人颈椎间盘退变与细胞凋亡及基质金属蛋白酶11的表达

背景：前期研究发现基质金属蛋白酶11基因在人退变颈、腰椎间盘组织中明显上调。目的：观察人退变颈椎间盘髓核组织中基质金属蛋白酶11的表达与细胞凋亡的关系。方法：纳入30个经MRI确认的退变颈椎间盘髓核组织和20个因颈椎创伤治疗获得的正常颈椎间盘髓核组织。结果与结论：苏木精-伊红染色显示退变的颈椎间盘髓核组织中髓核细胞较正常髓核组织明显减少（P〈0.01）,而凋亡细胞较正常髓核组织明显增多（P〈0.01）。免疫组化染色显示退变的颈椎间盘髓核组织中基质金属蛋白酶11的表达明显高于正常髓核组织（P〈0.01）,且基质金属蛋白酶11表达与TUNEL染色检测到的细胞凋亡正相关（r=0.44,P〈0.05）。说明高表达的基质金属蛋白酶11不仅可直接破坏细胞外基质尚可诱导髓核细胞凋亡,在椎间盘退变的过程中发挥重要作用。     

人颈椎间盘退变与细胞凋亡及基质金属蛋白酶11的表达

背景:前期研究发现基质金属蛋白酶11基因在人退变颈、腰椎间盘组织中明显上调.目的:观察人退变颈椎间盘髓核组织中基质金属蛋白酶11的表达与细胞凋亡的关系.方法:纳入30个经MRI确认的退变颈椎间盘髓核组织和20个因颈椎创伤治疗获得的正常颈椎间盘髓核组织.结果与结论:苏木精-伊红染色显示退变的颈椎间盘髓核组织中髓核细胞较正常髓核组织明显减少(P < 0.01),而凋亡细胞较正常髓核组织明显增多(P < 0.01).免疫组化染色显示退变的颈椎间盘髓核组织中基质金属蛋白酶11的表达明显高于正常髓核组织(P < 0.01),且基质金属蛋白酶11表达与TUNEL染色检测到的细胞凋亡正相关(r=0.44,P < 0.05).说明高表达的基质金属蛋白酶11不仅可直接破坏细胞外基质尚可诱导髓核细胞凋亡,在椎间盘退变的过程中发挥重要作用.     

急性缺血性脑卒中小鼠模型脑组织中miR-21 表达对炎症反应和细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的 研究急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke, AIS）小鼠模型脑组织中miR-21 表达对炎症反应和细胞凋亡的影响,并探讨其相关分子机制。方法 选取C57/BL6 小鼠30 只随机均分为假手术组、短暂局灶性大脑中动脉闭塞（tran-sient middle cerebral artery occlusion,tMCAO）模型组（利用线栓法构建短暂局灶性大脑中动脉闭塞小鼠模型）及miR-21 agomir 激动剂预处理组（tMCAO 术后侧脑室注射miR-21 agomir 激动剂）。RT-PCR 法检测小鼠脑组织中miR-21 表达水平;改良神经严重程度评分（modified neurological severityscore,mNSS）评估小鼠神经功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法检测小鼠脑梗死体积;酶联免疫吸附法检测炎症因子（TGF-β1,TNF-α,IL-18 和IL-10）水平变化;原位末端标记（terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediatednick end labeling,Tunel）法观察小鼠神经细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测TLR4/NF-κB/NLRP3 通路相关蛋白及凋亡蛋白（Bcl-2/Bax）表达情况。结果 假手术组﹑ tMCAO 模型组和miR-21 agomir 组小鼠脑组织中miR-21 表达水平分别为0.83±0.17,0.50±0.11 和1.55±0.32,组间差异有统计学意义（F=43.805,P<0.05）。假手术组小鼠神经功能mNSS 评分均为0 分,tMCAO 组mNSS 评分明显高于miR-21 agomir 组（11.30±3.42 vs 5.61±1.73）,差异有统计学意义（t=12.784,P<0.05）。假手术组小鼠脑组织未出现梗死现象,tMCAO 组脑梗死体积（62.72%±5.30%）高于miR-21 agomir 组（38.22%±3.31%）,差异有统计学意义（t=31.309,P<0.05）。与tMCAO 组比较,miR-21 过表达明显降低促炎因子TNF-α 和IL-18 水平,升高抗炎因子TGF-β1 和IL-10 水平,差异均有统计学意义（t=3.785 ～ 9.693,均P<0.05）。假手术组脑组织皮层细胞凋亡数约为9.40±5.21 个,明显低于 tMCAO 组的75.52±12.81 个,差异有统计学意义（t=38.552,P<0.05）;miR-21 agomir 组细胞凋亡数约为42.41±9.62 个,低于tMCAO 组,差异有统计学意义（t=19.174,P<0.05）。与tMCAO 组比较,miR-21 过表达组小鼠脑组织中TLR4, NF-κB,p-NF-κB 和NLRP3 蛋白表达降低,Bcl-2/Bax 表达升高,差异均有统计学意义（t=2.314 ～ 3.098,均P ＜ 0.05）。结论 miR-21 在急性缺血性脑卒中后小鼠脑组织中表达明显下降,其过表达可以调节脑缺血后促炎因子和抗炎因子之间的平衡,改善皮层细胞凋亡,可能是通过调控TLR4/NF-κB/NLRP3 通路发挥脑损伤保护作用。     

