hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴促进胰腺癌细胞增殖与迁移的机制研究

目的　检测环状核糖核酸（circular RNA ,cicrRNA）hsa_circ_0006950 在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其潜在分子作用机制。方法　利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 检测hsa_circ_0006950 在胰腺癌组织及细胞中的相对表达水平;转染hsa_circ_0006950 干扰载体构建低表达细胞系,通过CCK-8实验、克隆斑点形成实验和Transwell 实验检测hsa_circ_0006950 对胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移的影响;利用生物信息学网站预测hsa_circ_0006950 的miRNA 分子靶标及其调控网络（hsa_circ_0006950-miR-124-3p-EZH2）,双荧光素酶基因报告实验验证hsa_circ_0006950 和miR-124-3p,miR-124-3p 和EZH2 的靶向结合关系;转染过表达/ 干扰miR-124-3p 和过表达EZH2 细胞系,探究miR-124-3p 和EZH2 及hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴对胰腺癌细胞克隆形成及迁移的影响。结果　胰腺癌组织中hsa_circ_0006950 表达明显高于癌旁正常组织（3.57±0.52 vs 1.01±0.03）,差异有统计学意义（t=21.980,P ＜ 0.001）。胰腺癌细胞PANC-1（7.51±0.62）,AsPC-1（5.26±0.45）,Capan-2（3.69±0.38）,SW1990（3.25±0.32）and BXPC-3（3.86±0.35）中hsa_circ_0006950 相对表达明显高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7（1.00±0.01）中的表达,差异有统计学意义（F=88.585,P ＜ 0.001）。与对照组相比,干扰hsa_circ_0006950 表达组细胞增殖能力（0.79±0.17 vs 1.83±0.42）,克隆形成率（51.42%±5.84% vs 78.76%±13.65%）和迁移数目（104.64±24.73 vs 218.21±31.57）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.976,3.190,4.905,P=0.016,0.033,0.008）。miR-124-3p 是hsa_circ_0006950 的下游靶基因,EZH2 是miR-124-3p 的直接靶标。hsa_circ_0006950 靶向负调控miR-124-3p,miR-124-3p 靶向负调控EZH2。与对照组相比,过表达miR-124-3p 组PC 细胞增殖（0.21±0.16 vs1.75±0.47）,克隆形成率（47.85%±4.13% vs 81.54%±2.33%）和细胞迁移数目（118.74±24.65 vs 202.36±31.45）明显降低,差异均有统计学意义（t=5.378, 14.317, 3.390, 均P ＜ 0.001）;共转染过表达EZH2 后,miR-124-3p 对细胞增殖、克隆形成率及迁移能力的抑制作用被逆转。在干扰hsa_circ_0006950 组细胞中同时下调miR-124-3p 或过表达EZH2 后,hsa_circ_0006950 对细胞克隆形成及迁移的抑制作用被逆转恢复。结论　胰腺癌中hsa_circ_0006950 显著高表达,抑制其表达可以抑制胰腺癌细胞的增殖及迁移;hsa_circ_0006950 可能通过靶向下调miR-124-3p 表达,进而上调EZH2 表达来发挥作用,参与胰腺癌的发生发展。     

miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖抑制及克隆形成的机制研究

目的　检测骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤（ osteosarcoma,OS）细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法　选取 2018年 1月～ 2020年 12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科 30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本,采用实时荧光定量 PCR实验（ qRT-PCR）法检测组织中 miR-146b-5p表达水平;通过介导转染 miR-146b-5p mimics和 miR-146b-5p ASO分别过表达和敲低 miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤细胞增殖及克隆形成的影响。通过生物学信息数据库预测 miR-146b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验验证两者结合关系,分析 miR-146b5p对靶基因的调控作用。分析靶基因在骨肉瘤中的表达特征及与 miR-146b-5p的相关性,通过细胞增殖实验验证两者的调控作用,以其探究在骨肉瘤中发挥功能的潜在分子机制。结果　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p表达（ 4.096±1.237）显著低于邻近正常组织（ 5.895±0.834）,差异有统计学意义（ t=6.605,P＜ 0.001）。miR-146b-5p过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力（ t=13.233～ 34.599,均 P＜ 0.01）。miR-146b-5p过表达组克隆形成数目（ 48.912±2.032）较对照组（160.834±9.031）明显降低,差异有统计学意义（ t=20.942,P＜ 0.001）。DUSP16是 miR-146b-5p的潜在靶基因, miR-146b-5p负向调控双特异性磷酸酶（ dual speci.city phosphatase 16, DUSP16）表达。骨肉瘤组织中 DUSP16表达（5.683±0.457）较邻近正常组织（ 4.665±0.531）显著升高,差异有统计学意义（ t=7.959,P＜ 0.001）,与 miR-146b5p表达呈负相关（ r=-0.667,P<0.05）。共转染过表达 DUSP16逆转了 miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。 miR-146b-5p过表达组 P21水平（ 4.995±0.214）较对照组（ 1.001±0.002）显著升高,差异有统计学意义（ t=32.325,P＜ 0.001）;当共转染 DUSP16过表达后, P21表达（ 0.986±0.012）较单独过表达 miR-146b-5p组（4.995±0.214）显著降低,差异有统计学意义（ t=32.398,P＜ 0.001）。结论　骨肉瘤组织中 miR-146b-5p显著低表达,其过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖及克隆形成; miR-146b-5p通过靶向负调控 DUSP16表达参与 P53信号通路从而在骨肉瘤发生发展起重要作用。     

miR-125b靶向STAT3调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移、侵袭机制的研究

目的 对miR-125b靶向STAT3调控舌鳞状细胞癌增殖、迁移、侵袭的机制进行研究.方法 采用实时荧光PCR法检测miR-125b在舌鳞状细胞癌癌组织及癌旁组织中的表达,采用MTT法检测细胞的增殖能力;采用Transwell法检测miR-125b对舌鳞状细胞癌细胞的侵袭作用;采用划痕实验检测舌鳞状细胞癌细胞的迁移能力...     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p的表达水平及临床价值

目的　探讨鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p的表达水平及临床价值。方法　选取2016年1月～2020年7月涿州市医院收治的106例鼻咽癌患者和50例健康对照组作为研究对象,采用实时定量PCR法检测miR-144-3p及miR-151-3p表达水平。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-144-3p及miR-151-3p诊断鼻咽癌的价值。Pearson相关分析鼻咽癌患者血清miR-144-3p与miR-151-3p表达水平的相关性。结果　鼻咽癌组血清miR-144-3p（2.36±1.05 vs 0.82±0.27）及miR-151-3p（3.58±1.73 vs 0.97±0.36）表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义（均P <0.001）。鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3p表达水平升高与临床分期高、分化程度低、淋巴结转移及远处转移有关（t=5.824~19.307,均P <0.01）。ROC曲线显示, miR-144-3p为1.61及miR-151-3p为2.25是诊断鼻咽癌的最佳截断值,二者联合诊断鼻咽癌的曲线下面积（0.937,95%CI:0.875~0.99）最大,其敏感度和特异度为95.3%和87.0%。鼻咽癌患者血清miR-144-3p表达水平与miR-151-3p呈正相关（r=0.872,P<0.001）。结论　鼻咽癌患者血清miR-144-3p及miR-151-3表达水平明显升高,二者联合诊断鼻咽癌的价值较高。     

