凹土玉米芯垫料提取物对细胞存活率的影响

目的 研究凹土玉米芯垫料物质的细胞毒性.方法 将凹土玉米芯、玉米秸、普通刨花垫料物质的丙酮提取物分别加到小鼠成纤维细胞、小鼠S180-S2D9细胞中体外培养,孵育72 h后测定每个培养孔细胞的总蛋白量,计算细胞的存活率.结果 随着垫料物质丙酮提取物质量浓度的增加,S180-S2D9细胞及小鼠成纤维细胞存活率逐渐降低,其中普通刨花组降低最显著,凹土玉米芯组变化最小,玉米秸组降低程度居中.丙酮提取物质量浓度相同时,凹土玉米芯组的S180-S2D9细胞及小鼠成纤维细胞存活率均显著高于玉米秸组和普通刨花组(P＜0.05或P＜0.01).结论 普通刨花的细胞毒性最大,凹土玉米芯的细胞毒性最小,玉米秸、普通刨花垫料物质均有细胞毒性,其毒性显著高于凹土玉米芯.     

5种垫料物质的细胞毒性研究

目的研究松木、麦秸、玉米秸、玉米芯和国外商品垫料5种垫料物质的细胞毒性作用.方法将五种垫料物质的丙酮提取物按1、3、5、10、20和40mg/ml的终浓度梯度加入到H22-H2D8细胞中,培养72h后用考马斯亮蓝法测定细胞的总蛋白量,计算细胞的半数致死量(LD50);用MTT法测定H22-H2D8细胞在492nm的吸光度值(A492),计算细胞的相对增值率,用6级毒性分类法进行毒性分级.结果松木的LD50<5mg/ml,麦秸、玉米秸、国外商品垫料的LD50<20mg/ml,玉米芯的LD50>40mg/ml.麦秸和商品垫料的细胞毒性为2～3级,松木的细胞毒性2～5级,玉米秸的细胞毒性为1～3级,玉米芯的细胞毒性为1～2级.在垫料提取物浓度为5mg/ml、10mg/ml时,麦秸组的A492值显著低于玉米秸组和商品垫料组的A492值(P<0.05),而玉米秸组和商品垫料组相比无显著差异(P>0.05);在浓度为20mg/ml、40mg/ml时,王米秸组的A492值大于麦秸组和商品垫料组的A492值(P<0.05),麦秸组和商品垫料组相比差异无显著性(P>0.05).结论松木的细胞毒性最大,玉米芯的细胞毒性作用最小,玉米秸、国外商品垫料、麦秸三种物质均显示有细胞毒性作用,但它们的毒性显著低于松木,高于玉米芯.     

大潮气量致急性肺损伤犬呼吸机相关性肺损伤模型的构建

目的探讨实验动物垫料对小鼠细胞生长活性的影响及其可能的细胞毒性。方法体外培养的小鼠肝癌细胞Hepal-6（mouse hepatoma cell line Hepal-6，Hepal-6）、小鼠肺癌细胞（Lewis Lung carcinoma，LLC）和小鼠黑色素瘤细胞B16（Melanoma，B16）培养液中分别加入不同浓度的3种实验动物常用垫料（玉米芯、松木、杨木）丙酮提取物，采用MTT方法测定细胞生长活性，并比较3种垫料对细胞的生长毒性。结果小鼠Hepal-6细胞生长活性与3种垫料之间的线性相关系数分别为：玉米芯-0．875。松木-0．747，杨木-0．826；LLC细胞分别为：玉米芯-0．527，松木-0．812，杨木-0．865；B16细胞分别为：玉米芯-0．727，松木-0．860，杨木-0．888。松木、杨木、玉米芯垫料对小鼠Hepal-6细胞的半致死量（IC50）分别为：8．86，19．10，91．37mg／ml；对LLC细胞的IC50分别为：4．42，7．72，24．65mg／ml；对B16细胞的IC50分别为：8．86，19．10，91．37mg／ml。结论3种垫料与小鼠细胞Hepal-6、LLC、B16的生长活性之间具有显著负相关性（P〈0．001），其抑制细胞生长作用依次为：松木〉杨木〉玉米芯。     

