SFRP1基因甲基化在儿童急性淋巴细胞白血病中的临床意义

目的:探讨SFRP1基因及其甲基化在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)检测43例新确诊ALL患儿化疗前(初发组)和诱导缓解化疗后d 46骨髓达完全缓解(缓解组)时的骨髓单个核细胞中SFRP1基因甲基化状态，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SFRP1 mRNA表达，蛋白印迹(Western blot)法检测SFRP1蛋白表达，并收集患儿的临床资料，分析SFRP1基因甲基化在儿童ALL中的临床意义。结果:初发组SFRP1基因启动子甲基化阳性率(44.19%)明显高于缓解组(11.63%)(χ²=11.328,P <0.05)。初发组患儿骨髓单个核细胞中SFRP1 mRNA及蛋白相对表达量均显著低于缓解组(P <0.05)。初发组SFRP1基因启动子甲基化与危险度(χ²=15.613,P=0.000)及患儿生存(χ²=6.561,P=0.010)有关，SFRP1基因高甲基化患儿危险度明显升高、无事件生存时间缩短，而其他临床资料间无明显差异。结论:SFR...     

急性髓系白血病中DKK-3和WIF-1甲基化状态和mRNA表达的研究

目的:研究DKK-3和WIF-1在急性髓系白血病(AML)患者中的启动子甲基化状态和mRNA表达情况及其临床意义。方法:用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例AML患者骨髓标本和20例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓标本中DKK-3和WIF-1启动子甲基化状态;用实时定量PCR检测上述标本中β-catenin、DKK-3和WIF-1mRNA表达情况,并分析其与临床资料及生存时间的关系。结果:AML组中DKK-3和WIF-1启动子甲基化率明显高于对照组(χ2=15.330,P0.001;χ2=17.371,P0.001),且与性别、年龄、临床分型无相关性。DKK-3和WIF-1 mRNA相对表达量在AML患者中依次为0.840±0.320和0.792±0.313,明显低于对照组的1.134±0.392和1.047±0.334(t=3.415,P=0.000;t=3.070,P=0.003)。AML患者骨髓标本β-catenin的mRNA相对表达量为0.756±0.304,高于对照组骨髓标本表达量0.342±0.105(t=5.943,P=0.001),且AML骨髓标本中DKK-3和WIF-1 mRNA相对表达量和β-catenin相对表达量呈均呈负相关性(r=-0.543;r=-0.562)。KaplanMeier生存曲线分析显示,DKK-3甲基化阳性组AML患者总体生存时间短于阴性组患者(χ2=3.957,P=0.042),而WIF-1甲基化阳性组AML患者总体生存时间亦短于阴性组患者(χ~2=4.520,P=0.029)。结论:AML患者中Wnt/β-catenin信号通路存在有异常激活,DKK-3和WIF-1启动子甲基化可能参与了Wnt通路激活及AML的发病过程并影响其总体预后。     

儿童急性淋巴细胞白血病p16基因甲基化及表达水平临床意义

目的 探讨p16基因甲基化及表达水平改变在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)发病机制中的作用.方法 ALL患儿76例,其中初发(uALL)患儿69例、复发(rALL)患儿7例,健康儿童28例纳入对照组.采用荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)检测外周血淋巴细胞p16基因mRNA表达;采用基于SYBR Green的甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测p16基因启动子甲基化水平.结果 ALL患儿淋巴细胞p16基因启动子甲基化水平高于健康儿童,uALL患儿p16基因甲基化水平低于rALL患儿(P＜0.05);ALL患儿p16基因mRNA水平低于健康儿童,uALL患儿p16基因转录水平高于rALL患儿(P＜0.05);p16基因转录水平与其启动子甲基化水平呈负相关关系(r=-0.63,P＜0.05);首次化疗即获完缓解ALL患儿p16基因甲基化水平低于未完全缓解患儿,而p16 mRNA表达水平高于后者(P＜0.05);p16基因低甲基化或高表达水平ALL患儿巩固强化治疗平均缓解时间明显低于p16基因高甲基化或低表达患儿(P＜0.05).结论 p16基因甲基化及表达低下可能与ALL发病有关,p16基因甲基化状态及表达水平检测或可用于儿童ALL预后评估.     