结直肠癌组织miR-485-5p，miR-1207-3p和miR-590-3p水平表达与临床病理特征及生存的相关性研究

目的　研究 miR-485-5p,miR-1207-3p和 miR-590-3p在结直肠癌演进过程中的表达变化。方法　选取 2019年 1月～ 2020年 1月承德市中心医院病理科归档资料齐全完整的 84例结直肠癌组织石蜡标本和距离癌组织边缘 5cm的癌旁组织石蜡标本。采用免疫组织化学法及荧光定量 PCR法检测以直肠组织制作的标本 miR-485-5p,miR-1207-3p和 miR-590-3p,分析 miR-485-5p,miR-1207-3p和 miR-590-3p在结直肠癌组织演进过程中的表达变化。结果　癌组织 miR-485-5p(3.25±0.32 fmol/L),miR-1207-3p(1.45±0.14 fmol/L)和 miR-590-3p(2.63±0.26 fmol/L)表达均低于癌旁组织 (7.65±0.76 fmol/L,5.81±0.58 fmol/L,8.95±0.89 fmol/L),差异有统计学意义（ t=48.900,66.970, 62.470,均 P＜ 0.05)。Ⅲ～Ⅳ期、中、低分化、有淋巴结转移、有肝转移患者 miR-485-5p,miR-1207-3p和 miR-590-3p表达分别低于Ⅰ～Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移、无肝转移患者,差异有统计学意义（ t/F=21.338～ 52.835, 均 P＜ 0.05）。死亡组患者 miR-485-5p（1.52±0.15 fmol/L）,miR-1207-3p（0.50±0.05 fmol/L）和 miR-590-3p（1.15±0.11 fmol/L）均低于存活组（4.98±0.49 fmol/L,2.40±0.24 fmol/L,4.11±0.41 fmol/L）,差异具有统计学意义（t=27.820,31.370, 28.520,均 P＜ 0.05）。 ROC曲线分析显示,三项联合曲线下面积、敏感度和特异度分别为 0.823,86.30%和 87.32%;miR-485-5p分别为 0.699,85.78%和 86.41%;miR-1207-3p分别为 0.768,85.59%和 71.14%;miR-590-3p分别为 0.719,83.62%和 87.62%,三项联合诊断价值大于单独检测。 miR-485-5p,miR-1207-3p和 miR-590-3p之间相关性分析显示, miR-485-5p与 miR-12073p呈正相关（ r=0.457,P=0.005）;miR-485-5p与 miR-590-3p呈正相关（ r=0.314,P=0.003）;miR-1207-3p与 miR590-3p呈正相关（ r=0.332,P=0.002）。结论　血清 miR-485-5p,miR-1207-3p和 miR-590-3p水平联合检测对诊断结直肠癌、判断恶化程度有一定临床价值,且可能作为结直肠癌患者潜在的预后标志物。     

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制.方法 采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检...     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p表达.分别转染si-LncRNA PTPRG-AS1、miR...     

沉默lncRNA THAP9-AS1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默长链非编码RNA THAP9反义RNA1(lncRNA THAP9-AS1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选取贵州省肿瘤医院2017年6月至2020年6月25例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p表达水平。将MDA-MB-231细胞随机分为si-THAP9-AS1组、si-NC组、miR-505-3p组、 miR-NC组、si-THAP9-AS1+anti-miR-NC组、si-THAP9-AS1+miR-505-3p inhibitor组。采用四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活性,平板克隆实验检测细胞集落形成数,流式细胞术实验检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移及侵袭,双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,乳腺癌组...     

