三角叶黄连ISSR反应体系的建立与优化

目的 针对三角叶黄连ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系,为进一步研究三角叶黄连的种质资源遗传多样性奠定基础.方法 通过筛选引物并设定影响三角叶黄连ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测其不同反应体系的扩增效果,分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立三角叶黄连ISSR-PCR稳定可靠的反应体系.结果 建立了可用于三角叶黄连ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系:25 μLPCR反应体系中,内含10×PCR Buffer 2.5 μL,1.5 mmol/L Mg~(2+),200 μmol/L dNTP,0.3 μmol/L 引物,40 ng模板,1.0 U Taq DNA聚合酶.扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环:94℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性60 s,72℃延伸90 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存.结论 所建立的三角叶黄连ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好等特点,可以较好地应用于三角叶黄连的种质资源遗传多样性及居群鉴别的研究.     

主产区远志种质资源遗传多样性的ISSR分析

目的对主产区远志种质资源进行遗传多样性研究。方法利用ISSR分子标记分析来自于主产区陕西、山西和河北3个省的10个居群的远志种质资源的遗传多样性。结果 12条ISSR引物扩增出276条带,其中有271条为多态性条带,聚类分析结果表明,地理来源相同的野生居群和栽培居群先行聚合。野生和栽培远志居群的遗传变异主要发生在居群间,栽培居群的遗传多样性略低于野生居群,二者均不符合距离隔离模型。结论聚类分析结果与栽培居群多为就地取材的事实相符。造成远志这种遗传变异型式的原因在于其本身的繁殖生物学特性以及当前的粗放栽培模式。     

蒲公英总DNA的提取及其RAPD-PCR反应条件的优化

目的 建立并优化蒲公英样品总DNA提取方法及其RAPD-PCR反应体系.方法 采用改良的CTAB法提取基因组DNA,对蒲公英RAPD-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选.结果 建立了多态性高、重复性好、可用于蒲公英RAPD分析的最佳反应体系.25 μl反应体系中含有:1×Taq Mix buffer,50 ng DNA模板,0.4 μmol/L 引物,1.5 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTPs,1.25U Taq酶.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,38℃复性1 min,72℃延伸2 min,共40个循环;72℃延伸10 min,反应结束后,4℃保存.结论 这一优化体系的建立为今后利用RAPD标记技术进行蒲公英鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.     

青天葵总DNA的提取与随机扩增多态性DNA反应条件的建立

目的 建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA(RAPD)反应.方法 采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品,通过正交设计和均匀设计,改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA.结果 使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA,药材叶片含杂质较多,但都能用于RAPD.反应体系为:缓冲液2.0 μ1,0.5 μl dNTP(各2.5 mmol·L-1),0.8 μl Mg2+(25 mmol·L-1),0.5 μl引物(20 pmol·μl-1),0.2 μl Taq酶(5U·μ1-1),1 μl DNA(50 ng),1μl BSA(20 mg·ml-1),加双倍蒸馏水至20 μl.扩增程序为:94 ℃预变性3 min;94 ℃变性30 s,40 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,40个循环;72℃延伸5 min.结论 建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系.     

不同产地猫豆遗传多样性的ISSR分析

目的:从DNA分子水平分析不同产地猫豆的遗传多样性,探索其相互之间的亲缘关系。方法:采用简单重复序列区间(ISSR)分子标记技术对11份不同产地猫豆进行聚类分析,ISSR-聚合酶链式反应(PCR)扩增程序为94℃预变性4min,94℃变性45s,48~54℃退火1min,72℃延伸90s,40个循环,72℃延伸7min,10℃保存。在单因素试验基础上,通过L16(45)正交试验考察ISSR-PCR的5个主要因素(Mg2+,引物,dNTPs,模板DNA及Taq聚合酶)。运用Ntsys-pc软件和Popgene软件对11份样品进行分析。结果:ISSR-PCR反应最佳体系为模板DNA20ng,0.3μmol·L-1引物,0.15mmol·L-1的dNTPs,2.4mmol·L-1MgCl2,1UTaqDNA聚合酶(5U·μL-1),PCR缓冲液2μL,加入灭菌水至20μL。从40条ISSR引物中筛选出10条扩增条带清晰且重复性良好的引物,共扩增出97个条带,其中多态性条带25条,多态性位点比率25.8%。11份猫豆资源间的遗传相似系数0.866~0.9691,聚类分为3个大类群。结论:猫豆遗传差异与地理分布有一定关系,但整体遗传变异小,遗传稳定性强。     