应用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传学改变

目的：用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法：小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8、H22-H2G4、H22-H2E10、H22-H2C4,用47条随机引物经PCR扩增,对扩增产物进行电泳,凝胶分析系统观察结果并照相。结果：47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4-10条,片段大小在200-2000bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异。结论：RAPD技术可以用来对小鼠肝癌H22细胞克隆株进行遗传检测。     

蓖麻毒素细胞毒性及其中毒小鼠组织病理改变

目的：探讨蓖麻毒素对不同细胞的细胞毒性及小鼠各主要组织脏器毒性的基本病理改变。方法应用MTT法检测不同浓度（1 ng/ml，10 ng/ml，100 ng/ml，1μg/ml）蓖麻毒素给药24 h对不同细胞株（Caco-2，MDCK，MDCK-MDR1，HepG2， H1299）的细胞活性的影响；经灌胃方式使小鼠中毒，中毒24 h观察蓖麻毒素对小鼠脏器的基本病理变化，测定相关生化指标，分析蓖麻毒素对小鼠肝肾损伤。结果不同浓度的蓖麻毒素对Caco-2，MDCK，MDCK-MDR1，HepG2和H1299细胞均有一定的毒性，随着毒素浓度的升高，细胞毒性亦呈上升趋势，有明显量效关系，其中MDCK细胞对蓖麻毒素最为敏感。病理学检测显示蓖麻毒素可致小鼠肾小球出血及部分肾血管内皮细胞缺如，肝细胞水肿、近端肠绒毛损伤、轻度坏死性肺炎并有炎性细胞浸润。血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）、甘油三酯（TG）、肌酐（CREA）均升高，表明小鼠中毒3 h内肝功能和肾功能已出现一定程度的损伤。结论蓖麻毒素通过抑制蛋白质合成而导致细胞坏死。不同细胞对蓖麻毒素具有不同的敏感性，表现为蓖麻毒素中毒早期，动物即可出现严重的肝、肾损伤。     

垫料水提取物的急性毒性及微核试验

目的 对4种常用垫料(松木刨花、枫木刨、纸皮、稻草)的水提取物进行小鼠急性毒性试验和骨髓嗜多染红细胞微核试验,为检测分析垫料提取物的毒性和致突变作用提供参考依据.方法 采用热煎煮法收集4种垫料的水提取物,选用40只体重18～22 g的NIH小鼠和140只体重25～30 g的NIH小鼠,进行急性毒性试验和骨髓嗜多染红细胞微核试验.结果 4种垫料对NIH雄性和雌性小鼠的急性口服MTD均大于100 g/kg,4种垫料水提取物的微核率与阴性生理盐水组比较差异均无显著差异(P＞0.05).结论 4种垫料的水提取物对小鼠无明显的毒性,均无诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核生成的作用.     

小鼠肝癌H22细胞克隆株的RAPD分析

目的应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法用47条引物对小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8,H22-H2G4,H22-H2E10,H22-H2C4基因组DNA进行RAPD分析。结果47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4~10条,片段大小在200~2000 bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异。结论RAPD技术可以用来检测小鼠肝癌H22细胞克隆株基因组之间的差异。     

红花提取物细胞毒性作用研究

目的：研究红花提取物体外对人肝癌细胞株SMMC7721、人张氏肝细胞株 Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino生长的影响,探讨其细胞毒性作用。方法：采用MTT法检测红花提取物对SMMC7721、Chang liver、3T3-Swiss albino细胞生存率的影响,并观察不同时间点的半数抑制浓度IC50。结果：红花提取物对人肝癌SMMC7721细胞的生长具有明显的抑制作用,且生长抑制作用呈现明显的剂量-效应依赖性和时间-效应依赖性。对人张氏肝细胞株 Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino也具有较低的细胞毒性作用。结论：红花提取物可抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖,而对人张氏肝细胞Chang liver、小鼠胚胎成纤维细胞株3T3-Swiss albino增殖的影响不大,即细胞毒性较小。故红花提取物有可能用于抗肿瘤治疗。     

