粪菌移植干预治疗溃疡性结肠炎的免疫学机制研究

背景溃疡性结肠炎被世界卫生组织列为现代难治疾病之一。目前西医对其治疗尚存在诸多不足之处,研究显示粪菌移植（FMT）对其有一定的疗效,但机制尚不明确。目的采用FMT治疗小鼠溃疡性结肠炎模型,验证FMT的疗效和可能的作用机制。方法2019年12月至2020年4月,采用随机数字表法将60只小鼠分为正常对照组（Control组）、溃疡性结肠炎模型组（Model组）、溃疡性结肠炎模型+粪菌移植治疗组（Model+FMT组）和溃疡性结肠炎模型+5-氨基水杨酸（5-ASA）治疗组（Model+5-ASA组）,各15只。Control组不作任何干预处理;Model组制备小鼠溃疡性结肠炎模型;Model+FMT组于造模成功后,给予制备的粪菌液0.2 ml/次灌肠;Model+5-ASA组于造模成功后,给予0.019 5 g/ml 5-ASA灌肠。通过透射电镜观察肠组织超微结构变化,流式细胞检测血液辅助性T细胞（Th）-17、Th-1、Th-2、Treg细胞含量变化,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清干扰素γ（IFN-γ）、白介素（IL）-2、IL-17、IL-4、IL-10、转化生长因子β（TGF-β）水平变化。结果肠组织透射电镜超微结构显示Model组造模成功;Model+FMT组与Model+5-ASA组微绒毛较为致密,形态正常,杯状细胞数目较多,线粒体轻微肿胀,粗面内质网病变不明显。Model+FMT组Th17细胞含量高于Control组、低于Model组,Model+5-ASA组Th17细胞含量低于Control组、Model组、Model+FMT组;Model+FMT组、Model+5-ASA组Th1细胞含量均分别低于Control组、Model组;Model+FMT组Th2细胞含量低于Control组、高于Model组,Model+5-ASA组Th2细胞含量低于Control组、高于Model组和Model+FMT组;Model+FMT组、Model+5-ASA组Treg细胞含量均分别低于Control组、高于Model组（P<0.05）。Model+5-ASA组IFN-γ细胞含量低于Model组;Model+FMT组、Model+5-ASA组IL-2细胞含量低于Model组;Model+FMT组、Model+5-ASA组IL-17细胞含量均分别低于Control组和Model组,Model+5-ASA组IL-17细胞含量低于Model+FMT组;Model+FMT组IL-4细胞含量低于Control组、高于Model组,Model+5-ASA组IL-4细胞含量高于Model组;Model+FMT组IL-10细胞含量高于Control组和Model组,Model+5-ASA组IL-10细胞含量高于Model组;Model+FMT组、Model+5-ASA组TGF-β细胞含量均分别低于Control组、高于Model组（P<0.05）。结论FMT可改善小鼠溃疡性结肠炎症状,推测其可能是通过调节Th1/Th2细胞平衡、Th17/Treg细胞比例达到治疗的目的。     

黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对小鼠结肠炎的干预作用

目的：探讨黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的实验性结肠炎的干预作用。方法：将C57BL/6 雄性小鼠随机分为5 组,即对照组、结肠炎组、黄芩素低剂量（Ba-L）治疗组[10 mg/（kg·d）]、黄芩素高剂量（Ba-H）治疗组[25 mg/（kg·d）]和5-氨基水杨酸（5-ASA）治疗组,每组各12只。对照组小鼠饮用清水,其余各组小鼠均连续7 d饮用3.5%的DSS溶液构建实验性结肠炎模型。在DSS造模开始前7 d和造模开始后给予不同剂量黄芩素或5-ASA灌胃治疗,共14 d。比较各组小鼠之间的平均体质量、疾病活动指数（DAI）以及结肠组织学活动程度评分（HAI）;采用实时荧光定量PCR法测定各组小鼠的结肠组织中IL-1β、TNF-α、IFN-γ、TLR4、NF-κB p65、MyD88的mRNA水平;采用免疫荧光技术测定肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率。结果：结肠炎组小鼠与对照组小鼠相比,出现严重的结肠炎,表现为小鼠体质量降低、全结肠长度缩短、DAI和HAI大幅度升高（均P ＜0.01）。与结肠炎组小鼠相比,Ba-L治疗组、Ba-H治疗组和5-ASA治疗组小鼠的结肠炎有明显改善（均P ＜0.05）。结肠炎组小鼠的结肠组织中IFN-γ、TNF-α、IL-1β、MyD88、NF-κB p65、TLR4的mRNA表达水平均明显高于对照组小鼠（均P ＜0.01）;而Ba-L治疗组、Ba-H治疗组及5-ASA治疗组中上述mRNA表达水平则均明显低于结肠炎组小鼠（均P ＜0.05）。结肠炎组小鼠的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率明显高于对照组小鼠（P ＜0.001）,但Ba-L治疗组、Ba-H治疗组以及5-ASA治疗组的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率则明显低于结肠炎组（均P ＜0.001）。结论：黄芩素可能通过TLR4/NF-κB信号通路抑制DSS诱导的结肠炎症。     

