槲皮素对SW620细胞迁移和侵袭的影响

目的探索槲皮素对结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响。方法不同浓度(0、25、50、100μmol/L)槲皮素处理SW620细胞后,MTT法检测细胞存活率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,RT-PCR、Western blot分别检测STAT3 mRNA、蛋白表达。结果槲皮素呈剂量和时间依赖性地降低SW620细胞存活率、STAT3 mRNA表达。最佳浓度、处理时间分别为50μmol/L、48 h,细胞迁移和侵袭显著降低(P<0.05)。敲低STAT3,SW620细胞存活率、迁移和侵袭数目明显减少(P<0.05)。STAT3过表达显著逆转槲皮素对细胞存活率、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论槲皮素可通过调控STAT3表达来抑制SW620细胞迁移和侵袭。     

异甘草素通过调节VEGFA/NF-κB通路抑制高糖诱导的ARPE-19细胞增殖、迁移

目的探讨异甘草素通过调节VEGFA/NF-κB通路抑制高糖诱导的ARPE-19细胞增殖、迁移。方法异甘草素(30、60、120μmol/L)处理ARPE-19细胞24 h后,加入25 mmol/L葡萄糖24 h;将si-con、si-VEGFA质粒转染至ARPE-19细胞,加入25 mmol/L葡萄糖24 h;异甘草素(60μmol/L)处理ARPE-19细胞24 h后,将pcDNA-con、pcDNA-VEGFA质粒转染,加入25 mmol/L葡萄糖24 h。MTT检测细胞存活率;Western blot检测基MMP2、MMP9、VEGFA、CyclinD1、p-p65、p-IκBα蛋白表达;Transwell实验检测细胞迁移;PT-PCR检测VEGFA mRNA表达。结果高糖诱导的人视网膜上皮细胞ARPE-19存活率升高,MMP2、MMP9蛋白表达升高,细胞迁移数量升高,VEGFA蛋白和mRNA表达升高(P0.05)。异甘草素处理后高糖诱导的ARPE-19细胞中细胞存活率降低,MMP2、MMP9蛋白表达降低,细胞迁移数量降低,VEGFA蛋白和mRNA表达降低(P0.05);低表达VEGFA使高糖诱导的ARPE-19细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达降低,细胞存活率降低,细胞迁移数量降低(P0.05)。异甘草素处理后高糖诱导的ARPE-19细胞中p-p65、p-IκBα表达降低(P0.05);过表达VEGFA逆转了异甘草素对高糖诱导的p-p65、p-IκBα表达的抑制作用。结论异甘草素可抑制高糖诱导的ARPE-19细胞增殖和迁移,其机制可能与VEGFA有关。     

款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探索款冬花多糖通过miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法 MTT检测款冬花多糖(10、20、40、80、160 mg/L)对食管癌细胞Eca109细胞存活的影响;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测MMP2、MMP9、Cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测miR-99a表达。在Eca109细胞中转染miR-99a、anti-miR-99a并使用80 mg/L款冬花多糖进行处理,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果款冬花多糖抑制Eca109细胞增殖、迁移、侵袭及MMP2、MMP9、CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达(P0.05),促进miR-99a表达(P0.05)。过表达miR-99a抑制Eca109细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达,减少细胞存活率、迁移细胞数和侵袭细胞数(P0.05)。低表达miR-99a部分逆转款冬花多糖对细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达的抑制作用。结论款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

木香烃内酯通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移

目的:探讨木香烃内酯对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:不同浓度(10、20、40μmol/L)木香烃内酯作用结直肠癌细胞SW480,并设空白对照组、溶剂对照组和紫杉醇组,MTT和平板克隆实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot检测与增殖、凋亡、侵袭和迁移相关蛋白、LASP1、PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。应用Lipofectamine~(TM)2000将真核表达载体pCDNA-LASP1和空载体pCDNA导入SW480细胞,观察LASP1过表达后木香烃内酯对SW480增殖、凋亡、迁移和侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。结果:与空白对照组比较,40μmol/L木香烃内酯组SW480细胞活力、细胞迁移和侵袭数量显著降低、凋亡率显著升高,CDK1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、LASP1、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达显著降低,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著升高。空白对照组和溶剂对照组各检测指标差异无统计学意义(P0.05)。LASP1过表达可逆转木香烃内酯对SW480细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K、AKT、mTOR蛋白表达的抑制作用,并逆转木香烃内酯对SW480细胞的凋亡促进作用。结论:木香烃内酯可能通过抑制PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。     

