髓细胞白血病（CD7^-AML）不同的临床特点、生物学特征与预后。     

交叉表达髓系和淋系相关抗原急性白血病的免疫学及临床特征研究

交叉表达淋系和髓系相关抗原的急性白血病（AL）包括伴有髓系抗原阳性的急性淋巴细胞性白血病（My^＋ -ALL）、伴有淋系抗原阳性的急性髓细胞性白血病（Ly^＋ -AML）及多系表达（即同时表达T、B及髓系三系以上的抗原）。而多系表达是AL免疫分型中的少见类型，国内外报道甚少。本研究对以上几种类型AL的表达特征及意义做简要分析，以利于今后白血病的诊治。[第一段]     

流式细胞术在抗原异常表达淋巴瘤/白血病诊断中的应用

目的 探讨流式细胞免疫分型在抗原异常表达淋巴瘤诊断及鉴别诊断中的作用。方法 应用流式细胞术对伴有抗原异常表达的淋巴瘤3例,B淋巴细胞性白血病8例,T淋巴细胞性白血病1例及伴有淋巴细胞分化抗原表达的急性非淋巴细胞白血病17例,急性粒细胞白血病累及淋巴结1例的免疫表型进行回顾性分析,每例均作胞质CD3ε、CD79a、髓过氧化物酶(MP0)的En Vision两步法染色。结果 11例B细胞淋巴瘤／白血病胞质CD79a阳性,胞质CD3ε及MP0阴性,其中5例伴CD5表达,2例同时伴CD5及1-2项髓系分化抗原表达;1例T淋巴细胞白血病胞质CD3ε阳性,胞质CD79a及MP0阴性,伴CD13、CD33表达;18例急性非淋巴细胞白血病(包括1例急性粒细胞白血病累及淋巴结)胞质髓过氧化物酶(MP0)均阳性,胞质CD3ε及C1979a均阴性,其中8例(包括1例急性粒细胞白血病累及淋巴结)伴T细胞分化抗原表达,8例伴B细胞分化抗原表达,2例同时伴T细胞及B细胞分化抗原表达。结论流式细胞免疫分型不仅能发现淋巴瘤／白血病抗原异常的表达,而且可通过表面免疫标记及胞质CD3s、CD79a、MP0的表达来确定抗原异常表达淋巴瘤／白血病的细胞来源,对抗原异常表达淋巴瘤／白血病的诊断及鉴别诊断具有十分重要价值。     

CD117在急性白血病中的表达及临床意义

目的探讨CD117在急性白血病中的表达及其临床意义。方法应用CD45/SSC设门,直接荧光标记法,经流式细胞术对73例急性髓系白血病（AML）和47例急性淋巴细胞白血病（ALL）进行CD117的检测。结果对照组、ALL及AML3组CD117的表达阳性率差异有统计学意义（χ2=41.681,P﹤0.01）。AML组CD117的表达阳性率（58.9%）明显高于对照组（0）及ALL组（8.5%）。CD117/CD34的共表达率ALL组明显低于AML组（4.3%vs45.2%,P﹤0.05）。AML组CD117＋患者的CR率为60.5%,CD117-患者为76.7%,两者比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而CD117＋/CD34＋患者的CR率为54.5%,明显低于CD117-/CD34-患者的CR率（88.2%,P﹤0.05）。结论 CD117可作为辅助诊断AML的髓系标志抗原,CD34＋/CD117＋可作为进一步排除ALL的指标。CD117＋/CD34＋可能是AML中一类预后不良的特殊亚型,可以作为AML预后判断的指标之一。     

脂肪与髓核来源间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下向类髓核细胞分化

背景:大量研究表明多种组织来源的成体干细胞在体外均可向类髓核细胞分化。椎间盘髓核组织来源间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下能否向类髓核细胞分化?其分化能力与脂肪间充质干细胞相比是否有差异目前未见报道。目的:比较脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下向类髓核细胞诱导分化能力的差异。方法:分别取大鼠腹股沟处脂肪组织与尾段脊柱,采用机械酶消化法分离培养脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞。流式细胞仪检测两种细胞CD105、CD90、CD29、CD45、CD44、CD34、CD24的表达。脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞各自分为诱导组、无因子诱导组和对照组,诱导组以转化生长因子β1标准软骨诱导液培养,无因子诱导组以不含转化生长因子β1的软骨诱导液培养,对照组以含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养。培养14 d后用RT-PCR检测各组细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因的表达。结果与结论:两种细胞CD105、CD90、CD29表达阳性,CD45、CD44、CD34、CD24表达阴性。向类髓核细胞诱导培养14 d后两种细胞诱导组Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因表达水平较对照组均明显升高,差异有显著性意义(P0.05);髓核间充质干细胞诱导组3种基因的表达水平明显高于脂肪间充质干细胞诱导组,差异有显著性意义(P0.05)。提示脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞均具有向类髓核细胞分化的能力,而髓核间充质干细胞相对于脂肪间充质干细胞其软骨相关基因表达更高,可能更适合于作为组织工程髓核研究的种子细胞。     

多参数流式细胞术分析急性白血病免疫表型

为了探讨急性白血病免疫表型特征,利用流式细胞术三色荧光直接标记技术CD45/SSC多参数散点图设门方法,对162例急性白血病患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析.结果提示:急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者主要表达CD117(94.9%)、CD13(88.5%)和CD33(70.5%);急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中B-ALL主要表达cCD79a(100%)、CD19(92.1%),T-ALL表达cCD3(100%)、CD2(83.3%);ANLL伴淋系抗原表达(Ly ANLL),以CD7(56.2%)、CD19(31.2%)多见;ALL伴髓系抗原表达(My ALL),以CD13(88.9%)、CD33(27.8%)多见.为此用多参数流式细胞术三色荧光直接标记法进行免疫分型,对急性白血病的确诊、治疗和预后有重要的临床意义.