miRNA-34b 对子宫内膜癌细胞凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的 探究miR-34b 对子宫内膜癌(endometrial cancer) 凋亡、迁移、侵袭的影响及对Jag1/Cyclin D1 信号通路的影响。方法 将人子宫内膜癌细胞AN3CA 细胞分为对照组、NC 组和miR-34b 组。通过流式细胞技术、Transwell实验分别检测各组细胞凋亡、迁移能力和侵袭能力;通过定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)及Westernblot 检测各组细胞Jagged-1 蛋白(Jag1)及其靶基因G1/S- 特异性周期蛋白-D1(Cycling D1)mRNA和蛋白的表达水平;通过裸鼠荷瘤实验分析miR-34b 对肿瘤生长的影响。结果 对照组、NC 组和miR-34b 组细胞凋亡比例分别为5.6%±0.12%,5.80%±0.22% 和19.4%±0.51%。miR-34 组细胞凋亡比例高于对照组,差异具有统计学意义(t=8.325,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞迁移数分别为322.15±13.71 个,327.67±9.14 个和162.19±7.49 个,miR-34b 组细胞迁移数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.945 , P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组细胞侵袭数分别为357.6±14.11 个,364.05±16.12 个和157.58±8.77 个,miR-34b 组细胞侵袭数低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.643,P ＜ 0.01);qPCR 结果表明对照组、NC 组和miR-34b 组Jag1 mRNA 表达为2.75±0.21,2.67±0.14 和1.19±0.19,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.434,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.71±0.11,1.77±0.24 和0.69±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=7.895,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组Cyclin D1mRNA 表达为1.29±0.13,1.32±0.11 和0.59±0.13,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=9.124,P ＜ 0.01);对照组、NC 组和miR-34b 组蛋白表达为1.81±0.18,1.79±0.14和1.29±0.16,miR-34b 组低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.227,P ＜ 0.01);裸鼠荷瘤实验表明过表达miR-34b 裸鼠肿瘤生长曲线与对照组差异有统计学显著性意义,并且肿瘤体积显著低于对照组(t=8.184,P ＜ 0.01)。结论 miR-34b 可以促进人子宫内膜癌细胞的凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,其机制与Jag1/Cyclin D1 信号通路活性的抑制相关。     

下调miR-572抑制人胃癌细胞株凋亡、迁移和侵袭机制的实验研究

目的 探讨下调微小核糖核酸（miRNA, miR）-572对人胃癌细胞凋亡和迁移能力的影响及机制。方法 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)法检测miR-572,第10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten, PTEN)和蛋白激酶2 (protein kinase 2,AKT2)在不同胃癌细胞株（HGC-27,AGS和SGC-7901）和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达情况。在胃癌细胞株AGS细胞中加入miR-572 inhibitor后,CCK8检测细胞活力;Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡比例;qPCR检测miR-572,PTEN和AKT2的表达量。结果 miR-572和AKT2在胃癌细胞系HGC-27(6.97±1.62,4.98±1.34),AGS(7.21±1.32,5.39±1.14)和SGC-7901(5.97±1.44,4.02±1.02)中较正常胃黏膜上皮细胞GES-1表达升高（1.00±0...     

HOXB3促进骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和抑制细胞凋亡的机制研究

目的　探究同源异型盒基因 B3（homeobox genes B3, HOXB3）对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和凋亡的影响及其潜在分子机制。方法　检测 2020年 1月～ 12月在雅安市第二人民医院骨科行手术治疗的 30例骨肉瘤患者病理组织及邻近正常组织中 HOXB3表达;通过转染干扰 siRNA敲低 HOXB3表达,验证其转染效率;采用细胞增殖实验、克隆形成实验、细胞划痕实验及细胞凋亡实验分别探究敲低 HOXB3对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和凋亡的影响;分析 CDCA3在骨肉瘤中的表达特征及与 HOXB3的相关性,通过染色质免疫共沉淀技术（ chromatin immunoprecipitation, ChIP）分析和荧光素酶报告基因实验验证 HOXB3和细胞分裂周期相关蛋白 3（cell division cycle associatedfprotein 3, CDCA3）结合关系;验证 HOXB3和 CDCA3表达调控对骨肉瘤细胞生物学行为的作用机制。结果　30例骨肉瘤临床组织中 HOXB3表达（ 41.154±8.626）较邻近正常组织（22.857±7.512）显著升高,差异有统计学意义（t=8.975,P＜ 0.001）。敲低 HOXB3表达后,骨肉瘤细胞增殖率、克隆形成率和迁移率明显降低（ F=37.477～ 399.842,均 P＜ 0.001）,细胞凋亡率显著升高（F=10.556,P=0.011）。骨肉瘤组织中CDCA3表达（ 38.624±7.736）明显高于邻近正常组织（21.875±6.482）,差异有统计学意义（ t=9.090,P＜ 0.001）;HOXB3与 CDCA3表达呈正相关（ r=0.736,P＜ 0.01）。CDCA3是 HOXB3的靶基因;敲低 HOXB3表达显著降低了骨肉瘤细胞中 CDCA3表达（ F=694.283,P＜ 0.001）。HOXB3可结合 CDCA3的启动子区域正调控 CDCA3的表达;在敲低 HOXB3表达的细胞中回补 CDCA3,逆转了 HOXB3对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成、迁移、凋亡的抑制 /促进作用。结论　HOXB3在骨肉瘤中表达上调,其可能通过与 CDCA3启动子区域结合,正向调控 CDCA3表达促进了骨肉瘤细胞的增殖、克隆形成及迁移,抑制了细胞凋亡,可作为临床骨肉瘤治疗的潜在药物靶点。     