知母皂苷AⅢ调控miR-494对原发性皮肤黑色素瘤生物学行为的影响

目的:探讨知母皂苷AⅢ调控miR-494对原发性皮肤黑色素瘤增殖、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人黑色素瘤A375细胞,分别用0、4、8、16 μmol/L的知母皂苷AⅢ处理A375细胞24 h。将miR-NC、miR-494转染至A375细胞,作为miR-NC、miR-494组; 将anti-miR-NC、anti-miR-494转染至A375细胞,再用知母皂苷AⅢ(16 μmol/L)干预,作为anti-miR-NC+16 μmol/L组、anti-miR-494+16 μmol/L组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况; 蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达; Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况; 实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测细胞miR-494表达水平。结果:与对照组比较,8、16 μmol/L中、高剂量组的知母皂苷AⅢ明显下调组细胞A值、迁移数量和侵袭数量以及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。与对照组比较,8 μmol/L中剂量组、16 μmol/L高剂量组的知母皂苷AⅢ明显上调细胞miR-494表达水平(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-494组细胞A值、迁移数量和侵袭数量以及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+16 μmol/L组比较,anti-miR-494+16 μmol/L组细胞miR-494表达水平显著降低; 细胞A值、迁移数量和侵袭数量以及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:知母皂苷AⅢ上调miR-494抑制原发性皮肤黑色素瘤增殖、迁移和侵袭。     

姜黄素联合紫杉醇在体内外可协同降低乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力并降低MMP9表达

目的:观察姜黄素联合紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力的抑制作用及对MMP9体内外表达的影响。方法:采用细胞划痕实验检测姜黄素联合紫杉醇对MDA-MB-231细胞迁移的影响;采用Western blotting检测MDA-MB-231细胞和MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤组织中MMP9蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测MMP9 mRNA的表达。结果:在体外细胞实验中,姜黄素10μmol/L组、紫杉醇0.001μmol/L组可分别降低MDA-MB-231细胞的迁移能力,并可降低MMP9蛋白和mRNA的表达,10μmol/L姜黄素和0.0005μmol/L紫杉醇联合药物组可协同减弱细胞的迁移能力并降低MMP9的表达。裸鼠移植瘤模型实验中,姜黄素100mg/kg组、紫杉醇10mg/kg组,可分别降低MMP9蛋白和mRNA的表达,姜黄素100 mg/kg与紫杉醇5mg/kg联合组可协同降低其表达。结论:姜黄素联合紫杉醇在体内外可协同降低乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力。     

汉黄芩素调控胆绿素还原酶A对结肠癌细胞的抑制作用

目的探讨汉黄芩素对结肠癌HT29及SW620细胞的抑制作用及可能机制。方法取筛选出的结肠癌HT29及SW620细胞,分别予不同质量浓度汉黄芩素(0、20、40、80、160μg/mL)及5-FU(12.5μg/mL)干预后,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测凋亡因子BAX、Bcl-2及EMT相关蛋白表达,Western blot、RT-PCR检测BLVRA蛋白及mRNA表达。结果汉黄芩素能抑制结肠癌HT29及SW620细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性(P0.01);促进细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白的表达,促进BAX蛋白的表达,抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭能力,呈浓度依赖性(P0.01);汉黄芩素能够增加E-Cadherin的表达,降低Vimentin及snail蛋白的表达,抑制EMT进程,呈浓度依赖性(P0.05,P0.01);不同浓度汉黄芩素均能降低两种CRC细胞中BLVRA的蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论汉黄芩素能够抑制结肠癌HT29及SW620细胞的增殖及迁移和侵袭能力,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤EMT进程,且随着药物浓度升高其抑制作用呈现出时间和浓度依赖性,这些作用可能是通过下调胆绿素还原酶A(BLVRA)的表达发生。     