粪菌移植在小鼠实验性结肠炎中的疗效研究

目的 观察粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎的影响,探讨FMT对结肠炎的治疗作用和可能机制。方法 将小鼠分为4组:正常对照组、DSS组、美沙拉嗪(又叫5-氨基水杨酸,5-aminosalicylic acid,5-ASA)组、FMT组。除正常对照组外,其余3组小鼠连续饮用3%DSS水7天,建立急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,同时DSS组、5-ASA组及FMT组于实验第1、3、5、7天分别给予0.5%羧甲基纤维素钠(Carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na)、5-ASA及粪菌液灌肠。每天观察各组疾病活动指数(disease activity index,DAI),于实验第8天处死小鼠,测量结肠长度,检测结肠组织中中性细胞髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白介素10(interleukin-10,IL-10)的含量。结果 与模型组相比,FMT可改善小鼠结肠组织炎症程度,降低MPO活力(P<0.05),减少组织TNF-α、IL-1β的含量(P<0.05),升高IL-10的含量(P<0.05)。结论 FMT对小鼠实验性结肠炎有治疗效果,可能通过重建肠道菌群,调节肠道T细胞免疫稳态来发挥治疗作用。     

彝药益元化腐汤浸膏对溃疡性结肠炎模型T细胞亚群干预机制研究*

目的研究彝药益元化腐汤调控T细胞亚群介导治疗溃疡性结肠炎的效应机制，为益元化腐汤临床应用治疗溃疡性结肠炎提供科学基础。方法 32只C57BL/6健康雌性小鼠随机分为正常组、模型组、益元化腐汤中剂量（4.05 g·kg-1）和高剂量组（8.1 g·kg-1），每组8只。除正常组，其余以自由饮水的方式给予3%葡聚糖硫酸钠（sodium dextran sulfate，DSS）诱导建立溃疡性结肠炎小鼠模型，每2 d更换1次饮用水，自饮用DSS第1天起，各组按相应剂量灌胃给药，每日1次，连续8 d；采用疾病活动指数（diseases activity index，DAI）和苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）分别评价溃疡性结肠炎症状及结肠组织形态学变化；荧光定量PCR（qPCR）检测淋巴细胞T细胞亚群相关因子转录的相对表达水平；流式细胞术（flow cytometry）检测T细胞亚群中辅助性T细胞1（T-helper 1 cell, Th1）、辅助性T细胞17（T-helper 17 cell，Th17）和调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的表达水平。结果 与正常组比较，病理模型组小鼠体质量和结肠质量显著下降、结肠长度显著缩短（P<0.05或P<0.01）；与病理模型组比较，益元化腐汤组显著增加小鼠体质量、结肠质量及其长度（P<0.05或P<0.01），改善结肠病理损伤程度；流式细胞术检测结果显示，益元化腐汤药物干预显著下调γδTCR表达（P<0.05），且抑制Th1细胞（CD4+ IFN-γ+ T细胞）、Th17细胞（CD4+ IL-17+ T细胞）绝对数量和比例（P<0.01），然而对Treg细胞（CD4+ Foxp3+ 调节性T细胞）表达无明显影响。qPCR检测结果显示，益元化腐汤显著下调UC小鼠Th17细胞因子IL-17A和转录因子RORγτ mRNA表达（P<0.01）。结论 彝药益元化腐汤可能通过抑制Th17细胞诱导的炎症反应介导治疗溃疡性结肠炎。     

谷氨酰胺对实验性结肠炎BABL/C小鼠肠黏膜的修复作用

目的 探讨谷氨酰胺(Gln)对BALB/C小鼠实验性结肠炎的治疗作用及可能的机制。方法 将50只BALB/C小鼠分为正常对照组、模型对照组、5-ASA组、Gln组、Gln+5-ASA组。各实验性结肠炎组小鼠采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠造模后,治疗组给予药物干预,观察疾病活动指数(disease activity index, DAI),取结肠组织行H-E染色病理组织学检查并积分,应用免疫组织化学技术检测小鼠结肠黏膜TNF-α、NF-κB、IL-10、IL-1β的表达。结果 模型组小鼠DAI评分明显升高、结肠黏膜呈明显的炎症变化,表现为急性炎症,如溃疡形成、单核细胞浸润等。结肠黏膜TNF-α、NF-κB、IL-1β的表达增多、IL-10表达减少;谷氨酰胺能减轻小鼠大肠黏膜炎症,在一定程度上起到治疗小鼠实验性结肠炎的目的,其疗效与5-ASA相当;其中谷氨酰胺联合5-ASA治疗效果最佳,与正常对照组比较差异无统计学意义。结论 谷氨酰胺可用于治疗BALB/C小鼠实验性结肠炎,其作用机制可能与促进肠黏膜细胞增殖、维护肠黏膜屏障、调节免疫功能、抑制NF-κB活化、降低TNF-α、IL-1β表达,升高IL-10的表达等有关,与5-ASA联用其治疗效果优于两者单独用药。     