动物原代细胞彗星试验敏感性筛选

目的：筛选一种动物原代敏感细胞用于彗星试验，使该试验能更广泛地对环境样品的遗传毒性进行监测。方法：用重铬酸钾(K2CrO7)和过氧化氢(H2O2)作为受试物对小鼠的肝、脾、肾细胞进行彗星试验，观察K2CrO7和H2O2对这3种细胞造成的DNA损伤来判断细胞的敏感性。结果：以K2CrO7染毒的彗星试验中肝细胞的检测阈值(10nmol／L)低于为脾和肾(100nmol／L)，以H2O2染毒的彗星试验中，在相同浓度下肝细胞迁移长度最长。结论：肝细胞具有敏感性高、自身活化能力强、取材方便、耗时短等优点，可以作为一种检测细胞应用于彗星试验对环境样品进行遗传毒性监测。     

有机溶剂对肿瘤细胞的细胞毒作用

目的:为了给脂溶性的抗肿瘤药物筛选高溶解性、低细胞毒性的有机溶剂。方法:采用MTT法,研究了丙酮、甲醇、乙醇、DMSO(二甲基亚砜)、异丙醇及甘油等6种有机溶剂对U937(人白血病细胞株)、95D(猪肺癌细胞株)及AGS(人胃癌细胞株)三种细胞株的细胞毒性。结果:丙酮对三种细胞株的毒性较弱,在10%的体积分数时也没有明显的毒性,是一种良好的有机溶剂,甲醇在使用时体积分数应低于1%;对U937细胞,乙醇、甘油、异丙醇、二甲基亚砜(DMSO)的IC50分别为6.28%、5.98%、6.41%、14.18%,甲醇对U937细胞不成线性关系,在体积分数<1%时没有明显的细胞毒作用,当浓度达到3%以上时表现出明显的细胞毒作用;对95D细胞,甲醇、乙醇、甘油、异丙醇、DMSO的IC50分别为9.36%、3.23%、7.22%、1.13%、2.15%,对人AGS细胞株,甲醇、乙醇、甘油、异丙醇、DMSO的IC50分别为9.27%、2.52%、7.22%、1.13%、2.15%;结论:丙酮是脂溶性抗肿瘤药物的首选有机溶剂。     

D—氨基酸氧化酶／D—丙氨酸系统杀伤K562e细胞的作用机制探讨

目的：探讨D－氨基酸氧化酶（DAAO）／D－丙氨酸（D－Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法：以D－Ala杀伤稳定表达DAAO和绿荧光蛋白（GFP）的高致瘤性K562e单克隆细胞KDfGd,KDfGC,应用MTT法检测细胞存活率，并用酚红氧化法测定培养上清H2O2和Lowry法测定细胞蛋白数量，流式细胞仪测定细胞GFP的荧光强度。结果：在25mmol/L D-Ala作用下24h好可完全杀死KDfGd细胞，当D－Ala为20mmol/L时延长作用时间至48h，杀伤率由64％增加至96．8％，而D－Ala≤15mmol/L时杀伤率增加不明显。低于20mmol/L,D-Ala对K562e几乎无杀伤作用。培养上清的H2O2变化与杀伤转基因细胞作用相一致。结论：DAAO／D－Ala系统可能是通过产生H2O发挥杀伤转基因K562e白血病细胞的作用。     