急性髓系白血病患者SFRP2基因甲基化的检测及临床意义

目的检测分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因在急性髓系白血病(AML)患者中的甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子区甲基化状态与AML发生的关系。方法收集了99例AML患者的骨髓或外周血样本,匹配以70例门诊普通患者的外周血作为对照。采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对所有研究样本进行SFRP2基因启动子区甲基化状况检测。结果 99例AML患者中有27例检测到SFRP2基因的甲基化,甲基化率为27.3%;而正常对照组中未检出SFRP2基因的甲基化;两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。SFRP2基因的甲基化状态与AML的年龄、性别、临床分型及样本来源(骨髓/外周血)间均未见显著关系(P>0.05)。结论 SFRP2基因启动子区的甲基化与AML的发生有相关性,可能是引起AML的分子机制之一。外周血中的SFRP2基因的甲基化可望作为一项新的分子标记物应用于AML的临床早期检测。     

骨髓增生异常综合征患者SFRP5基因启动子区甲基化状态研究

背景:SFRP5基因启动子区的甲基化与急性髓系白血病的发生密切相关.作为白血病的前期,骨髓增生异常综合征患者中SFRP5基因启动子区的甲基化状态尚不清楚.目的:探索骨髓增生异常综合征中WNT/β-catenin信号传导通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因的甲基化状态.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法对43例骨髓增生异常综合征患者的骨髓或外周血进行SFRP5基因启动子区甲基化状况检测,并以70例门诊普通患者的外周血作为对照.结果与结论:113例样本均成功进行了MSP检测,进入结果分析.43例骨髓增生异常综合征患者中检出5例(11.6%)SFRP5的甲基化,70例正常对照中检出1例(1.4%)SFRP5的甲基化,并且均为不完全甲基化状态.SFRP5在骨髓增生异常综合征患者中的甲基化率显著高于正常对照(χ2=5.511,P=0.019).43例患者样本中,17例为骨髓样本,26例为外周血样本.而5例甲基化的样本中,2例为骨髓样本,3例为外周血样本.样本的来源(骨髓/外周血)对于甲基化状态的结果无显著差异(χ2=0.001,P=0.982).提示,SFRP5基因的甲基化与骨髓增生异常综合征有相关性,SFRP5基因的甲基化可能是引起骨髓增生异常综合征的分子机制之一.     

沉默DNMT1基因对骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化的影响

目的:探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase,DNMT1)基因沉默对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞内细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling,SOCS-1)甲基化的影响。方法:应用靶向沉默DNMT1基因的短发卡RNA(RNA-Short hairpin RNA,shRNA)通过脂质体(lipofectamineTM2000)介导转染骨髓瘤细胞RPMI8226,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染前后DNMT1基因和蛋白表达,应用甲基化特异性PCR检测转染前后骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化水平的变化。结果:转染后骨髓瘤细胞DNMT1 mRNA表达水平(0.176±0.004)和蛋白表达水平(0.065±0.014)均明显低于阴性对照组(0.956±0.033,0.415±0.027),其差异具有统计学意义(P0.01)。转染后SOCS-1基因甲基化水平较转染前明显降低。结论:利用shRNA能靶向沉默DNMT1基因的表达,并可以有效逆转SOCS-1基因高甲基化状态。     