脉冲电磁场对人退变髓核细胞A2A腺苷受体的影响

目的 观察脉冲电磁场对人退变髓核细胞A2A腺苷受体及白细胞介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。 方法 取人退变髓核细胞进行体外培养,取生长良好的二代髓核细胞给予脉冲电磁场干预（磁场强度0.8 mT,频率50 Hz,脉宽150 μs,曝磁时间30 min,共曝磁6次）。采用蛋白免疫印迹法（WB）及RT-PCR法观察髓核细胞A2A腺苷受体表达变化,采用ELISA法检测髓核细胞炎症因子IL-1β、TNF-α表达变化。另外本研究还分别采用A2A腺苷受体拮抗剂和激动剂处理人退变髓核细胞,再采用ELISA法检测脉冲电磁场对人退变髓核细胞IL-1β、TNF-α表达的影响。 结果 人退变髓核细胞经脉冲电磁场处理后,发现A2A腺苷受体表达水平明显增强（P<0.05）,同时IL-1β、TNF-α表达水平明显降低（P<0.05）。人退变髓核细胞经A2A腺苷受体拮抗剂处理后,发现能逆转脉冲电磁场对IL-1β、TNF-α的抑表达作用;人退变髓核细胞经A2A腺苷受体激动剂处理后,发现能增强脉冲电磁场对IL-1β、TNF-α的抑表达作用。 结论 脉冲电磁场干预能明显抑制人退变髓核细胞炎症因子IL-1β、TNF-α表达,并且该抑制作用可能与上调A2A腺苷受体表达有关。     

miR-146 调控TLR4/NF-κB 通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的 探究miR-146 通过调控Toll 样受体4（TLR4）/ 核因子-κB（NF-κB）减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰（premature ovarian failure,,POF ）的机制。方法 野生小鼠实验:60 只SPF 级C57BL/6 小鼠随机分为对照组（n=30）和POF 组（n=30）。POF 组建立卵巢早衰模型,造模后15 天qPCR 检测2 组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40 只C57BL/6 小鼠和20 只miR-146 敲除小鼠分为三组:对照组（n=20）、野生型POF组（n=20）和miR-146 敲除POF 组（n=20）,野生型POF 组和miR-146 敲除POF 组建立POF 模型,建模后15 天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA 检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB, 肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平;Western blot 检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X 蛋白（Bax）,B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl2）和TLR4 信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果 野生鼠实验表明与对照组相比,POF 组小鼠卵泡中miR-146 表达水平下调（0.51±0.14 vs 1.52±0.21）,差异具有统计学意义（t=7.338,P<0.01）;基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF 组和miR-146 敲除POF组原始卵泡（9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11）、初级卵泡（6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12）、次级卵泡（5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34）均降低,闭锁卵泡（10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64）升高,差异具有统计学意义（F=7.787, 8.214, 9.726, 7.811, 均P<0.01）。与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织TLR4（68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml）,NF-κB（74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml）,TNF-α（72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml）和IL-6（69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml）分泌显著升高,差异均有统计学意义（F=6.281, 7.264, 8.724, 6.817, 均P <0.01）;与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织Bax 蛋白表达水平降低（1.18±0.19. 0.61±0.14 vs1.81±0.21）,Bcl2 蛋白表达升高（0.59±0.05, 0.91±0.05 vs 0.58±0.02）,TLR4（1.10±0.12, 0.41±0.04 vs 1.13±0.11）和NF-κB（0.81±0.02, 0.31±0.06 vs 0.87±0.27）降低,差异均有显著性统计学意义（F=7.235, 6.714, 7.612 ,7.737, 均P<0.01）。结论 miR-146 具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB 信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。     

