miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

缺血性脑卒中患者血清miR-155和PDCD4mRNA表达水平与颈动脉支架成形术后再狭窄的相关性研究

目的　了解缺血性脑卒中（cerebral ischemic stroke,CIS）患者血清微小RNA-155（microRNA-155,miR-155）、程序性细胞死亡因子4（programmed cell death factor 4,PDCD4）信使RNA（messenger RNA,mRNA）表达水平与颈动脉支架成形术（carotid artery stenting,CAS）后再狭窄的相关性。方法　选择2016 年2 月～ 2020 年7 月在凉山彝族自治州第二人民医院确诊的CIS 患者120 例作为CIS 组,同期选取健康体检者125 例为对照组。实时荧光定量PCR 法测定CIS 组术前和术后24 h,对照组体检时血清miR-155 和PDCD4 mRNA 表达水平;术后180 天对CIS 患者进行脑多普勒超声检查和颈动脉彩超检查,观察CIS 患者颈动脉狭窄程度、不稳定斑块数量、斑块长度及斑块厚度,测定患者血浆粘度、全血黏度、红细胞比容和纤维蛋白原水平;采用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析血清miR-155 和PDCD4 mRNA 表达水平对CIS 患者行CAS 术后再狭窄的诊断价值。结果　与对照组相比,CIS 组术前血清miR-155 表达水平显著降低（0.31±0.06 vs 1.01±0.20）（q=45.189,P=0.000）,CIS 组术前（2.23±0.45 vs 1.03±0.20）和术后24 h（1.19±0.29 vs 1.03±0.20）血清PDCD4 mRNA 表达水平均显著升高（q=40.422,5.390,均P=0.000）,差异均有统计学意义;与CIS 组术前相比,CIS 组术后24 h 血清miR-155 表达水平显著升高（0.97±0.21 vs 0.31±0.06）（q=42.179,P=0.000）,血清PDCD4 mRNA 表达水平显著降低（1.19±0.23 vs2.23±0.45）（q=34.680,P=0.000）,差异均有统计学意义;与未狭窄组相比,再狭窄组颈动脉狭窄程度（21.31±5.33vs 9.11±2.52）、术后24 h 血清PDCD4 mRNA 表达水平（2.18±0.54 vs 1.06±0.26）、不稳定斑块数量（5.51±1.27 vs2.87±0.71）、斑块长度（7.60±1.90mm vs 3.16±0.79mm）、斑块厚度（4.60±1.15mm vs 2.84±0.71mm）、血浆黏度（15.03±3.85mPa·s vs 11.01±2.75mPa·s）、全血粘度(5.84±1.46mPa·s vs 3.71±0.92mPa·s）、红细胞比容（58.98%±17.74%vs 46.51%±11.62%）和纤维蛋白原（4.93±1.23g/L vs 3.01±0.75g/L）显著升高,差异均有统计学意义（t=4.277 ～ 17.874,均P<0.05）,术后24 h 血清miR-155 表达水平显著降低（0.36±0.09 vs 1.03±0.25）,差异有统计学意义（t=9.074,P=0.000）。ROC曲线结果表明,术后24 h血清miR-155和PDCD4 mRNA表达水平诊断CAS术后再狭窄的AUC分别为0.778（95% CI 为0.692~0.864）和0.838（95% CI 为0.749~0.926）。结论　血清miR-155 和PDCD4 mRNA 的异常表达与CIS病情及CAS 术后再狭窄联系密切,对CAS 术后再狭窄具有一定的诊断价值。     

子宫内膜癌组织中miR-3188和mTOR表达量与预后的相关性研究

目的　探究子宫内膜癌（endometrial carcinoma, EC）组织中微小核糖核酸-3188（miR-3188）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达量与预后的相关性。方法　前瞻性选取2016年1月至2018年4月在开滦总医院林西医院接受手术治疗的121例EC患者作为研究对象,并根据3年内是否复发将其分为复发组（n=32）和未复发组（n=89）。用实时荧光定量PCR法检测EC组织和癌旁组织中miR-3188表达量,用蛋白质免疫印迹法检测EC组织和癌旁组织中mTOR表达量。结果　EC组织中miR-3188相对表达量低于癌旁组织（0.60±0.14 vs 1.46±0.14）,EC组织中mTOR相对表达量高于癌旁组织（0.92±0.11比0.63±0.11）,差异均有统计学意义（t=48.995,19.348,均P=0.000）。不同浸润深度、是否淋巴结转移、是否子宫外转移、不同分化程度及不同FIGO分期的miR-3188和mTOR相对表达量比较,差异均有统计学意义（t=2.400~8.611,均P＜0.05）。未复发组的miR-3188相对表达量高于复发组（0.66±0.11 vs 0.45±0.08）,mTOR相对表达量低于复发组（0.88±0.10 vs 1.02±0.06）,差异均有统计学意义（t=11.220,9.229,均P=0.000）。COX回归分析结果显示分化程度高（HR=0.696,P=0.015）、miR-3188表达量高（HR=0.058,P=0.008）是EC预后的独立保护因素,FIGO分期高（HR=2.967,P=0.000）、mTOR表达量高（HR=1.162,P=0.035）是EC预后的独立危险因素。Pearson相关分析结果显示EC组织中miR-3188相对表达量与mTOR相对表达量呈负相关关系（r=-0.409,P=0.000）。结论　EC组织中miR-3188表达量低、mTOR表达量高与预后不良有关。     

