肠杆菌科细菌mcr-1流行病学研究

目的探讨临床常见肠杆菌科细菌携带质粒介导多黏菌素耐药基因（mcr-1）的情况,为医院感染防控提供依据。方法收集2018年1月至2022年3月浙江省台州医院临床分离得到的菌株共1980株,包括大肠埃希菌1400株,肺炎克雷伯菌580株。采用PCR检测mcr-1基因;利用微量肉汤稀释法和E-test法检测抗生素对mcr-1阳性菌株的最低抑菌浓度;采用接合试验检测mcr-1基因在可转移质粒上的位置;通过提取细菌DNA基因组进行全基因组测序,并对测序结果进行多位点序列分型、质粒Inc分型和耐药基因识别等分析。结果在1400株大肠埃希菌中,共检测出6株携带mcr-1,阳性率为0.43%;580株肺炎克雷伯菌,仅1株检出mcr-1,阳性率为0.17%。其中5株菌株接合试验成功。6株大肠埃希菌的ST型分别是ST648、ST95、ST359、ST602、ST453、ST156,肺炎克雷伯菌是ST25。质粒Inc分型结果显示不同菌株携带相同类型质粒,提示该类质粒可以在菌株间水平传播。耐药基因分析发现7株细菌均携带大量的耐药基因,其中1株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌同时携带mcr-1和碳青霉烯耐药基因。结论mcr-1在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的分离率相对较低,然而考虑到含有mcr-1的质粒在不同细菌之间水平传播的潜力,以及mcr-1与同一质粒内的多个耐药基因整合的能力,在临床环境中要加强对多重耐药菌的管理。     

产新德里金属β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药机制及分子流行病学研究

目的 研究临床分离耐碳青霉烯类抗菌药物的大肠埃希菌中新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi metallo-beta-lactamase,NDM)的分子分型、耐药机制及流行特点等,为医院感染的防控与治疗提供依据。 方法 收集浙江大学丽水医院2017年6月—2018年2月从各种临床标本中分离得到的产NDM的大肠埃希菌。结合临床药敏、EDTA协同及增效试验与PCR扩增检测blaNDM基因;通过肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)及多位点序列分型(MLST)分析菌株之间的同源性;采用药物敏感性试验、接合试验、聚合酶链式反应(PCR)和序列分析等技术研究大肠埃希菌NDM分子分型及耐药的分子机制。 结果 共筛选出9株产NDM的大肠埃希菌菌株,其中3株分离自新生儿科,2株分离自妇科,重症医学科、急诊、血液内科、肾内科各1株;经测定所有菌株的NDM亚型均为NDM-5型,质粒复制子类型均为IncX3型;5株细菌接合试验阳性,分别来自妇科、重症医学科、急诊和新生儿科,同时PCR结果表明接合菌的质粒复制子类型为IncX3型;所有菌株呈现多重耐药现象;MLST分型结果显示,这9株大肠埃希菌共有4个ST分型,分别为ST206、ST167、ST354和ST1642,与ERIC-PCR分型结果相一致。 结论 研究结果表明本地区存在携blaNDM-5基因的大肠埃希菌的流行,同时携带有多种耐药基因,并能够通过IncX3型质粒在大肠埃希菌中传播。因此,为了预防和控制医院感染的暴发,必须重视和加强对耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的监测。      

泌尿系感染产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药表型和基因分型

目的:了解本地区泌尿系感染产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药表型及其基因型分布.方法:收集2003-03/2004-06间临床分离的尿培养阳性大肠埃希菌共258株,ESBLs的检测采用NCCLs规定的ESBLs型筛选和确定实验,用K-B琼脂扩散法进行药物敏感性检测,并应用聚合酶链反应(PCR)方法对所分离的产ESBLs菌株进行SHV,CTX-M基因型检测.结果:产ESBLs大肠埃希菌检出率为24.0%(62株),67.7%(42株)携带CTX-M基因,14.5%(9株)的菌株携带SHV型基因,并有1.6%(1株)同时携带CTX-M基因和SHV型基因.结论:本地区泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌以耐头孢曲松和头孢噻肟为主;CTX-M型的ESBLs最为常见.     

