成年猪胰岛分离和纯化的实验研究

采用经胰导管连续灌注胶原酶技术，从每个胰腺中获得平均４６９１００±２０８３００个胰岛（７６９３个胰岛／ｇ胰腺），纯化后平均１５２０００±１０９０００个胰岛／胰腺（２４８６个胰岛／ｇ胰腺）。平均回收率３２．４９％，纯度８０％。在培养第１、第３和第７天间，胰岛细胞对高糖和茶碱刺激有明显反应，胰岛素释放量，分别为低糖的１．３９～３．６７倍，（Ｐ＜０．０５），提示分离纯化后及培养期间的胰岛功能良好。胰岛形态学观察表明，双硫腙特异性的与胰岛Ｂ细胞胰岛素颗粒内的锌螯合使其着色，台盼兰染色证实胰岛活率在９０％以上。本文将分离纯化后及培养的经双硫腙染色的阳性细胞团进行电镜检查，证实为形态结构完整的胰岛。     

成年猪胰岛的分离与纯化

目的　研究成年猪胰岛的分离与纯化方法。方法　胰岛的分离采用导管内连续灌注胶原酶消化法 ,纯化采用Nycodenz连续密度梯度离心。 结果　消化后每个胰腺平均可获得 (3970 0 0±185 96 3)个胰岛或 (986 0± 3 0 43)个胰岛 /克胰腺组织 ,纯化后为 (1480 0 0± 890 0 0 )个胰岛 /胰腺或(3 75 0± 493)个胰岛 /克胰腺组织 ,纯度 >95 %。体外培养示胰岛对糖刺激反应良好 ;免疫组织化学检查证实胰岛细胞存活。结论　经本法获得的胰岛具有较高的纯度及良好的功能 ,可为临床提供可靠的移植物来源。     

胰腺干细胞的研究进展

糖尿病目前治疗以注射胰岛素和药物为主,不仅给病人带来很大痛苦,对社会和家庭也是沉重负担.自1998年Thomson等首次报道体外成功培养人胚胎干细胞以来,随着胰岛干细胞研究的深入,胰岛干细胞将为胰岛移植提供新的材料来源.研究表明,已有多种途径可得到分泌胰岛素的细胞,将这些胰岛素分泌细胞移植入小鼠糖尿病模型已取得较理想的效果,可使小鼠的血糖水平恢复正常.     

三种消化酶在大鼠胰岛分离纯化中的效果比较

目的　分别用 3种酶消化大鼠胰腺 ,比较分离纯化后胰岛细胞的收获量、纯度、活性和功能。方法　将 2 1只SD大鼠按应用释放酶、胶原酶P、胶原酶V消化胰腺随机均分为A、B、C组。结果　A组的胰岛细胞收获量比B组或C组多 ( 93 0± 78比 692± 68或 70 6± 70 ,P <0 .0 5 ) ;纯度比B组或C组高 ( 93 .8± 2 .3比 88.4± 2 .0或 89.2± 2 .1,P <0 .0 5 ) ;成活率比B组或C组高( 97.2± 1.4比 92 .2± 1.9或 92 .9± 2 .1,P <0 .0 5 ) ;A组培养后胰岛素分泌量和葡萄糖刺激时胰岛素分泌量比B组或C组多 (P <0 .0 5 ) ;A组逆转糖尿病大鼠的高血糖状态时间比B组或C组长( 7.5± 1.3比 5 .8± 1.6或 6.3± 1.2 ,P <0 .0 5 )。结论　与胶原酶P和胶原酶V比较 ,释放酶消化大鼠胰腺可提高胰岛细胞的收获量、纯度、活性和功能。     

胰岛和胰岛干细胞的微创移植

目前 ,I型糖尿病的常规治疗方法是应用外源性胰岛素注射控制血糖。胰岛素注射不能完全控制血糖和远期并发症 ,因为常有血糖波动和低血糖发生 ,而且患者难免遭受注射所带来的不便和痛苦。全胰腺移植始于 2 0世纪 6 0年代初期 ,到 2 0 0 0年全球实施了近 1 0 0 0例手术[1 ] ,虽然患者移植后 1年生存率和移植功能存活率逐渐提高 ,但胰腺单独移植存活率低 ,只有与肾或其它脏器联合移植才能获得较高的成活率[2 ,3 ] 。尽管胰腺移植是一种有效的治疗方法 ,但要求条件高 ,损伤大 ,费用高 ,而且只有少数单位能够承担此项工作 ,难以普及。另外 ,还受…     

微囊化新生猪胰岛样细胞团异种移植

本实验研究新生猪与大鼠产的异种移植。结果显示，新生猪胰岛样细胞团可纠正糖尿病大鼠的高血糖状态；海灌酸钠－多聚赖氨酸微囊能有效保护移植物的存活，平均存活时间为４个月。而微囊作为一种新型防排斥手段，将应用于广泛的领域。     