miR-124 靶向调控CMTM6 增强CIK 对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的 研究细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer ,CIK）细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸（miRNA,miR）-124 在此过程中的调节作用及可能机制。方法 收集2017 年3 月～ 2019 年10 月鄂州市中心医院神经外科收治的30 例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR 法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL 跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6 (chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontainingfamily member 6,CMTM6) mRNA 表达量及相关性。诱导培养CIK 细胞后,分别与胶质瘤细胞C6 和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor 及阴性对照序列,通过CCK-8 实验检测CIK 细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124 与CMTM6 基因的靶向关系,qRT-PCR 和Western blot 检测胶质瘤细胞中miR-124,CMTM6 mRNA 及蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124 表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086) 显著降低,CMTM6 mRNA 表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089) 显著升高,差异有统计学意义（t=39.051,26.337,均P ＜ 0.001）,二者呈负相关（r2=0.262）。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic 转染及其与CIK 细胞共培养对C6(72.84%±3.81% vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18% vs 74.59%±3.47%),U87 细胞(71.93%±3.94% vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24% vs 76.28%±3.64%) 增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义（q=16.340,15.486,14.087, 13.886,均P ＜ 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-124 和CMTM6 具有明显的靶向关系。Western blot 结果显示,与转染阴性对照+CIK 组比较miR-124 mimic 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068) 显著降低,转染miR-124 inhibitor 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6 蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068) 显著增加,差异均有统计学意义（q=13.817,10.839, 7.327,17.558,均P ＜ 0.001）。结论 CIK 细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124 可通过靶向抑制CMTM6 增强CIK 细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。     

miR-25靶向作用FBXO33在肾透明细胞癌凋亡及预后的相关实验研究

目的探索miR-25与FBXO33在肾透明细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的相关性,并分析其与肾癌细胞凋亡及预后的关系。方法从肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中获取1998~2013年511例RCC芯片数据,Pearson检验分析miR-25和FBXO33表达的相关性;检测miR-25对构建的FBXO33 3'UTR野生型、突变型及空白对照荧光素酶报告基因中荧光素表达的影响;CCK8法检测瞬转miR-25 mimic,siRNA及对照序列对RCC细胞活力的影响;流式细胞术检测瞬转miR-25 mimic,siRNA及对照序列对RCC细胞凋亡的影响;TCGA数据库中筛选出miR-25与FBXO33表达负相关且具有随访的58例患者,分为miR-25低表达联合FBXO33高表达组(n=34)和miR-25高表达联合FBXO33低表达组(n=24)进行生存分析,采用Log-rank检验和Gehan-Breslow-Wilcoxon检验。结果 RCC组织中FBXO33与miR-25表达负相关(r=-0.161 1,Pearson检验)。与空白对照组相比,miR25可降低野生型组RLU至80.2%±2.6%,差异具有统计学意义(t=6.539,P=0.006);而突变序列组RLU为空白对照组的103.5%±8.4%,差异不具有统计学意义(t=0.041 3,P=0.968 4)。72 h细胞活力与空白对照组相比,miR-2 siRNA组提高32.7%±3.5%,差异具有统计学意义(P0.05);而miR-25 mimic组降低23.3%±1.7%,差异具有统计学意义(P0.05)。mimic-miR-25-3P与其对照组比较,早期凋亡率降低(8.83±0.09 vs 12.83±0.14),差异具有统计学意义(t=42.17,P=0.005);晚期凋亡率轻度升高(0.41±0.10 vs 0.33±0.15),差异无统计学意义(t=0.75,P=0.639);siRNA-miR-25-3p与其对照组比较,早期凋亡率升高(19.05±1.64 vs 13.68±0.78),差异具有统计学意义(t=5.12,P=0.006);晚期凋亡率轻度降低(0.56±0.10 vs 0.62±0.08),差异无统计学意义(t=0.83,P=0.376)。miR-25低表达同时FBXO33高表达患者(n=34)与miR-25高表达而FBXO33低表达者(n=24)相比生存率更高,差异具有统计学意义(采用Log-rank检验P=0.025 2,采用Gehan-Breslow-Wilcoxon检验P=0.004 9)。结论 miR-25可抑制肾癌FBXO33,提高细胞活性,抑制凋亡而降低患者预后。     