CircRNA-100395 基因通过启动子区甲基化调控miRNA-136-5p/Smad3 轴促进前列腺癌细胞增殖及侵袭的机制研究

目的　检测前列腺癌细胞中环状核糖核酸（circular RNAs, CircRNA）100395 基因启动子区甲基化状态及其表达水平,研究CircRNA-100395 基因去甲基化对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制。方法　选择人正常前列腺上皮细胞（RWPE）和前列腺癌细胞系（LNCap,PC3 和DU145）进行研究。采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylationspecific polymerase chain reaction, MSP) 检测CircRNA-100395 基因启动子区甲基化状态。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR) 法检测上述细胞中CircRNA-100395 mRNA 表达水平。应用去甲基药物5- 氮杂-2'- 脱氧胞苷（AZA）处理LNCap 细胞,检测AZA 去甲基化处理前后细胞中CircRNA-100395 表达水平。采用CCK-8 和Transwell 实验检测CircRNA-100395 基因去甲基化前后LNCap 细胞增殖和侵袭能力。构建CircRNA-100395 野生型和突变型质粒,通过双荧光素酶报告分析CircRNA-10039 与miRNA-136-5p 之间的靶向关系;利用qRT-PCR 检测CircRNA-10039 与miRNA-136-5p 表达水平,验证其调控关系。采用Westernblot 法检测AZA 去甲基化和miRNA-136-5p 过表达对Smad3,p-Smad3 蛋白表达的影响。结果　前列腺癌细胞中CircRNA-100395 呈高甲基化状态;LNCap,PC3 及DU145 细胞中CircRNA-100395 相对表达水平分别为0.39±0.08,0.65±0.14,0.62±0.10,显著低于RWPE（1.12±0.15）细胞中表达水平,差异有统计学意义（F=42.076,P ＜ 0.001）。经AZA 去甲基化处理后,LNCap 细胞中CircRNA-100395 表达水平为1.02±0.17,较未处理LNCap 细胞（0.42±0.05）明显升高,差异有统计学意义（t=5.808,P ＜ 0.01）。AZA 去甲基化处理显著抑制了LNCap 细胞的增殖能力（t=8.764~12.970,均P ＜ 0.001）、迁移能力（t=6.092,P ＜ 0.01）。miRNA-136-5 可能是CircRNA-100395 的下游靶基因。未经AZA 处理前LNCap 细胞中CircRNA-100395,miRNA-136-5p 表达水平分别为0.39±0.08,0.87±0.15,AZA 处理后两者表达水平分别为1.02±0.17,0.35±0.08,差异有统计学意义（t=5.808,5.298,均P ＜ 0.01）。AZA 处理后Smad3 和p-Smad3 蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（t=7.394,11.889,均P ＜ 0.01）;miRNA-136-5p 过表达抑制了Smad3 和p-Smad3 蛋白表达,差异有统计学意义（t=4.996,5.422,均P ＜ 0.01）。结论　CircRNA-100395 基因启动子区的高甲基化状态可以抑制CircRNA-100395 在前列腺癌细胞中的表达水平,去甲基化处理后CircRNA-100395 表达恢复,并抑制前列腺癌细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与CircRNA-100395 靶向调控miRNA-136-5p/Smad3 轴有关。     