程序性死亡分子5在退变腰椎间盘中的表达

背景:细胞凋亡在腰椎间盘退变中起重要作用.程序性死亡分子5是一个促细胞凋亡的蛋白,在骨关节炎的软骨细胞中表达增高,但是至今未见在退变椎间盘中表达的报道.目的:观察程序性死亡分子5在正常、突出和脱出腰椎间盘髓核细胞中的表达规律,分析其在腰椎问盘退变中的作用.方法:用SP免疫组织化学方法、免疫荧光方法检测程序性死亡分子5在2例正常、23例突出和17例脱出腰椎间盘髓核细胞中的表达,用脱氧核苷酸转移酶末端标记法和透射电镜检测髓核细胞凋亡情况;用天狼星红染色观察髓核组织细胞外基质Ⅰ,Ⅱ型胶原纤维的变化.结果与结论:脱出组髓核细胞表达程序性死亡分子5的阳性率高于突出组(P＜0.05),脱出组髓核细胞脱氧核苷酸转移酶末端标记阳性率高于突出组(P＜0.05).荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察结果显示程序性死亡分子5表达定位于退变椎间盘的髓核细胞的细胞核;用透射电镜检测到凋亡的髓核细胞:天狼星红染色结果显示,随着年龄增长,髓核中Ⅱ型胶原纤维减少,Ⅰ型胶原纤维增多.结果提示退变椎间盘髓核细胞表达程序性死亡分子5上调,细胞凋亡增加,程序性死亡分子5介导的细胞凋亡在椎间盘退变中起到重要作用.     

