黄芩素通过下调Twist蛋白水平抑制A549细胞迁移的机理研究

目的:探讨黄芩素对A549细胞迁移的影响及相关分子机制。方法:采用细胞划痕实验和Transwell小室法来检测黄芩素对A549细胞迁移能力的影响;并采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)研究黄芩素对A549细胞中Twist蛋白表达的影响。结果:低浓度的黄芩素处理A549细胞后,可明显抑制肺癌细胞的迁移速度,黄芩素能有效抑制Twist蛋白的表达。结论:黄芩素可抑制A549细胞的迁移,其分子机制可能与下调Twist蛋白表达有关。     

汉黄芩素对肺癌肿瘤细胞生长和转移抑制作用机制的研究

目的:探讨明胶酶(MMP-2)、表皮生长因子受体酪氨酸蛋白激酶(EGFR-TPK)和氨肽酶N(APN)抑制剂汉黄芩素对肺癌细胞的生长和转移抑制机制。方法:本文采用酶抑制学方法,研究了汉黄芩素(0~100μmol/L)对MMP-2、APN和EGFR-TPK的抑制作用,并进一步的分析了汉黄芩素(0~100μmol/L)对肺癌A549的生长、细胞转移的抑制作用和A549细胞中TIMP-2和TGF-β1表达水平的影响,酶标仪吸光度法检测细胞凋亡蛋白Caspase 3活性。结果:汉黄芩素能够抑制MMP-2、APN和EGFR-TPK的活性(汉黄芩素半抑制浓度IC50分别为7.26±0.33、7.11±0.43和5.32±0.22μmol/L)和诱导A549的凋亡(汉黄芩素半抑制浓度IC50为49.13±4.90μmol/L);随着汉黄芩素作用浓度(1、10、50、100μmol/L)的增加,TGF-β1表达均呈现降低趋势,TIMP-2的表达呈增加趋势,且A549细胞穿过人工基底膜的能力下降而凋亡蛋白Caspase 3活性增加。结论:汉黄芩素通过诱导TIMP-2表达增强和TGF-β1表达的降低,对MMP-2、APN和EGFR-TPK的活性产生抑制作用,对Caspase 3活性产生激活作用,最终对肺癌A549细胞的转移和凋亡起到重要作用。     

三氧化二砷联合非诺贝特对人肺癌A549细胞抑制和凋亡的实验研究

目的 探讨三氧化二砷联用过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特对体外培养的人肺癌A549细胞增值和凋亡的影响及可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测三氧化二砷联用非诺贝特对肺癌A549细胞的生长抑制情况.采用Hoechest染色观察三氧化二砷联用非诺贝特对肺癌A549细胞的生长抑制作用,采用光学显微镜观察A549细胞形态学的变化.以流式细胞术检测联合用药对A549细胞的凋亡诱导作用.用RT - PCR法检测联合用药对A549细胞中caspase -3及survivin mRNA的表达变化情况.结果 非诺贝特对肺癌A549细胞有抑制作用,呈现时间剂量关系.三氧化二砷联用非诺贝特的用药组作用肺癌A549细胞48 h后比单用药组的细胞抑制作用要强(P＜0.05).RT - PCR结果提示联合用药组较单用药组上调caspase -3 mRNA的表达,下调survivin mRNA的表达.结论 过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特可以抑制肺癌A549细胞增值,与三氧化二砷联用可以增强对肺癌A549细胞杀伤作用,其机制可能与上调caspase -3的表达和下调survivin的表达相关.     

半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素蛋白表达的影响

目的:研究半枝莲提取物对肺癌A549细胞生存素(survivin)蛋白表达的影响及其作用机制。方法:体外培养(10%胎牛血清、1640培养基)肺癌A549细胞,MTT法观察半枝莲提取物对A549细胞的抑制作用,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学(SP)法检测半枝莲提取物对A549细胞survivin蛋白表达的影响。结果:MTT法结果显示,半枝莲提取物质量浓度5～40 mg·L-1对A549细胞的抑制率呈浓度依赖性(P<0.01)。半枝莲提取物18.86 mg·L-1剂量组凋亡指数为(38.40±7.41)%,对照组为(6.22±0.45)%,两者有显著性差异(P<0.01)。半枝莲提取物组survivin蛋白阳性细胞数明显低于对照组(P<0.01)。结论:半枝莲提取物能明显抑制肺癌A549细胞生长,其机制可能与下调survivin表达有关。     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

