UPLC-MS/MS同时测定经典名方泽泻汤中6个成分的含量

目的 建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定泽泻汤中泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量的方法。方法 泽泻汤按照经典名方自制,采用Agilent SB-C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）,流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min^–1,柱温为40 ℃,进样量为1 μL;质谱条件为电喷雾离子源（ESI）,正离子模式采集,多反应监测（MRM）方式进行定量。结果 15 min内泽泻汤中6个成分的色谱峰分离良好,泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ分别在8.20~409.90（r=0.999 3）、16.06~802.99（r=0.999 5）、14.47~723.49（r=0.999 9）、2.57~128.67（r=0.999 6）、2.85~142.66（r=0.998 5）、3.24~162.24 ng·mL^–1（r=0.999 8）线性关系良好;平均回收率为95.39%~102.53%,RSD为0.71%~2.33%,精密度、稳定性、重复性符合要求。结论 所建立的方法简便、快速、准确,可为泽泻汤的质量标准提升提供参考。     

白术内酯Ⅲ通过调节自噬水平清除过氧化物减轻小鼠溃疡性结肠炎＊

目的 探讨白术内酯Ⅲ是否通过调节自噬水平清除过氧化物减轻小鼠溃疡性结肠炎（UC）。方法 将32只健康雄性BALB/c小鼠随机分为空白组（n=8）和造模组（n=24），造模组小鼠均采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇诱导造UC小鼠模型，造模成功后小鼠随机分为模型组、白术内酯Ⅲ组（20 mg·kg^-1）、白术内酯Ⅲ+自噬抑制剂组（20 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1），造模成功后第2天起按相应剂量给药，连续给药14天。进行小鼠疾病活动指数（Disease activity index，DAI）及结肠黏膜损伤指数（Colonic mucosal damage index，CMDI）评分；测量小鼠结肠长度及重量；苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色观察结肠组织病理学变化；酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测结肠组织超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase，GSH-PX）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量；蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）检测结肠组织Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白表达；透射电镜观察结肠上皮细胞中的自噬泡。结果 与空白组比较，模型组小鼠DAI、CMDI评分、单位结肠重量、结肠组织MDA含量及p62蛋白表达明显升高（P<0.05），小鼠结肠长度明显缩短、结肠组织SOD、GSH-PX含量及Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，白术内酯Ⅲ组小鼠DAI、CMDI评分、单位结肠重量、结肠组织MDA含量及p62蛋白表达明显降低（P<0.05），小鼠结肠长度、结肠组织SOD、GSH-PX含量及Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达明显升高（P<0.05）。自噬抑制剂阻止白术内酯Ⅲ诱导的Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达升高，抑制结肠组织SOD、GSH-PX含量。结论 白术内酯Ⅲ可明显改善UC病理损伤，通过调节自噬水平清除过氧化物发挥对UC小鼠的治疗作用。     

HPLC-PDA联合Box-Behnken响应面法优选五苓散低极性部位提取工艺

目的 应用HPLC-PDA联合响应曲面法,筛选五苓散低极性部位乙醇提取最佳工艺。方法 采用多波长切换定量测定,以23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、麦角甾醇、茯苓酸、白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III、肉桂酸、桂皮醛9种有效成分为评价指标,采用Box-Behnken响应曲面法考察提取乙醇体积分数、料液比、提取时间对提取工艺的影响,确定最佳工艺。结果 色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C₁₈柱（100 mm×4.6 mm,2.7 μm）,体积流量为0.8 mL/min,柱温为40℃。流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱：0~10 min,37%~60%乙腈;10~20 min,60%乙腈;20~23 min,60%~95%乙腈;23~36 min,95%乙腈;36~37 min,95%~37%乙腈;37~42 min,37%乙腈。检测波长为280、247、220、208 nm多波长切换。最佳提取工艺为10倍量75%乙醇提取2次,每次1.5 h。结论 建立的HPLC-PDA法稳定可行,适合多种成分同时测定。响应曲面法所建模型准确,可以较好地预测9种成分含量综合评分;优选的提取工艺方法重现性良好,稳定可行,为五苓散临床应用、药效物质基础研究和新药开发提供技术参考。     

