EB病毒BNLF-1基因在淋巴瘤和急性白血病的表达及临床意义

目的：研究EB病毒BNLF－1基因在淋巴瘤和急性白血病的表达及含量,探讨对该基因表达与淋巴瘤、急性白血病的发病机制与预后的关系。方法：采用Amplisensor荧光定量PCR技术,检测淋巴瘤和急性白血病患者血液或骨髓EB病毒BNLF－1基因片段,同时测定血清中EB病毒VCA－IgA抗体滴度。结果：（1）淋巴瘤BNLF－1基因表达高于急性淋巴细胞白血病（急淋）、急性非淋巴细胞白血病（急非淋）和对照组;急淋高于急非淋和对照组;淋巴瘤VCA－IgA阳性率高于急非淋和对照组;急淋高于对照组;急非淋与对照组无显著差异。（2）淋巴瘤BNLF－1基因含量高于急淋、急非淋;急淋高于急非淋。（3）T、B细胞淋巴瘤BNLF－1基因表达无显著差异。（4）淋巴瘤BNLF－1基因含量越高,生存期越短。结论;BNLF－1基因可能是EBV的致癌基因之一;其阳性率及含量的高低可作为淋巴瘤及急淋和急非淋的鉴别诊断依据之一;BNLF－1基因高表达与淋巴瘤的预后呈负相关关系。     

EB病毒BHRF1基因聚合酶链反应扩增及其鉴定

目的：ＢＨＲＦ１的研究对于认识ＥＢＶ有关肿瘤和其它疾病的发病机理、寻找预防、治疗途径有十分重要的意义。方法：以Ｂ９５８细胞ＤＮＡ为模板，设计一对引物，用ＰＣＲ方法扩增ＢＨＲＦ１基因，用目的基因内的两个限制性内切酶位点进行酶切鉴定。结果：扩增产物长５９２ｂｐ，与预期结果一致，两个酶所切下的四个片段长度也与理想值相符。结论：本研究首次采用ＰＣＲ方法，成功地获得完整的ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１基因，从而为该基因的进一步研究和应用奠定基础。     

儿童外周血EB病毒DNA检测的临床意义

目的探讨Epstein-Barr病毒（EB病毒）DNA检测的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应病毒核酸扩增方法,定量检测儿科以发热为主诉的患儿外周血EB病毒DNA载量。阳性病例进行临床分析和抗病毒治疗观察。结果检测522例间断和/或持续发热患儿,阳性（病毒载量≥50拷贝/ml）102例,阳性率19.5%。病毒载量最高4.44×10^6拷贝/ml,最低4.3×10^2拷贝/ml。阳性病例疾病病种较多。部分阳性病例抗病毒治疗显效。结论静脉血EB病毒DNA检测是可行的实验室诊断方法;儿科以发热为主诉的患儿可能有19.5%左右存在EB病毒感染或隐性感染。EB病毒DNA检测阳性患儿应适当抗病毒治疗并随访。     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

目的 :探讨 WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法测定 5 3例急性白血病、15例慢性粒细胞白血病、2 1名正常人的 WT1基因表达。结果 :5 3例急性白血病患者中 4 1例 WT1基因表达阳性 ,阳性率为 77.35 % ,其中急性髓系白血病 (AML )和急性淋巴细胞白血病 (AL L )阳性率分别为 80 .6 %和 72 .0 % ,两组相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;15例的慢性粒细胞白血病 (CML ) WT1基因表达阳性率为 4 6 .7% ,其中 7例急变期和加速期阳性率为 10 0 % ,8例慢性期阳性率为 0 %。 2 7例急性白血病完全缓解 (CR)患者中 2 2例 (81.5 % ) WT1基因表达转阴 ,4例复发患者 WT1基因表达再次升高。 2 1例正常人的 WT1基因表达阴性 ;RT- PCR检测 WT1基因灵敏度为 10 - 4水平。结论 :1WT1基因在各种类型白血病患者中均有表达 ,在正常人中不表达。 WT1的表达与白血病病程相关 ;2 WT1基因可作为检测MRD的标记性基因。 WT1基因的表达与白血病患者的化疗效果及预后密切相关。     