转染肿瘤细胞总RNA的树突状细胞联合CIK细胞抗小鼠肝癌作用的实验研究

目的探讨转染小鼠肝癌H22细胞总RNA的树突状细胞(DC)疫苗体外抗小鼠肝癌的免疫作用。方法提取小鼠四肢长骨骨髓,在rmGM-CSF和rmIL-4体外刺激下增殖分化为DC。制备小鼠脾淋巴细胞,在体外经rmIFN-γ、anti-CD3、rmIL-2和rmIL-1b诱导成为细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK细胞)。制备肝癌H22细胞总RNA,体外转染DC,流式细胞仪检测转染前后的DC表面分子的表达情况。将转染H22细胞总RNA的DC和CIK细胞混合培养制备成为效应细胞,LDH释放法测定效应细胞对小鼠H22细胞、S180细胞的杀伤活性。结果经H22细胞总RNA转染后的DC,其MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子及CD83、CD86表达率明显增高,CD14表达率降低(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其对S180细胞的杀伤率(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其他各组效应细胞对H22细胞的杀伤率(P<0.05)。结论转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞具有高效而特异性的体外抗小鼠肝癌免疫作用。     

小鼠LAK细胞MHC表达水平对其体外杀伤肿瘤活性的影响

目的探讨LAK细胞表面MHC的表达水平与体外肿瘤细胞杀伤活性的关系。方法使用siRNA沉默小鼠LAK细胞MHC-Ⅰ(H-2Kd)分子的表达,同时设空转染组和无关序列组,流式细胞仪检测不同组别靶蛋白的表达,LDH释放试验检测H-2Kd表达降低的LAK细胞对K562和H22肿瘤细胞株的杀伤活性。结果流式细胞检测证实siRNA能够抑制靶蛋白的表达,H-2Kd表达降低组对K562和H22肿瘤细胞的杀伤活性与对照组相比明显降低,空转染组和无关序列组与对照组无显著性差异。结论小鼠脾LAK细胞表面H-2Kd的表达水平与其体外杀伤活性相关。     

Investigation on the Effects of Soluble Programmed Death-1 （sPD-1）Enhancing Anti-tumor Immune Response

Summary: By using semi-quantitative RT-PCR method, it was found that PD-L1 mRNA but not PD-L2 mRNA was expressed in H22 hepatoma cells and both PD-L1 and PD-L2 mRNAs were expressed in tumor tissues of tumor bearing mice and upregulated as compared with muscle tissues in normal mice and H22 hcpatoma cells. PD-L1 and PD-L2 were also expressed on the surface of the activated T cells. The soluble recombinant sPD-1 expressed from the constructed eukaryotic expression vector could enhance the lysis of tumor cells by lymphocytes stimulated specifically with antigen. The expresssion of sPD-1 by local gcne therapy on the inoculation site of H22 hepatoma cells could inhibit the growth of tumor. The results of this study indicate tbat expression of soluble receptor of negative costimulatory molecules could reduce the inhibitory effect on T cells in tumor microenvironment and enhance the eytotoxicity of T cells on tumor cells. This possibly provides a new method of improving efficacy of tumor gene therapy.     

中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒的研究

目的:探讨中药注射剂引起RBL-2H3细胞脱颗粒情况及其机制。方法:RBL-2H3细胞分别与阳性药物C48/80及15种中药注射剂作用,从形态学和超微结构观察、β-氨基己糖苷酶释放检测等方面研究RBL-2H3细胞脱颗粒情况。用WST-8法检测中药注射剂对RBL-2H3细胞和BRL细胞的细胞毒作用。结果:甲苯胺蓝染色和电镜观察细胞超微结构变化从形态学上证明中药注射剂引起RBL-2H3细胞脱颗粒。上清中β-氨基己糖苷酶释放率检测表明脉络宁、清开灵、参麦和痰热清注射液明显促进酶的释放,酶释放率在20%以上,与阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。进一步的研究发现,痰热清注射液成分中的黄芩和生脉注射液成分中的红参、五味子与RBL-2H3细胞的脱颗粒有关。大部分中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒的作用与细胞毒作用相关,但有的中药注射剂致脱颗粒无细胞毒作用。结论:一些中药注射剂可致RBL-2H3细胞脱颗粒,中药注射剂中有的成分与RBL-2H3细胞脱颗粒相关;有的中药注射剂致RBL-2H3细胞脱颗粒与细胞毒作用有关,而pH和渗透压可影响细胞的脱颗粒。     

