普罗布考干预后小鼠血清对巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的 观察普罗布考处理后小鼠血清及不同浓度普罗布考体外干预对巨噬细胞胆固醇流出的影响,探讨普罗布考调节细胞胆固醇流出的可能机制.方法 16只健康雄性C57 BL/6J小鼠随机分为两组,分别给予普通饮食或添加普罗布考饲料饲养4周后,收集血清,酶法测定血清脂质;以乙酰化低密度脂蛋白和3H-胆固醇标记巨噬细胞,并以不同浓度普罗布考干预细胞,然后以上述血清介导,测定细胞胆固醇流出;收集干预后的细胞,提取mRNA及膜蛋白,分别检测ATP结合盒转运子A1和G1、B族Ⅰ型清道夫受体的表达.结果 普罗布考干预4周后小鼠血清较对照组介导更多的胆固醇从巨噬细胞流出,普罗布考呈剂量依赖性地增加巨噬细胞ATP结合盒转运子G1基因和蛋白的表达,并加速血清诱导的胆固醇流出率,而对B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1基因和蛋白表达无明显影响.结论 普罗布考干预后的小鼠血清显著促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能是通过增加ATP结合盒转运子G1的表达,而与细胞膜B族Ⅰ型清道夫受体、ATP结合盒转运子A1的表达无关.     

巨噬细胞内胆固醇平衡机制研究进展

巨噬细胞内脂质含量增多形成泡沫细胞是动脉粥样硬化早期病变的特征变化之一.巨噬细胞可以通过CD36和清道夫受体A-Ⅰ等膜受体摄入胆固醇,同时通过清道夫受体B-Ⅰ、ABC家族等逆转运膜受体将胆固醇逆转运出细胞,从而维持细胞内胆固醇平衡,阻止其在细胞内堆积形成泡沫细胞.本文对巨噬细胞内与胆固醇平衡机制做一综述.     

薯蓣皂苷元对THP-1巨噬细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响

目的　探讨薯蓣皂苷元（Dgn）对巨噬细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达及其介导胆固醇流出的影响。方法　用Dgn或结合ABCA1小干扰RNA（siRNA）处理THP-1源性巨噬细胞24　h后,Western　blot检测ABCA1蛋白水平,HPLC检测胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）及胆固醇酯（CE）含量,液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出,油红O染色观察胞内脂滴情况。结果　Dgn呈浓度依赖性上调巨噬细胞ABCA1的表达,促进胞内胆固醇流出,降低胞内TC、FC和CE含量,抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。而ABCA1　siRNA与Dgn共处理细胞后,明显抑制Dgn促胆固醇流出作用,胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成明显加剧。结论　Dgn通过促进巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇流出,抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。     

葛花提取物通过激活PPARγ上调ABCA1的表达而抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。 [方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。 [结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P＜0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P＜0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P＜0.01),胆固醇流出水平降低(P＜0.01)。 [结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。     

β受体介导肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI与ABCA1基因表达的影响

目的 探讨肾上腺素对THP-1源巨噬细胞ATP结合盒转运体A1与清道夫受体AI mRNA表达影响的β受体介导作用.方法 分别用β1受体拮抗剂美托洛尔(10 nmol/L～100 μmol/L)和β2受体拮抗剂丁氧胺(2.5mol/L～25 μmol/L)预处理细胞1 h,再加入终浓度为1 μmol/L肾上腺素继续孵育24 h,检测受试基因的表达.结果 1 μmol/L的肾上腺素上调清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体A1 mRNA水平,与各自对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).而终浓度为1 μmol/L肾上腺素分别与不同浓度的β肾上腺素能受体拮抗剂美托洛尔和丁氧胺联合作用时,随着美托洛尔和丁氧胺浓度加大,各组ATP结合盒转运体A1 mRNA的表达升高而清道夫受体AI mRNA的表达随浓度升高呈下降趋势,与1 μmol/L肾上腺素组比较差异有统计学意义(P<0.05),且丁氧胺对肾上腺素的拮抗作用在2.5 μmol/L达到平台期.结论 肾上腺素可能通过β1和β2肾上腺素能受体介导从而上调THP-1源性巨噬细胞清道夫受体AI mRNA水平和下调ATP结合盒转运体AI mBNA水平.     

