亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的实验研究

为研究亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用,应用7日龄大鼠制成缺氧缺血性脑损伤模型。动物随机分组：假手术组（C组）,缺氧缺血正常温度组（HI组）,缺氧缺血后30分钟亚低温治疗组（亚低温组）。脑皮质细胞匀浆用于测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,应用原位缺口末端标记（TUNEL）及免疫组化bax基因表达,观察神经细胞凋亡情况。结果显示,HI组MDA含量明显高于C组（P＜0．01）,亚低温组MDA含量明显低于HI组（P＜0．01）;亚低温组凋亡细胞明显少于HI组（P＜0．01）。因此,亚低温可以通过减少自由基的产生,抑制细胞凋亡的机制发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

他克莫司对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马GAP-43表达的影响

目的：新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是新生儿期常见病,具有较高的致死率和神经系统致残率,目前尚无有效干预措施。新型的免疫抑制剂他克莫司（FK506）已在成年动物缺血性脑损伤模型中显示神经保护作用,目前尚无新生动物模型研究。该研究旨在探讨FK506对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马生长相关蛋白（GAP-43)表达的影响。方法：7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、HIBD组和FK506干预组,HIBD组和干预组制备HIBD模型,干预组缺氧后即刻腹腔内注射FK506 1 mg/kg,连续注射3 d。大鼠分别于缺氧后24 h,72 h,7 d,14 d 断头取脑,切片行苏木精-伊红染色及免疫组化Envision法检测海马GAP-43的表达。结果：同HIBD组相比,干预组神经细胞灶性坏死减少。HIBD组海马GAP-43的表达较假手术组增加,在缺氧后72 h至 14 d 差异有显著性意义（P<0.05）。干预组海马GAP-43的表达在缺氧后7 d达到高峰,与HIBD组相比,在缺氧后72 h、7 d表达增加,差异有显著性（P<0.05）。结论：FK506可能对HIBD新生大鼠具有神经保护作用。 ［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：65-68］     

地塞米松对脑缺氧缺血大鼠bid基因表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后bid基因表达及细胞凋亡的变化，地塞米松（DEX）对其的调控作用，从而阐明DEX预处理对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制。方法 7d龄SD大鼠24只。随机分成DEX组、9g／L盐水组（NS组）、HIBD组、健康对照组。DEX和NS组在缺血缺氧前12h腹腔内分别注射DEX、等量NS。通过建立新生大鼠HIBD动物模型，取实验侧大脑半球，采用RT-PCR技术检测脑bid基因表达，采用Tunel法检测凋亡细胞。结果 正常组无bid基因表达，HIBD组bid基因表达明显上调，凋亡细胞数明显增加（P〈0．01）；与HIBD组比较，DEX组bid基因表达明显下调，而凋亡细胞数明显减少（P〈0．01）。结论 脑缺氧缺血引起神经细胞凋亡可能与bid基因表达明显上调有关。DEX能通过下调bid基因表达，从而抑制细胞凋亡，起到神经保护作用。     

细菌内毒素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期智能的影响

目的：探讨细菌内毒素脂多糖（LPS）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠远期智能的影响，方法，建立新生大鼠LPS＋HIBD模型，于新生大鼠缺氧前4h给予腹腔注射LPS0．3mg/kg,HIBD组和对照组仅给予腹腔注射生理盐水，采用迷宫实验观察远期学习记忆能力的改变。结果：LPS＋HIBD组学习记忆能力明显低于HIBD组，表现在达标所需反映次数明显高于HIBD组（P＜0．05），而正确率支明显低于HIBD组（P＜0．05），结论：LPS对缺氧缺血引起的脑损伤有增敏作用，可进一步降低HIBD后的学习和记忆能力。     