半枝莲对人结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的探索半枝莲对人结肠癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、12.5、25、50、75μg/mL)的半枝莲氯仿极性部位提取物(ECSB)干预SW620细胞后,MTT法检测细胞活力,DAPI染色观察SW620细胞的凋亡,流式细胞术检测SW620细胞的周期,蛋白质印迹法(Western blot)检测SW620细胞中PCNA、Survivin的表达。结果ECSB显著抑制了SW620细胞的活力(P<0.01),并呈剂量性依赖;DAPI染色显示ECSB处理SW620细胞24 h后出现明显的细胞核固缩,核碎裂形成,提示ECSB促进SW620细胞的凋亡;流式细胞术检测结果显示在50μg/mL ECSB干预SW620细胞48 h后,S期明显增高,提示ECSB抑制SW620细胞的增殖;Western blot检测结果显示各浓度的ECSB均能显著抑制SW620细胞的PCNA表达,75μg/mL ECSB能显著抑制SW620细胞的Survivin表达。结论ECSB促进人结肠癌细胞株SW620的凋亡,抑制其增殖,其可能机制是通过下调PCNA、Survivin的表达。     

健脾消癌方对转化生长因子-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响

目的观察健脾消癌方对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响,探讨其防治结直肠癌的可能机制。方法体外培养结直肠癌细胞SW620。CCK-8法和Transwell小室实验测定细胞增殖、侵袭及迁移能力,qRT-PCR和Western blot检测E-cadherin和Vimentin的基因和蛋白表达。结果健脾消癌方药物血清能抑制SW620细胞体外增殖、迁移和侵袭能力;与空白组比较,TGF-β1诱导组细胞E-cadherin表达水平下降,Vimentin表达水平升高(P0.05);与TGF-β1诱导组比较,健脾消癌方+TGF-β1组细胞E-cadherin表达水平升高,Vimentin表达水平下降(P0.05)。结论健脾消癌方可通过调控TGF-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化过程,抑制结肠癌的生长、侵袭和迁移能力,达到防止结直肠癌复发和转移的目的。     

黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用研究

目的:研究黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用及相关机制。方法:用结肠癌HT-29细胞作为研究对象。以50、100、200 μmol/L黄芩素、5 μmol/L伊立替康分别处理结肠癌HT-29细胞。MTT实验和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆形成能力; Western blotting法实验检测Src激酶、Yes相关蛋白(YAP)及大肿瘤抑制因子激酶1(LATS1)磷酸化蛋白表达; 免疫荧光实验检测细胞YAP表达分布。结果:50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均能增加伊立替康对HT-29细胞的增殖和克隆抑制作用。50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均可下调结肠癌HT-29细胞p-Src蛋白表达,上调p-YAP、p-LATS1蛋白表达。200 μmol/L黄芩素组能增加结肠癌HT-29细胞的细胞质YAP分布。结论:黄芩素通过抑制Src-YAP信号通路增强伊立替康对结肠癌细胞的抑制作用。     

半枝莲提取物通过PI3K-Akt信号通路抑制胰腺癌模型大鼠肿瘤生长的机制研究

目的:基于PI3K-Akt信号通路探究半枝莲提取物对胰腺癌模型大鼠的干预效果。方法:选取40只SD健康雄性大鼠,10只为正常组,其余30只建立胰腺癌模型,分为模型组、低浓度半枝莲组、高浓度半枝莲组。检测各组大鼠肿瘤体积、重量、T淋巴细胞亚群水平、细胞凋亡及Wnt3α、β-catenin、PI3K、Akt、mTOR表达。结果:高浓度半枝莲组大鼠肿瘤体积、重量低于低浓度半枝莲组、模型组(均P<0.05)。高浓度半枝莲组大鼠CD8⁺水平低于低浓度半枝莲组、模型组,CD4⁺、CD3⁺水平高于低浓度半枝莲组、模型组(均P<0.05)。高浓度半枝莲组大鼠Wnt3α、β-catenin、PI3K、Akt、mTOR表达低于低浓度半枝莲组、模型组(均P<0.05)。结论:半枝莲提取物可抑制胰腺癌模型大鼠肿瘤组织,调控胰腺癌大鼠T淋巴细胞亚群水平,调控Wnt/β-catenin、PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达,促进胰腺癌细胞自噬、凋亡。     