扶正法与祛邪法对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:研究扶正法和祛邪法对肺癌A549细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:常规培养A549细胞,按实验分组干预,MTT法观察A549细胞增殖情况,流式细胞仪观察A549细胞凋亡情况,western blot法检测凋亡相关因子BCL-2、Caspase-3和Survivin的表达情况。结果:芪贞固本方、芩莲正积方对A549细胞增殖均有一定程度的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,均能显著提高A549细胞早期凋亡率,上调Caspase-3的表达,下调BCL-2、Survivin蛋白的表达,与对照组相比有显著差异性(P0.05)。结论:扶正法和祛邪法用于肺癌治疗可诱导肺癌细胞凋亡,其机制可能为上调Caspase-3的表达,下调BCL-2、Survivin蛋白的表达。     

黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响

目的:观察黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响。方法:采用2mg/L、4mg/L、8mg/L黄芩苷和100ng/mLTRAIL单用或联用处理肺癌细胞株A549。利用MTT法检测各组细胞增殖,倒置荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法及Western blot法检测Survivin、X连锁凋亡抑制蛋白基因(XIAP)、死亡受体4(DR4)及死亡受体(DR5)mRNA及蛋白相对表达量。结果:相比较于对照组,黄芩苷和TRAIL单用或联用均能呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P0.05),而黄芩苷和TRAIL联用比单用时细胞抑制率及凋亡率更高(P0.05)。相比较于对照组,黄芩苷组和TRAIL组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。与黄芩苷组或TRAIL组比较,联用组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。结论:黄芩苷联合TRAIL可协同抑制肺癌细胞株A549增殖,并促进凋亡,其作用机制可能与两者联用能增加死亡受体DR5的表达,进而抑制Survivin和XIAP蛋白表达有关。     

山茱萸多糖对肺癌细胞的凋亡作用及Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨山茱萸多糖对人肺癌A549细胞凋亡的作用及凋亡相关基因表达的影响.方法 采用MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳法、免疫组化SP法检测山茱萸多糖对A549细胞凋亡作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 山茱萸多糖对A549细胞抑制作用明显,抑制程度与质量浓度呈正相关;DNA琼脂糖凝胶电泳出现相差约200 bp的DNA梯形条带,免疫组化SP法染色显示Bcl-2的表达下降,Bax的表达上升.结论 山茱萸多糖对人肺癌A549细胞的增殖有较强抑制作用,能诱导细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达有关.     

百合总皂苷对肺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移的作用及其初步机制研究

该文探讨百合总皂苷(TSLL)对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的潜在作用及其可能机制。采用CCK-8法、克隆形成实验及Ed U染色检测TSLL对A549细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染法和Hoechst 33342染色法荧光显微镜观察TSLL对细胞凋亡形态的影响,Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测TSLL对细胞迁移、侵袭的影响,Western blot法检测TSLL对肿瘤细胞内相关蛋白的表达变化。结果显示,TSLL干预肺癌A549细胞24,48或72 h均可显著抑制细胞生长,其IC50分别约为229,173,71 mg·L~(-1); TSLL可显著降低A549细胞克隆形成率; TSLL可浓度依赖性地降低A549细胞DNA合成率; TSLL可明显诱导A549细胞凋亡; TSLL可减少A549细胞迁移行为; TSLL可减少A549细胞侵袭人工基底膜;TSLL可显著下调肺癌A549细胞内PCNA蛋白的表达水平以及Bcl-2/Bax蛋白表达水平比值,同时促进procaspase 3的激活,此外TSLL对EMT相关标志蛋白E-cadherin,vimentin的表达均无明显的影响。以上结果表明TSLL对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭具有抑制作用,并且对细胞凋亡具有诱导作用。TSLL可通过下调PCNA的表达抑制肺癌细胞DNA合成,从而抑制细胞增殖。TSLL对肺癌细胞凋亡的诱导作用与其对Bcl-2,Bax蛋白的表达调控有关。此外,TSLL抗肺癌细胞侵袭转移作用与EMT无明显的关联性。     

芦荟素抑制A549肺癌细胞增殖、凋亡和周期的作用机制研究北大核心CSCD

目的:探究芦荟素对非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC) A549细胞增殖、凋亡和周期的作用及机制。方法:用不同浓度芦荟素处理A549细胞,MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期; Western blot检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及相关通路标记蛋白的表达。结果:芦荟素浓度达到50μM及以上时,A549细胞活性低于80%,因此,选择5、10、20μM三个浓度进行后续实验。芦荟素(10、20μM)能显著促进A549细胞凋亡,还能诱导A549细胞G2/M期阻滞;芦荟素可显著抑制细胞增殖标记蛋白Ki67和细胞周期蛋白Cyclin B的表达,浓度为10μM和20μM时能明显升高细胞凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达水平。此外,芦荟素还能明显抑制p38 MAPK通路蛋白p-Cdc25B和p-Hsp27的表达,降低p-p38/p38的比值。结论:芦荟素可抑制NSCLC A549细胞增殖,诱导细胞凋亡和周期阻滞,作用机制可能与抑制p38 MAPK通路激活有关。