糖原合酶激酶3β抑制剂TDZD-8对急性肝细胞损伤中自噬及NLRP3炎性小体的影响

目的 探讨糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)抑制剂TDZD-8在急性肝细胞损伤衰竭模型中对细胞自噬及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing 3,NLRP3)炎性小体的影响。方法 体外培养人正常肝细胞L02细胞, CCK-8法测定不同浓度TDZD-8对L02细胞活性的影响;将细胞分为3组(对照组、模型组、TDZD-8组),经处理后,试剂盒检测细胞上清液中游离DNA(cell-free DNA,cf-DNA)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量;免疫荧光法检测3组细胞第9位丝氨酸磷酸化的GSK3β(p-GSK3β,Ser9)表达含量;Western blot法检测3组细胞中NLRP3、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、UNC－51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK-1)、Beclin1及p62蛋白水平变化。结果 CCK-8结果显示,在TDZD-8浓度≤20μmol/L时药物对细胞活性无明显影响。3组细胞经处理后,与对照组比较,模型组p-GSK3β(Ser9)荧光强度明显减弱,GSK3β被激活,同时上清液中cf-DNA和LDH水平明显升高,NLRP3、IL-18和IL-1β蛋白水平也明显升高,而自噬相关蛋白ULK1和Beclin1蛋白水平明显下降,p62水平升高,自噬水平受到抑制(P<0.05)。经TDZD-8处理后,与模型组比较,细胞p-GSK3β(Ser9)荧光强度明显增强,上清液中cf-DNA和LDH水平显著降低,NLRP3、IL-18和IL-1β蛋白水平也明显降低,而自噬水平显著升高(P<0.05)。结论 TDZD-8在急性肝细胞损伤衰竭的模型中能够抑制NLRP3炎性小体活化同时激活细胞自噬起到保护作用。     

NLRP3炎性小体与动脉粥样硬化相关性研究进展

NLRP3炎性小体是模式识别受体激活后所形成的一种多蛋白复合体。活化的NLRP3炎性小体可使caspase-1前体转变为有活性的caspase-1,促进白介素（IL）-1β和IL-18的成熟和分泌,进而引发机体的炎性反应。动脉粥样硬化作为心脑血管疾病的发病基础,严重威胁着人类的健康。近年研究结果表明,动脉粥样硬化是一种慢性炎性反应性疾病。炎性小体在动脉粥样硬化炎性反应中发挥关键作用,其中NLRP3炎性小体与动脉粥样硬化的形成有着密切联系。本文就NLRP3炎性小体活化机制及其与动脉粥样硬化的相关性进行综述。     

NLRP3炎性小体在炎症疾病中的研究进展

炎症是清除体内危险刺激的一种防御反应,炎性小体通过促炎细胞因子的裂解并使其成熟来调节炎症。NLRP3炎性小体能活化胱天蛋白酶(caspase)1,并引起白细胞介素(IL)1β、IL-18和IL-33等促炎细胞因子的分泌,参与机体抵抗病原体免疫应答。各种内源或外源的刺激可通过不同的信号通路激活NLRP3炎性小体来活化caspase-1。该文介绍了NLRP3炎性小体的结构、激活途径及其对非感染性炎症疾病的研究进展。     

NLRP3炎性体与类风湿关节炎的相关性研究

目的探讨NLRP3炎性体与类风湿关节炎的相关性。方法选取2015年1~12月我院收治的类风湿关节炎患者(RA)40例为研究组,同时选取同期健康体检人员40例为对照组,比较两组研究对象外周血NLRP3、半胱天冬酶-1(CASP1)以及凋亡斑点样蛋白(PYCARD)mRNA表达水平。结果研究组的NLRP3表达显著低于对照组,同时CASP1以及PYCARD表达显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 NLRP3炎性体各个基因mRNA表达在类风湿关节炎患者当中表达异常,表明NLRP3炎性体在炎症反应中有重要影响。     

NLRP3炎性小体与糖尿病肾病相关性研究进展

炎性小体(inflammasome)是位于细胞内的蛋白质复合物,作为固有免疫的重要组成部分,在机体天然免疫及获得性免疫反应中发挥着重要作用。Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体主要是由NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)等相互结合而形成,调控白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)等细胞因子的成熟和分泌。近年发现NLRP3炎性小体的非正常活化及调控在糖尿病肾病的发生、发展过程中发挥重要作用。NLRP3炎性小体可能成为糖尿病肾病的潜在治疗靶点。     