党参ISSR-PCR反应体系的建立与优化

目的：建立党参的ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR标记技术进行党参鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序。方法：采用试剂盒法提取党参基因组DNA为模板,通过单因素实验分析了ISSR-PCR反应体系中MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、模板DNA用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响。结果：建立了重复性好,分辨率高的ISSR-PCR反应体系,即在25μL反应体系中,含有10×PCR Buffer缓冲液2.5 μL,MgCl2 2.0 mmol·L-1,dNTPs 0.5 mmol·L-1,引物0.4 μmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.0 U,模板DNA为30 ng;扩增程序为：94 ℃预变性5 min,然后94 ℃变性30 s,51.7 ℃退火1 min,72 ℃延伸1.5 min,共计35个循环,循环结束后在72 ℃延伸7 min,4 ℃保存。结论：建立了适用于党参的ISSR-PCR反应体系,为应用ISSR技术鉴定党参种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。     

地龙ISSR-PCR反应体系的建立与优化

目的 建立和优化地龙ISSR-PCR反应体系.方法 以地龙药材为实验试材,采用异丙醇沉淀法提取了地龙总DNA模板,对地龙ISSR-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选.结果 建立了标记位点清晰、稳定、重复性好,可用于地龙ISSR分析的最佳反应体系,50 μl体系中含有:1×Taq酶配套缓冲液,DNA模板50 ng,2.5U Taq DNA聚合酶,2 mmol/L MgCl2,0.8 μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTPs.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;72℃延伸5 min,反应结束后,4℃保存.结论 这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行地龙类药用动物鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.     

野生白及SRAP-PCR反应体系的优化

采用浓度梯度设计法研究适合白及的SRAP-PCR反应体系。对影响SRAP-PCR的DNA模板、引物、dNTP、Mg2+、Taq酶、退火温度等6个因素进行优化。最终确定白及的SRAP-PCR优化体系:在20μL体系中,DNA模板30 ng、Mg2+2.5 mmol/L、dNTPs 0.25μmol/L、引物20μmol/L、Taq酶2.0U,扩增体系为:94℃预变性5 min;5个循环的94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min;之后35个循环:94℃变性1 min,48℃退火1 min,72℃延伸1 min;72℃最后延伸5 min。该体系的建立为野生白及种质资源遗传多样性的进一步相关遗传分析奠定了基础。     

黄花蒿SRAP-PCR反应体系的建立与优化

目的用序列相关扩增多态性(SRAP)这一新的分子标记技术建立稳定可重复的黄花蒿Artemisia annua的SRAP最佳反应体系。方法以黄花蒿DNA为模板,分析了SRAP反应体系中的一些重要参数对PCR扩增的影响。结果建立了稳定可重复的SRAP反应体系;25μL反应体系中,模板DNA为30～105ng,MgCl2为2.0mmol/L,dNTP为0.25mmol/L,Taq酶为1.0U,引物为2.0μmol/L;扩增程序:94℃预变性3min,94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min,5个循环;94℃变性1min,50℃复性1min,72℃延伸1min,35个循环,72℃延伸7min。结论本研究建立的黄花蒿SRAP体系重复性好,稳定性强。     

何首乌ISSR—PCR反应体系的建立与优化

目的 建立和优化ISSR-PCR反应体系.方法 通过单因素实验研究ISSR反应体系中主要成分(模板、Taq DNA聚合酶、Mg2 、引物、dNTPs)以及退火温度对扩增结果的影响.结果 建立了适合何首乌ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在25μl反应体系中,内含1×Taq酶配套缓冲液、100ng模板、1.5 U Taq DNA聚合酶、1.5 mmol/L Mg2 、0.6μmol/L引物、0.2 mmol/L dNTPs.扩增程序为94℃预变性5 min;然后是94℃变性45s,(据不同引物的退火温度)复性1 min,72℃延伸1.5 min,共35个循环;72℃延伸7 min,4℃保存.结论 这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行何首乌鉴定及种质资源遗传多样性分析提供了一个标准化程序.     

远志的化学成分研究(Ⅰ)

目的研究中药远志Polygalatenuifolia根中的化学成分.方法采用硅胶、Sephadex LH-20及ODS柱层析进行分离纯化,通过理化性质和光谱分析鉴定结构.结果从中分离得到了5个化合物,分别鉴定为tenuifolisideB(Ⅰ),3,4,5-三甲氧基肉桂酸甲酯(Ⅱ),polygalaxanthone Ⅲ(Ⅲ),7-O-methylmangiferin(Ⅳ)和lancerin(Ⅴ).结论化合物Ⅱ和Ⅳ为首次从远志属植物中分离得到,化合物Ⅴ为首次从远志植物中分离得到.     