呼吸道合胞病毒感染患儿外周血NDR1和miR-146a表达水平及其临床意义

目　的　探讨丝苏氨酸蛋白激酶 1(Nuclear Dbf2 p-related kinase 1, NDR1)和微小核糖核酸（micro RNA, miR）146a在呼吸道合胞病毒（ Respiratory syncytial virus,RSV）感染患儿外周血清中的表达情况及临床意义。方法　收集 2019年 7月～ 2020年 5月西北大学附属医院（西安市第三医院）检验科、西安市儿童医院就诊的 77例 RSV感染患儿作为研究对象。按照病情严重程度分为重症组 36例,轻症组 41例。同时选取 53例同期来医院体检的健康儿童为对照组。采用实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）法检测外周血清中 miR-146a表达水平;酶联免疫吸附法（ ELISA）检测 NDR1水平;Pearson法分析 NDR1与 miR-146a表达的相关性及二者与相关炎性因子表达的相关性。受试者工作特征曲线（ ROC）评估血清 NDR1和 miR-146a水平对 RSV感染严重程度的诊断价值。结果　与对照组相比, RSV感染患儿外周血中 NDR1水平（ 9.95±2.38 pg/L vs 6.46±1.12 pg/L）下调, miR-146a表达水平（ 1.03±0.17 vs 2.12±0.43）上调,差异具有统计学意义（ tmiR-146a=17.519,tNDR1=11.204,均 P＜ 0.05）。RSV感染重症组、轻症组及对照组中 hs-CRP,IL-4, IL-5,IL-6,IL-2和 IFN-γ比较差异均有统计学意义（ F=67.825,564.775,256.06,202.992,77.579,320.470,均 P＜ 0.05）。 RSV感染患儿血清 NDR1水平与 IL-2,IFN-γ表达均呈正相关（ r=0.473,0.620,均 P＜ 0.05）,与 hs-CRP,IL-4, IL-5,IL-6水平呈负相关（ r=-0.259,-0.559,-0.422,-0.505,均 P＜ 0.05）; miR-146a与 hs-CRP,IL-4,IL-5,IL-6水平均呈正相关（ r=0.381,0.636,0.421,0.570,均 P＜ 0.05）,与 IL-2,IFN-γ水平呈负相关（ r=-0.646,-0.744,均 P＜ 0.05）;RSV感染患儿外周血清中 NDR1与 miR-146a表达水平呈负相关（ r=-0.225,P＜ 0.05）;ROC结果显示,血清 NDR1,miR-146a水平预测重症 RSV感染患儿的曲线下面积（ AUC）分别为 0.911（95%CI:0.823～ 0.964）, 0.741（95%CI:0.628～ 0.834）,敏感度分别为 82.93%,68.29%,特异度分别为 88.89%,75.00%,二者联合预测重症 RSV感染患儿的 AUC为 0.925（95%CI:0.842～ 0.973）,敏感度和特异度分别为 90.24%和 83.33%。结论　NDR1在 RSV感染患儿外周血清中呈低表达,miR-146a呈高表达,二者可作为评估患儿病情发展的潜在指标。     

miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖抑制及克隆形成的机制研究

目的　检测骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达，探究其对骨肉瘤（ osteosarcoma，OS）细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法　选取 2018年 1月～ 2020年 12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科 30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本，采用实时荧光定量 PCR实验（ qRT-PCR）法检测组织中 miR-146b-5p表达水平；通过介导转染 miR-146b-5p mimics和 miR-146b-5p ASO分别过表达和敲低 miR-146b-5p表达，探究其对骨肉瘤细胞增殖及克隆形成的影响。通过生物学信息数据库预测 miR-146b-5p的潜在靶基因，荧光素酶实验验证两者结合关系，分析 miR-146b5p对靶基因的调控作用。分析靶基因在骨肉瘤中的表达特征及与 miR-146b-5p的相关性，通过细胞增殖实验验证两者的调控作用，以其探究在骨肉瘤中发挥功能的潜在分子机制。结果　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达（ 4.096±1.237）显著低于邻近正常组织（ 5.895±0.834），差异有统计学意义（ t=6.605，P＜ 0.001）。miR-146b-5p过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力（ t=13.233～ 34.599，均 P＜ 0.01）。miR-146b-5p过表达组克隆形成数目（ 48.912±2.032）较对照组（160.834±9.031）明显降低，差异有统计学意义（ t=20.942，P＜ 0.001）。DUSP16是 miR-146b-5p的潜在靶基因， miR-146b-5p负向调控双特异性磷酸酶（ dual speci.city phosphatase 16, DUSP16）表达。骨肉瘤组织中 DUSP16表达（5.683±0.457）较邻近正常组织（ 4.665±0.531）显著升高，差异有统计学意义（ t=7.959，P＜ 0.001），与 miR-146b5p表达呈负相关（ r=-0.667，P<0.05）。共转染过表达 DUSP16逆转了 miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。 miR-146b-5p过表达组 P21水平（ 4.995±0.214）较对照组（ 1.001±0.002）显著升高，差异有统计学意义（ t=32.325，P＜ 0.001）；当共转染 DUSP16过表达后， P21表达（ 0.986±0.012）较单独过表达 miR-146b-5p组（4.995±0.214）显著降低，差异有统计学意义（ t=32.398，P＜ 0.001）。结论　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p显著低表达，其过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖及克隆形成； miR-146b-5p通过靶向负调控 DUSP16表达参与 P53信号通路从而在骨肉瘤发生发展起重要作用。     