NLRP3炎性小体、胆固醇结晶与动脉粥样硬化关系的研究进展

动脉粥样硬化(AS)与血管内皮功能障碍、炎症、自身免疫等多种因素有关,是以血管壁炎症反应为基础的慢性病理过程。近来研究表明,炎性小体(Inflammasome)是炎症反应的核心。炎性小体作为固有免疫的一种模式识别受体,通过激活半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase1),介导炎性因子的分泌,参与各种炎症性疾病包括动脉粥样硬化的发生发展。胆固醇结晶被认为是动脉粥样硬化病变的标志,作为内源性物质之一能激活NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体,促进动脉粥样硬化的发展。为了给研究动脉粥样硬化抗炎症治疗提供新思路、新靶点,我们现将炎性小体活化及调控与胆固醇结晶、动脉粥样硬化关系研究进展做一综述。     

NLRP3炎性体在糖尿病肾病肾间质炎症反应中的作用

目的 探讨NLRP3炎性体在糖尿病肾病肾间质炎症反应中的作用。 方法 选择2014年6月-2015年5月浙江省人民医院2型糖尿病肾病患者50例作为糖尿病肾病组,同期肾脏错构瘤手术切除患者50例作为对照组。比较2组患者的临床资料、尿IL-18和尿IL-1β水平、肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β的表达,分析糖尿病肾病肾间质炎症和肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β表达的相关性,糖尿病肾病肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4免疫组化表达评分和尿IL-18、IL-1β水平的相关性。 结果 糖尿病肾病组的尿蛋白定量、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白均高于对照组(P<0.05)。糖尿病肾病组尿IL-18和尿IL-1β水平均高于对照组(P<0.05)。糖尿病肾病组肾小管上皮细胞中NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β呈高表达,对照组肾小管上皮细胞中NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β呈低表达或不表达。糖尿病肾病组肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β的表达评分均明显高于对照组(P<0.05)。糖尿病肾病肾间质炎症和肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4、IL-18和IL-1β表达均呈正相关(P<0.05)。糖尿病肾病肾小管上皮细胞NLRP3、P2X4免疫组化表达评分和尿IL-18、IL-1β水平均呈正相关(P<0.05)。 结论 P2X4可能通过激活NLRP3炎性体,调控炎性细胞因子,引起糖尿病肾病肾间质炎症反应。      

NLRP3炎性小体研究进展及与消化系统疾病关系

NOD样受体热蛋白3(NLRP3)炎性小体是人体免疫系统的重要固有成分,主要产生和分泌成熟的白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18(IL-18)等关键下游促炎细胞因子,导致机体的炎症反应,而IL-1β是NLRP3发挥作用的最主要促炎因子。NLRP3可以识别或被多种危险信号主动激活,致使主要的促炎因子IL-1β表达水平上调。研究数据显示,NLRP3炎性小体可影响动脉粥样硬化、免疫性疾病、炎症性疾病等多种类型疾病的进程,是目前研究最为广泛的炎性小体,已成为近年来的研究热点。文章对NLRP3炎性小体的激活调控机制及近些年来它在消化系统疾病中的运用以及关系作一综述,旨在为临床消化系统疾病的治疗提供新的治疗思路及靶点方向。     

刺甘草查尔酮调节自噬和NLRP3炎症小体减轻脓毒症心肌损伤

目的 探究刺甘草查尔酮对自噬、NLRP3炎症小体和脓毒症大鼠心肌损伤的影响。方法 将大鼠按照随机数表法分为Col、LPS、Ech L、Ech M、Ech H、阳性对照组。检测大鼠心功能指标（LVEDD、LVESD、FS、EF）;ELISA检测血清中炎症因子（TNF-α、IL-1β）水平和心肌损伤标志物（cTnΙ、CK-MB）含量;HE染色检测心肌组织病理学变化;TUNEL检测心肌细胞凋亡率;蛋白质印迹检测心肌组织中自噬相关蛋白及炎性小体相关蛋白表达。结果 和Col组相比,LPS组大鼠心功能指标LVEDD、LVESD和血清中TNF-α、IL-1β、cTnΙ、CK-MB水平明显升高,FS、EF明显降低,心肌组织中p62、NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达和心肌细胞凋亡率均明显升高,组间差异有统计学意义（P <0.05）;和LPS组相比,Ech L、Ech M与Ech H组心功能指标LVEDD、LVESD和血清中TNF-α、IL-1β、cTnΙ、CK-MB水平明显降低,FS、EF明显升高,心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ι比值、Becline-1、p62均逐渐升高...     