参苓白术散通过IκBα/NF-κB通路调控Lewis肺癌小鼠肿瘤自噬的研究

目的 观察培土生金法代表方参苓白术散对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织IκBα/NF-κB信号通路以及肿瘤自噬的干预作用，探讨参苓白术散联合顺铂对肺癌的部分治疗机制。方法 选取SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只，采用腋窝皮下接种肺癌Lewis细胞悬液法建立Lewis肺癌小鼠模型，建模成功后随机分为4组：模型组、顺铂组、中药组和中药+顺铂组，每组10只。模型组给予等量蒸馏水灌胃；顺铂组每周给与腹腔注射顺铂（5 mg·kg^-1）一次，共2次；中药组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天；中药+顺铂组每日给与参苓白术散（9.36g·kg^-1）灌胃一次，连续14天，同时每周给与腹腔注射顺铂（5mg·kg^-1）一次，共2次。给药14天后，测定各组小鼠肿瘤体积，并计算相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率；采用ELISA法测定肿瘤组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）和白细胞介素-1（interleukin-1β， IL-1β）的含量；采用透射电镜观察肿瘤细胞超微形态的变化；采用免疫组化法测定核因子κB抑制蛋白α（NF-kappa-B inhibitor alpha， IκBα）和核因子-κB（nuclear factor-κ-gene binding， NF-κB）P65的蛋白表达水平；采用Western blot法测定自噬相关基因3（autophagy related gene 3， Atg3）、自噬相关基因5（autophagy related gene 5， Atg5）、自噬特异性基因（Beclin-1）和微管相关蛋白1轻链3（Microtubule-associated protein 1 light chain 3， LC3）的蛋白表达水平。结果 与模型组比较，顺铂组、中药组、中药+顺铂组小鼠肿瘤体积和相对肿瘤体积显著减小（P<0.01），肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），IκBα蛋白表达水平显著升高（P<0.01）、NF-κB P65蛋白入核率显著降低（P<0.01），Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01），和顺铂组比较，中药组和中药+顺铂组肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低（P<0.01），中药+顺铂组肿瘤组织LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 参苓白术散能够上调IκBα蛋白表达，抑制NF-κB的激活，降低肿瘤组织中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量，调控肿瘤组织炎症反应，改变肿瘤微环境，并上调肺癌组织Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平，激活肿瘤发生自噬，抑制肿瘤的生长。     

白术水提物对肥胖小鼠血管稳态失衡的影响

目的 探讨白术Atractylodes macrocephala水提物对肥胖小鼠血管稳态失衡的改善作用和潜在机制。方法 选取40只ICR小鼠,随机分为正常组、模型组、依折麦布片（1 mg/kg）组和白术水提物（4、2 g/kg）组,每组8只,除正常组给予普通饲料外,其余各组每天给予高糖高脂饲料喂养,造模的同时分别ig相应药物,正常组及模型组ig蒸馏水,1次/d,连续11周。给药期间检测小鼠体质量及面温、舌色等中医证候指标;末次给药后,检测血清中一氧化氮（nitric oxide,NO）、内皮素-1（endothelin-1,ET-1）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）及总胆固醇（total cholesterol,TC）水平;取主动脉观察其组织形态学变化,并检测主动脉中白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、TNF-α、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated adenylate-activated protein kinase,p-AMPK）、沉默信息调节因子1（silent information regulator,SIRT1）、过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α）的蛋白表达。结果 白术水提物可显著提高肥胖小鼠旷场水平移动总距离和水平移动速度、排便量、排尿量及面温（P＜0.01）,增加尾部微循环血流量（P＜0.05、0.01）,显著降低尿液吸光度、足温（P＜0.01）,并改善舌色变化（P＜0.01）,显著降低TC、LDL-C、TNF-α和ET-1水平（P＜0.01）,升高NO含量（P＜0.01）,改善主动脉组织结构异常,降低主动脉IL-6、TNF-α、TLR4蛋白表达（P＜0.05、0.01）,提高p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达（P＜0.05、0.01）。结论 白术水提物能够有效缓解倦怠乏力、排便无力、四肢烦热等证候表现,并能改善肥胖引起的主动脉损伤、血管内皮紊乱等血管稳态失衡,其作用机制可能和激活AMPK/SIRT1/PGC-1α通路有关。     

