维甲酸对人肺腺癌细胞系分化作用的实验研究

为阐明癌症发生的内在机制和探索肿瘤分化治疗与基因治疗的合适途径，作者应用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到（１）细胞体外生长速度减慢，堆叠性生长消失，细胞出出现空泡，细胞逐渐衰老和死亡；（２）双层软琼脂中细胞集落形成爱到明显抑制；（３）细胞ＤＮＡ合成能力降低；（４）细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；（５）细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶     

维甲酸诱导人肺腺细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸诱导人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２，观察到：（１）细胞体外生长速度减慢、堆叠性长消失、泡浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡。（２）双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；（３）细胞ＤＮＡ合成能力降低；（４）细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征动力学改变；（５）细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶基因早期被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－     

维甲酸诱导人肺腺癌细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＲＡ）诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到：①细胞体外生长速度减慢、堆叠性生长消失、胞浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡；②双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；③细胞ＤＮＡ合成能力降低；④细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；⑤细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶（ＴＧａｓｅ）基因早期即被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２分化相关基因表达进而启动细胞分化。     

9—顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察9－顺维甲酸（9-cis-RA)处理前后人肺腺癌细胞株PG和A549维甲酸受体（RARs)及维甲类X受体（RXRs）不同时相mRNA转录水平的表达。方法：用RT－PCRT相对定量检测人肺腺癌细胞株PG和A549加9-cis-RA前后RARs和RXRs mRNA转录水平。结果：应用9-cis-RA后，两细胞株的RARα和RARβ mRNA转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体RARα和RARβ可能与9-cis-RA对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

9-顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察９－顺维甲酸（９－ｃｉｓ－ＲＡ）处理前后人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９维甲酸受体（ＲＡＲｓ）及维甲类Ｘ受体　（ＲＸＲｓ）不同时相ｍＲＮＡ转录水平的表达。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ相对定量检测人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９加９－ｃｉｓ－ＲＡ前后ＲＡＲｓ和ＲＸＲｓ　ｍＲＮＡ转录水平。结果：应用９－ｃｉｓ－ＲＡ后，两细胞株的ＲＡＲα和ＲＡＲβ－ｍＲＮＡ转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体ＲＡＲα和ＲＡＲβ可能与９－ｃｉｓ－ＲＡ对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

维甲酸诱导分化小鼠淋巴瘤SACIIB2克隆细胞的作…

研究了ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞的促分化作用，结果表明，受ＲＡ处理后，ＳＡＣ－ＩＩＢ２克隆细胞形态的改变及一长制制不因培养注保去除ＲＡ而立即消失，瘤细胞酸性非特异性酯酶染色阳性明显升高，细胞内漂呤核苷磷酸化酶活性明显升高，而腺苷脱氨酶活性明显降低，末端脱氧核苷酰转移酶的表达有所减弱，而ＲＡ处理前后瘤细胞乳酸脱氢酶同工酶谱型无明显改变，提示ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞有一定程度的诱导分化作用，对Ｒ     

人肺腺癌细胞单羧酸转运泵基因的克隆及基因序列分析

目的 克隆人肺腺癌细胞单羧酸转运泵基因编码序列并对此序列作同源性分析。方法 通过ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆人肺腺癌Ａ５４９细胞单羧酸转运泵基因ｄＤＮＡ编码序列,应用ＰＣＲ、四色荧光、双脱氧终止法测序;通过Ｇｅｅｂａｎｋ数据库应用分析软件对克隆基因序列进行同源性分析。结果 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆出人肺癌细胞的单羧酸转运泵基因;肺癌民人心肌细胞单羧酸转运泵基因第一亚型的ｃＤＮＡ编码序列具有主度同源性。结论     

热诱导人肺腺癌细胞凋亡的实验研究

我们以体外人肺腺癌细胞系SPC．AI为研究对象,观察温热对肺癌细胞的杀伤效应,并从细胞形态学和生化学两方面,着重探讨细胞凋亡在热杀伤体外Spe－AI细胞过程中的作用,期望进一步丰富和发展肺癌热疗的生物学机制,为肺癌热疗的临床应用提供新的理论依据。一、材料与方法1细胞培养：人肺腺癌细胞系Spe．AI引自中国科学院上海细胞库。常规用含质量分数为10％的灭活小牛血清的RPMI－lop培养液（pH7．2－74,Gibeo,USA）,单层培养于对℃、含体积分数为0．历的C02的培养箱中。以质量分数为0．石坑胰蛋白酶（D矗。。,1：250）和质量…     