促红细胞生成素在缺氧缺血性脑病新生鼠模型中的神经保护作用

目的探讨促红细胞生成素（EPO）在缺氧缺血性脑病（HIE）新生鼠模型中的神经保护作用。方法新生鼠HIE模型为7日龄新生鼠，结扎右侧颈总动脉，在缺氧环境下（氧体积分数为80mL／L）放置2h。实验分为假手术组、对照组和EPO组。从手术前2d开始，对照组注射磷酸盐酸缓冲液（PBS），EPO组注射EPO4000U／（kg·d），持续注射9～16d。通过测脑质量、脑损伤比率、姿势反射实验观察EPO疗效。体外实验利用神经干细胞系C17．2，在无血清条件下培养，体外模拟缺血环境，诱导细胞凋亡，利用流式细胞技术检测Anexin V，研究EPO对C17．2的保护作用。结果对照组脑质量、脑损伤比率明显大于假手术组（Pa〈0．05）。姿势反射实验对照组明显低于假手术组（P〈0．05）。EPO处理后，脑质量明显提高，脑损伤比率明显减小，姿势反射实验正常百分率提高（Pa〈0．05）。体外实验，用流式细胞技术检测Anexin V，发现EPO可有效减少神经细胞凋亡（P〈0．05）。结论EPO在HIE中具有神经保护作用，且有抗神经于细胞凋亡作用。     

神经生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经修复作用的研究

目的研究神经生长因子（NGF）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后，神经干细胞巢蛋白（nestin）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其神经修复作用机制。方法7日龄新生SD大鼠84只，建立HIBD模型后，随机分为假手术组、缺氧缺血组及NGF干预组各28只。神经生长因子干预组腹腔内注射NGF（6000U／kgJd），缺氧缺血组同步注射等量生理盐水。采用免疫组化法检测NGF对新生大鼠HIBD后不同时间内Nestin及VEGF表达的影响。结果缺氧缺血性脑损伤后12、24h，3、7、14d，NGF干预组在大脑皮质、海马和室旁区的Nestin表达高于缺氧缺血组（P〈0．05），且高峰提前到3d。HIBD后即刻、3、12、24h及3d，NGF干预组在大脑皮质、海马区VEGF的表达高于缺氧缺血组（P〈0．05），且高峰提前到3h。结论NGF对HIBD具有神经修复作用可能是通过上调nestin及VEGF的表达而实现的。     

地塞米松对缺氧缺血新生大鼠脑组织兴奋性氨基酸和C-fos蛋白表达的影响

目的观察地塞米松（DXM）对缺氧缺血新生大鼠脑组织兴奋性氨基酸（EAA）和C-fos蛋白表达的影响，探讨其在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中的应用价值。方法建立HIBD动物模型，应用高效毛细管电泳和免疫组化方法，分别检测假手术组、HIBD组、小剂量DXM干预组（0．5mg／kg）及大剂量DXM干预组（10mg／kg）的脑组织EAA含量及C-fos蛋白表达水平。结果HIBD组的EAA含量及C-fos蛋白表达均较假手术组明显升高（P〈0．01）；小剂量DXM组的EAA含量及C-fos蛋白表达较HIBD组无明显变化（P〉0．05）；大剂量DXM组EAA含量较HIBD组明显减少（P〈0．01），较小剂量DXM组减少（P〈0．05）；大剂量DXM组C-fos蛋白表达较HIBD组及小剂量DXM组均明显降低（P〈0．01）。结论缺氧缺血促进脑组织EAA的释放，诱导C-fos蛋白表达；大剂量DXM干预可能通过抑制EAA释放，降低C-fos蛋白表达而对缺氧缺血脑损伤起保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病模型中己酮可可碱的干预作用研究

目的观察不同时间给予己酮可可碱（pentoxifylline，PTX）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型的影响。方法建立新生大鼠HIBD模型，120只出生7d的Wistar大鼠随机分为假手术（Sham）组、HIBD模型组和3种PTX（50mg／kg腹腔注射）给药组，即缺血末均给药（I＋PTX）组、缺氧末给药（H4-PTX）组及缺血和缺氧末均给药（I，H＋PTX）组，各组均于缺血缺氧处理后72h取出左脑，测定脑组织水含量、大脑皮层神经组织游离钙离子浓度、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）及一氧化氮（NO）。结果HIBD模型组与Sham组相比，脑组织含水量、游离钙离子浓度、MDA、NOS及NO水平显著升高（均P〈0．01），SOD水平明显降低（P〈0．01）。3种PTX给药组与HIBD模型组相比，脑组织含水量、游离钙离子浓度、MDA、NOS及NO水平均显著降低（均P〈0．01），SOD水平明显升高（P〈0．01）。以上作用尤以（I，H＋PTX）组明显。结论PTX对新生大鼠缺氧缺血后脑组织有保护作用，其机制可能与PTX改善能量代谢及减少局部细胞毒性物质有关。     