正常与退变髓核细胞形态学及Ⅱ型胶原蛋白的定量分析

背景：椎间盘退变导致椎间隙狭窄的主要变化是髓核细胞表达软骨特异性基因产物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的减少。 目的：对成人的正常与退变椎间盘髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色及番红O染色进行定量观察比较。 方法：取成人脊柱侧弯患者与椎间盘突出症患者自愿者术中取出的废弃髓核组织各3例,经培养后每个患者各测量26个细胞,正常组和退变组分别测量78个细胞。对正常与退变椎间盘髓核细胞进行番红“O”染色并行灰度及测定细胞内Ⅱ型胶原蛋白行免疫荧光染色定量测定。 结果与结论：免疫荧光染色显示：退变椎间盘髓核细胞仅轻度染色,染色模糊,其呈类圆形,纺锤形,梭形及不规则形,其内仅有极少量荧光颗粒;Ⅱ型胶原表达较正常髓核细胞降低显著（P〈0.05）。番红O染色显示：退变的髓核细胞肿胀,细胞核肿胀染色略淡,细胞突起延长,胞浆染色不匀伴有空泡,部分细胞崩解,细胞分布零散,混乱,可见成片坏死区。与正常髓核细胞图像灰度值相比差异无显著性意义（P〉0.05）。结果表明退变的椎间盘髓核细胞减少、部分凋亡,其细胞内Ⅱ型胶原蛋白含量较正常髓核细胞显著减少。     

电磁场联合A2A腺苷受体激动剂CGS-21680对大鼠椎间盘退变髓核细胞凋亡及炎性反应的影响

目的 观察脉冲电磁场（PEMF）联合A2A腺苷受体激动剂CGS-21680对大鼠椎间盘退变髓核细胞凋亡及炎性反应的影响。 方法 采用随机数字表法将48只SD大鼠分为假手术组、模型组、A2A腺苷受体激动剂CGS-21680治疗组（简称激动剂组）和PEMF联合CGS-21680治疗组（简称观察组）。除假手术组外,其余各组均制成椎间盘退行性病变（IDD）大鼠模型。制模后激动剂组向L5-6椎间盘注射100 μl CGS-21680（100 μg/kg）,观察组注射CGS-21680后再给予PEMF干预,磁场强度1.5 mT,磁场频率75 Hz,脉宽150 μs,暴磁30 min/次/d,连续干预14 d,假手术组及模型组同期注射等量生理盐水。于实验进行8周后采用HE染色观察椎间盘组织病理形态变化,采用免疫组化法检测Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)蛋白表达,采用ELISA及RT-PCR法检测炎性因子白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量及mRNA表达,采用Western blot及RT-PCR法检测A2AR、NLRP3、Caspses-3蛋白含量及mRNA水平。 结果 模型组髓核及纤维环退变明显,观察组髓核细胞皱缩、坏死及纤维环断裂情况显著缓解。干预后观察组椎间盘髓核Col Ⅱ阳性表达、A2AR蛋白含量及mRNA相对表达量均较模型组、激动剂组明显增加（P<0.05）;而促炎因子IL-6、TNF-α水平及mRNA表达量均较模型组、激动剂组显著降低（P<0.05）;另外观察组大鼠椎间盘组织NLRP3、Caspase-3蛋白含量及mRNA相对表达量亦较模型组、激动剂组明显降低（P<0.05）。 结论 PEMF联合A2A腺苷受体激动剂CGS-21680能协同上调IDD模型大鼠A2AR活性,下调促炎因子IL-6、TNF-α及NLRP3、Caspase-3表达,抑制髓核细胞凋亡,减轻炎性反应,有助于椎间盘退变病情缓解。     