miR-335 通过下调Fra-1 表达抑制人乳腺癌细胞增殖机制的实验研究

目的　探讨微小核糖核酸（microRNA,miR）-335 对人乳腺癌细胞增殖能力的影响,以及其可能存在的机制。方法　体外培养乳腺癌细胞及正常乳腺组织细胞,检测miR-335 及Fros 相关抗原1(fros related antigent-1,Fra-1) 的表达量;体外转染miR-335 mimics 后,通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8) 检测细胞的增殖能力,检测Fra-1 的表达变化及下游细胞增殖相关蛋白分子基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor- C,VEGF-C) 的表达量;生物信息学预测及双荧光霉素报告基因验证Fra-1 为miR-335作用靶基因。结果　乳腺癌细胞中miR-335 的表达量（0.755±0.034）低于正常乳腺细胞（1.495±0.029）,Fra-1 蛋白的表达量（2..347±0.120）高于正常乳腺细胞（1.319±0.038）,差异均有统计学意义（t=0.075,4.191, 均P ＜ 0.001）。转染miR-335 mimic 后48,72 h 乳腺癌细胞增殖能力（0.881±0.062,0.887±0.082）低于对照组细胞（1.326±0.051,1.493±0.038）,差异均有统计学意义（t=44.096,59.307, 均P ＜ 0.001）;转染miR-335 mimic 后乳腺癌细胞中Fra-1的蛋白表达量（0.567±0.091）低于未转染细胞（2.347±0.204）,差异有统计学意义（t=3.763, P<0.001）;转染miR-335 mimic 后细胞中MMP-9（0.469±0.027）,VEGF-C（0.540±0.041）的蛋白表达量低于对照组（0.958±0.058,1.024±0.171）,差异均有统计学意义（t=1.953,7.856, 均P ＜ 0.001）;荧光霉素报告基因实验结果显示miR-335 下调Fra-1 启动子核心转录区域（-164 ～ -52nt）的转录活性。结论　miR-335 通过抑制MMP-9 和VEGF-C 的表达,并下调Fra-1 启动子转录活性,抑制了体外乳腺癌细胞的增殖。     

间质干细胞通过调控miR-92b修复顺铂诱导的急性肾损伤

目的探讨骨髓间质干细胞(BM-MSCs)修复顺铂诱导的急性肾损伤的分子机制。方法以6 mg/kg顺铂的剂量经腹腔注射大鼠体内,24 h后经尾静脉输注BM-MSCs(BM-MSCs组)或PBS(PBS组),以未注射顺铂者作为正常对照组;HE染色及免疫组织化学染色法检测BM-MSCs对肾损伤的修复情况;体外培养NRK-52E细胞并经顺铂作用6 h后,继续培养48 h(顺铂组)或与BM-MSCs共培养48 h(细胞组),未用顺铂处理的NRK-52E细胞作为对照组;qRT-PCR检测其miR-92b及其靶基因PTEN的表达水平,western blot检测其p-Akt蛋白的表达水平。结果 HE染色结果显示,BM-MSCs组的肾小管蛋白质管型明显少于PBS组,肾小管结构明显改善;免疫组织化学染色结果表明,BM-MSCs组的增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数[(131.0±14.4)个]明显高于PBS组[(42.2±6.1)个],差异有统计学意义(t=11.28,P0.01);qRT-PCR结果表明,体内试验中,与正常对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.11±0.78,1.01±0.21)相比,PBS组分别为4.64±1.06和0.61±0.2,差异有统计学意义(P0.05),BM-MSCs组分别为2.27±0.81和1.1±0.1,差异亦有统计学意义(P均0.05);体外实验中,与阴性对照组miR-92b和PTEN基因的表达水平(1.12±0.77,1.02±0.13)相比,顺铂组分别为7.64±0.72和0.58±0.2,差异有统计学意义(P均0.05),细胞组分别为4.38±0.50和1.15±0.23,差异亦有统计学意义(P均0.05);western blot检测结果显示,与顺铂组p-Akt蛋白的表达水平(0.96±0.18)相比,细胞组p-Akt蛋白表达水平为2.11±0.11,差异有统计学意义(P0.01)。结论 BM-MSCs能够修复顺铂诱导的急性肾损伤,可能通过下调miR-92b发挥作用。     

miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p 表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR 实验（qRT-PCR）检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p 相对表达;构建miR-505-3p 过表达、c-MYC 过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8 法,克隆斑点形成实验、Transwell 侵袭/ 迁移实验检测miR-505-3p 和c-MYC 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p 对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p 和c-MYC 的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot 检测miR-505-3p 和c-MYC 对Wnt/β-catenin 通路关键蛋白表达的影响。结果 临床胃癌组织中miR-505-3p 表达水平较正常癌旁组织显著下调（0.92±0.37 vs 1.74±0.59）,差异有统计学意义（t=3.723,P ＜ 0.01）。胃癌细胞系MGC803（1.12±0.35）,AZ521（2.31±0.24）和HGC-27（2.28±0.43）中miR-505-3p 相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1（4.62±0.79）明显降低,差异有统计学意义（F=26.109,P ＜ 0.001）。miR-505-3p 过表达组细胞增殖（0.92±0.27）、克隆形成（51.67±21.75）、迁移（43.25±15.47 ）、侵袭（38.53±14.76）能力较NC组（1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.131 ～ 7.166,均P ＜ 0.05）;miR-505-3p 过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC 是miR-505-3p 的靶基因,miR-505-3p 靶向负调控c-MYC。c-MYC 过表达组细胞增殖（2.72±0.68）、迁移（147.15±20.36）、侵袭（145.46±22.73）能力较NC 组（1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94）明显增高,差异均有统计学意义（t=2.455 ～ 4.456,均P ＜ 0.05）;c-MYC 过表达可逆转miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p 过表达组Wnt（0.46±0.07 ）,β-catenin（0.50±0.05）蛋白相对表达水平明显低于NC 组（1.01±0.02,1.02±0.02）,差异均有统计学意义（t=8.139,7.342,均P ＜ 0.001）;过表达c-MYC 能够逆转miR-505-3p 对Wnt 和β-catenin 蛋白表达的抑制作用。结论 胃癌中miR-505-3p 显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC 表达介导Wnt/β-catenin 信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。     

miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制研究

目的探讨miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制。方法收集2017年1月—2019年6月证实的胃癌组织和癌旁组织各70例,采用qRT-PCR检测miR-100-5p在胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45和人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中的表达,分析miR-100-5p表达与胃癌患者临床病理参数关系。选择miR-100-5p低表达的胃癌细胞系MKN45,转染miR-100-5p mimic,分为NC组和miR-100-5p mimic组,采用MTS实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测两组细胞转移能力;采用不同浓度奥沙利铂处理两组细胞48 h, MTS实验和流式细胞凋亡实验检测两组细胞对奥沙利铂化疗敏感性;采用Western blotting检测两组细胞中ERK1/2和pERK1/2蛋白表达。结果 miR-100-5p相对表达量胃癌组织低于癌旁组织,胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45均低于人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1,差异有统计学意义(P0.01)。miR-100-5p表达与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期和化疗效果相关(P0.05或P0.01)。细胞中miR-100-5p相对表达量miR-100-5p mimic组高于NC组,MKN45细胞增殖能力及MKN45细胞穿膜细胞数miR-100-5p mimic组低于或少于NC组,MKN45细胞对奥沙利铂化疗敏感性miR-100-5p mimic组较NC组增加,细胞中pERK1/2蛋白表达miR-100-5p mimic组低于NC组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 miR-100-5p可能通过调控ERK1/2信号通路抑制胃癌细胞增殖、转移和对奥沙利铂化疗耐药,是治疗胃癌的潜在靶标。     