胰岛细胞瘤的诊断和治疗：附33例报告

目的：探讨胰岛细胞瘤的诊断和治疗方法。
方法：回顾性分析33例胰岛细胞瘤的临床资料。
结果：诊断采用CT,MRI,SAOG,术前B超,IRI/G和术中B超（IOUS）,敏感性分别为64.71%,50%,42.86%,15.38%,94.74%和100%。术前确诊率54.55%,手术探查的阳性率为90.91%;治疗采用肿瘤局部摘除术24例,远段胰腺切除术9例。治愈率为90.91%,并发症发生率33.33%,病死率3.03%。
结论：术中触诊联合IOUS基本上可定位诊断;根据胰岛细胞瘤的大小、部位、数目采取适宜的手术方式是获得良好疗效的关键。     

成人胰岛细胞的分离

目的　探讨成人胰岛细胞的分离及胰腺冷缺血时间与胰岛细胞活率的关系。方法　采取胰、肾联合切取 ,经腹主动脉插管 ,用自制的灌注器以高渗枸橼酸盐嘌呤溶液 (HC A液 ) 15 0 0～2 0 0 0ml进行原位灌洗。将肾与胰腺、十二肠、脾分离 ,采用胶原酶P消化胰腺 ,分离并纯化胰岛细胞 ,以双硫腙及丫腚橙染色 ,测定所得到的胰岛细胞的纯度及活率。结果　胰腺的冷缺血时间为 2 .5～ 8h ,温缺血时间为 0～ 3min。胰岛收获量为 (2 .38± 0 .6 7)× 10 3 IEQ/g ,纯化后胰岛细胞的活率为 19%～ 83% ,冷保存指数 (或输注指数 )为 9.8～ 6 6 .4。胰岛细胞的活率与胰腺的冷缺血时间呈负相关 ,冷保存指数和胰岛细胞活率呈负相关。结论　以高渗枸橼酸盐嘌呤溶液灌洗、胶原酶P消化胰腺所得到的胰岛细胞活率高 ,但胰腺的冷缺血时间不宜超过 5h。     

胰岛的可替代资源--干细胞

2000年加拿大的Edmonton组在同种胰岛移植中取得了可喜的成绩,重新点燃了人们对胰岛移植治疗糖尿病的希望。他们应用移植更多的胰岛(10000IEQ/kg)和不含糖皮质激素的新型免疫抑制剂的方法,使100%(7例)的患者获得了停用胰岛素并维持良好血糖超过1年的效果[1]。然而,供者胰腺的短     

微囊化新生猪胰岛细胞体外培养的研究

目的 探讨海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠生物微胶囊（ＡＰＡ微胶囊）微囊化新生猪胰岛细胞作为异种移值供体来源的可能。方法 利用微囊技术包膜新生猪胰岛细胞本外培养，放免疫法检测培养液中胰岛素含量，比较微囊化及未微囊化新生猪胰岛素分泌能力和胰岛素刺激释放试验、组织学检查。结果 二者差异无显著意义，均具有良好的生物活性。结论 微囊包膜后胰岛细胞的生物活性和分泌功能良好，微囊包膜新生猪胰岛细胞可能是临床异种胰     

胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ对体外培养人胎胰岛细胞的增殖作用

本文研究了胰岛素样生长因子－Ⅰ与ＩＧＦ－Ⅱ对组织培养中的人胎胰岛细胞增殖与功能的作用。结果表明ＩＧＦ－Ⅰ与ＩＧＦ－Ⅰ均可明显促进人胎胰岛细胞ＤＮＡ合成与Ｂ细胞复并能促进人胎胰Ｂ细胞的胰岛素合成与分泌。     

胰岛移植的现状与未来

阻碍胰岛移植的关键因素仍是：供体数量的不足，自体、同种异体间及异种间的免疫排斥、随时间而呈现的移植物功能的退化。基因工程技术、异种移植以及胰岛干细胞移植等将可能有效地解决供体数量的不足和功能的减退。本文仅就胰岛移植在上述领域的现状及发展作一简要的综述。     

大豆胰蛋白酶抑制剂对大鼠胰岛分离纯化的影响

目的探讨大豆胰蛋白酶抑制剂（STI）在大鼠胰岛分离纯化中对胰岛产量及功能的影响。方法按胶原酶中是否加入STI将大鼠分为实验组和对照组，实验组在胶原酶消化液中按2．0mg／ml加入STI，对照组不添加STI。2组均运用胶原酶原位灌注大鼠胰腺的方法来分离胰岛，使用Ficoll-400用非连续梯度离心法纯化胰岛，将纯化前、后获得的胰岛进行计数，并对纯化后的胰岛进行形态、功能检查。同时进行大鼠同种异体胰岛移植观察其体内功能。结果实验组和对照组在消化后纯化前所得胰岛数量无明显差别[（624&#177;38．2）IEQVS（586&#177;37．7）IEQ，P〉0．053；在纯化后实验组与对照组所得胰岛数量[（408&#177;28．3）IEQVS（189&#177;27．1）IEQ，P〈0．05]和纯度[（93&#177;2．4）％VS（75&#177;2．1）％，P〈0．05；差异有统计学意义。实验组与对照组最终所得胰岛的体外功能差异无统计学意义（P〉0．05），体内功能实验结果差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论使用在胶原酶中加入STI的消化液原位灌注大鼠胰腺，可以明显提高大鼠胰岛的最终产量和纯度，但对胰岛的功能无明显影响。