解毒活血方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠斑块稳定性的影响

目的 研究解毒活血方是否可通过调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路诱导巨噬细胞自噬抑制炎症反应稳定AS易损斑块。方法 30只高脂饲料喂养ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、解毒活血方（中药）低、中、高剂量组、雷帕霉素组,6只普通饲料喂养的ApoE^-/-小鼠为正常组,6只普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠为空白组,造模7周后开始灌胃给药,中药组予解毒活血方溶液（5.35、10.7、21.4 g·kg^-1·d^-1）,雷帕霉素组予自噬诱导剂雷帕霉素（2 mg·kg^-1·d^-1）,连续给药4周,余各组予等容积生理盐水。检测血清血脂及炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-6（IL-6）水平,苏木素-伊红（HE）染色观察主动脉根部血管壁病理变化,免疫组化法测定巨噬细胞/单核细胞单克隆抗体（MOMA-2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平,透射电镜观测主动脉自噬体数量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬效应蛋白（Beclin-1）、自噬相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白及PI3K、Akt、mTOR通路蛋白水平。结果 与正常组比较,模型组血清血脂和炎症因子MCP-1、IL-6水平升高（P<0.05）,MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）,自噬蛋白Beclin-1表达增加（P<0.05）,通路蛋白PI3K、Akt、mTOR表达减少（P<0.05,P<0.01）;主动脉内壁可见明显粥样斑块,斑块内可见炎性细胞浸润,斑块附着处血管内膜明显增厚且结构紊乱;自噬体和线粒体数量更少,且线粒体结构不完整。与模型组比较,中药组及雷帕霉素组总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平和MCP-1、IL-6水平降低（P<0.05）,高密度脂蛋白（HDL）水平升高（P<0.05）,MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）,Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加（P<0.05,P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR表达减少（P<0.05,P<0.01）;主动脉内壁可见少量粥样斑块,炎性细胞浸润程度及血管壁厚度减轻;自噬体和自噬溶酶体数量增多。结论 解毒活血方改善AS小鼠脂质代谢,增强巨噬细胞自噬活性,减轻AS炎症反应,提高易损斑块稳定性,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。     

miR-20a通过ATG16L1影响细胞自噬并参与调节雷公藤甲素肝毒性

目的 观察雷公藤甲素对miR-20a及自噬相关16样蛋白L1（autophagy related 16 like protein1,ATG16L1）表达的影响,探讨miR-20a对雷公藤甲素所致肝细胞毒性的调控作用。方法 利用雷公藤甲素处理人正常肝细胞株HL7702和C57BL/6J小鼠,通过qRT-PCR和Western blotting检测miR-20a、ATG16L1及自噬标记物微管相关蛋白1轻链3II（microtubule-associated protein 1 light 3II,LC3II）的表达。利用雷公藤甲素和miR-20a模拟物或抑制物共同处理HL7702细胞,通过qRT-PCR和Western blotting检测ATG16L1及LC3II的表达;CCK-8法检测细胞存活率;试剂盒检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放量;ELISA检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）和Caspase-9的活性。结果 雷公藤甲素显著下调人正常肝细胞或小鼠肝组织中miR-20a表达（P＜0.05）,上调ATG16L1和LC3II的表达（P＜0.05）。miR-20a模拟物可抑制雷公藤甲素引起的ATG16L1、LC3II表达升高（P＜0.05）,进一步降低细胞存活率（P＜0.05）,提高LDH释放量（P＜0.05）,上调Caspase-3和Caspase-9活性（P＜0.05）,而miR-20a抑制物具有相反作用。结论 miR-20a通过ATG16L1影响自噬过程,参与调节雷公藤甲素肝细胞毒性。     