成人退变腰椎间盘髓核组织中端粒酶表达及意义

目的探讨端粒酶在成人退变腰椎间盘髓核组织中的表达及与腰椎间盘髓核组织退变的关系。方法 8例腰椎间盘退行性病变患者(观察组),取手术摘除退变椎间盘髓核组织,8例腰椎骨折患者(对照组),取手术摘除非明显退变腰椎间盘髓核组织,采用免疫组织化学法检测2组端粒酶阳性表达情况,ELISA法检测端粒酶、Ⅱ型胶原纤维、硫酸软骨素相对表达量,Spearman相关法分析观察组端粒酶与Ⅱ型胶原纤维、硫酸软骨素的相关性。结果观察组髓核组织端粒酶阳性表达率(2.1%)低于对照组(4.3%)(P<0.05),髓核组织端粒酶、Ⅱ型胶原纤维、硫酸软骨素相对表达量吸光度值(7.62±0.98、59.45±6.32、3.31±0.38)低于对照组(15.52±0.94、69.33±5.86、4.64±0.29)(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,观察组端粒酶与Ⅱ型胶原纤维(r=0.488,P<0.001)、硫酸软骨素(r=0.673,P<0.001)表达均呈正相关。结论端粒酶参与了腰椎间盘髓核组织的退变过程,且端粒酶表达下调,Ⅱ型胶原纤维、硫酸软骨素表达降低。     

腰椎间盘突出症退变组织中DKK-1、IL-20、TNF-α的表达及意义

目的观察腰椎间盘突出组织中的Diekkopf-1（DKK—1）、白细胞介素20（IL-20）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平变化,探讨其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）法测定73例腰椎间盘突出组织标本的DKK-1、IL-20和TNF—α水平,并与15例正常椎间盘组织进行对比,分析其与Pfirriman分级标准的关系。结果观察组DKK-1、IL-20和TNF-α水平分别为（3835．52v419．48）pg／m]、（60．17±8．62）pg／ml和（7．41±2．02）pg／ml,对照组分别为（1524．26±241．93）pg／ml、（15,53±4．17）pg／ml和（2．38±0．79）pg／ml,观察组明显高于对照组,差异均有统计学意义（t分别=3．27、2．53、2．39,P均〈O．05）,椎间盘突出症患者各亚组退变椎间盘组织DKK-1水平随着疾病的病变程度增加而升高（斥2．76,P〈0．05）,DKK—1水平与Pfirrilnltn分级呈正相关（r=0．56,P〈0．05）。结论腰椎间盘突出组织中的DKK-1、IL-20和TNF—α水平升高。DKK-1可能在椎间盘退行性变中起着重要作用。     

高容量血液滤过对内毒素休克犬心肌组织Toll样受体4表达的影响

目的 探讨高容量血液滤过(HVHF)对内毒素休克心肌组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康犬16只,静脉注射脂多糖(LPS)650 μg/kg诱导犬内毒素休克模型.将制摸成功的动物按随机数字表法分为对照组和HVHF治疗组,每组8只.用放射免疫法测定血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10含量,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌TLR4 mRNA表达,电镜下观察心肌组织病理改变.结果 治疗组HVHF后1、2、4 h血清TNF-α(μg/L:0.59±0.15、0.51±0.12、0.41±0.10)、IL-6(ng/L:11.08±2.83、9.82±2.58、8.25±2.05)、IL-10(μg/L:57.28±5.93、53.81±5.83、50.67±6.33)的含量显著低于本组成模时[(0.84±0.16)μg/L、(16.97±2.50)ng/L、(70.86±5.43)μg/L]和对照组相应时间点[TNF-α(μg/L):0.75±0.14、0.74±0.11、0.72±0.11,IL-6(ng/L):15.33±3.20、14.66±3.24、14.20±3.33,IL-10(μg/L):71.54±4.73、70.71±4.34、69.35±4.60],差异均有统计学意义(均P<0.01).治疗组较对照组心肌TLR4 mRNA表达明显下调(t=3.58,P<0.01).相关分析显示,TLR4 mRNA表达与循环血中TNF-α、IL-6、IL-10浓度呈正相关(r1=0.785,r2=0.569,r3=0.635,均P<0.05).电镜下观察治疗组心肌病理损伤较对照组减轻.结论 HVHF能下调内毒素诱导休克犬心肌TLR4mRNA 表达,减轻心肌炎症反应和心肌损伤.     