参苓白术散对脾虚小鼠肠保护作用及其机制的研究

目的：研究参苓白术散对脾虚小鼠肠道菌群的调整及肠保护作用。方法：昆明小白鼠,分成5组：A组（模型组）;B组（正常对照组）;C组（脾虚自然恢复组）;D组（参苓白术散治疗组）;E组（丽珠肠乐治疗组）。检测结肠内容物和粪便标本的肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、类杆菌、乳酸杆菌数量。结肠组织光镜和电镜观察。结果：脾虚小鼠给予参苓白术散治疗后肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、类杆菌、乳酸杆菌数量逐渐恢复正常,肠壁肌层厚度增加,杯状细胞数量增多,肠粘膜微绒毛排列紊乱、线粒体肿胀显著改善。明显好于脾虚自然恢复组,与丽珠肠乐治疗组相比无明显差异。结论：参苓白术散对脾虚小鼠具有肠道菌群调整及促进损伤肠组织恢复的作用。     

四神丸对脾虚小鼠肠道菌群调整及肠保护作用的实验研究

目的：研究四神丸对脾虚小鼠肠道菌群的调整及肠保护作用。方法：昆明小白鼠，分成5组，A组（模型组），B组（正常对照组），C组（脾虚自然恢复组），D组（四神丸治疗组），E组（丽珠肠乐治疗组）。检测结肠内容物和粪便标本的肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、类杆菌、乳酸杆菌数量。结肠组织光镜和电镜观察。结果：脾虚小鼠给予四神丸治疗后肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、类杆菌、乳酸杆菌数量逐渐恢复正常，肠壁肌层厚度增加，杯状细胞数量增多，肠粘膜微绒毛排列紊乱、线粒体肿胀显著改善。明显好于脾虚自然恢复组，与丽珠肠乐治疗组相比无明显差异。结论：四神丸对脾虚小鼠具有肠道菌群调整及促进损伤肠组织恢复的作用。     

5-氨基水杨酸治疗溃疡性结肠炎的临床观察

目的观察氨基水杨酸（5-ASA）治疗溃疡性结肠炎（UC）的疗效与安全性。方法对2004年6年至2009年4月确诊的溃疡性结肠炎48例患者,随机分为治疗组（5-ASA）与对照组柳氮磺胺吡啶（SHSP）组分别为26例与22例。5-ASA组给予5-ASA3～4g/d;SASP组给予SASP4-6g/d,2组均于治疗前及疗程6周复查结肠镜评估疗效。结果5ASA治疗UC6周后有效率与SASP组无显著差异（P〉0.05）显效率与SASP组差异有显著性（P〈0.05）;药物不良反应如恶心,肝功能损害明显低于SASP组。结论5-ASA为治疗UC安全有效不良反应明显减少的药物。     

髓系抑制性细胞和调节性T细胞在小鼠实验性结肠炎中的作用

目的探讨髓系抑制性细胞（MDSC）和调节性T 细胞（Treg 细胞）在小鼠溃疡性结肠炎发生、发展过程中的作用。方法使用5%右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液复制小鼠溃疡性结肠炎模型,每日观察小鼠体重和大便状况。DSS 处理3 和7 d 后处死小鼠,苏木精- 伊红染色法观察病理组织学变化,流式细胞仪检测脾脏和肠系膜淋巴结中MDSC 和Treg 细胞的表达。结果模型组小鼠于造模第4 天体重开始下降,有腹泻和血便,HE染色结果显示小鼠结肠出现黏膜损伤及炎症表现。与对照组和造模3 d组比较,造模7 d 组肠系膜淋巴结中Treg 细胞比例增加,而MDSC 比例降低;进一步观察MDSC 亚群变化发现,粒细胞型MDSC 在造模7 d组中比例下降,而单核细胞型MDSC则无改变。无论Treg细胞还是MDSC,脾脏中的水平3组比较差异无统计学意义。结论急性溃疡性结肠炎可导致MDSC降低和Treg细胞增高,可能与疾病的发生发展有关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。