机械通气导致小鼠认知障碍时对自噬和NLRP3炎症小体的影响

目的 探讨机械通气导致小鼠认知障碍时对自噬和Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的影响.方法 将8～12周龄、体质量20～25 g的SPF级健康雄性C57BL/6小鼠110只分为对照组(C组,n=26)、机械通气组(MV组,n=28)、机械通气+雷帕霉素处理组(Rap组,n=28)及机械通气+6-氨...     

可溶性高尿酸对人脐静脉内皮细胞NLRP3炎性体途径的影响

目的 研究可溶性高尿酸(uric acid,UA)是否通过NLRP3炎性体途径参与人脐静脉内皮细胞活化。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用200μg/ml的UA培养后,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞内NLRP3和pro-IL-1β mRNA表达量;检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、E-选择素(E-selectin)、干扰素诱导蛋白10(CXCL10)、C-C原件趋化因子26(CCL26)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS) mRNA水平;用Western blot法测定NLRP3、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达量;用免疫荧光检测NLRP3与ASC共定位和NF-κB核移位情况;并用荧光探针测定胞质活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 200μg/ml的UA上调黏附分子ICAM-1、E-选择素(P=0.000)和趋化分子CXCL10、CCL26mRNA水平(P<0.05),下调eNOS mRNA水平(P<0.01),并上调细胞内ROS水平,提示HUEVCs处于活化状态。UA对NLRP3、pro-IL-β mRNA和蛋白水平无显著影响;成熟IL-1β也无显著增加。NF-κB没有明显的核移位现象,但NLRP3-ASC复合体显著增加。结论 可溶性高UA诱导HUVECs活化,虽然UA诱导NLRP3-ASC复合体体形成,但对IL-1β的产生没有显著影响。因此,在细胞水平,可溶性高UA主要不是通过激活NLRP3炎性体途径诱导人脐静脉内皮细胞活化。     

NLRP3炎性小体在创伤性脑损伤中的作用

创伤性脑损伤(TBI)的致死率及致残率居高不下,一直是研究的热点.炎症反应是TBI后继发性脑损伤的重要病理机制之一,NLRP3炎性小体作为炎症反应的重要组成部分,其过度活化与多种中枢神经系统疾病的发展密切相关.研究表明NLRP3炎性小体在TBI后被激活,并通过招募、活化半胱氨酸天冬氨酸酶-1前体(pro-caspase...     

千金藤素通过抑制TLR4-NLRP3炎症小体及炎症因子治疗痛风性关节炎

[目的] 评价千金藤素的体内外抗炎效果，探讨其治疗痛风性关节炎的作用机制。[方法]采用噻唑蓝(3-(4，5-Dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltet -razolium bromide，MTT)比色法检测千金藤素对RAW264.7巨噬细胞的活性抑制作用。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测千金藤素对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)和 IL-6分泌的影响。以免疫印迹法分别检测千金藤素对Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MYD88)、NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3，NLRP3)/凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC)/半胱天冬酶-1(caspase-1)炎症小体的蛋白表达的影响。采用尿酸钠诱导SD大鼠关节炎模型，通过炎症指数以及TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子及TLR4-NLRP3相关蛋白的表达，评价千金藤素的体内抗炎作用。[结果] 千金藤素抑制RAW264.7细胞活力的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration，IC50)为(62.51±5.36) μmol·L-1，弱于秋水仙碱(26.89±5.14) μmol·L-1。在RAW264.7细胞中，1～10 μmol·L-1千金藤素显著抑制尿酸钠晶体诱导的炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌与mRNA表达，也抑制了尿酸钠晶体诱导的TLR4、MYD88及NLRP3炎性小体的蛋白表达。在关节炎大鼠模型中，1～10 mg·kg-1千金藤素能够剂量依赖性地减轻关节肿胀，并抑制TNF-α、IL-1β和IL-6分泌及TLR4-NLRP3炎症小体的蛋白表达。[结论] 千金藤素可通过抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达，以及抑制尿酸钠介导的TLR4-NLRP3炎症小体的表达，发挥抗关节炎作用。     

NLRP3炎性小体与周围神经损伤关系的研究进展

NLRP3通过改变免疫反应在各种疾病中发挥着关键作用。免疫系统和神经系统之间存在着诸多联系,故其在中枢和外周神经病理学中也起着关键作用。在周围神经损伤后,炎症不仅出现在损伤部位,同时也出现在脊髓神经元部位,炎性小体在其中起着关键作用,并串扰其他信号共同参与损伤后的生物过程。该综述探讨了周围神经损伤后炎性小体带来的直接或间接的影响,以及可能的治疗靶点与机制。     