微波制备IFN-γ处理的小鼠H22肝癌瘤苗的抗瘤作用

目的探讨用微波方法制备IFN-γ处理的小鼠H22肝癌细胞瘤苗(MITTV-H22)对H22细胞型肝癌的预防与治疗作用。方法 (1)预防实验:采用MITTV-H22免疫小鼠3次后接种H22肿瘤细胞,观察小鼠的生存期、肿瘤生长情况及检测淋巴细胞增殖指数。(2)治疗实验:小鼠接种H22肿瘤细胞的同时接种MITTV-H22进行免疫治疗。观察小鼠的生存期,治疗结束后取瘤称重、测瘤体积。结果 (1)预防实验:实验组小鼠于H22肿瘤细胞攻击后7 d经解剖肿瘤接种部位未发现瘤组织。对照组于接种部位出现直径小于0.5cm的包块,成瘤率为100%。实验组小鼠的生存期(115.40 d±11.22 d vs 31.87 d±5.87 d)和淋巴细胞增殖指数(1.51±0.23 vs 1.26±0.18)都优于对照组(P<0.05)。(2)治疗实验:实验组小鼠的平均生存期长于对照组(46.5 d±3.3 d vs 34.0 d±4.6 d,P<0.05);实验组瘤块体积增长速度明显慢于对照组(F=179.318,P<0.05);实验组的平均瘤体积(0.67 cm~3±0.21cm~3 vs 1.84cm~3±0.74 cm~3)、平均瘤质量(0.67 g±0.35 g vs 1.91 g±0.34 g)小于对照组(P<0.05)。结论 MITTV-H22可以有效的抑制肿瘤生长,具有明显的抗瘤效应。     

虎杖提取物白藜芦醇对鼠肝癌细胞H22生长及扩增的影响(英文)

目的　测定虎杖的有效成分白藜芦醇对体外培养的小鼠肝癌H2 2的抗癌活性。方法　肝癌细胞H2 2调节到 (1× 10 6)·ml-1,将适宜H2 2细胞数 (2× 10 4 /孔 )接种在 96孔培养板上 ,在 5 %CO2 、37℃培养箱中温育 12h后 ,用MTT法测定白藜芦醇对肝癌细胞的生长抑制率 ,并在显微镜和电镜下观察肝癌细胞的变化。结果　白藜芦醇终浓度为 5 .0 μg·ml-1、10 μg·ml-1及 2 0 μg·ml-1,在 8h、12h、2 4h和 48h及白藜芦醇终浓度为 2 .5 μg·ml-1的抑制率 ,较对照组有显著性差异 (P <0 .0 5 )。显微镜下观察经药物处理 48h的肝癌细胞可见细胞膜不规则、肿胀和染色质断裂 ,电镜下可见细胞出现细胞电子密度增加及出现凋亡小体。结论　白藜芦醇对体外培养的肝癌细胞H2 2的生长具有抑制作用 ,它的机制也许是诱导H2 2细胞凋亡。     

鼻咽癌双特异性抗独特型抗体体外抗肿瘤免疫机制初探

目的：比较鼻咽癌双价双特异性抗独特型抗体G22-I50与单价的抗独特型抗体G22,I50在体外抗肿瘤免疫情况,并对其可能的机制作初步探讨。方法：诱导表达G22-I50,G22,I50 3种蛋白并用Western印迹及ELISA方法进行活性鉴定。常规分离人外周血单个核细胞(PBMC),分别用G22-I50,G22,I50抗独特型抗体刺激并培养,采用MTT法、LDH释放法分别观察淋巴细胞增殖情况和细胞毒作用,ELISA法测定各抗独特型抗体刺激后培养上清液中IFN-γ,IL-2,IL-4的水平,流式细胞术检测刺激后淋巴细胞表型的改变。结果：Western印迹分析表明表达的G22-I50,G22,I50蛋白均可与FC2(Ab1)特异性地结合;直接ELISA结果表明复性后的蛋白已恢复活性,可用于体外实验研究。与G22、I50组相比,G22-I50刺激后的PBMC增殖明显,且对鼻咽癌细胞HNE2有特异的杀伤作用。G22-I50刺激后的PBMC培养上清液中IFN-γ,IL-2水平均比G22,I50组有所增加,而对IL-4水平没有明显影响。流式细胞术显示刺激后的PBMC中CD4+,CD8+T细胞比例增加,CD4+/CD8+比率增加,而CD4+CD25+T细胞的比例有所减少,其中以G22-I50组最为明显。结论：G22-I50具有更强的免疫原性并能增强PBMC的特异性杀瘤作用,其机制可能与促进PBMC的增殖,诱导具有抗肿瘤作用的Th1细胞因子的分泌并活化CD8+T细胞,抑制CD4+CD25+T细胞的表达有关。     