SFRP4和β-catenin在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的观察分泌型卷曲相关蛋白(SFRP4)及β-连环素(β-catenin)在宫颈鳞癌组织中的表达,并分析其临床病理意义。方法应用免疫组化SP法检测62例宫颈鳞癌组织(SCC组)及23例正常宫颈组织(NC组)中SFRP4和β-catenin的表达。结果①(1)SCC组SFRP4和β-catenin的阳性表达率(66.1%、71.0%)均高于NC组(30.4%、34.8%)(P均<0.05)。②SFRP4和β-catenin在宫颈鳞癌中的表达与临床分期、分化程度、淋巴转移及浸润深度有关(P均<0.05)。③SFRP4和β-catenin的表达呈正相关(r=0.29,P<0.05)。结论 SFRP4可能与β-catenin协同作用促进Wnt/β-catenin信号通路的活化,并且与宫颈鳞癌的恶性临床病理特征相关,提示SFRP4可能成为指导宫颈鳞癌的临床治疗和判断预后的指标。     

Apaf-1基因启动子甲基化与抑凋亡蛋白Apollon表达在成人急性白血病发生发展中的意义

目的 探讨Apaf-1基因启动子甲基化与抑凋亡蛋白Apollon在成人急性白血病(AL)发生发展中的作用.方法 采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测53例AL患者骨髓细胞基因启动子区域甲基化情况,RT-PCR方法 检测Apaf-1 mRNA表达水平.免疫细胞化学方法 检测Apollon蛋白表达情况,正常骨髓对照为10名正常人和非恶性血液病患者.结果 18例(33.9%)AL患者Apaf-1基因启动子存在异常甲基化,甲基化检测阳性患者均未检测到Apaf-1 mRNA的表达,对照组仅1份Apaf-1 mRNA表达缺失,MS-PCR检测未发现Apaf-1基因启动子的异常甲基化,AL患者Apaf-1基因甲基化阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),AL患者骨髓细胞Apollon蛋白表达水平高于对照组(P＜0.05),AL患者外周血WBC＞10×109/L的患者Apaf-1基因启动子甲基化阳性率及Apollon蛋白表达水平高于WBC≤10×109/L患者,差异有统计学意义(P＜0.05),AL患者中Apaf-1基因启动子甲基化阳性率与Apollon蛋白表达呈正相关.结论 Apaf-1基因启动子的异常甲基化与抑凋亡蛋白Apollon的高表达在白血病的发生发展中可能起协同作用,共同促进了白血病的发生、发展.     

AML和ALL患者骨髓EVI1表达水平及其与白血病分型、临床特征和预后的相关性分析

目的:探讨白血病患者骨髓中的EVI1基因在AML和ALL中的表达情况,以及其与白血病分型、患者临床特征以及预后的相关性。方法:选取2012年至2016年间中南医学院收治的白血病患者333例,其中AML患者263例,ALL患者70例,正常对照的志愿者13例。抽取患者及志愿者的骨髓样本,用Ficoll法分离骨髓样本中的单个核细胞,提取总DNA,然后采用实时荧光定量PT-PCR检测法检测EVI1 mRNA的相对表达水平,比较EVI1mRNA在AM L、ALL患者中的表达差异。采用相关的统计学方法分析EVI1表达与白血病分型、患者临床特征以及患者预后之间的相关性。结果:根据实时荧光定量PT-PCR检测的EVI1 mRNA表达结果,EVI1 mRNA在AM L、ALL患者中均有较高的表达水平,因此2组的EVI1 mRNA表达水平比较没有显著的差异(t=1. 756,P0. 05),但是ALL患者在EVI1 mRNA发生过表达及低表达的表达率高于AM L患者,而正常表达的表达率低于AM L患者,差异存在统计学意义(χ~2=13. 698,P 0. 05)。在AM L-M1中,T-ALL两个亚型中患者的Plt水平与EVI1 mRNA表达水平呈正相关(r=0. 393,P 0. 05;ρ=0. 442,P 0. 05),而在AM L-M3亚型中,患者的Blasts(%)在AML-M3与EVI1 mRNA表达水平有显著的负相关性(r=-0. 518,P 0. 01)。在EVI1 mRNA表达分布上,EVI1 mRNA的表达分布与AML患者年龄存在相关性(χ~2=6. 684,P 0. 05)。AM L患者中有高表达EVI1mRNA的患者的有较差的预后(Log-Rank检验,P 0. 05),且AM L-M3亚型的EVI1 mRNA高表达患者比非高表达的患者有更显著的较差预后(Log-Rank检验,P 0. 01)。结论:在EVI1的表达水平上,AML及ALL患者并没有太大的差异,但在EVI1的表达分布差异明显,并且其差异与患者的年龄有一定的相关性。同时患者的一些临床特征以及急性白血病的部分亚型均与EVI1的表达水平存在一定相关性。     

