内皮素－1对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

我们采用黄体细胞孵育的方法，观察了内皮素－１对离体黄体细胞孕酮生成的影响。发现内皮素－１能抑制黄体细胞孕酮的基础分泌及人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）刺激下的孕酮分泌。内皮素－１加入孵育的黄体细胞悬液１５分钟后，即发生明显地抑制孕酮分泌作用（Ｐ＜０．０１）。人内皮素－１的抗血清能反转内皮素－１的上述作用。实验结果提示，内皮素－１可能为一种卵巢内调节肽，它通过抑制黄体细胞的孕酮生成，参与黄体退化过程的调节     

cAMP介导内皮素－1对大鼠黄体细胞孕酮分泌的作用

本研究采用大鼠黄体细胞体外孵育技术，观察了缩血管肽内皮素－１（ＥＴ－１）对黄体细胞孕酮分泌的影响及其与细胞内信使ｃＡＭＰ的相互关系。结果表明，１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＥＴ－ｌ可显著抑制黄体细胞的基础孕酮分泌和ｈＣＧ诱导的孕酮分泌；外源性ｃＡＭＰ和腺苷酸环化酶激动剂Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ则可促进黄体细胞分泌孕酮；当ｃＡＭＰ或Ｆｏｎｓｋｏｌｉｎ与ＥＴ－１共同作用时，前者可完全反转ＥＴ－１对黄体细胞的抑制作用，孕酮分泌恢复到对照组水平。提示Ｅｌ－１可能是一种卵巢局部调节因子，通过抑制黄体细胞内的腺苷酸环化酶，减少ｃＡＭＰ的生成和释放，进而抑制黄体细胞的孕酮分泌。     

cAMP介导内皮素－1对大鼠黄体细胞孕酮分泌的作用

本研究采用大鼠黄体细胞体外孵育技术，观察了缩血管肽内皮素－１（ＥＴ－１）对黄体细胞孕酮分泌的影响及其与细胞内信使ｃＡＭＰ的相互关系。结果表明，１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＥＴ－ｌ可显著抑制黄体细胞的基础孕酮分泌和ｈＣＧ诱导的孕酮分泌；外源性ｃＡＭＰ和腺苷酸环化酶激动剂Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ则可促进黄体细胞分泌孕酮；当ｃＡＭＰ或Ｆｏｎｓｋｏｌｉｎ与ＥＴ－１共同作用时，前者可完全反转ＥＴ－１对黄体细胞的抑制作用，孕酮分泌恢复到对照组水平。提示Ｅｌ－１可能是一种卵巢局部调节因子，通过抑制黄体细胞内的腺苷酸环化酶，减少ｃＡＭＰ的生成和释放，进而抑制黄体细胞的孕酮分泌。     

四种合成人抑制素α亚基片段对大鼠黄体细胞孕酮分泌的影响及与？…

应用大鼠黄体细胞离体培养方法，观察４种人工合成人抑制素α亚基Ｎ末端片段，Ｐ＾７２、Ｐ＾３２、Ｐ＾３２－Ｔｙｒｔ Ｐ＾２９对基础孕酮及绒毛膜促性激素和卵泡刺激素（ＦＳＨ）致孕酮分泌作用的影响。结果表明：（１）４种α片段均显著抑制大鼠黄体细胞的基础孕酮分泌。除Ｐ＾２２无抑制作用外，其余３种片段不同程度地减弱ｈＣＧ和ＦＳＨ刺激的孕酮分泌。（２）４种α片段显著抑制Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ、ｄｂｃＡＭＰ及蛋白激酶     