当归红芪超滤物联合重离子12C6+对肝癌H22细胞辐射增敏的实验研究

目的 观察当归红芪超滤物（Radix Angelicae Sinensis and Radix Hedysari, RAS-RH）增强人肝癌H22细胞对重离子12C6+辐射敏感性的作用，并探讨其可能的作用机制。方法 H22细胞分为空白对照组、药物组（给予RAS-RH）、辐射组（一次性给予12C6+辐射）及联合组（给予RAS-RH+辐射），用CCK-8法检测RAS-RH对人肝癌H22细胞增殖抑制的影响，筛选合适的RAS-RH工作浓度；克隆集落形成实验检测RAS-RH对人肝癌H22的辐射增敏作用，筛选合适的辐射剂量；通过流式细胞仪检测RAS-RH对人肝癌H22细胞凋亡的影响，利用Western blot法检测Survivin、Caspase-9的蛋白表达水平的改变。结果 RAS-RH对H22细胞的增殖抑制作用在一定的时间（0~72 h)和浓度范围（0~200 mg/L)内呈现时间和剂量依赖性，其细胞抑制率为20%（IC20）时RAS-RH的质量浓度为（117.60±2.15） mg/L，以此选定100 mg/L为工作浓度；利用Prism5.0软件拟合的H22细胞生存曲线均向右下呈弧度的曲线，两条曲线明显分开呈一定的距离，联合组与辐射组相比，曲线低剂量区“肩区”缩小变窄，且各剂量点（1~10 Gy)的存活率降低，2 Gy时，其辐射增敏比（SER）为1.39±0.07，以此选定2 Gy为辐射总剂量。联合组（100 mg/L RAS-RH+2 Gy)凋亡率高于其余3组（ P＜0.01）；Western blot结果显示联合组的Survivin蛋白表达低于其余3组（ P＜0.01），而联合组的Caspase-9蛋白表达高于其余3组（ P＜0.01）。结论 RAS-RH联合重离子12C6+束对人肝癌H22细胞有辐射增敏作用，其辐射增敏机制可能通过下调凋亡抑制因子Survivin蛋白表达，上调促凋亡因子Caspase-9蛋白表达以促进细胞凋亡有关。     

复方斑蝥注射液抗小鼠肝癌H_(22)肿瘤作用及机理的初步研究

目的研究复方斑蝥注射液(Compound Cantharis Injection,CCI)的抗肿瘤作用,并观察CCI对小鼠H22肿瘤细胞Fas蛋白表达的影响。方法(1)通过小鼠腋皮下接种H22肿瘤细胞,观察CCI对H22小鼠的抑瘤作用。(2)用免疫组织化学的方法检测该药对小鼠H22肿瘤细胞Fas蛋白表达的影响。结果(1)实验证实,与模型组比较,CCI有显著的抑制小鼠H22实体瘤的作用(p<0.05),该药高剂量对小鼠H22抑制率为34.83%。(2)免疫组织化学结果显示,与模型组比较,CCI能上调Fas蛋白表达(p<0.05)。结论CCI可能通过上调Fas蛋白表达,诱导肿瘤细胞凋亡而抑制H22肿瘤细胞的生长。