大肠埃希菌中OXA型超广谱β-内酰胺酶基因分布

目的了解郑州地区OXA型ESBLs在大肠埃希菌中基因分布状况。方法收集郑州大学第一附属医院和河南省人民医院2006年1月至2007年10月临床分离产ESBLs大肠埃希菌108株，采用聚合酶链反应（PCR）扩增OXA型ESBLs基因全长序列，采用DNA脱氧核酸测序确定基因型别。结果108株产ESBLs菌株中8株携带OXA型ESBLs基因，测序结果显示8株均为OXA-1型。结论郑州地区大肠埃希菌OXA型ESBLs以OXA-1型为主。     

产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株第1类整合子-基因盒的特征

目的：探讨产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株携带第1类整合子的特征及所含基因盒的种类。方法：采用纸片扩散法对8株产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株进行抗生素耐药性监测;制备细菌转接合子,采用PCR技术鉴定第1类整合子,并对PCR产物测序及结果分析。结果：4株产志贺毒素大肠埃希菌对复合磺胺、四环素、氨苄西林、环丙沙星表现多重耐药,其中2株同时对链霉素和壮观霉素耐药。PCR检测第1类整合子1 000 bp 2株,PCR产物测序1 000 bp整合子携带腺苷酰基转移酶(aadA1)基因盒并存在于7 800 bp可接合质粒上,与sul 1和qacEΔ1基因连锁,分别传递着对链霉素、壮观霉素、复合磺胺和季胺盐类消毒剂的耐药性。结论: 产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株可接合质粒上第1类整合子携带的aadA1耐药基因盒是该菌株对氨基糖苷类抗生素耐药产生和扩散的重要原因。     

多重PCR检测临床产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性、产ESBLs的阳性率及耐药基因之间的关系。方法采用Kirby-Bauer(K-B)琼脂扩散法检测120株临床分离的大肠埃希菌对18种抗生素的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,运用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果120株大肠埃希菌产ESBLs的有51株,阳性率为42.5%。120株大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢类抗菌药物的耐药率高达100%;51株产ESBLs菌株其中46株扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,2株扩增到SHV基因,1株OXA型基因,未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青酶烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物;产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型别为CTX-M型和TEM型。     

青岛地区大肠埃希菌中整合子与耐药性的分析

【立论依据】 大肠埃希菌是临床常见的条件致病菌,耐药率有逐年上升的趋势。近年研究表明,整合子在细菌多重耐药性的形成和水平传播中发挥重要作用,且整合子的分布及其携带的基因盒存在明显的地区差异性。因此,检测不同地区大肠埃希菌中整合子的分布及耐药基因盒,对于控制细菌耐药及合理应用抗菌药物具有重要的指导意义。 【设计思路】 本研究通过检测青岛地区临床分离的大肠埃希菌中I类、II类及III类整合子的分布及携带的耐药基因盒,分析整合子与耐药表型的关系,旨在探讨整合子在介导大肠埃希菌耐药中的作用。 【实验内容】 琼脂纸片扩散法进行药敏试验;分别设计针对I、II、III类整合子整合酶基因及可变区的PCR引物,PCR检测整合子的整合酶基因,对整合酶基因阳性菌株进行可变区基因的PCR扩增,回收纯化的PCR产物克隆至T载体,将筛选鉴定的重组子送往华大基因公司测序,测序结果经在线Blast及DNAstar软件进行同源性比对分析,确定整合子携带的耐药基因盒。应用SPSS 21.0统计软件分析大肠埃希菌耐药性与整合子的相关性。 【材料】 78株大肠埃希菌分离自青岛市立医疗集团住院患者的各类标本,细菌DNA提取试剂盒购自天根生化科技有限公司,PCR引物由Invitrogen公司合成,pMD18-T载体购自大连TaKaRa公司。 【可行性】 前期研究结果表明:78株大肠埃希菌对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢唑林、头孢呋辛、复方新诺明、氨曲南、头孢曲松及哌拉西林的耐药率均超过70%;I类整合子的携带率为53.89%,其中I类整合子阳性菌株对复方新诺明的耐药率明显高于整合子阴性菌株,差异有统计学意义(P<0.05);I类整合子可变区检测出3种不同长度的片段:2株750 bp片段不携带耐药基因盒,8株1 800 bp片段携带dfrA17-aadA5 基因盒,1株1 200 bp片段为aadA22基因盒;I类整合子阳性菌株中携带耐药基因盒的菌株占61.90%,对复方新诺明的耐药率明显高于基因盒阴性菌株(P<0.01)。 【创新性】 首次研究青岛地区大肠埃希菌中整合子的分布及其携带的耐药基因盒,探讨整合子与大肠埃希菌耐药性的关系。     