基于病证结合探讨糖尿病肾病阴虚证大鼠肾损害与自噬的关系＊

目的 观察阴虚证对糖尿病肾病（Diabetic kidney disease，DKD）大鼠肾损害以及自噬变化的影响，探讨DKD阴虚证大鼠肾脏病理损害与自噬之间的关系。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，随机分为正常组、糖尿病组。12周后将糖尿病组中尿蛋白阳性的大鼠随机均分为DKD组、阴虚组，阴虚组大鼠通过左甲状腺素钠片灌胃法制备DKD阴虚证模型。每日观察大鼠一般情况。第16周处死取材，观察大鼠血肌酐（Serum creatinine，Scr）、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、24 h尿蛋白定量（24-hour urinary protein，24 h Pro）、肾脏病理改变；ELISA法检测阴虚证指标-血清环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（Cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）及血清游离甲状腺素（Free Thyroxine 4，fT4）、血清皮质醇（Cortisol，Cort）、雌二醇（Estradiol，E₂）；透射电镜观察大鼠肾脏超微结构及自噬变化；免疫组化、Western Blot、RT-PCR法检测肾组织纤维化指标纤连蛋白（Fibronectin，FN）、平滑肌肌动蛋白（Alpha smooth muscle actin，α-SMA）、自噬相关Beclin-1、LC3-II、P62的蛋白及其mRNA表达。结果 与正常组比较，DKD组出现精神萎靡、多饮多食多尿、毛发粗糙等症状，阴虚客观指标血清fT4、Cort、E₂、cAMP、cAMP/cGMP比值升高、cGMP下降（P < 0.01或P < 0.05），24 h Pro、Scr、BUN升高（P < 0.01），光镜及电镜下肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达均增高（P < 0.05或P < 0.01），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达均下降（P < 0.05或P < 0.01）；与DKD组相比，阴虚组大鼠死亡率增加，出现急躁易怒、饮食饮水量增加、毛发粗糙无光泽、体质量下降等现象，血清fT4、Cort、E₂、cAMP、cAMP/cGMP比值（P < 0.05或P < 0.01），24 h Pro、Scr、BUN进一步升高（P < 0.01或P < 0.05），cGMP则下降（P < 0.01），同时肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达进一步增高（P < 0.01或P < 0.05），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达则下降（P < 0.01或P < 0.05）。结论 在病证结合模型下，阴虚证能够加重糖尿病肾病大鼠肾脏病理损伤，可能与抑制肾脏组织的自噬功能有关。     

23-乙酰泽泻醇B大鼠体内药动学和生物利用度研究

目的: 对泽泻中主要成分23-乙酰泽泻醇B进行不同给药方式的药代动力学和口服生物利用度研究。 方法: 大鼠分别注射和灌服23-乙酰泽泻醇B,于不同时间点采血;采用HPLC-UV 法检测血浆中23-乙酰泽泻醇B,流动相为乙腈-水(80 ∶20),检测波长210 nm,流速1.0 mL ·min^-1;绘制药时曲线,建立药代动力学模型,计算药动学参数和绝对生物利用度(F)。 结果: 主要药动学参数为口服: T_max (122.15±15.23) min, C_max (9.89±0.87) mg.L^-1, t_1/2 (58.72±6.23) min,AUC_0-t(1 854.970±142.31) μg ·min ·mL^-1,AUC_0-∞(1 875.81±144.27) μg ·min ·mL^-1,CL/F (2.89±0.13) mL ·min^-1;静脉注射: T_max (10.04±0.78) min, C_max (42.59±3.47)μg ·mL^-1, t_1/2 (32.05±2.53) min,AUC_0-t(2 810.08±178.70) μg ·min^-1 ·mL^-1,AUC_0-∞(2 812.41±224.63) μg ·min^-1 ·mL^-1,CL/F (1.74±0.54) mL ·min^-1;平均F为44.46%。 结论: 23-乙酰泽泻醇B在大鼠体内吸收缓慢但较完全,消除相对较快 。说明23-乙酰泽泻醇B具有良好的药代动力学特征,便于开发成临床使用方便的药物。     