骨髓增生异常综合征患者SFRP5基因启动子区甲基化状态研究

背景：SFRP5基因启动子区的甲基化与急性髓系白血病的发生密切相关。作为白血病的前期,骨髓增生异常综合征患者中SFRP5基因启动子区的甲基化状态尚不清楚。目的：探索骨髓增生异常综合征中WNT/β-catenin信号传导通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）基因的甲基化状态。方法：应用甲基化特异性PCR（MSP）法对43例骨髓增生异常综合征患者的骨髓或外周血进行SFRP5基因启动子区甲基化状况检测,并以70例门诊普通患者的外周血作为对照。结果与结论：113例样本均成功进行了MSP检测,进入结果分析。43例骨髓增生异常综合征患者中检出5例（11.6%）SFRP5的甲基化,70例正常对照中检出1例（1.4%）SFRP5的甲基化,并且均为不完全甲基化状态。SFRP5在骨髓增生异常综合征患者中的甲基化率显著高于正常对照（χ2=5.511,P=0.019）。43例患者样本中,17例为骨髓样本,26例为外周血样本。而5例甲基化的样本中,2例为骨髓样本,3例为外周血样本。样本的来源（骨髓/外周血）对于甲基化状态的结果无显著差异（χ2=0.001,P=0.982）。提示,SFRP5基因的甲基化与骨髓增生异常综合征有相关性,SFRP5基因的甲基化可能是引起骨髓增生异常综合征的分子机制之一。     

Reprimo和hMLH1基因甲基化在胃癌早期诊断价值的研究

目的 探讨Reprimo和hMLH1基因启动子区甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值。方法 通过陕西省人民医院2013年9月～2014年4月收治的慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者50例、异型增生患者50例、胃癌患者50例,取内镜下胃活检组织,并取正常胃黏膜活检组织30例作为对照组,分析Reprimo基因和hMLH1基因启动子区甲基化表达情况,比较各组患者间的差异。结果 患者组的胃黏膜组织中Reprimo基因和hMLH1基因启动子区甲基化阳性率显著高于正常组,差异有统计学意义(P＜0.05)。Reprimo基因启动子区甲基化阳性率:慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组28%(χ²=10.18,P＜0.05); 异型增生组56%(χ²=25.84,P＜0.05); 胃癌组62%(χ²=30.36,P＜0.05); hMLH1基因启动子区甲基化阳性率:慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组20%(χ²=4.39,P＜0.05); 异型增生组44%(χ²=15.13,P＜0.05); 胃癌组48%(χ²=17.41,P＜0.05),检测的特异度高。结论 Reprimo和hMLH1基因甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值很高,特异度高,是一种有效的诊断方式,在患者的临床诊断方面拥有广阔的治疗前景。     