EB病毒在不同类型淋巴瘤中的表达及检测方法的比较

目的探讨EB病毒（EBV）在不同类型淋巴瘤中的表达差异及对用于检测EBV表达的3种实验方法（免疫组织化学、原位杂交、PCR）进行比较分析。方法收集明确诊断淋巴瘤石蜡组织57例,包括结外NK／T细胞淋巴瘤（NK／TCL）鼻型12例、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤（AITCL）13例、霍奇金淋巴瘤（HL）12例、弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）20例,应用免疫组织化学（IHC）、原位杂交（ISH）、聚合酶链反应技术（PCR）分别检测淋巴瘤中EBV蛋白（LMP-1）、EBV潜伏相关RNA（EBERl）、EBV（DNA）的表达情况。结果57例淋巴瘤组织中EBV蛋白（LMP-1）、EBER1、EBVDNA总阳性表达率分别为17．5％（10／57）、47．4％（27／57）、50．9％（29／57）。其中NK／TCL鼻型为8．3％（1／12）、83．3％（10／12）、91．7％（11／12）;AITCL为30．8（4／13）、53．8％（7／13）、61．5％（8／13）;HL为33．3％（4／12）、41．7％（5／12）、41．7％（5／12）;DLBCL为5．00％（1／20）、25．0％（5／20）、25．O％（5／20）。PCR及原位杂交检测方法比免疫组化更敏感（P〈0．05）。结论EBV感染在不同类型的淋巴瘤中表达存在差异,3种检测方法之间的阳性表达率也不同且ISI-I和PCR检测方法优于IHC。     

淋巴细胞与血浆 EB 病毒核酸定量结果的关系

目的：探讨淋巴细胞与血浆EB病毒核酸（ EBV-DNA）定量结果的关系。方法收集88例疑似EBV感染者全血分离的淋巴细胞与血浆，实时荧光PCR定量检测EBV-DNA；同时检测另外249例疑似感染者、40例体检者淋巴细胞和血浆EBV-DNA量。结果88份配对的淋巴细胞和血浆EBV-DNA定量值及阳性率（＞500 copies／mL为阳性）差异有统计学意义（ P＝0.00）。两种标本类型EBV-DNA定量结果呈正相关（ r＝0.664，P＝0.00）；当淋巴细胞EBV-DNA浓度较低（＜500 copies／mL）或较高（＞106 copies／mL）时，两标本类型定量结果较一致（κ＝0.40），中等浓度（500～106 copies／mL）则一致度低（κ＜0.40）；EBV-DNA检出率：249份疑似感染者为55％（淋巴细胞），40份体检者为50％（淋巴细胞）和0（血浆）。结论淋巴细胞与血浆EBV-DNA定量呈正相关，淋巴细胞定量值高于血浆。推荐用血浆EBV-DNA定量来反映体内EB病毒增殖情况。     

白血病患者WT1基因的表达及临床意义

目的：检测白血病患者WT1基因的表达水平，并探讨其与临床的关系。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术，检测58例初治急性白血病（AL）、20例慢性粒细胞白血病（CM）和10例非血液病患者WT1基因的表达。结果：10例非血液病患者WT1基因的表达均呈阴性。58例AL患者44例检测有WT1基因的表达，阳性率为75．9％，其中急性髓性白血病（AML）阳性率为86．4％，急性淋巴细胞白血病（ALL）为42．9％，两者差异有显著性（P＜0．01）；AML治疗前WT1的表达水平与完全缓解（CR）率无相关（P＞0．05），但倾向于WT1基因低表达者有更高的CT率（低表达组CR率为75．0％，高表达组率为34．8％）。CML慢性期WT1的表达水平极低，随临床分期进展水平增高，高表达者预示急变。结论：AL和CML急变期患者WT1基因过度表达，初治AML治疗前WT1的表达水平与疗效无相关，但低表达组CR为75％，高表达组CR为34．8％。     