miR-153对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨miR-153对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其相关作用机制。方法 构建SRC-3’UTR-WT和SRC-3’UTR-MUT载体,分别与miR-153 mimic,mimic control共转染至肺腺癌A549细胞,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-153与SRC的靶向关系。构建miR-153过表达、敲低miR-153和SRC表达的A549细胞系,采用Western Blot检测miR-153对SRC蛋白表达的影响。通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验及流式细胞仪分别检测miR-153,SRC及miR-153+SRC共转染对A549细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。结果 双荧光素酶报告基因实验证实SRC是miR-153的靶基因。25例临床肺腺癌组织中miR-153表达水平（13.251±4.256）较癌旁正常组织（25.312±6.527）显著降低（t=7.739,P <0.001）,SRC表达水平（28.574±6.438）较癌旁正常组织（15.206±5.117）显著升高,差异有统计学意义(t=8.128,P <0.001...     

长链非编码RNA LINC00222对肺腺癌细胞增殖、 迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制的研究

目的 检测肺腺癌组织及细胞系中LncRNA LINC00222表达,探究其对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和相关作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和Western blot实验检测肺腺癌组织及细胞中LINC00222表达;构建LINC00222过表达载体,验证其转染效率;采用CCK-8法...     

沉默SOX2对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响及机制研究

【目的】探讨转录因子 SOX2表达下调对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响。【方法】将特异性短发夹（shRNA）SOX2干扰载体转染宫颈鳞癌细胞 SiHa获得稳转细胞系（SOX2干扰组）,MTT法检测细胞增殖能力变化,Transwell小室法测定细胞侵袭能力差异,Western Blot检测 SOX2、MMP2、MMP9及上皮间质转化相关因子变化,并与阴性对照转染组与空白对照组比较。【结果】与阴性对照转染组和空白对照组比较, SOX2干扰组 MTT结果显示细胞增殖能力明显降低,Transwell结果显示细胞穿膜数显著减少、侵袭能力降低（P＜0．05）,Western Blot检测 SOX2显著下调、MMP2、MMP9表达下调、E-cadherin蛋白水平升高、Vim-entin表达降低（P＜0．05）;而阴性对照转染组与空白对照组相比各项指标无明显变化。【结论】抑制 SOX2表达能够抑制宫颈鳞癌细胞的体外增殖与侵袭能力,可能与抑制上皮间质转化过程有关。     

体外血管内皮生长因子单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响

目的:在体外观察血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响。方法:采用氯化钴(Co Cl2)模拟缺氧环境,予以0、0.1、1、10μg/m L的VEGF抗体,对常氧或缺氧条件下对C6胶质瘤细胞进行处理。通过MTT实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting检测HIF-1α蛋白、FAK/Pyk2总蛋白及磷酸化FAK-Tyr397/Pyk2-Tyr402表达水平变化。结果:200μmol/L Co Cl2明显抑制C6细胞增殖(P<0.05),10μg/m L VEGF抗体可明显抑制C6细胞增殖(P<0.05)。与常氧相比,缺氧可使C6细胞的迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。常氧和缺氧下,VEGF抗体的干预均增强C6细胞的迁移、侵袭能力(P<0.05),且相对于常氧,缺氧可进一步增强VEGF抗体促C6细胞迁移、侵袭的作用(P<0.05)。Co Cl2干预可增加C6细胞中HIF-1α的含量;在常氧和缺氧情况下,只有1μg/m L VEGF抗体可降低FAK的总蛋白量(P<0.05);在缺氧情况下,VEGF抗体可明显增高Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平。结论:在缺氧情况下,VEGF抗体的干预可使Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平增高,引起C6细胞的侵袭迁移能力进一步增强。