胎膜早破产妇血清SFRP5，TIMP-1 和HMGB1 水平与并发组织学绒毛膜羊膜炎的相关性研究

目的　探讨胎膜早破（premature rupture of membranes,PROM）产妇血清分泌型卷曲相关蛋白5（secretedfrizzled-related protein-5,SFRP5）、基质金属蛋白酶组织抑制剂 1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP- 1）和高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1,HMGB1）水平与组织学绒毛膜羊膜炎（histologic chorioamnionitis,HCA）的关系。方法　选择2019 年6 月～ 2021 年8 月河北生殖妇产医院产科收治的72 例足月PROM 并发HCA 产妇（HCA 组）,120 例足月PROM 未发生HCA 产妇（非HCA 组）和51 例足月妊娠未发生PROM 产妇（对照组）。检测血清SFRP5,TIMP-1 和HMGB1 水平,分析其与PROM 产妇发生HCA 的关系。绘制受试者工作特征（ROC）曲线,分析SFRP5,TIMP-1 和HMGB1 诊断PROM 产妇发生HCA 的价值。结果　HCA 组血清SFRP5（7.53±1.42 mg/L）和TIMP-1（102.35±16.67 ng/ml ）水平低于非HCA 组（10.23±2.11 mg/L,185.23±29.42 ng/ml）和对照组（15.23±3.06mg/L,242.13±32.65 ng/ml）,差异均有统计学意义（F =187.726, 423.352,均P ＜ 0.05）;血清HMGB1 水平（10.25±3.26ng/ml）高于非HCA 组（6.02±1.41 ng/ml）和对照组（3.06±0.81 ng/ml）,差异有统计学意义（F=191.968,P ＜ 0.05）。多因素Logistic 回归分析示PROM 破膜时间≥ 48h[OR=2.208,95 ％ CI=1.466 ～ 3.326）], 阴道检查次数≥ 3 次[OR=1.540,95％ CI=1.206 ～ 1.968）],SFRP5 ＜ 7.53mg/L[OR=1.657,95％ CI=1.220 ～ 2.250）],TIMP-1 ＜ 102.35ng/ml[OR=1.826,95 ％ CI=1.275 ～ 2.613）] 和HMGB1 ≥ 10.25ng/ml[OR=1.809,95 ％ CI=1.237 ～ 2.647] 是PROM 产妇发生HCA 的危险因素（均P ＜ 0.05）。SFRP5,TIMP-1 和HMGB1 诊断足月PROM 产妇发生HCA 的曲线下面积分别为0.707,0.731 和0.747,联合诊断曲线下面积为0.933,高于单独指标（Z=5.822,5.611,5.274,均P=0.000）。结论　PROM 产妇血清SFRP5 和TIMP-1 水平降低,HMGB1 水平升高,且与HCA 发病密切相关。SFRP5,TIMP-1 和HMGB1 可作为HCA 诊断的生物标志物。     

结直肠癌组织中RREB1和ANKRD1的表达与临床病理特征和预后的相关性研究

目的 探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织ras反应元件结合蛋白1 (ras-responsive element binding protein 1,RREB1),ankyrin重复结构域1 (ankyrin repeat domain 1,ANKRD1)的表达及与临床病理特征和预后不良的关系。方法 选取2013年1月～2016年12月复旦大学附属中山医院厦门医院收治的105例CRC患者,应用免疫组织化学SP法检测CRC患者癌组织和癌旁组织RREB1和ANKRD1蛋白表达,分析RREB1和ANKRD1蛋白表达与患者临床病理特征的关系,患者均随访5年,比较不同RREB1和ANKRD1表达患者的预后情况,并分析CRC患者预后不良的影响因素。采用Spearman相关系数分析RREB1与ANKRD1表达的相关性。结果 CRC癌组织RREB1蛋白阳性率(59.05%)显著高于癌旁组织(27.61%),差异有统计学意义(χ²=21.120,P=0.000)。CRC癌组织ANKRD1蛋白阳性率(31.43%)显著低于癌旁组织(60.95%),差异有统...     