儿童患者中检出产ESBLs大肠埃希菌的耐药性和基因分型

目的了解本地区儿童患者临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药基因型别和耐药性的变化情况。方法收集自儿童患者分离鉴定的大肠埃希菌株1327株，通过K-B法作药敏试验，采用美国NCCLS1999年推荐的抑制剂增强纸片法确认产ESBLs株，并对ESBLs进行初步基因分型。结果检出产ESBLs菌株702株，检出率为52．9％，产ESBLs大肠埃希菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类抗生素耐药率为55．5％。95．0％；PCR初步分型结果，单独携带TEM型基因的占56．7％，单独携带SHV型基因的占15．0％，携带两种基因的占25．8％。结论产ESBLs大肠埃希菌检出率逐年上升，具有多重耐药的特点；产ESBLs大肠埃希菌主要携带TEM型和SHV型β-内酰胺酶基因，其中绝大部分产TEM型β-内酰胺酶。     

临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：检测临床分离的临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株的发生率、耐药性、流行性以及酶的基因型别。方法：采用双纸片法、琼脂稀释法、PCR、脉冲场电泳对1999年复旦大学附属华山医院临床分离的559株肺克雷伯菌和427株大肠埃希菌进行检测。结果：肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产ESBL菌株的发生率分别为51％和23.6％,产ESBL菌株主要分布于ICU和神经外科病房,对大多数的β-内酰胺酶和非β-内酰胺类抗菌药物耐药;PFGE显示,产ESBL菌株（尤其是产ESBL肺炎克雷伯菌株）在ICU病房中存在同一菌株的克隆传播;PCR检测显示TEM型是最为常见的β-内酰胺酶型别,CTX-M型ESBL亦较为普遍。结论：产ESBL菌株在临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中较为普遍,而且为多重耐药菌株,在医院内中存在流行与传播。     

MRFQ SYBR Green I-PCR结合融解曲线快速检测产ESBLs菌耐药基因

目的 探讨SYBRGreenⅠ实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法快速检测常见超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）耐药基因的可行性。方法选取经测序验证携带有tern、shy、ctx—m-1组、ctx-m-9组耐药基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作为阳性菌株,建立细菌耐药基因SYBRGreen1实时荧光定量多重PCR检测体系,这四种耐药基因的扩增产物片段长度和融解温度（Tm值）都不同,可通过结合融解曲线分析加以区别。用此体系检测110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌,根据特异性Tm值的有无和差别判断是否携带有耐药基因及携带耐药基因型别。结果与耐药表型、琼脂糖电泳、测序结果对照。结果经SYBRGreenⅠ实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析,分别有47株（42．7％）大肠埃希菌和34株（36．2％）肺炎克雷伯菌携带有这四种常见的ESBLs耐药基因,与表型确证实验和电泳结果比较达到100％的一致性;根据Tm值的不同,对耐药基因进行鉴别,携带单个耐药基因菌株的检测与电泳结果和测序结果比较达到100％的一致性;对携带多个耐药基因菌株的检测不能达到较好的分辨性。结论SYBRGreenI实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法可以快速筛查常见超广谱β-内酰胺酶（EsBI曲耐药基因,对携带单个耐药基因的细菌的基因型能进行准确鉴定。这对指导临床医生合理使用抗生素进行临床治疗和对耐药细菌的流行病学监测具有重要价值。     

大肠埃希菌质粒型AmpC酶基因的检测分析

目的 调查大肠埃希菌质粒型Ampc酶基因的存在状况。方法 采用MH药敏平板对40株临床分离的大肠埃希菌进行抗菌药物敏感试验和ESBLs纸片法确诊，PcR方法检测DHA和ACT-1型Ampc酶基因。结果 40株大肠埃希菌呈多重耐药，20株ESBLs阳性菌AmpCM基因阳性率90％，20株ESBLs性菌Ampc酶基因阳性率45％，40株大肠埃希菌ACT-1和DHA基因阳性率分别为57．5％，40．0％，有12株大肠埃希菌同时携带ACT-1和DHA基因。结论 临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重，质粒型AmpC酶基因携带率高。     