TKP,a serine protease extracted from Trichosanthes kirilowii,inhibits the migration and invasion of colorectal adenocarcinoma cells by targeting Wnt/β‐catenin and Hedgehog/Gli1 signalings

Trichosanthes kirilowii, which is a type of Liana from cucurbitaceous family, possesses many bioactive constituents and therefore has multifarious pharmacological functions. TKP, which is a serine protease extracted from the fruit of Trichosanthes kirilowii, has been reported to possess potential anticancer activity. However, the effects of TKP on cancer cell migration and invasion are still unknown. Here, we reported that TKP could inhibit the migration and invasion abilities of colorectal cancer cells. In addition, the mRNA, protein expression levels, and activities of migration and invasion‐related proteins MMP2 and MMP9 were decreased in TKP‐treated cells. Mechanistically, TKP treatment repressed Wnt/β‐catenin and Hedgehog/Gli1 signaling cascades. However, the addition of lithium chloride or the transfection of plasmid pcDNA3.1‐V5‐HisA‐Gli1 reversed the impacts of TKP on MMP2, MMP9, cell migration, and invasion. These results indicated that TKP suppressed the migration and invasion of colorectal cancer cells through blocking Wnt/β‐catenin and Hedgehog/Gli1 pathways‐mediated MMP2 and MMP9.     

橙皮素通过激活内质网应激C/EBP同源蛋白诱导人神经胶质瘤细胞凋亡实验研究

目的:分析橙皮素(HES)对人神经胶质瘤细胞凋亡的影响及相关分子机制。方法:将人神经胶质瘤U251细胞分为100 μmol/L橙皮素组、200 μmol/L橙皮素组、400 μmol/L橙皮素组、600 μmol/L橙皮素组、800 μmol/L橙皮素组、阴性对照组、4-苯基丁酸(4-PBA)组、橙皮素加4-苯基丁酸组、转染对照组、C/EBP同源蛋白(CHOP)低表达组、橙皮素加转染对照组、橙皮素加CHOP低表达组。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,qRT-PCR法检测CHOP mRNA表达水平,Western blot法检测细胞凋亡蛋白和内质网应激(ERS)蛋白表达水平。结果:HES对胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,与阴性对照组比较,HES可诱导U251细胞凋亡,上调Caspase-3、剪切Caspase-3、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、剪切PARP蛋白以及CHOP、ERS蛋白分子伴侣葡萄糖调节蛋白78、X盒结合蛋白1(XBP-1)、激活转录因子6蛋白表达量和磷酸化真核起始因子2α/eIF2α。4-PBA可逆转HES引起的ERS蛋白和凋亡蛋白表达变化; 干扰CHOP表达可逆转HES对凋亡蛋白的调控作用。结论:HES通过介导ERS途径CHOP诱导胶质瘤细胞凋亡。     