基于Akt/mTOR通路研究地榆皂苷II诱导肝癌细胞凋亡和自噬作用机制

目的 探讨地榆皂苷II抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡和自噬的作用机制。方法 采用不同浓度（0、10、20、40 μmol/L）地榆皂苷II处理人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌Hepa1-6细胞,通过CCK-8和EdU实验观察地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6细胞增殖的影响;运用流式细胞术检测地榆皂苷II对细胞凋亡的影响;通过Western blotting检测地榆皂苷II对细胞凋亡和自噬相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cysteine-aspartic acid protease-3,Caspase-3）、Caspase-8、Caspase-9、B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、cleaved Caspase-3、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-II（microtubule-associated protein light chain3-II,LC3II）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-Ⅰ（microtubule-associated protein light chain3-Ⅰ,LC3Ⅰ）、自噬相关蛋白p62、Beclin1及蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路关键蛋白表达的影响。结果 地榆皂苷II显著抑制HepG2和Hepa1-6细胞活力,且呈现一定的剂量相关性;流式细胞检测发现地榆皂苷II给药后细胞凋亡率显著增加（P＜0.01、0.001）;Western blotting结果显示,与对照组比较,地榆皂苷II给药后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2表达显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）,cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01）,LC3Ⅱ/LC3I值显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,Beclin1蛋白表达量显著升高（P＜0.05、0.01）,p62蛋白表达量显著下降（P＜0.05、0.01）,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR值显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 地榆皂苷II通过Akt/mTOR通路诱导HepG2和Hepa1-6细胞自噬和凋亡实现对肝癌细胞增殖的抑制,为抗肝细胞癌新药发现提供药理学证据。     

止眩颗粒剂的提取工艺研究

目的 优选止眩颗粒剂的制备工艺。方法 以23—乙酰泽泻醇B、白术内酯I提取率和固形物得率为指标，采用正交试验法对止眩颗粒剂的提取工艺进行优选，并以小鼠镇静作用的药效学验证。结果 优化工艺为：泽泻、白术先以12倍量70％乙醇分2次回流提取，每次2h；再以14倍量水分2次煎煮，每次2h。提取物对小鼠有明显的镇静作用。结论 该工艺合理，有效成分提取效率高。     

关于《中国药典》2020年版泽泻质量标准修订的建议

完善泽泻药材和饮片的质量标准,为《中国药典》2020年版泽泻药材和饮片质量标准的修订提供参考和建议。参照《中国药典》2015年版四部通则,对泽泻药材和饮片的水分、总灰分、重金属及有害元素、农药残留及醇溶性浸出物进行测定;以硅胶GF254板为薄层板,以二氯甲烷-甲醇(15∶1)为展开剂,建立了以23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C及泽泻对照药材为对照的薄层鉴别方法;采用HPLC,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,在208 nm和246 nm波长下分别对23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C进行定量分析。采用建立的方法,对37批泽泻药材、30批泽泻饮片和19批盐泽泻的质量进行评价,根据实验结果,建立了泽泻药材和饮片的质量标准。该标准具有很好的专属性和重复性,可用于泽泻药材与饮片的质量控制。建议《中国药典》2020年版对泽泻的【来源】、【鉴别】(薄层)、【浸出物】(盐泽泻)、【含量测定】项进行相应的修订。     