大肠埃希菌多重耐药与Ⅰ类整合子的关系

目的 监测大肠埃希菌临床分离株的耐药性,了解大肠埃希菌中Ⅰ类整合子的流行情况和分子特性.方法 临床分离114株大肠埃希菌经全自动细菌分析系统鉴定并检测耐药性,应用PCR法扩增质粒DNA上Ⅰ类整合子,对PCR产物进行酶切分析和DNA测序.将序列结果在GenBank中搜索,确定Ⅰ类整合子可变区基因盒的种类和排列.结果 细菌耐药率＞50%,且大多为多重耐药菌(耐受3种以上抗生素).在58株细菌的质粒DNA上检测到Ⅰ类整合子序列,大小约600～3 500 bp,各含1～3个Ⅰ类整合子.整合子中最常见的基因盒为dfrl7(甲氧苄啶耐药基因)与aadA5(链霉素、壮观霉素耐药基因),最主要的基因盒排列为dfrl7-aadA5.绝大多数携带甲氧苄啶耐药基因盒的菌株对复方新诺明耐受,大多数携带链霉素、壮观霉素耐药基因盒的菌株对链霉素不敏感.结论 目前临床分离的大肠埃希菌耐药性强,并广泛存在Ⅰ类整合子.菌株携带基因盒和耐药表型之间有较好的对应关系,基因盒介导了细菌耐药性.细菌的多重耐药率与Ⅰ类整合子的阳性率相关.     

健康学生大肠埃希菌第1类整合子的鉴定及特征

目的：探讨健康学生肠道大肠埃希菌携带第1类整合子的分布及所含基因盒的特征。方法：常规方法分离大肠埃希菌;纸片扩散法对10种抗生素进行耐药性监测和分析;PCR鉴定第1类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析。结果：从97份标本中鉴定出大肠埃希菌76株,其中25株（32.8%）为多重耐药,耐药谱为复合磺胺-氨苄西林-四环素-红霉素-链霉素。25株中有14株(56.0%)鉴定出1类整合子,1 800 bp 10株, 750 bp 4株。PCR产物测序得知1 800 bp整合子携带aadA1-dfrA14-orf基因盒,传递对氨基糖苷类-磺胺类抗菌药物的耐药性;750 bp整合子携带dfrA14基因盒,传递对磺胺类抗菌药物的耐药性。结论: 不同种类的1类整合子存在于健康人大肠埃希菌中,携带耐药基因盒,决定多重耐药性。      

基于管家基因和水平转移基因的菌株亲缘性分析:60株耐药大肠埃希菌研究

目的:了解1组(60株)耐药大肠埃希菌的菌株亲缘性?方法:对该组耐药大肠埃希菌4种与耐药相关的管家基因和45种水平转移获得与β-内酰胺类?氨基糖苷类?喹诺酮类耐药相关基因以及7种整合子?转座子?插入序列?接合性质粒遗传标记进行检测?并对检测结果进行样本聚类分析?结果:60株耐药大肠埃希菌多态性明显,多数菌株已发生演化?只有6?53号株;10?14号株,7?8?26?40号株3组携带相同基因(同一克隆)?结论:耐药基因的样本聚类分析可识别出具有相同耐药特征的菌株,具有一定的流行病学意义,为追溯耐药菌传播途径提供方便?     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药表型和基因型分析

目的:分析临床分离大肠埃希菌耐药性、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性率及耐药基因之间的关系。方法:用K-B法检测117株大肠埃希菌耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,用PCR法检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果:117株大肠埃希菌产ESBLs 49株,阳性率41.9%。产ESBLs菌株对青霉素类和第一、第二代头孢菌素耐药率100%,对第三代头孢菌素中头孢哌酮、头孢噻肟和头孢曲松耐药率>95%,对酶抑制剂哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦耐药率<20%,未检测到亚胺培南耐药株。非产ESBLs菌株耐药率明显低于产ESBLs菌株。49株产ESBLs菌株PCR均扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,未扩增到其他基因型。DNA序列分析证实为CTX-M-14亚型、CTX-M-3亚型和广谱酶TEM-1亚型基因。结论:大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著;耐药基因以CTX-M-14亚型为主,其次为CTX-M-3亚型,尚未检出其他ESBLs基因。TEM-1亚型广谱内酰胺酶基因在大肠埃希菌中普遍存在。     