山慈菇提取物通过下调AEG-1表达抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭＊

目的 本研究旨在观察山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响，并探讨其分子机制。方法 取人结直肠癌SW480细胞作为研究对象，采用划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力，采用短发夹RNA（Short hairpin RNA，shRNA）干扰技术沉默SW480细胞中星形细胞上调基因-1（astrocyte elevated gene-1，AEG-1）基因的表达，利用Western blot法检测基质金属蛋白酶-2，9（matrix metalloproteinase-2，9，MMP-2，9）、E-钙粘蛋白（E-cadherin）和AEG-1等蛋白的表达变化。结果 山慈菇提取物可使人结直肠癌SW480细胞愈合率、迁移率和侵袭率均显著下降（P < 0.05），下调MMP2、MMP9和AEG-1蛋白表达水平（P < 0.05）以及上调E-cadherin蛋白表达水平（P < 0.05），上述作用均具有浓度依赖性。经shRNA干扰AEG-1基因表达后，SW480细胞中AEG-1蛋白表达水平显著下降（P < 0.05）；同时AEG-1干扰SW480细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P < 0.05），MMP2和MMP9蛋白表达水平均显著下降，同时单独或者联合山慈菇提取物组的细胞迁移率、侵袭率也降低（P < 0.05）。结论 山慈菇提取物能浓度依赖性地抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭，这可能与山慈菇提取物抑制AEG-1蛋白表达，继而下调MMP2、MMP9蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关。     

Inhibition of Sanggenon G Isolated from Morus alba on the Metastasis of Cancer Cell

Objective An organic layer prepared from the cortex of Morus alba(Moraceae)was studied in order to identify the active compounds for heparinase.Methods Bioassay-guided fractionation resulted in the isolation of sanggenon G.Results The compound showed inhibitory activity with IC50 of 3.7μmol/L on heparinase in vitro as well as 24μmol/L in invasion assay using MDA-MB231 cells.Sanggenon G also had the moderate cytotoxicity at SW 620(colon)and ACHN(kidney)cancer cell lines with IC50 of 10.96 and 13.44μmol/L,respectively.Conclusion This is the first time that prenylated flavonoid sanggenon G is described as heparinase inhibitor.Besides,this flavonoid would be expected to be a metastasis inhibitor of cancer cells and also a valuable reagent to explore the mechanism of heparinase/heparanase-mediated metastasis.     

苦参素通过sHH信号通路抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭能力研究

目的:研究苦参素对胰腺癌增殖和侵袭能力的影响及机制。方法:在体外培养胰腺癌细胞株,不同浓度的苦参素在不同时间点干预胰腺癌细胞,在现象层面,应用MTT法检测胰腺癌细胞的增殖能力; 应用Transwell小室检测细胞的侵袭能力。在机制层面,应用Real time PCR和Western blot在转录水平和蛋白水平检测程度,并通过基因转染技术构建高表达sHH的胰腺癌细胞株,进一步验证苦参素对胰腺癌增殖和侵袭能力的影响及sHH通路的作用。结果:高浓度组(40 μmol/L)苦参素与低浓度组(20 μmol/L)相比,明显抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭能力。在mRNA和蛋白水平,苦参素可明显抑制肿瘤细胞sHH信号通路,降低sHH(P<0.05)和 GLI-1的表达水平(P<0.05)。构建高表达sHH的胰腺癌细胞株Panc-1-sh-sHH,苦参素对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的抑制程度明显强于高表达sHH的胰腺癌细胞Panc-1-sh-sHH。结论:苦参素通过抑制sHH信号通路,减弱胰腺癌细胞增殖和侵袭能力。     

��ζ������ͨ��VEGF/PI3K/Akt�ź�ͨ·�����˽᳦��ϸ��SW620����ֳ��Ǩ��

??OBJECTIVE To study the changes of VEGF signaling pathway in colon cancer patients and the effect of schisandrin B on SW620 cells and to analyze its possible mechanism. METHODS The protein expression of VEGFA, VEGF-R2, PI3K, Akt and p-Akt in human cancerous colon samples and adjacent normal samples were detected by Western blotting. The proliferation of SW620 cells was detected by CCK-8 method. The mRNA expression of VEGFA, VEGF-R2, PI3K and Akt in SW620 cells were detected by real-time PCR. The protein expression of VEGFA, VEGF-R2, PI3K, Akt and p-Akt in SW620 cells were detected by Western blotting. RESULTS The protein expression of VEGF-R2, PI3K, Akt and p-Akt in human cancerous colon samples was significantly higher than that in the adjacent normal samples(P<0.05). Compared with the control group, schisandrin B could significantly inhibit the proliferation and migration of SW620 cells, the mRNA expression of VEGFA, VEGF-R2, PI3K and Akt(P<0.01) and the protein expression of VEGFA, VEGF-R2, PI3K, Akt and p-Akt(P<0.05) in SW620 cells also were significantly decreased by schisandrin B. CONCLUSION The VEGF/PI3K/Akt signaling pathway is activated in colon cancer patients. Schisandrin B could inhibit the activity and migration of SW620 cells and inhibit the VEGF/PI3K/Akt signaling pathway.     