HPLC-ELSD测定五苓散中2种泽泻醇的含量

 目的采用HPLC-ELSD测定五苓散中泽泻醇A24-乙酸酯、泽泻醇B23-乙酸酯的含量。方法色谱柱:大连依利特Hy-persil C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水(75∶25);检测器:Alltech2000型蒸发光散射检测器;流速为0.8 mL·min^-1;柱温:室温;ELSD气体:高纯氮气;流速为2.0 L·min^-1;漂移管温度:82℃。结果在五苓散中测定出的泽泻醇A24-乙酸酯、泽泻醇B23-乙酸酯分别在0.330～1.980μg(r=0.999 5),0.624～4.680μg(r=0.999 4)内呈良好的线性关系。平均回收率分别为101.4%,99.6%,RSD分别为1.7%,3.0%(n=6)。结论采用本法测定五苓散中泽泻醇A24-乙酸酯、泽泻醇B23-乙酸酯的含量,方法简便、可靠、重复性好。     

RP-HPLC-DAD同时测定泽泻中11个三萜类成分

目的建立同时测定泽泻中泽泻醇C、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B和11-去氧泽泻醇B 11个三萜类成分的RP-HPLC-DAD分析方法。方法采用Ultimate XB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈(A)-水(B)进行梯度洗脱,体积流量1 m L/min,检测波长为208、245 nm,柱温30℃。比较25批泽泻中11个三萜类成分的量。结果泽泻醇C、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、11-去氧泽泻醇B 11个成分的线性范围分别为0.313~17.210μg/m L(r=0.999 9)、0.504~11.880μg/m L(r=0.999 9)、0.284~9.369μg/m L(r=0.999 9)、0.146~2.680μg/m L(r=0.999 9)、0.254~5.596μg/m L(r=0.999 8)、2.500~66.000μg/m L(r=0.999 8)、0.463~10.190μg/m L(r=0.999 9)、1.575~20.475μg/m L(r=0.999 9)、1.525~57.268μg/m L(r=0.999 6)、3.035~118.362μg/m L(r=0.999 9)、0.816~16.880μg/m L(r=0.999 8)。平均加样回收率分别为98.76%、100.24%、97.97%、100.14%、99.88%、96.54%、97.27%、98.85%、99.45%、98.85%和98.13%。结论该法准确、可靠、分离效果良好,为泽泻药材质量评价提供了可靠的方法。     

泽泻药材的研究进展及其质量标志物的预测分析

泽泻始载于《神农本草经》,列为上品,历代本草中多有收载。泽泻主要分布于福建、四川和江西,具利水渗湿、泄热、化浊调脂之效,现代药理活性广泛,其临床研究也逐步深入。从本草考证、化学成分和药理作用等几个方面对泽泻的研究现状进行综述,在此基础上明确泽泻不同基原的差异,并根据质量标志物(Q-marker)的概念,从生源途径出发,结合药效、新药用途及炮制等的研究,预测泽泻的质量标志物,以期为泽泻有效成分的定性定量分析和新标准的制定提供科学依据。     

不同炮制方法盐泽泻饮片的等级评价

目的:建立盐泽泻饮片的等级评价方法。方法:分别按照《中华人民共和国药典》2020年版和《江西省中药饮片炮制规范》2008年版制备盐泽泻和樟帮特色盐泽泻饮片各15批,在前期研究基础上,采用质量常数评价方法对两者进行等级评价,评价指标涉及饮片大小、饮片厚度和指标成分含量3个方面。结果:15批盐泽泻饮片的质量常数为1.50～3.62;一等盐泽泻质量常数≥2.90,二等盐泽泻质量常数≥1.81且2.90,三等泽泻质量常数1.81;15批樟帮特色盐泽泻饮片的质量常数为1.61～3.61,一等特色盐泽泻饮片质量常数≥2.89,二等特色盐泽泻饮片质量常数≥1.81且2.89,三等特色盐泽泻饮片质量常数1.81。结论:建立的评价方法具有一定的可行性,可为盐泽泻饮片的市场流通提供参考。     