miR-451a/KIF2A轴对食管鳞状细胞癌顺铂耐药的影响

目的 探讨miR-451a通过调控PI3K/Akt通路对食管鳞状细胞癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药的作用及其可能机制.方法 人正常食管鳞状上皮细胞系Het-1A、人食管鳞状细胞癌细胞系Eca109、人食管鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系Eca109/DDP,采用实时荧光定量PCR法检测3种细胞miR-451a相对表达...     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人食管癌细胞株Eca109的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人食管癌细胞株Eca109生长的影响.方法 用不同浓度的(10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L)特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR于不同作用时间(24c168 h)处理人食管鳞癌细胞株Eca109,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定5-aza-CdR对Eca109细胞生长的影响,借助倒置显微镜观察细胞的形态变化,结合流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期.结果 5-aza-CdR不同药物浓度组(10-7～10-4 mol/L)对细胞生长抑制率的差异有统计学意义(F=60.95,P=0.000);不同作用时间下(24～96 h)细胞生长抑制率差异也有统计学意义(F=160.06,P=0.000),且10-4 mol/L 5-aga-CdR干预96 h对Eca109细胞的生长抑制率达(15.70±0.75)%,作用最明显;形态学观察显示:癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;同时FCM分析结果显示,在二倍体峰前出现凋亡峰,G0/G1,期细胞随着药物浓度增大而增多,经10-4 mol/L 5-aza-CdR处理96 h时,G0/G1,期细胞高达(89.70±0.91)%,而S期细胞随着药物浓度增大而减少,经10-4 mol/L 5-aza-CdR处理96 h时,S期细胞仅为(9.10±0.48)%.不同浓度药物作用下,G0/G1期细胞比率的差异有统计学意义(F=6479.46,P=0.000),S期细胞比率差异也有统计学意义(F=4222.26,P=0.000).结论 5-aza-CdR可通过调控细胞周期和促进细胞凋亡的途径抑制Eca109细胞的生长.     

miRNA-34b 对子宫内膜癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的 探究miR-34b 对子宫内膜癌(endometrial cancer) 凋亡、迁移、侵袭的影响及对Jag1/Cyclin D1 信号通路的影响。方法 将人子宫内膜癌细胞AN3CA 细胞分为对照组、NC 组和miR-34b 组。通过流式细胞技术、Transwell实验分别检测各组细胞凋亡、迁移能力和侵袭能力;通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)及Westernblot 检测各组细胞Jagged-1 蛋白(Jag1)及其靶基因G1/S- 特异性周期蛋白-D1(Cycling D1)mRNA和蛋白的表达水平;通过裸鼠荷瘤实验分析miR-34b 对肿瘤生长的影响。结果 对照组、NC 组和miR-34b 组细胞凋亡比例分别为5.6%±0.12%,5.80%±0.22% 和19.4%±0.51%。miR-34 组细胞凋亡比例高于对照组,差异具有统计学意义(t=8.325,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞迁移数分别为322.15±13.71 个,327.67±9.14 个和162.19±7.49 个,miR-34b 组细胞迁移数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.945 , P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞侵袭数分别为357.6±14.11 个,364.05±16.12 个和157.58±8.77 个,miR-34b 组细胞侵袭数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.643,P ＜ 0.01);qPCR 结果表明对照组、NC 组和miR-34b 组Jag1 mRNA 表达为2.75±0.21,2.67±0.14 和1.19±0.19,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.434,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.71±0.11,1.77±0.24 和0.69±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.895,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组Cyclin D1mRNA 表达为1.29±0.13,1.32±0.11 和0.59±0.13,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=9.124,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.81±0.18,1.79±0.14和1.29±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.227,P ＜ 0.01);裸鼠荷瘤实验表明过表达miR-34b 裸鼠肿瘤生长曲线与对照组差异有统计学显著性意义,并且肿瘤体积显著低于对照组(t=8.184,P ＜ 0.01)。结论 miR-34b 可以促进人子宫内膜癌细胞的凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,其机制与Jag1/Cyclin D1 信号通路活性的抑制相关。     

miR-146a靶向调控MIF基因对胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对胶质瘤细胞增殖的影响。方法回顾性收集2017年6月至2019年7月济南市人民医院收治的经手术病理证实的胶质瘤患者36例,取胶质瘤组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-146和MIF表达水平。体外培养U87胶质瘤细胞系,检测U87中miR-146a水平,并将U87细胞株分为转染miR-146a模拟物组(miR-146a mimic组)和miR-146阴性对照组(NC组)。采用双荧光素酶检测系统和集落形成实验分析miR-146a与MIF 3’UTR基因靶向关系。采用RT-PCR检测U87细胞转染miR-146a mimic和NC后,MIF mRNA和蛋白表达水平。结果脑胶质瘤组织miR-146a水平为0.30±0.13,显著低于癌旁组织(0.63±0.19),MIF水平为0.54±0.08,显著高于癌旁组织(0.41±0.15),差异均有统计学意义(P <0.05)。miR-146a mimics+pGL3-MIF 3’UTR-Wt共转染组荧光信号为0.43...