NLRP3炎性小体在血栓闭塞性脉管炎发病机制中的作用研究进展

血栓闭塞性脉管炎(TAO)是中、小动静脉的一种节段性、闭塞性的慢性炎性疾病,其特点为病变血管的血栓形成和血管闭塞。TAO是一种影响上肢及下肢中、小型动静脉的非动脉粥样硬化的炎性疾病,对血栓闭塞性脉管炎的患者的血管壁及血栓进行研究发现了大量的炎性细胞浸润。NLRP3炎性小体能活化半胱天冬氨酸酶-1,引起白细胞介素(IL)等促炎细胞因子的分泌,参与机体的免疫应答反应,现已发现它在自身免疫性疾病及动脉性疾病中发挥免疫方面的作用。文章就NLRP3炎性小体在血栓闭塞性脉管炎的发病机制中的作用进行进一步介绍。     

胆绿素对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的作用

目的 探讨胆绿素（biliverdin,BV）对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的影响及其作用机制。方法 用不同浓度胆绿素（10、20、30μmol/L）处理小鼠RAW264.7巨噬细胞30min后再用LPS （1μg/ml）处理细胞6h,ELISA法检测培养上清液IL-β和IL-18中的分泌量。30μmol/L胆绿素处理细胞30min后再用LPS处理细胞6h,Western blot法检测胞内NLPR3、caspase-1、ASC和磷酸化IκB （p-IκB）的蛋白表达水平;NF-κB抑制剂BAY11-7082处理细胞1h后,然后给予细胞30μmol/L胆绿素孵育30min,经1μg/ml LPS孵育6h,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-β、IL-18的表达水平。结果 （1）在受到LPS作用后,RAW264.7巨噬细胞分泌IL-β、IL-18水平显著升高;而在预先给予胆绿素后,抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18表达,并且呈剂量依赖性（P < 0.05）。（2）与空白对照组相比,LPS处理巨噬细胞6h后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达明显上调（P均<0.05）,在同时间点,巨噬细胞在LPS处理前经过胆绿素预处理后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达都显著降低（均P<0.05）。（3）与LPS组相比,BAY+胆绿素明显抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18的表达（P<0.05）,并且BAY和胆绿素的对于LPS诱导炎性反应对的联合抑制作用显著的高于BAY或者胆绿素的单独作用（P<0.05）。结论 在RAW264.7巨噬细胞中,胆绿素可以通过抑制NF-κB的活性进而抑制NLRP3炎性体的形成,从而发挥抗炎作用。     

NLRP3炎性小体在类风湿关节炎中的研究进展

炎性小体（inflammasome）是细胞内的一类蛋白复合体,调控IL-1β和IL-18的产生,在机体的固有免疫和适应性免疫中发挥重要作用。其中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（nucleotide-binding oligomerization domain like receptor family,pyrin domain-containing 3,NLRP3）炎性小体是目前研究最为广泛和深入的一种炎性小体。近年发现NLRP3炎性小体的异常激活及调控在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）中发挥重要作用,加强对NLRP3炎性小体的研究有望为RA的诊断、治疗及病情监控提供更多的理论依据。     

NLRP3 炎性小体及其下游细胞因子在哮喘中的作用研究进展

哮喘作为一种常见慢性疾病,困扰着全球数亿患者。NLRP3炎性小体是固有免疫的重要组成部分。大量研究表明,过度激活 NLRP3 炎性小体将增加气道炎性细胞浸润,进而导致气道高反应性,诱导气道重塑。NLRP3 炎性小体的激活将直接导致白细胞介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)、IL-18、IL-33 的成熟,随后三者被分泌至胞外,参与哮喘的发生、发展。本文将综述 NLRP3 炎性小体在哮喘中的作用,并着重阐述其下游细胞因子 IL-1β、IL-18 以及 IL-33 在两种哮喘亚型中的作用,以期为临床治疗哮喘以及开发相关靶向药物提供研究思路。     

中医药调控NLRP3炎性小体治疗脓毒症多器官损伤的研究进展

脓毒症是宿主对感染的免疫反应失调引起的全身炎症反应,会导致危及生命的器官功能障碍。核苷酸结合寡聚结构域（Nod）样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在先天免疫系统中扮演着重要角色。研究表明,在脓毒症多器官损伤的进程中,NLRP3炎症小体的活化可导致全身炎症水平加重。因此,阐明NLRP3炎症小体的活化机制及其在脓毒症多器官损伤中的致病作用至关重要。该文将综述上述研究的最新研究进展,从NLRP3炎症小体的角度阐述中医药对脓毒症的治疗作用,为脓毒症多器官损伤的治疗提供一些参考。