雌激素对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的干预作用

目的 研究外源性雌激素对缺氧缺血新生大鼠脑组织中超氧化酶歧化酶（SOD）和一氧化氮（NO）水平的影响,探讨雌激素治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的作用机制。方法 将7日龄Wistar大鼠75只随机分为正常组、HIBD模型组、生理盐水对照组（NS组）、丹参干预组（丹参组）及雌激素干预组（雌激素组）,制备HIBD模型后注射雌二醇2 mg/kg及丹参注射液（0.15 ml/10g）。缺氧缺血后72 h处死,取大脑皮质,制作脑组织匀浆,检测脑组织中SOD、NO水平。结果 HIBD组与NS组脑组织中SOD水平低、NO水平高,与正常组比较差异有统计学意义（P均〈0.01）;雌激素、丹参治疗组SOD水平高、NO水平低,与模型组比较差异有统计学意义（P均 〈 0.05）。结论 雌激素可通过血脑屏障,能使大脑皮质SOD水平升高,降低NO水平,对HIBD有防治作用。     

褪黑素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的实验研究

褪黑素（melatonin,MT）是松果体腺分泌的一种吲哚胺类激素,近年研究发现它的强大氧自由基清除作用对脑缺血损伤、癫癎发作、外周神经损伤等多种神经系统疾病有保护作用,但在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的作用还少见报道.2004年3月至12月我们进行了MT对新生动物缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究,报道如下.     

新生大鼠缺氧性脑损伤新模型

目的探讨建立新生鼠缺氧性脑损伤新模型,验证新模型的可靠性及优越性。方法7日龄Wistar大鼠随机分为无氧组、Rice Vannucci法组、单纯缺血组和正常组。无氧组于0%氧浓度环境中持续7min;Rice Vannucci法组采用传统的Rice Vannucci法处理;单纯缺血组只结扎左颈总动脉,不缺氧;正常组不作处理。各组处理后测定脑含水量、神经细胞凋亡、神经功能,取脑行苏木精 伊红染色,观察组织病理改变。结果无氧组大鼠左脑的含水量［（88.96±0.29）%］和神经细胞凋亡计数［（31.52±5.45）%］明显高于正常组和单纯缺血组（P＜0.01）;与Rice Vannucci法组相比,差异无统计学意义,无氧组大鼠右脑含水量［（88.68±0.24）%］和神经细胞凋亡计数［（30.85±5.38）%］明显高于Rice Vannucci法组、单纯缺血组和正常组（P＜0.01）;苏木精 伊红染色无氧组左右大脑均有病变,Rice Vannucci法组仅左脑有病变,单纯缺血组和正常组左右大脑均无病变;与单纯缺血组和正常组相比,无氧组和Rice Vannucci法组神经功能明显受损。 结论 置新生大鼠于0%氧浓度环境中持续7 min,成功建立了简便可靠的新生鼠缺氧性脑损伤模型。     

高压氧对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型NF-κB活化和神经细胞凋亡的影响

目的探讨高压氧（HBO）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型神经细胞的凋亡和对NF-κB活化的影响。方法新生7日龄健康SD大鼠随机分为空白对照组（n=16）、假手术组（n=16）、HIBD组（n=17）及HBO组（n=18）。Western-blot检测神经细胞IκBα的表达,了解NF-κB的活化,TUNEL试剂盒检测神经细胞的凋亡。结果脑组织缺氧缺血后可在一定程度上诱导NF-κB的活化,HBO治疗可使NF-κB的活化增强;脑组织缺氧缺血后神经细胞的凋亡明显增加,其阳性凋亡数为368．62±8．25,HBO治疗后神经细胞的阳性凋亡数为278．32±10．34,较HIBD组明显减少（P〈0．05）。结论HBO治疗可减轻缺氧缺血性脑损伤后神经细胞的凋亡,机制可能与其诱导了神经细胞NF-κB的活化有关。     