河北太行山区远志最佳播种期的确定

目的为太行山区远志播种期的确定提供科学依据。方法本试验设置六个播种期,并比较苗期情况以及根性状和远志酸含量。结果播种时期对远志的生长影响较大。结论远志的最佳播种期为夏末秋初的雨季。     

远志中的三萜皂苷和寡糖多酯类成分(英文)

目的:研究远志的抗老年痴呆活性成分。方法:采用活性追踪的方法,利用硅胶柱层析、反相中压色谱、制备高效液相等多种色谱技术分离单体化合物;并利用多种光谱技术确定化合物的结构。结果:从远志的根中分离得到了5个三萜皂苷类化合物Onjisaponin Wg(1),Fg(2),Ng(3),R(4)和O(5)及6个寡糖多酯类化合物tenuifolioses A(6),B(7),C(8),I(9),K(10),和G(11)。结论:化合物1为新化合物,化合物2-5首次报道其核磁数据;化合物6和7显示了PC12细胞的保护作用;化合物7和8可增强大鼠齿状回突触的传递作用,表明具有改善大鼠学习记忆的活性。     

远志皂苷H对离体平滑肌与心脏的作用

 目的:研究一种新的远志皂苷H对平滑肌和心肌的药理作用及其机制。方法:制备离体兔回肠,胸主动脉条,Langen-dorf心脏,豚鼠气管条和动情期未孕大鼠子宫标本,记录给药3min后的张力变化。结果:H对上述4种平滑肌均具兴奋作用,19和76μmol·L^-1分别使其张力提高64%和167%,30%和118%,20%和50%,以及100%和180%;对心脏则呈依剂量的抑制作用,19,38和76μmol·L^-1分别使心肌收缩力降低20%,23%和34%,使心率减少17%,20%和35%,但不影响冠脉流量。H对子宫的兴奋作用不受苯海拉明影响,但可被吲哚美辛部分抑制。结论:H对平滑肌具兴奋作用,对心肌具抑制作用,其中对子宫的作用可能部分地与前列腺素合成酶有关。     

Effects of Polygala tenuifolia root extract on proliferation of neural stem cells in the hippocampal CA1 region

Neurogenesis persists in the adult mammalian brain and can be a target for modulation for therapeutic purposes. This study investigated the effect of a Polygala tenuifolia root extract on the proliferation of a stem cell population in the rat hippocampus. The root extract of P. tenuifolia (2 mg/kg/day, 14 times intraperitoneal injections) increased the incorporation of bromodeoxyuridine (BrdU) into cells in the hippocampal CA1 region. This activity was enriched in the saponin-containing fraction. The majority of cells labelled with BrdU were immunoreactive to nestin or Tuj1 and the percentages of nestin/BrdU- and Tuj1/BrdU-double positive cells were increased by the P. tenuifolia root extract, suggesting that the P. tenuifolia root extract promotes the proliferation of neural stem cells. In addition, this extract promoted the neurite outgrowth of rat neuronal precursor cells, HiB5. These activities of P. tenuifolia root extract may contribute to the therapeutic benefits of herbal medicines containing P. tenuifolia root for the treatment of patients with insomnia, neurosis and dementia.     

中药远志改善记忆障碍研究进展

远志是临床上最为常用的益志中草药之一,可单用于轻度记忆障碍患者的饮食治疗。近20年来,国内外学者在分子、细胞、组织与整体4个药理学层次及提取物、部位与成分3个化学水平,对远志改善学习记忆障碍的药效作用、物质基础及其作用机制进行了系统而深入的探讨,初步揭示出远志改善学习记忆的临床应用,源于其多成分、多途径、多机制的整合效应。     

正交设计研究中药黄花远志的提取工艺

目的 采用正交设计法选择黄花远志的最佳提取方案.方法 用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和水进行单因素实验,选择最佳提取溶剂.采用L_(16)(4~5)正交实验没计对黄花远志进行回流提取.以提取浸膏干粉质量为评价指标分析回流次数、回流时间、料液比、溶剂浓度和回流温度5个因素对提取率的影响.结果 最佳提取工艺为95%乙醇,料液比1:5,75℃下回流提取3次,1.5 h/次,提取率为11.89%.结论 该提取方法操作简便,结果可靠.