载脂蛋白AⅠ与三磷酸腺苷结合盒转运体A1相互作用的机理探讨

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察载脂蛋白AⅠ对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响 ,以便探讨载脂蛋白AⅠ对动脉粥样硬化发生发展的影响。用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量 ,运用逆转录—多聚酶链反应和Western印迹分别检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA与三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白的表达 ,采用流式细胞术检测细胞平均三磷酸腺苷结合盒转运体A1荧光强度。实验显示载脂蛋白AⅠ引起THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少 ,而三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平、细胞平均三磷酸腺苷结合盒转运体A1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加 ,但三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂 (leupeptin和ALLN)增加三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平 ,而其它蛋白酶抑制剂 (pepstatinA、aprotinin及phosphoramiddon)不增加三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平 ,蛋白体抑制剂 (lactacytin)和溶酶体抑制剂 (NH4 C1)也不影响三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平。提示巯基蛋白酶可快速分解THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷     

荷叶碱对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇流出的影响及机制

目的观察荷叶碱(NF)对巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响及机制。方法体外培养人源性THP-1单核细胞,使用佛波酯(160 nmol/L)对其进行诱导,促进其分化为巨噬细胞,并在50 mg/L氧化低密度脂蛋白处理下,使其荷脂形成泡沫细胞,进行常规体外培养细胞。高效液相色谱检测泡沫细胞内脂质成分,液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出的水平;实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1表达情况。PPARγ抑制剂GW9662和LXRα抑制剂GGPP分别处理泡沫细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测荷叶碱对泡沫细胞PPARγ、LXRα和ABCA1表达的影响。结果荷叶碱显著减少泡沫细胞内的脂质成分,增加ABCA1表达与胆固醇流出水平。PPARγ抑制剂GW9662处理细胞后,显著降低了PPARγ、LXRα和ABCA1的表达。泡沫细胞在LXRα抑制剂GGPP处理下,也明显降低了LXRα和ABCA1表达。结论荷叶碱通过PPARγ/LXRα途径上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。     

脂多糖和甲基磺酰苯丙氨酰氯甲酮对巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出和ATP结合盒转运体A1表达的影响

目的观察脂多糖和核因子κB抑制削甲基磺酰苯丙氨酰氯甲（tosyl-phenylalanine chloromethyl-ketone，TPCK）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出和ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达的影响，以探讨脂多糖是否通过Toll样受体4-核因子κB途径影响ABCA1的表达。方法THP-1细胞经佛波酯诱导转化为巨噬细胞，再加入ox-LDL培养使其转化为泡沫细胞，     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在泡沫细胞胆固醇流出中的作用

以THB-1细胞源泡沫细胞为研究对象，观察三磷酸腺苷结合盒转运体A1在单核-巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇流出中的作用。实验采用流式细胞术检测的方法，来判断三磷酸腺苷结合盒转运体A1激动荆22(R)-羟基胆固醇和抑制剂4，4-二异硫氰酸二丙乙烯2，2-二磺酸(4，4’-diisothiocyanostilbene-2，2’-disulfonic acid,DIDS)对THP-1细胞源泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响。实验结果发现，22(R)-羟基胆固醇作用THP-l细胞源泡沫细胞不同时间后，能明显增加细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达，流式细胞术检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的平均荧光强度从0h的31．1增加到24h的45．2；而DIDS作用THP-1细胞源泡沫细胞不同时间后，能明显降低细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达，平均荧光强度从0h的29．4降低到24h的10．4。胆固醇流出实验发现，22(R)-羟基胆固醇作用THP-1细胞源泡沫细胞不同时问后，能明显增加细胞胆固醇流出：而DIDS作用THP-1细胞源泡沫细胞不同时间后，能明显降低细胞胆固醇流出。这些结果表明，三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1细胞源泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用。     

细胞胆固醇流出通路研究进展

动脉粥样硬化的形成是动脉壁内泡沫细胞逐渐沉积的慢性炎症过程。循环中的氧化脂质特别是氧化型低密度脂蛋白胆固醇,以及一些体液因子、细胞因子均可引起单核巨噬细胞表面的清道夫受体表达增加,单核巨噬细胞吞噬大量含胆固醇的脂质,胆固醇流出减少,形成泡沫细胞,并在内皮下聚集,从而促进动脉粥样硬化的发生。