EB病毒BARF1基因真核表达载体的构建

①目的 构建携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.②方法 根据GenBan提供的BARF1基因的cDNA序列,设计特异性引物,并在两端添加酶切位点;常规培养B95-8细胞,提取细胞RNA,通过RT-PCR扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coli DH5α,经氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切与测序鉴定,证实BARF1基因已克隆到pUM-T载体.凝胶回收双酶切产物BARF1片段,再将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)-his,转化E.coli DH5α,通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切分析,确认插入方向.③结果 以B95-8细胞提取RNA进行RT-PCR扩增的cDNA为模板扩增BARF1,得到与预期片段大小相符的666bp的片段;对所提质粒进行鉴定后,证实目的 基因BARF1片段已插入pUM-T载体,经双酶切和测序分析,确认BARF1基因已正确连接到pcDNA3.1(+)-his真核表达载体.④结论 成功地构建真核表达载体.pcDNA3.1(+)/BARF1-his.     

急性白血病患者Wilms肿瘤基因(WT1)表达及其临床意义

目的 检测急性白血病患者WT1 mRNA转录水平,探讨WT1基因与白血病病程的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对57例白血病病人和10例正常健康人的外周血或骨髓标本进行WT1基因的检测.结果 45例初发急性白血病(AL)中35例WT1 mRNA阳性(阳性率77.8%),其中27例初发急性髓细胞白血病(AML)中24例阳性(88.9%),18例初发急性淋巴细胞白血病(ALL)中11例阳性(61.1%).10例正常人没有检测到WT1 mRNA.结论 急性白血病WT1 mRNA呈高表达.在缺乏特异性克隆标志白血病中监测WT1 mRNA是有价值的.     

急性白血病患者骨髓细胞中WT1基因的表达

目的:探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞WT1基因的表达。方法:采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测100例AL患者骨髓细胞WT1基因及内参基因(ABL),以WT1基因拷贝数/内参基因拷贝数(NQ比值)计算基因表达水平。结果:初诊组和复发组AL患者WT1表达水平明显高于完全缓解组(P<0.01)。初诊患者中,AL各亚型之间WT1表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),急性淋巴细胞白血病WT1表达水平最低,急性早幼粒细胞白血病表达最高。随访3例患者,达到完全缓解时WT1表达很低,复发时WT1表达均再次升高。结论:WT1基因在AL中的表达,可作为白血病疗效评价及监测微小残留病灶的指标。     

鼻咽癌细胞EB病毒编码BHRF1基因的研究

利用斑点杂交技术检测正常鼻咽青草 咽未分化癌、低分化及高分化鳞癌中ＥＢ病毒编码ＢＨＲＦ１基因的存在情况。结果表明，鼻咽未分化癌及低分化鳞癌中的ＢＨＲＦ１阳性率分别为９０％和８５．７％，而高分化鼻咽癌组织的阳性率为２５％。提示ＢＨＲＦ１基因可能与因癌细胞的分化有关。     

WT1基因在白血病中的表达及意义

目的 探讨WT1基因在白血病中的表达与临床意义。方法 采用筑巢式逆转录聚合酶链反应（Nest RT-PCR）检测K562白血病细胞系、39例急性白血病（AL）患者、5例慢性粒细胞白血病（CML）患者和22例正常对照骨髓或外周血细胞的WT1基因表达。结果30例初治或复发AL中有22例患者高表达WT1基因，阳性率73．3％。在急性非淋巴细胞白血病（ANLL）和急性淋巴细胞白血病（ALL）阳性率分别为70．8％和83．3％，两组无显著差异。随着WT1基因表达水平的升高，完全缓解（CR）率有明显下降的趋势，CR后WT1基因表达水平明显下降，复发后又显著升高。结论 用Nest RT-PCR测定WT1基因的表达可作为检测白血病微小残留病（MRD）的一项指标。     

Krev—1基因在白血病中表达的研究

Ｋｒｅｖ－１基因在白血病中表达的研究孟庆祥王立郝玉书王建祥卞寿庚薛艳萍晁恒军李克Ｋｒｅｖ－１ｃＤＮＡ是在恢复为贴壁生长的ｖ－Ｋ－ｒａｓ转化的ＮＩＨ３Ｔ３细胞中发现的，它可能是通过其产物ＳｍｇＰ２１拮抗ｒａｓ癌基因产物ｒａｓ－Ｐ２１的作用而发挥抑癌效应...     