乌司他丁对缺氧缺血性新生鼠的脑保护作用

目的 探讨乌司他丁对新生鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的作用。方法 选7日龄新生Wistar大鼠60只制备HIBD模型。乌司他丁治疗组大鼠分别于术后即刻、术后8、16h腹腔注射乌司他丁一次，术后24h处死。取脑组织迅速秤重，固定，切片行HE和TUNEL染色，测定凋亡细胞数，对皮层脑细胞变性坏死和胶质细胞增生行病理量化评分，电镜观察海马区细胞形态。结果 治疗组在脑重增加值及左、右脑重差值、凋亡细胞数和病理量化评分明显低于缺氧缺血组（P〈0．01）；各治疗组之间比较上述指标无统计学意义（P〉0．05）。结论 乌司他丁可减轻缺氧缺血后脑细胞水肿、变性、坏死及凋亡，对新生鼠HIBD具有保护作用。     

窒息新生儿血浆血管活性肠肽、超氧化物歧化酶、丙二醛水平与脑损伤的关系

目的探讨窒息新生儿血浆血管活性肠肽（VIP）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平与窒息后缺氧缺血性脑损伤的关系。方法足月窒息新生儿68例（单纯窒息组15例，轻、中、重度HIE组分别为17、22、14例），对照组20例。分别于生后d1及d7采用放射免疫法、硫代巴比妥酸比色法及黄嘌呤氧化酶法测定血浆VIP、MDA、SOD水平，并进行比较。结果各组新生儿d1及d7血浆VIP、MDA、SOD组间比较差异均有统计学意义（Pa〈0．01）；HIE程度越重，VIP、MDA水平增高和SOD水平下降的幅度越大；中、重度HIE组d1血浆VIP、MDA水平显著高于d7（Pa〈0．05），d1血浆SOD水平显著低于d7（P。〈0．05）。结论1，HIE新生儿出生d1血浆VIP、MDA和SOD水平可作为窒息并脑损伤的早期诊断标志物。2．血浆VIP、MDA和SOD水平可反映窒息后脑损伤的严重程度。     

亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤自由基影响的研究

目的 研究亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后自由基的影响。方法 7日龄大鼠行左侧颈总动脉结扎后吸入8%氧气2h,制成缺氧缺血性脑损伤模型。动物随机分成五组：假手术组、缺氧缺血组、缺氧缺血后30min给予亚低温组、缺氧缺血后1h给予亚低温组、缺氧缺血后3h给予亚低温组。脑皮质细胞匀浆用于测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 缺氧缺血组MDA含量明显高于假手术组,而亚低温各组MDA含量均低于缺氧缺血组,而且亚低温应用越早者MDA含量减少越明显。结论 亚低温可以通过减少自由基的产生发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

3日龄未成熟大鼠慢性缺氧缺血脑损伤IGF-1及其受体的变化(英文)

目的：探讨胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)在3日龄未成熟大鼠慢性缺氧缺血脑损伤发病机制中的作用。方法：90只3日龄SD未成熟大鼠随机分为对照组（n=40）和慢性缺氧缺血（HI,n=50）组。对照组仅切开颈部皮肤,HI组结扎双侧颈总动脉造成新生大鼠慢性缺氧缺血脑损伤,采用组织切片苏木素－伊红染色和免疫组化等方法,观察未成熟大鼠脑损伤时少突胶质细胞营养因子IGF-1和受体的表达、脑组织病理变化和白质细胞凋亡。结果：3日龄未成熟大鼠慢性缺氧缺血脑损伤后IGF-1及其受体呈现动态变化。HI组在术后3～5 d（生后6~8 d） IGF-1表达阳性的细胞减少,IGF-1受体表达却有增高趋势,变化以胼胝体和脑室周围白质部位明显,术后7～14 d（生后10~17d）时逐渐恢复。同时脑白质出现液化疏松、脑室扩大等形态学病理变化,凋亡细胞计数在损伤后增多,以48 h最为显著。结论：提示IGF-1在3日龄未成熟大鼠慢性缺氧缺血脑损伤的发病机制中具有重要作用,为早产儿脑损伤的防治提供了实验依据。［中国当代儿科杂志,2005, 7(3):193-197］     