广州市番禺区基层医院产ESBLs大肠埃希菌耐药性以及常见基因型检测

目的了解本地区基层医院大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药性和基因型特点,为临床治疗提供依据。方法收集2014年3月至2015年3月广州市番禺区基层医院临床各类标本中分离得到的大肠埃希菌,采用纸片扩散法检测产ESBLs菌株,通过全自动细菌药敏仪检测实验菌株的药敏结果,PCR法检测bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)、bla_(CTX-M-9)和bla_(SHV)基因。结果各类临床标本共分离到产ESBLs大肠埃希菌株50株,阳性率为43.9%(50/114)。50株产ESBLs大肠埃希菌对阿莫西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢呋辛100%耐药;对头孢噻肟耐药率为82%、对复方新诺明耐药率为66%、对庆大霉素耐药率为70%、对氨曲南耐药率为50%、对左氧氟沙星和环丙沙耐药率分别为70%和80%。其中33株(66%)携带bla_(CTX-M-9)亚群基因,19株(38%)携带bla_(CTX-M-1)亚群基因,6株同时含上述2种基因。未检测出bla_(CTX-M-2)、bla_(SHV)型基因。结论基层医院大肠埃希菌产ESBLs率较高,其基因型以携带bla_(CTX-M-9)亚群基因为主。     

Ⅰ类整合子在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的分布探讨

目的了解耐多药产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带情况。方法纸片扩散法(K-B法)测定大肠埃希菌对6种3类抗生素的敏感性并筛选出产ESBLs酶菌株;聚合酶链反应(PCR)检测整合子遗传标记qacE△1sul1。结果 71株大肠埃希菌中QacE△1-sul1共检出阳性菌株55株(74.46%),其中多耐模式检出率最高为88.89%(40株)。不同耐药模式中遗传标记基因的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);产酶菌株在不同耐药模式中检出差异有统计学意义(P<0.05);非产酶菌株中检出差异无统计学意义(P>0.05)。结论耐多药产ESBLs大肠埃希菌中Ⅰ类整合子携带率高。     

大肠埃希菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrB的检测

目的了解本地大肠埃希菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrB的流行情况。方法对2009年8月～2010年8月临床分离的154株大肠埃希菌用Kirby-Bauer琼脂扩散法对13种抗生素做药物敏感试验,并采用PCR检测qnrB基因。结果 154株大肠埃希菌中共检出耐左氧氟沙星菌76株(49.35%),qnrB基因阳性菌10株(6.49%),qnrB基因阳性菌株均对左氧氟沙星耐药。结论自贡地区存在qnrB基因流行,且qnrB基因阳性菌株均对左氧氟沙星耐药,故应加强耐药监控。     

产ESBLs大肠埃希菌耐药基因分型研究

目的对本院分离的31株产ESBLs大肠埃希菌进行耐药基因分型研究。方法用PCR对根据CLSI标准进行产ESBLs大肠埃希菌的初筛确证实验得到的产ESBLs大肠埃希菌31株,进行耐药基因的分型研究。结果31株产ESBLs大肠埃希菌中,TEM型为15株,SHV型为3株,CTX-M型为6株,TEM型对氨苄西林100%耐药,而SHV和CTX-M型主要对三代头孢类抗生素耐药,其治疗的首选药物为亚胺培能。结论本院检出的产ESBLs大肠埃希菌主要型别为TEM型,耐药基因分型研究将为临床用药和医院感染监控提供较有价值的参考。     

澳门地区产超广谱内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析

 【目的】 了解澳门地区医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌的临床分布特点和基因型特征。【方法】 收集2007年12月至2008年2月期间从澳门地区两家医院的临床患者中分离到的大肠埃希菌158株,用表型确定试验确定产ESBL大肠埃希菌。应用PCR方法分别扩增产酶菌株的CTX-M-3、CTX-M-9、TEM和SHV等常见的β-内酰胺酶基因,并结合临床分离菌株的分布特点对PCR扩增结果作进一步的分析。【结果】 澳门地区临床分离的158株大肠埃希菌中,有54株产ESBL,产酶率为34.2%。PCR 扩增结果显示,所有产酶菌株均携带TEM基因;其中有47株(87%)同时携带CTX-M-9、TEM两个基因;没有菌株携带CTX-M-3和SHV 基因。产ESBL大肠埃希菌广泛分布于临床各科室,其中普外科占40.7%,内科占27.8%,心脏科占16.7%。标本分布较为集中,尿液占55.6%,分泌物或脓液标本占22.2%,血液和呼吸道标本各占11.1%。【结论】 澳门地区医院感染中,产ESBL大肠埃希菌在临床各科室分布广泛,主要分离自尿液、分泌物或脓液标本;所有菌株均携带TEM基因,并有87%的菌株同时携带CTX-M-9基因。