经典性霍奇金淋巴瘤中EB病毒潜伏膜蛋白1的表达

目的 探讨经典性霍奇金淋巴瘤（cHL)肿瘤性H／R－S细胞埃泼斯坦－巴尔病毒（EBV）潜伏膜蛋白1（LMP1）的表达情况及其意义。方法 采用免疫组化SABC法对32例cHL进行LMP1蛋白表达的检测。结果 20／32（62．5％）例LMP1蛋白表达阳性、在各亚型之间没有显著性差异（X^2=0.0809,P=0.847)。结论 LP1蛋白表达有地区差异,在cHL亚型间可能没有分型差异性。     

WT1基因在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

目的研究WT1基因在急性白血病（AL）患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR方法动态检测92例初治AL患者WT1基因的表达。结果初治AML各亚型中M5基因表达阳性率最高,为91.7%,其WT1基因中位表达水平最高,达1308.6,显著高于其他亚型,差异有统计学意义（P〈0.05）;初治ALL各亚型（L1,L2,L3）之间WT1基因表达阳性率及中位表达水平差异无统计学意义（P〉0.05）;AL患者中,WT1基因表达阳性组CR率显著低于阴性组,阳性组缓解后半年内复发率显著高于阴性组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;初治组、复发组及未缓解组AL患者骨髓细胞WT1基因中位表达水平明显高于完全缓解组和对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论WT1基因在AL患者骨髓细胞中表达水平可作为临床评估疾病的发生发展、判断预后及检测微小残留病（MRD）的指标。     

急性髓系白血病患者蛋白质酪氨酸磷酸酶基因的表达与临床意义

目的：探讨造血细胞磷酸酶（SHP—1）基因在急性髓系白血病患者中的表达,以及其与白血病发生和预后的关系。方法：用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例急性髓系白血病患者（患者组）及33例正常对照组的白细胞SHP-1mRNA表达。结果：患者组中,SHP-1在AML中表达阳性率由高至低依次为缓解组、初治组、复发组,各组与正常对照组相比有显著性差异（P〈0．05）;36例初治AML患者SHP-1＋与SHP-1-的CR率均有显著性差异（P〈0．05）。结论：SHP-1可能作为潜在的抑癌基因参与白血病的发病,检测SHP-1基因表达可作为判断急性髓系白血病患者预后的指标。     

EB病毒胸苷激酶基因的扩增

本文报道用多聚酶链反应方法扩增EB病毒胸苷激酶基因。本研究以Raji细胞和B95-8细胞二种不同细胞株的DNA为模板,引物是根据B95-8细胞的胸苷激酶基因序列设计的,均可得到特异的扩增产物,该产物用内切酶Ncol切割鉴定,酶切片段的长度与预期理论值完全一致。     

一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA

目的 构建RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因mRNA表达的方法,准确定量检测白血病患者微小残留病,指导临床判断预后和早期预测复发.方法 从K562细胞提取的RNA用特异性引物扩增WT1基因,pMD18-T载体克隆法构建荧光定量PCR标准模板,建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测wTl基因方法,并对该方法的灵敏度、重复性和稳定性进行检测.结果 构建的RT-PCR一步法实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平:以拷贝数为1.0x106～1.0×102 cps/ml的标准品,分别进行RT-PCR一步法实时荧光定量PCR扩增后,标准品的Ct值与该标准品模板起始浓度的对数存在线性关系,r值达0.998:管间和批间的变异系数均小于8%.结论 所建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法的灵敏度、重复性和特异性好;RT和PCR反应过程一步完成,更简便快捷,减少加样和污染机会,更适合临床检测.