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因ndr2哺乳动物真核表达载体（pIND-ndr2)，转染肺腺癌细胞GLC－82，观察ndr2基因表达，为进一步研究ndr2的生物学功能打下基础。方法 以RT－PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌GLC－82细胞ndr2的表达高低。PCR方法扩增ndr2，以BamHI EcoRI双酶切连接入pUC19载体中，测序正确后，插入到蜕皮素诱导的真核表达载体pIND中。连有ndr2基因的载体（pIND-ndr2)用指质体方法转染到培养的肺腺癌细胞GLC－82中。经G418和zeocin双抗生素筛选后，挑取单克隆进行培养，用蜕皮素诱导ndr2表达，用RT－PCR，western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株。结果 PCR的方法扩增获得大小约1200bp的片段，连接入预先插入HA－tag的pUC19载体的ndr2基因经HindⅢ EcoRI酶切后，构建到真核表达载体pIND中，酶切鉴定后证明连接片段正确。通过双载体转染和双抗生素筛选后，培养的细胞经诱导后检测到实验组ndr2的高表达，而对照组和未诱导的实验组ndr2表达均较低。结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌GLC－82细胞，建立了ndr2的可诱导表达的细胞系。     

人肺腺癌细胞A549转导HSV1—TK基因体内外表达研究

目的：观察Ａ５４９细胞转导ＴＫ基因在体外和体内的表达。方法：将已构建的 转录病毒表达载体ＰＬＸＳＮ－ＴＫ用电转化法转化Ａ５４９细胞，原位杂交检测ＴＫｍＲＮＡ在Ａ５４９－ＴＫ和由它接种裸鼠形成肿瘤组织中的表达。斑点杂交检测外源基因在细胞中整合，并体外观察Ａ５４９－ＴＫ对ＧＣＶ的敏感性。结果：原发杂交表明Ａ５４９－ＴＫ细胞及其形成肿瘤组织ＴＫｍＲＮＡ表达阳性，对照细胞无表达，斑占杂交证明Ａ５４９－ＴＫ     

人肺腺癌细胞系维甲酸特异性cDNA消减文库的建立和鉴定

人肺腺癌细胞系维甲酸特异性ｃＤＮＡ消减文库的建立和鉴定黎伯铨张雪艳蔡岩王秀琴毛宝龄吴采用诱导分化与ｃＤＮＡ文库消减杂交（ｃＤＮＡｌｉ－ｂｒａｒｙｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）相结合的策略，建立了人肺腺癌细胞系全反式维甲酸（ＲＡ）...     

全反式维甲酸诱导分化治疗晚期胃腺癌的临床疗效观察

晚期胃腺癌多数失去手术、化疗及放疗的机会,诱导分化治疗为这类患者开辟了全新的治疗途径.1993年2月～1997年5月我们对不能手术、放疗及化疗的晚期胃腺癌26例,用全反式维甲酸进行诱导分化,取得一定的疗效,现报告如下.     

小鼠肺腺癌细胞C-erbB-2基因片段TA克隆载体的构建与鉴定

目的:选择C-erbB-2(neu)基因中编码两个HLA-A2限制性CTL抗原肽表位p106-114,p369-377的基因片段,构建克隆载体pGM-neu1(包含p106-114片段)和pGM-neu2(包含p369-377片段).方法:用免疫组化方法检测小鼠Lewis肺腺癌细胞中C-erbB-2的表达,然后采用RT-PCR技术,从小鼠Lewis肺腺癌细胞总RNA中扩增编码neu1(包含p106-114片段)、neu2(包含p369-377片段)的基因片段,通过连接反应构建重组克隆载体,测序鉴定.结果:免疫组化染色检测C-erbB-2的表达,发现小鼠Lewis肺腺癌细胞有明显深棕色,表现出较强阳性,阳性信号位于细胞膜.RT-PCR扩增产物neu1、neu2基因片段大小与理论预期相符.重组克隆载体经DNA序列测定,结果与GeneBank中小鼠C-erbB-2的基因序列一致.结论:C-erbB-2在小鼠Lewis肺腺癌细胞中有较高表达,成功构建了克隆载体pGM-neu1和pGM-neu2.     