四种合成人抑制素α亚基片段对大鼠黄体细胞孕酮分泌的影响及与蛋白激酶A系统的关系

应用大鼠黄体细胞离体培养方法，观察４种人工合成人抑制素α亚基Ｎ末端片段：Ｐ￣(２２)（７～２８）、Ｐ￣(３２)（１～３２）、Ｐ￣(３２)－Ｔｙｒ（１～３２－Ｔｙｒ）和Ｐ￣(２９)（３７～６５）对基础孕酮及绒毛膜促性腺激素（（ｈＣＧ）和卵泡刺激素（ＦＳＨ）致孕酮分泌作用的影响。结果表明：（１）４种α片段（１００ｎｇ）均显著抑制大鼠黄体细胞的基础孕酮分泌。除Ｐ￣(２２)无抑制作用外，其余３种片段不同程度地减弱ｈＣＧ和ＦＳＨ刺激的孕酮分泌。（２）４种α片段也显著抑制Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（１００ｎｍｏｌ／Ｌ）、ｄｂｃＡＭＰ（２０ｎｍｏｌ／Ｌ）及蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）（１０μｇ）刺激基础孕酮分泌效应。表明各α片段对ＰＫＡ系统从受体水平到ｃＡＭＰ环节，直到ＰＫＡ水平均有抑制作用，α片段抑制孕酮分泌与ＰＫＡ系统有关。     

c-myc对大鼠黄体细胞人绒毛膜促性腺激素诱导的孕酮和雌二醇生成的影响

应用离体细胞体外孵育法研究了反义ｃ ｍｙｃ寡脱氧核苷酸（反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ）对大鼠黄体细胞人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）诱导的孕酮（Ｐ）和雌二醇（Ｅ２）生成的影响及其与外源性ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋的关系。结果发现，反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２的生成。在浓度分别为１０和５μｍｏｌ／Ｌ时的抑制作用即具有显著意义（Ｐ＜０．０５）；而无义ｔａｔ寡脱氧核苷酸则无此作用。反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ对黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２产生的抑制作用能被加入１０－４ｍｏｌ／Ｌ二丁酰ｃＡＭＰ逆转，钙离子通道阻断剂维拉帕米对此种抑制作用具有协同效应。结果提示，ｃ ｍｙｃ癌基因参与黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２生成的调控。     

阿黑皮素原相关肽对大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响

采用体外孵育大鼠黄体细胞的方法,观察了β-EP,β-LPH,α-MSH 和 ACTH 等阿黑皮素原(POMC)相关肽对孕酮分泌的影响,结果表明:β-EP(10~(-6),10~7,10~(-6)mol/L)可明显促进黄体细胞基础孕酮分泌,呈剂量-效应依赖关系,孕酮含量分别由对照组36.56±8.63pmol/10~6细胞上升为52.90±18.31(P<0.01),73.86±18.21和80.37±9.86pmol/10~6细胞(P<0.01);β-EP(10~(-7)mol/L)还能加强hCG 致孕酮生成作用,孕酮含量由47.30±11.57上升为63.34±9.32pmol/10~6细胞(P<0.01);纳络酮(10~(-6)mol/L)可完全阻断β-EP 的作用。与β-EP 不同,β-LPH(10~(-6)mol/L)抑制基础和 hCG 诱导的孕酮分泌;α-MSH(10~(-6)mol/L)对基础孕酮分泌无明显影响,但能加强 hCG 致孕酮生成作用;ACTH 对大鼠黄体细胞孕酮分泌无明显影响。实验显示:某些 POMC 相关肽,尤其是β-EP 可能以旁分泌的方式参与黄体细胞孕酮分泌的调节。     

纤溶酶原激活及抑制因子在人蜕膜腺体与间质细胞中的生成及调节

为了探讨人早孕蜕膜腺体与间质细胞离体培养下释放活性纤蛋白溶酶原激活及抑制因子（ＰＡ，ＰＡＩ）的平衡关系与激素调节。应用琼脂糖纤蛋白铺盖及反向铺盖技术，测得腺体及间质细胞均仅释放尿激酶型ＰＡ（ＵＰＡ），而不释放组织型ＰＡ（ｔＰＡ），并同时生成Ⅰ型ＰＡ抑制因子（ＰＡＩ－１）。雌二醇（Ｅ２）及ＲＵ４８６刺激ｕＰＡ、抑制ＰＡＩ－１活性，孕酮（Ｐ）的作用则相反，提示Ｐ在人早孕蜕膜中的作用之一是使ＰＡ－ＰＡ１的动态平衡趋于纤溶活性受抑的安静状态，而ＲＵ４８６激活蜕膜纤溶过程，从而增强细胞外基质蛋白水解，可能是其抗早孕作用机理之一。     