心脉隆对窒息新生鼠心肌缺氧诱导因子-1α的影响

目的：心脉隆是从昆虫类美洲大蠊中提取和制备的化合物,主要用于心血管疾病的治疗。该文研究心脉隆对窒息新生鼠心肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与血浆内皮素1（ET-1）的影响,探讨心脉隆对心肌缺氧缺血性损伤的保护机制。方法：新生7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=30)、窒息组(n=30)、心脉隆组(n=30)。每组再分6 h,24 h,72 h 3个时间点,每个时间点各10只,心脉隆组在进行窒息前5 min给予心脉隆注射液5 mg/kg腹腔注射。检测新生鼠心肌的HIF-1α,ET-1,心肌酶CK及心肌组织病理学。结果：窒息组4只鼠死亡,心脉隆组1只鼠死亡。窒息组心肌HIF-1α的表达与血浆ET-1水平于6 h升高,24 h达到高峰,72 h下降,均高于假手术组(P＜0.01);3个时间点均可见心肌缺血,24 h还可见细胞坏死;HIF-1α的表达与血浆ET-1水平呈正相关(r=0.876,P＜0.01)。与窒息组同时间点比较,心脉隆组心肌酶CK、血浆ET-1的水平和心肌HIF-1α的表达均显著减低(P＜0.01),且可见心肌缺血改善,未见细胞坏死。结论：窒息时心肌HIF-1α表达和血浆ET-1,CK水平升高;心脉隆可降低HIF-1α表达,降低血浆ET-1的水平,减轻心肌缺氧缺血性损伤。［中国当代儿科杂志,2009,11（8）：683-686］     

新生大鼠缺氧缺血后海马caspase-3 mRNA的表达及硫酸镁的神经保护机制研究

目的　探讨caspase 3mRNA在新生大鼠缺氧缺血后海马中的表达 ,研究硫酸镁对脑损伤可能的保护机制。方法　制作新生大鼠缺氧缺血模型 ,按治疗方式不同随机分为 :①正常对照组(n =4) ;②假手术组 (n =4) ;③缺氧缺血组 (n =4) ;④生理盐水对照组 (n =4) ;⑤硫酸镁预防组(n =4) ;⑥硫酸镁治疗组 (n =4)。预防组和治疗组分别在缺氧缺血前或后 0 5h腹腔注射 5 %硫酸镁5 0 0mg/kg。半定量RT PCR法测定缺氧缺血后 2 4h海马组织caspase 3mRNA的表达 ,比较两个硫酸镁干预组与对照组的差异。结果　正常对照组新生大鼠海马组织中caspase 3mRNA相对表达量为0 97± 0 46,缺氧缺血组海马组织中caspase 3mRNA表达量增高至 1 88± 0 3 6,与正常组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;硫酸镁预防组与治疗组表达量分别是 1 5 4± 0 49和 1 65± 0 48,与缺氧缺血组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,硫酸镁干预抑制了缺氧缺血后海马组织中caspase 3mRNA的表达。结论　新生大鼠缺氧缺血后 2 4hcaspase 3mRNA在海马中的表达明显增高 ,硫酸镁对缺氧缺血脑组织的保护作用可能与抑制海马caspase 3mRNA表达有关     

硫酸镁减轻新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

新生鼠发生缺氧缺血性脑损伤（HIBD）　后可出现神经细胞变性、坏死,还可诱发神经　细胞凋亡。采用原位末端标记技术（TUNEL　染色）可以检测发生凋亡的细胞核DNA片　段。已有资料报告在缺氧缺血性损伤后使用　硫酸镁可减轻大脑细胞损伤。本实验利用新　生鼠HIBD模型,观察硫酸镁预处理对新生　鼠神经细胞的保护作用。 材料和方法 　 实验对象为7日龄Wistar大鼠60只,体重12.5～17.0g,雌雄不限;新生鼠随机分为三组:正常对照组、缺氧缺血损伤组、硫酸镁     

川芎嗪对新生儿鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用

目的 研究川芎嗪对新生鼠缺氧缺血脑损伤（HIBD）的保护作用及其机制的探讨。方法 建立HIBD模型，采用ELISA方法检测新鲜心脏血中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的含量，采用氢清除法测定脑定皮质的血流量变化。结果 HIBD组NSE含量明显高于对照组（P＜0．01），而川芎嗪干预组明显低于模型组（P＜0．05）。HIBD组的非结构扎侧脑皮质血流量轻度降低，而结扎侧略有回升，川芎嗪干预组结扎侧与非结扎侧与非结扎侧脑皮质血流均有回升。结论 川芎嗪能降低NSE含量，增加脑皮质血流量，从而对新生鼠HIDBD具有保护作用。