p73基因在肺腺癌组织中的表达

目的：p73基因在肺腺癌与癌旁正常组织中表达情况及突变的研究。方法：采用竞争性定量RT－PCR和PCR－SSCP方法检测62例肺腺癌及其癌旁非癌组织中p73基因突变情况。结果：（1）通过定量PCR分析，肺腺癌组织中p73的表达量与正常对照组表达量存在显差异（P＜0．01）。（2）在21例中高分化标本中检出9例呈中高表达，在41例低分化标本中检出32例呈中高表达，两之间存在显差异（P＜0．01）；（3）p73基因表达程度在29例Ⅰ-Ⅱ期标本中检出14例呈中高表达，33例Ⅲ-Ⅳ期标本中检出18例呈中高表达，两之间无显差异（P＞0．05）。（4）PCR－SSCP未检测出基因突变。结论：p73基因mRNA的表达可能与肺腺癌发生，发展和分化程度有关，与临床分期无关。     

维甲酸诱导的促分化基因对人食管癌细胞生长的调节作用

抑癌基因是当前肿瘤分子生物学研究的热点。主要从两方面入手:(1)分离鉴定新的抑癌基因;(2)将分离所得的抑癌基因通过转基因技术引入癌细胞乃至体内以达到用基因治疗手段治疗癌症的目的。本文应用经维甲酸(RA)处理食管癌细胞EC8712前后的cDNA文库并经递减杂交筛选出来的一种促分化基     

鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的: 研究鬼臼素衍生物CN-2对人肺腺癌细胞A549的凋亡诱导作用,并对其分子机制进行初步探讨. 方法: 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Fas及caspase3蛋白表达水平. 结果: CN-2对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖的抑制作用,24, 48, 72 h IC50分别为108.20, 41.28, 20.67 mg/L,电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;DNA电泳可见明显的梯状条带;细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现S/G2期阻滞;CN-2能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05);Fas蛋白表达水平未见明显变化. 结论: CN-2通过诱导A549细胞发生S/G2期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2表达及阻滞细胞周期有关.     

维甲酸诱导分化小鼠淋巴瘤SACIIB_2克隆细胞的作用和机理

研究了ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞的促分化作用。结果表明，受ＲＡ处理后，ＳＡＣ－ＩＩＢ２克隆细胞形态的改变及生长抑制不因培养液中去除ＲＡ而立即消失，瘤细胞酸性非特异性酯酶（ＡＮＡＥ）染色阳性率明显升高，细胞内嘌呤核苷磷酸化酶（ＰＮＰ）活性明显升高，而腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）活性明显降低，末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ）的表达有所减弱，而ＲＡ处理前后瘤细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶谱型无明显改变，提示ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞有一定程度的诱导分化作用。对ＲＡ处理前后ＳＡＣＩＩＢ２，细胞３－ｆｏｓ基因表达情况也作了初步观察和分析。     

人肺癌细胞NHE-1基因部分正调控序列的克隆

目的 克隆人肺癌细胞Na∧ /H∧ 交换泵-1（NHE-1）基因上游正调控序列部分,为进一步将该片段导入肺癌细胞株,竞争性结合转录因子,达到抑制细胞内NHE-1基因的表达奠定基础。方法 采用PCR技术从人肺癌A549细胞基因组中扩增长约170bp的NHE-1基因调控序列中起正调控作用的片段。在上、下游引物的5′-端带上BanHI和EcoRI酶切位点。然后将该片段连接到pUC18载体上,最后对产生的重组子进行酶切、PCR和测序鉴定。结果 经酶切及PCR鉴定,所克隆的目的片段大约为180bp,而NDA测序证实克隆并插入到载体中的片段为目的的片段,长度为168bp,与报道的序列比较缺失2个t。结论 本实验已成功地克隆了人肺癌细胞NHE-1基因调控序列中正调控序列片段。     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的 :探讨干扰素α(IFN α)对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法 :用不同质量浓度IFN α(2 5 μg/L ,75 μg/L ,10 0 μg/L)处理人肺腺癌A54 9细胞 ,记录细胞数目 ,进行甲基绿 派洛宁染色 ,测定软琼脂集落形成率。结果 :IFN α能明显抑制A54 9细胞的增殖 ,药物组与对照组之间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,药物组与对照组比较增殖型细胞减少 ,分化型细胞数增加 ,双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制 ,对照组集落普遍比药物组集落大 ,且单个集落中细胞数目多 (P <0 0 5 )。结论 :IFN α对A54 9细胞具有增殖抑制和诱导分化作用     

CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达

目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、WesternBlot、RT—PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80％以上的癌巢细胞CUGBPl基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性（t=100．01,P＜0．001）。95％以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性（t=407．53,P＜0．001）。结论CUGBPl基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBPl基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。