β-连环蛋白和过氧化物酶体增殖物激活受体γ在肝癌中的表达及意义

目的 探讨γ-连环蛋白、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在肝癌组织中的表达及意义.方法 利用组织芯片技术构建肝癌组织芯片,采用免疫组织化学SP法检测49例肝癌组织及相应癌旁组织、6例正常肝组织中β-连环蛋白、PPART蛋白的表达,分析PPARγ与分化程度等临床和病理指标的关系及β-连环蛋白与PPARγ的关系.结果 49例肝癌组织中β-catenin异常表达34例(69.39%);癌旁组织中异常表达24例(48.98%);6例正常肝组织中表达均正常;差异有统计学意义(精确概率法,P=0.001).49例肝癌组织中PPARγ表达阳性25例(51.02%),癌旁组织中15例阳性(30.61%),6例正常肝组织中未见表达,差异有统计学意义(精确概率法,P=0.016).肝癌患者不同年龄、肿瘤大小、血清甲胎蛋白水平、门/腔静脉癌栓有无、HBsAg感染与否的PPAR-γ表达程度差异无统计学意义(χ2值分别为0.214、3.201、0.046、3.201,P均>0.05);不同分化程度的PPARγ表达程度差异有统计学意义(χ22=4.693,P<0.05).β-catenin异常表达与PPARγ阳性表达相关(χ2=5.130,P<0.05).结论 异常表达的β-catenin可能参与肝癌的形成.PPARγ蛋白在肝癌组织中呈高表达,其表达与肝癌病理分化有关,检测PPARγ蛋白对诊断肝癌、判断其恶性程度及预后均有一定参考价值.     

宫颈脱落细胞中PAX1 和SOX1 基因甲基化对宫颈癌实验诊断的临床研究

目的 检测宫颈脱落细胞中配对盒家族基因1(paired box 1，PAX1)和性别决定区域Y 盒蛋白1(sexdetermining region Y box 1，SOX1)甲基化的状态及表达水平，并分析其对宫颈病变及宫颈癌(cervical cancer, CC)的诊断价值。方法 前瞻性选取2019 年1 月~ 2021 年12 月在阜阳市临泉县人民医院经病理检查确诊的58 例宫颈癌患者为宫颈癌(CC)组，35 例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions, H-SIL)患者为H-SIL组，33 例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions, L-SIL)患者为L-SIL 组，50 例同期行健康体检的正常人群为Control 组。分别取其宫颈脱落细胞，采用甲基化特异性实时定量PCR 检测所有研究对象宫颈细胞中PAX1 和SOX1 甲基化状态和甲基化水平，并分析其甲基化状态与宫颈癌患者临床病理参数之间的关系。根据甲基化水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线，根据曲线下面积(area under curve，AUC)分析PAX1 和SOX1 甲基化水平对宫颈病变及宫颈癌的诊断价值。结果 L-SIL 组患者PAX1 和SOX1 基因甲基化发生率分别为27.3% 和21.2%，H-SIL组患者PAX1 和SOX1 基因甲基化发生率分别为34.3% 和25.7%，CC 组患者PAX1 和SOX1 基因甲基化发生率分别为82.8% 和77.6%，显著高于Control 组(0.0%, 4.0%)，差异均有统计学意义(F=53.805，46.228，均P ＜ 0.001)。Control 组、L-SIL 组、H-SIL 组和CC组患者PAX1基因甲基化水平分别为1.86±0.64，1.55±0.28，1.46±0.30 和0.98±0.21，SOX1 基因甲基化水平分别为1.57±0.35，1.22±0.39，1.13±0.22 和0.82±0.17，各组间差异均有统计学意义(F=5.230，4.764，均P ＜ 0.05)。PAX1 和SOX1 基因甲基化状态均与淋巴结转移有明显相关性，差异有统计学意义(χ2=4.125，5.428，均P ＜ 0.05)，与年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型、分化程度及WHO 病理分级等无相关性，差异均无统计学意义(χ2=0.168~2.968，均P ＞ 0.05)。PAX1 甲基化水平诊断L-SIL，H-SIL 和CC 时对应AUC分别为0.645，0.703和0.917，SOX1 甲基化水平诊断L-SIL，H-SIL 和CC 时对应AUC 分别为0.604，0.689 和0.850。结论 宫颈脱落细胞中PAX1 和SOX1 基因甲基化状态与宫颈癌患者淋巴结转移有关，且其甲基化水平对宫颈癌具有较高的诊断价值。     