慢性盆腔炎模型大鼠中miR-29 及炎症信号通路分子的表达水平及其作用机制研究

目的 探究微小核糖核酸(micro RNA,miR)-29 对大鼠慢性盆腔炎模型的作用并探究其作用机制。方法 将80 只SPF 级SD 大鼠随机分为四组,分别为对照组(n=20)、模型组(n=20)、阴性对照组(n=20)和试验组(n=20)。模型组、阴性对照组和试验组通过机械损伤及接种混合菌构建大鼠慢性盆腔炎模型,阴性对照组和试验组造模后通过尾静脉注射5nmol 阴性对照(negative control, NC)antagomiR 和miR-29 antagomiR。HE 染色检测大鼠子宫组织病理特性;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠外周血炎症相关指标:白细胞介素(interleukin,IL)-1β,白细胞介素(IL)-6,白细胞介素(IL)-8 和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α 水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测子宫组织miR-29,Toll 样受体4(Toll-like receptors,TLR)4,核因子κB(nuclear factor,NF-κB)及NK-κB 抑制蛋白α(IκB α)表达水平;WesternBlot 检测子宫组织TLR4,NF-κB 和IκB α 蛋白表达水平。结果 HE 染色结果表明,与对照组相比,模型组、阴性对照组和试验组大鼠出现明显慢性盆腔炎症状,试验组子宫组织损伤显著缓解;ELISA 结果表明:模型组大鼠外周血IL-1β,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平显著高于对照组,与模型组和阴性对照组相比,试验组炎症因子IL-1β,IL-6,IL-8 和TNF-α 释放显著降低,差异有统计学意义(t=3.021 ～ 6.878,均P ＜ 0.05);qPCR 结果表明,与对照组相比,模型组miR-29,TLR4,NF-κB 和IκB α 的mRNA 表达显著上升,与模型组和阴性对照组相比,试验组miR-29 ,TLR4,NF-κB 和IκB α的 mRNA 表达显著降低,差异有统计学意义(t=3.917 ～ 8.095,均P ＜ 0.05)。Western Blot 结果表明:与对照组相比,模型组TLR4,NF-κB 和IκB α 蛋白表达显著上升,与模型组和阴性对照组相比,试验组TLR4,NF-κB 和IκBα 蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(t=2.987 ～ 8.045,均P ＜ 0.05)。结论 慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织中miR-29 显著高表达,下调miR-29 具有对大鼠子宫的保护作用,其机制可能与抑制炎症因子释放及TLR4/NF-κB 信号通路的调控相关。     

促红细胞生成素治疗大鼠腰椎间盘突出症动物模型的实验研究

目的建立大鼠腰椎间盘突出症的模型,探讨促红细胞生成素治疗大鼠腰椎间盘突出症动物模型的疗效。方法将30只SD大鼠按随机数字表法分为2组：实验组18只和对照组12只。2组大鼠分别建立腰椎间盘突出症模型。首先用自体髓核移植至L4、L5脊神经根,然后实验组大鼠将含促红细胞生成素的明胶海绵固定在神经根旁后缝合切口,对照组大鼠不作特别处理缝合切口。模型建立成功后。实验组大鼠采用促红细胞生成素5000U·kg^-1·次^-1·d^-1腹腔注射,对照组大鼠采用生理盐水lmL·次^-1·d^-1腹腔注射。术后12、24、36、48、72、96h各处死实验组大鼠3只、对照组大鼠2只,取受压神经根处的神经及周围组织分别进行TUNEL染色观察细胞凋亡及TNF—α阳性细胞数。结果实验组大鼠术后24、48、72、96h脊神经细胞凋亡率、术后12、24、36、48hTNF-α阳性细胞数均显著低于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论促红细胞生成素治疗大鼠腰椎间盘突出症动物模型能抑制神经细胞的凋亡及TNF-仪的表达,并能取得较好的疗效。     