响应面法优化泽泻中23-乙酰泽泻醇B闪式提取工艺

采用响应面分析法优化得到23-乙酰泽泻醇B闪式提取的最佳工艺。采用单因素考察法,以23-乙酰泽泻醇B提取率为指标,考察乙醇浓度、液料比、提取次数、提取时间对23-乙酰泽泻醇B提取率的影响,并结合Box-Behnken试验设计和响应面分析方法对闪式提取泽泻的工艺参数进行优化,得到23-乙酰泽泻醇B闪式提取最佳工艺为80%乙醇、液料比12∶1、提取4次、提取时间114 s/次。通过响应面法优化得到的23-乙酰泽泻醇B闪式提取工艺,稳定、省时、高效,且具有可室温提取、无成分破坏的优点,可用于实际大生产。     

不同大小泽泻23-乙酰泽泻醇B含量及红外指纹图谱比较

目的：比较不同大小泽泻化学成分的差异。方法选取8种不同质量梯度的泽泻药材,采用高效液相色谱法测定其23-乙酰泽泻醇B含量,应用傅里叶变换红外光谱法测定其指纹图谱。结果8种不同质量梯度泽泻中23-乙酰泽泻醇B含量均在0.06%以上,并且其大小与23-乙酰泽泻醇B含量没有相关性（P＞0.05）,红外指纹图谱相似度均在0.9以上。结论不同大小泽泻的化学成分基本相同,其23-乙酰泽泻醇B含量符合《中华人民共和国药典》规定。     

泽泻炮制过程中23-乙酰泽泻醇B的转化

目的分析泽泻中三萜类成分在炮制加工过程中的变化。方法采用超临界流体色谱分离技术(SFC)及HPLC测定方法,对泽泻加工炮制前后的三萜类成分的变化进行研究。结果在泽泻药材加工成生泽泻饮片的烘干(70℃)过程中,有少量23-乙酰泽泻醇B转化成了24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B;而在泽泻盐制(190~200℃)及麸制(160~170℃)过程中,23-乙酰泽泻醇B则大量转化为24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B,两者又进一步转化成了泽泻醇A。结论在高温炮制过程中,泽泻药材中三萜类主成分23-乙酰泽泻醇B出现两条转变途径,一条是氧环开裂并重排生成24-乙酰泽泻醇A,进一步脱乙酰基转化成泽泻醇A;另一条是先脱乙酰基生成泽泻醇B,继而氧环开裂转化成泽泻醇A。     

基于均匀设计的泽泻体外抗草酸钙结晶的有效组分配伍研究

目的研究泽泻中6种主要三萜成分(泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇F和24-乙酰泽泻醇F)及其组分配伍对体外抗草酸钙结石的作用。方法采用均匀设计法设计不同泽泻三萜组分配伍组,应用标准钙离子种晶技术分别检测不同配伍组对草酸钙结晶生长的抑制指数。结果 6种成分及其不同比例配伍组溶液均能抑制草酸钙晶体生长(P0.05),其中泽泻醇A-24-乙酰泽泻醇A-泽泻醇B-23-乙酰泽泻醇B-泽泻醇F-24-乙酰泽泻醇F(2.2∶3.8∶1∶3.5∶2.2∶1)组分配伍时体外抑制草酸钙结石效果最佳(P0.05),抑制指数为188.29%。结论泽泻三萜成分是泽泻抑制草酸钙结晶的重要药效物质基础,泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇F和24-乙酰泽泻醇F均具有体外抑制草酸钙结石生长的作用,且6种成分合用作用更强,其最佳组分配比为泽泻醇A-24-乙酰泽泻醇A-泽泻醇B-23-乙酰泽泻醇B-泽泻醇F-24-乙酰泽泻醇F(2.2∶3.8∶1∶3.5∶2.2∶1)。