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因表达及启动子区甲基化状态研究简

本研究通过对急性白血病病人及体外肿瘤细胞株的DNA甲基化及基因表达的实验,探讨死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase,DAPK）基因在急性白血病中的表达情况及其启动子区域甲基化的状态,并分析两者之间的相关程度.应用RT-PCR检测DAPK基因在白血病细胞及正常骨髓细胞中的表达;用巢式甲基化特异性PCR（n-MSP）法检测急性白血病患者及细胞株DAPK基因启动子甲基化状况;从第二轮巢式MSP扩增出的随机产物中挑选2个随机引物,交予专业机构克隆后进行序列分析.结果表明：DAPK基因在10例正常对照者骨髓标本中均有表达,DAPKmRNA在急性白血病病人骨髓标本中表达平均值为0.61 ±0.40,低于正常对照者,差异有显著性（P＜0.05）,其中52.94％（9/17例）的急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本DAPKmRNA表达降低或缺失,急性髓系白血病病人数据为41.18％ （42/102）;细胞株U-937显示基因表达正常,HL-60表达缺失;102例急性髓系白血病病人骨髓标本中33例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为32.4％（33/102）;17例急性淋巴细胞白血病病人骨髓标本中8例存在DAPK启动子区甲基化,甲基化率为47％ （8/17）;7例正常人骨髓标本DAPK启动子区均为非甲基化;细胞株U-937 DAPK启动子区非甲基化,HL-60 DAPK启动子区甲基化.ALL组与AML组患者骨髓细胞DAPKmRNA表达与其启动子甲基化均呈显著负相关（ALL组r=-0.855,P＜0.05;AML组r=-0.343,P＜0.05）,提示两者有密切的关联.结论：急性白血病患者中DAPK基因启动区甲基化与其mRNA的异常表达或失表达有关.     

DNMT3A基因对非M3型急性髓系白血病患者预后的预测价值

目的通过分析非M3型急性髓系白血病(AML)患者的临床和实验室资料,进一步阐明DNMT3A基因突变在非M3型AML患者预后中的意义及其影响AML发生发展的可能机制。方法采用R语言3.5.1版本RTCGAToolbox包下载癌症基因组图谱数据库180例非M3型AML患者临床及突变信息,数据为开放性数据。将患者按照突变状态进行分组,比较各组患者外周血白细胞计数、骨髓原始细胞比例、无事件生存期以及总体生存期有无差别。将患者按照年龄分为<60岁组和≥60岁组,使用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线,并运用Log-rank检验进行<60岁和≥60岁患者、DNMT3A突变组及野生组患者生存率的比较。采用Cox比例风险模型进行DNMT3A突变和其伴随突变及年龄分层等因素对患者总体生存期的单因素和多因素分析。结果共纳入非M3型AML患者180例,DNMT3A突变组与野生组患者临床特征比较发现突变组白细胞计数显著高于野生组(Z=-2.606,P=0.009),且DNMT3A突变多见于中危患者。值得注意的是,DNMT3A突变常伴随FLT3(P=0.025)、NPM1(P<0.001)、IDH1(P=0.002)突变的发生,且DNMT3Awt/FLT3wt组无事件生存期显著高于DNMT3Amut/FLT3mut组(11.00个月vs 6.15个月,P=0.005),而与DNMT3Amut/FLT3wt、DNMT3Awt/FLT3mut组之间的差异无统计学意义。Cox多因素分析结果显示,高龄是AML患者总体生存的独立危险因素(HR=2.974,95%CI:1.966~4.500,P<0.001);另外,DNMT3A R882突变是AML患者预后不良的独立预测因子(HR=1.937,95%CI:1.179~3.182,P=0.009)。结论高龄(≥60岁)和DNMT3A R882突变为预后不良的独立预测因子。DNMT3Amut/FLT3mut亚型与DNMT3Awt/FLT3wt、DNMT3Amut/FLT3wt、DNMT3Awt/FLT3mut相比,临床预后更差。     