白细胞介素-1β对离体大鼠黄体细胞孕酮分泌及钠-钾三磷酸腺苷酶活性的影响

为探讨白细胞介素 -1β(IL -1β)对黄体细胞甾体激素分泌的影响及其与黄体细胞膜钠 -钾三磷酸腺苷酶 (Na+ -K+ ATPase)活性变化的关系 ,本研究以经孕马血清促性腺激素 -人绒毛膜促性腺激素 (PMSG-h CG)处理的未成年雌性 Wistar大鼠为模型 ,制备了黄体细胞悬液。用放射免疫测定 (RIA)和定磷法分别测定了 IL -1β对离体大鼠孵育的黄体细胞孕酮 (P)分泌及黄体细胞膜 Na+ -K+ ATPase活性。结果表明 ,IL-1 β(1 ng/ ml)可显著抑制离体孵育的黄体细胞基础 P及 h CG诱导的 P分泌 ,并可使黄体细胞膜 Na+ -K+ATPase活性明显降低。 IL -1β引起的 P分泌减少和 Na+ -K+ ATPase活性降低之间呈显著正相关。提示 Na+ -K+ ATPase活性降低可能是 IL-1 β抑制 P分泌的因素之一     

c-ras与大鼠颗粒细胞和黄体细胞生成孕酮的关系

应用离体细胞培养 ,研究了反义 c-ras寡脱氧核苷酸 (反义 c-ras ODN)对人绒毛膜促性腺激素 (h CG)诱导的大鼠颗粒细胞和黄体细胞生成孕酮 (P)的影响及其与外源性 c AMP和 Ca2 +的关系。结果发现 ,2 0 μmol/ L 反义 c-ras ODN能显著抑制 h CG诱导颗粒细胞的 P生成量 (P<0 .0 5 ) ,而对黄体细胞的 P生成无明显影响 ;反义 c-ras ODN对h CG诱导的颗粒细胞生成 P的抑制作用能被加入 1 0 - 4mol/ L 二丁酰 c AMP所逆转 ,钙通道阻断剂维拉帕米对抑制作用具有协同效应。结果提示 ,c-ras癌基因参与 h CG诱导的颗粒细胞生成 P的调控 ,而对 h CG诱导的黄体细胞 P生成关系不大     

内皮素对大鼠睾丸间质细胞睾酮生成的影响

本研究采用大鼠睾丸间质细胞体外培养的技术 ,观察了内皮素 1对离体间质细胞睾酮分泌的影响。研究发现 ,10 -9mol/L的ET 1可显著抑制间质细胞睾酮的基础分泌 (P <0 .0 5 ) ,并且ET 1对人绒毛膜促性腺激素 (hCG)刺激睾丸间质细胞睾酮分泌也有抑制作用 ,其有效抑制浓度为 10 -10 mol/L(P <0 .0 5 )。本实验结果提示 ,ET 1呈剂量依赖性抑制睾丸间质细胞睾酮的基础分泌和hCG诱导的分泌 ,ET 1可能为睾丸内的一种局部调节多肽     

四种中药对大鼠黄体细胞分泌雌、孕激素的影响

目的探讨中药蜈蚣、紫草、莪术、水蛭的乙醇提取物对大鼠卵巢妊娠黄体细胞分泌孕酮(P)与雌二醇(E2)的影响。方法在大鼠妊娠第4天取卵巢,收集黄体细胞体外培养2 h后,分别加入3个浓度(0.01、0.1及1 mg/ml)的蜈蚣、紫草、莪术、水蛭乙醇提取物,乙醇的总浓度<5%;对照则代之以5%的乙醇生理盐水。在药物作用4 h后,收集部分上清,采用放射免疫法测定P与E2的含量,继续培养4 h,用MTT比色法反映活细胞数量。结果在四种中药作用下,各浓度的吸光度值均有增加。其中莪术、水蛭、蜈蚣均有增加黄体细胞分泌的趋势,尤以水蛭刺激黄体细胞分泌E2的作用最为显著,3个浓度与对照比较差异均有显著性(P<0.01,P<0.05,P<0.01),E2/P比值显著高于对照组(P<0.01,P<0.05,P<0.001);而紫草则有降低黄体细胞分泌E2的作用,随着浓度的降低,抑制作用逐渐增强(P>0.05,P<0.05,P<0.01)。结论提示莪术、水蛭和蜈蚣刺激黄体细胞分泌E2与P,增加E2/P比值,紫草则抑制黄体细胞分泌E2与P,降低E2/P比值,其中紫草与水蛭的作用较强,主要表现在对E2分泌的影响。     