脓毒症大鼠心肌细胞Toll样受体4和炎症因子基因表达的变化及作用机制

目的 观察脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及与Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)基因表达的关系;同时探讨谷氨酰胺(Gln)在脓毒症心肌损伤治疗中的保护作用.方法 采用内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射法制备脓毒症大鼠模型.将大鼠随机分为对照组、LPS组及Gln组,再分为术后0、6、12、24 h亚组,每组6只.于相应时间点取心肌组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达,并观察心肌组织病理学改变.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡程度增高.LPS组、Gln组各时间点心肌细胞TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达均较对照组明显增加(P均<0.05).而Gln组心肌细胞凋亡程度较LPS组轻,各时间点TLR4 mRNA表达均较LPS组升高幅度明显降低,且于12 h、24 h差异有统计学意义;TNF-α mRNA表达亦降低,于6 h、24 h差异有统计学意义;IL-6 mRNA表达较LPS组升高幅度降低,且于12 h差异有统计学意义(P均<0.05).结论 TLR4信号转导基因及其调控细胞因子TNF-α、IL-6基因表达在脓毒症心肌细胞损伤的发生发展中起重要作用.Gln通过影响相关基因表达干预脓毒症心肌细胞的凋亡.     

新生儿急性呼吸窘迫综合征患者血清miR-183-5p的表达及与IL-1β，IL-6和TNF-α水平的相关性

目的　探讨新生儿急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome, ARDS）患者血清miR-183-5p的表达及其与白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的相关性。方法　选取保定市第二中心医院收治的87例ARDS新生儿为研究对象。根据ARDS患儿出院时生存情况分为生存组（n=68）和死亡组（n=24）,按照新生儿危重评分结果分为非危重组（n=53,>90 分）、危重组（n=24, 70～90 分）、极危重组（n=15, <70 分）,比较各组血清miR-183-5p,IL-1β,IL-6及TNF-α水平差异。ARDS患儿miR-183-5p与IL-1β,IL-6及TNF-α的相关性采用Pearson相关分析。结果　与生存组比较,死亡组血清miR-183-5p（2.15±0.94 vs 0.96±0.38）,IL-1β（168.20±30.62 vs 110.25±19.30,pg/mL）,IL-6（217.28±44.27 vs 151.30±32.46,pg/mL）及TNF-α（81.16±19.24 vs 48.27±14.30,pg/mL）水平均明显升高（P<0.001）。随着病情加重ARDS患儿血清miR-183-5p,IL-1β,IL-6及TNF-α水平逐渐升高,极危重组>危重组>非危重组（P<0.001）。相关分析显示,ARDS患儿血清miR-183-5p表达水平与IL-1β,IL-6及TNF-α均呈正相关（P<0.001）。结论　ARDS患儿血清miR-183-5p高表达与IL-1β,IL-6,TNF-α水平及病情严重程度相关,可能是预测ARDS患儿病情严重程度的生物学指标。     

多次胶原酶消化法培养小鼠椎间盘髓核细胞

背景:椎间盘为无血运组织,椎间盘髓核细胞为分化终末细胞,细胞增殖能力较差,体外培养难度较大.目的:探索小鼠椎间盘髓核细胞体外分离培养的方法.方法:取小鼠椎间盘髓核组织,使用多次胶原酶消化的方法,分离培养髓核组织细胞,接种,传代,取第2代细胞,分别采用免疫细胞化学和RT-PCR方法检测椎间盘髓核细胞特征性分泌物Ⅱ型胶原和聚合蛋白的分泌量及mRNA的表达,并与软骨细胞,成骨细胞及成纤维细胞进行比较.结果与结论:椎间盘髓核细胞贴壁后呈现软骨细胞的形态;Ⅱ型胶原和聚合蛋白染色均为阳性;Ⅱ型胶原和聚合蛋白mRNA表达与软骨细胞相同,与成纤维细胞和成骨细胞存在明显差别.说明多次胶原酶消化的方法可以获得大量纯净的椎间盘髓核细胞,性状稳定.