儿童急性淋巴细胞白血病危险度相关基因表达谱的初步研究

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿的基因表达谱,探索与儿童ALL危险度相关的新基因.方法 以3例初诊危险度为标危调整后转入高危(B组)和3例初诊和调整后危险度均为标危(A组)的ALL患儿为观察组,3例特发性血小板减少性紫癜患儿为正常对照组,应用Illumina Human-6全基因组表达谱微珠芯片研究B组和A组患儿的差异性基因.通过实时定量RT-PCR,以82例ALL患儿为观察组,21例骨髓象正常患儿为对照组,以ABCC4、BCL11A、TOP2A 3个差异性基因为目的 基因进行验证研究.结果 ①B组与A组患儿有19个基因差异性表达,包括ABCC4、BCL11A 等14个上调基因和TOP2A等5个下调基因.②实时定量RT-PCR检测结果显示ABCC4和BCL11A基因的相对表达量观察组明显高于对照组(P＜0.01);高危组明显高于标危组(P＜0.05);TOP2A基因的相对表达量观察组明显低于对照组(P＜0.01);高危组明显低于标危组(P＜0.05).③与临床指标的相关性研究结果显示,缓解组ABCC4基因的相对表达量明显低于未缓解组(P＜0.05);各组间BCL11A基因的相对表达量差异均无统计学意义(P＞0.05);缓解组TOP2A基因的相对表达量明显高于未缓解组,泼尼松试验敏感组明显高于不敏感组(P＜0.05).结论 儿童ALL的发病及耐药是多基因共同参与的结果,研究ALL患儿的基因表达谱对儿童ALL的耐药机制、预后判断、早期干预和靶向治疗等具有重要意义.

Abstract：

Objective To explore genes associated with risk classification of childhood acute lymphoblastic leukemia(ALL) by gene chip technology. Methods Group A and B were both composed of three newly diagnosed ALL cases with standard risk. After re-evaluation, group B was relegated to high-risk. The control group was composed of three idiopathic thrombocytopenic purpura(ITP) patients. The gene expression profiles of group A and B were studied by Illumina Human-6 Beadchip. Eighty-two ALL patients were selected as the experimental group and 21 with normal bone marrow as control group for real-time quantitative RT-PCR (RQ-PCR). Results ①There were 19 genes expressed differently between group B and A, including 14 upregulated as ABCC4 and BCL11A, 5 down-regulated genes as TOP2A. ②ABCC4 and BCL11 A were validated by RQ-PCR and their expression level was higher in the high risk group than in the standard risk group( P ＜0.05 ). The gene expression level in the group A and B was higher than that in the normal control group( P ＜ 0.01 ). TOP2A was also validated by RQ-PCR and its expression level in the high risk group was lower than that in the standard risk group(P ＜0.05). The gene expression level in the groups A and B was lower than that in the normal control group and the difference was statistically significance( P ＜ 0. 01 ). ③There was a significant difference in the expression level of ABCC4 between the remission and unremission patients ( P ＜0.05 ). There was no significant difference in the expression level of BCL1 1A between different clinical indicators (P ＞ 0.05). There was significant difference in the expression level of TOP2A between remission and predtnisone good responder groups ( P ＜ 0.05 ). Conclusions Fourteen genes studied were involved in the pathogenesis and drug resistance mechanism in childhood ALL patients. Investigation of gene expression pro file will be helpful for predicting drug resistance, prognosis, early intervention and target therapy in childhood ALL.