瘦素、神经肽Y对离体人卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的　探讨瘦素、神经肽Y(NPY)对离体人卵巢颗粒细胞雌、孕激素生成的影响。　方法　将来自体外受精 胚胎移植的 2 5例离体人卵巢颗粒细胞纯化后 ,在不同浓度瘦素 (1、10、10 0 μg/L)、NPY(1× 10 -8、1× 10 -7、1× 10 -6mol/L)单独或与人绒毛膜促性腺激素 (hCG ,0、2 0IU/L)联合作用下体外培养 ,采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇 (E2 )、孕酮(P)的水平。　结果　 (1)无论单独或与hCG联合不同浓度瘦素组E2 、P水平均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;(2 )NPY浓度 1× 10 -7mol/L时 ,E2 水平显著低于空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,但与hCG联合组显著高于单独组 (P <0 .0 5 ) ;(3)NPY浓度 1× 10 -7mol/L、瘦素浓度 10 μg/L组 ,E2 水平明显高于相应浓度NPY单独作用组 (P <0 .0 5 )。　结论　 (1)瘦素不直接影响体外培养颗粒细胞E2 、P的分泌 ,可能通过影响其它因子的作用而间接调节卵巢功能 ;(2 )NPY单独作用时 ,对颗粒细胞E2 的分泌有一定抑制作用 ,但当hCG存在时作用消失 ,说明在正常月经周期中NPY对黄体的生成和维持可能无明显不利影响 ;(3)瘦素可能阻断NPY对颗粒细胞分泌E2 的抑制作用 ,表明二者可能对卵巢功能有相互协调作用。     

Effects of leptin and neuropeptide Y on function of human ovarian granulosa cells in vitro

Objective: To investigate the effects of leptin and neuropeptide Y on steroidogenesis of human ovarian granulosa cells in vitro. Methods: Human ovarian granulosa cells were isolated from follicular fluid obtained during oocyte retrieval of in vitro fertilization-embryo transfer program and cultured for 2 days with various concentration of leptin(1,10,100 ng/ml) or neuropeptide Y (1×10-6, 1×10-7, 1×10-8 mol/L) alone or both,or with the combination of human chorionic gonadotropin (hCG 0, 20 IU/L). The medium was collected for estradiol (E2) and progesterone (P) measurements. Results: (1)Whether hCG existed or not, the adding of leptin did not alter estradiol and progesterone production by human granulosa cells (P>0.05).(2) Only when the concentration of neuropeptide Y was at 1×10-7mol/L,estradiol level was lower than that in the control (P<0.05).(3) The levels of estradiol in neuropeptide Y (1×10-7mol/L) plus hCG group were significantly higher than those with neuropeptide Y alone(P<0.05). (4) In the absence of hCG, the levels of estradiol in neuropeptide Y (1×10-7mol/L)plus leptin (10 ng/ml) group were significantly higher than those with neuropeptide Y(1×10-7mol/L)alone(P<0.05).Conclusions: (1)Leptin alone produced no direct effect on secretion of E2 and P from granulosa cells in vitro.(2)Neuropeptide Y alone may inhibit the secretion of E2, but the inhibition would probably be blocked with the presentation of hCG.(3)Leptin probably blocked the inhibition of neuropeptide Y on E2 secretion, and this may indicate that there were some coordination between leptin and neuropeptid Y on the level of ovarian function.