黄芩素上调miR-625-5p表达干预支气管哮喘小鼠的机制研究

目的:探讨黄芩素调控miR-625-5p表达对支气管哮喘小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、迁移及炎性因子的影响。方法:培养小鼠原代ASMCs细胞,作为对照组,重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖,作为PDGF组; 分别采用10、20、40 μmol/L的黄芩素处理PDGF诱导ASMCs细胞。将miR-NC、miR-625-5p转染至PDGF诱导的ASMCs细胞,作为PDGF+miR-NC、PDGF+miR-625-5p组; 将anti-miR-NC、anti-miR-625-5p转染至PDGF诱导ASMCs细胞,以40 μmol/L的黄芩素处理,作为PDGF+anti-miR-NC+40 μmol/L组、PDGF+anti-miR-625-5p+40 μmol/L组。CCK-8法检测细胞增殖; Transwell实验检测细胞迁移; 酶联免疫吸附实验检测细胞IL-4、IL-6、IL-8水平; 实时荧光定量PCR检测细胞miR-625-5p表达水平。结果:与对照组比较,PDGF组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05); 与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与对照组比较,PDGF组细胞miR-625-5p表达显著降低(P<0.05); 与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞miR-625-5p表达显著升高(均P<0.05)。与PDGF+miR-NC组比较,PDGF+miR-625-5p组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与PDGF+anti-miR-NC+40 μmol/L组比较,PDGF+anti-miR-625-5p+40 μmol/L组细胞miR-625-5p表达水平显著降低,细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-625-5p表达抑制支气管哮喘小鼠的细胞增殖率、迁移率以及炎性因子水平。     

白杨素调控YAP介导的EMT进程抑制人结肠癌HCT-116细胞转移的机制研究

目的 探讨白杨素在体内外对人结肠癌HCT-116细胞侵袭与转移作用及相关机制。方法 本实验应用CCK-8法检测白杨素对HCT-116细胞增殖能力的抑制作用。利用划痕和Transwell法检测白杨素干预HCT-116细胞后对细胞迁移和侵袭能力的作用。通过Western blot检测白杨素干预后对HCT-116细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail表达水平的影响,并检测白杨素对HCT-116细胞内Yes相关蛋白(YAP)蛋白表达的作用。利用siRNA干扰实验考察YAP低表达对白杨素在HCT-116细胞侵袭作用和EMT进程中的影响。构建体内实验性肺转移模型考察白杨素对HCT-116细胞体内转移的作用。结果 白杨素从8 μmol·L^-1开始能够显著抑制HCT-116细胞的增殖,8 μmol·L^-1以下对HCT-116细胞增殖没有显著抑制作用。划痕和Transwell实验显示,白杨素(1、2和4 μmol·L^-1)能够剂量依赖性的抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭。Western blot结果显示,白杨素能够上调E-cadherin的蛋白表达,下调N-cadherin,Vimentin及转录因子Snail的蛋白表达。同时还发现白杨素能够下调YAP蛋白表达水平,而利用siRNA下调YAP后能显著逆转白杨素对HCT-116细胞迁移与侵袭的抑制作用,并能逆转白杨素对HCT-116细胞EMT过程的促进作用。体内肺转移实验显示,白杨素显著抑制了HCT-116在肺上转移结节。结论 本实验表明,白杨素能够在体内外抑制人结肠癌HCT-116细胞的侵袭与转移能力,其作用机制与抑制YAP的蛋白表达,下调EMT过程相关。