噻庚啶、山莨菪碱对内毒素休克TNFα表达的影响

目的：研究噻庚啶山菪碱对内毒素休克TNFα况表达的影响。方法：Wistar臣鼠脉注射脂多糖（LPS,EcoliO111B45mg/kg)复制内毒素休克模型。Northem印迹杂交分析肝脏TNFαmRNA表达,放射免疫法测定血浆TNFαW的含量。结果：LPS攻击后2h,大鼠肝脏TNFαmRNA表达显著高于盐水对照;（杂交信号经扫描仪半定量分析对．兀19幼。盐水对照11．防止7．m,P＜001）;血浆TNFα流水平明显升高：（211.52±3.16）μg/LvsLPS攻击前（2.19±0．95）μg/L,P＜0．01。静脉注射IPs后立即给予噻庚啶（Cyp,5mg/kg）、山茛菪碱（Ami,10mg/kg）,均能显著抑制LPS诱导的大鼠肝脏TNFαmRNA表达,降低血浆TNFα流含量;提高休克大鼠的平均动脉血压（MAB）及休克小鼠的24h的存活率。结论：Cyp和Ani均显著抑制内毒素休克TNFα基因表达,具有较强的抗休克作用。     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞[Ca2+]i和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预

目的:观察脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)[Ca²⁺]_i和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预作用。方法:分离、培养并鉴定Wistar大鼠RPMVECs;应用Fura-2/AM法测定RPMVECs[Ca²⁺]_i;流式细胞仪技术测定RPMVECsGq蛋白。结果:①LPS作用于RPMVECs30min和90min后,[Ca²⁺]_i显著高于对照组;Gq蛋白显著低于对照组。②山莨菪碱可抑制LPS的上述作用。结论:①LPS致RPMVECs[Ca²⁺]_i增加和Gq蛋白下降;②山莨菪碱通过抑制LPS诱导RPMVECs[Ca²⁺]_i增加和Gq蛋白下降的作用而保护其内皮屏障功能。     

甘氨酸对缺氧/复氧心肌细胞[[Ca2+]i和TNF-α浓度的影响

目的: 观察甘氨酸对缺氧/复氧心肌细胞内游离钙、心肌细胞存活率和TNF-α浓度的影响。方法: 利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌缺氧/复氧(H/R)模型,实验分7组:① 对照组;② 缺氧/复氧 (H/R)组;③ 0.5 mmol/L甘氨酸(GLY)+H/R组;④ 1.0 mmol/L GLY+H/R组;⑤ 2.0 mmol/L GLY+H/R组;⑥ 4.0 mmol/L GLY+H/R组;⑦ 4.0 mmol/L GLY对照组。结果: 在一定浓度范围内(0.5-2.0 mmol/L),甘氨酸能抑制缺氧/复氧损伤引起的细胞内钙超载,并呈现剂量依赖性关系,在2.0 mmol/L浓度水平,达到最佳抑制效应。甘氨酸能抑制心肌细胞产生TNF-α,避免心肌H/R损伤的加重,增加心肌细胞的存活率。 结论:甘氨酸对缺氧/复氧心肌具有保护作用,其机制与抑制钙超载,减少TNF-α的生成有关。     

钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i的调节

目的:探讨在常氧、低氧条件下钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)[Ca²⁺]_i的调节。方法:采用钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养的大鼠PASMCs,观察常氧、低氧培养后3种钾通道抑制剂(4AP,TEA、Glib)对PASMCs[Ca²⁺]_i的调节,同时用四唑盐(MTT)比色法比较4AP、TEA、Glib对大鼠PASMCs增殖的影响。结果:(1)常氧状态下,PASMCs[Ca²⁺]_i为(156.91±8.60)nmol/L,低氧时为(294.01±16.81)nmol/L(P＜0.01)。(2)常氧状态下,4AP可引起PASMCs[Ca²⁺]_i升高,达(280.52±23.21)nmol/L(P＜0.01),而TEA、Glib无此作用。(3)低氧时,4AP和TEA都可引起PASMCs[Ca²⁺]_i的升高,分别为(422.41±24.28)nmol/L、(380.84±11.02)nmol/L(P<0.01),Glib无作用。(4)MTT比色法中,常氧和低氧状态下4AP均引起吸光度(A)值升高,分别是0.582±0.062,0.873±0.043(P＜0.01)。TEA仅在低氧时A值升高(0.729±0.041,P＜0.05),而Glib无论常氧还是低氧均无影响。结论:无论常氧还是低氧条件下,电压依赖性钾通道(K_V)对PASMCs[Ca²⁺]_i及其增殖起主要作用。钙激活的钾通道(K_Ca)在常氧条件下对[Ca²⁺]_i不起调节作用,而在低氧下使[Ca²⁺]_i降低,反应性地调节PASMCs增殖。ATP敏感性钾通道(K_ATP)无论在常氧还是低氧情况下对[Ca²⁺]_i的调节不起作用。     

白细胞介素-2对缺氧/复氧心肌细胞[Ca2+]i的作用

目的:观察白细胞介素-2(IL-2)对心肌细胞在缺氧/复氧过程中电刺激诱导的[Ca²⁺]i的作用。方法:采用酶解分离成年大鼠心室肌细胞化学缺氧模型, 以Fura-2/AM为钙探针, 用细胞内双波长钙荧光系统检测心肌[Ca²⁺]i的变化。结果:①缺氧/复氧过程中, 缺氧5min时, 心肌[Ca²⁺]i幅度降低、舒张末期[Ca²⁺]i升高, [Ca²⁺]i达峰时间(TTP)延长, 恢复时间(RT)延长。复氧10min后, 心肌[Ca²⁺]i幅度、舒张末期[Ca²⁺]i、TTP及RT逐渐回复, 但不能完全恢复到对照水平;②在缺氧期间加入IL-2(2×10⁵U/L), 复氧期间[Ca²⁺]i各参数回复减慢;③用κ-阿片受体拮抗剂nor-BNI(10^-8mol/L)预处理后, 缺氧+IL-2对复氧时[Ca²⁺]i作用的影响被减弱, 而δ-阿片受体拮抗剂纳曲吲哚(10^-6mol/L)预处理则无此作用。结论:缺氧时同时存在IL-2, 可加剧复氧时心肌[Ca²⁺]i的变化, 其机制可能是IL-2通过心肌κ-阿片受体而发挥作用。     

血管内皮生长因子拮抗H2O2诱导的血管内皮细胞凋亡

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）预防血管成形术后再狭窄的机制。方法：构件含人VEGF₁₆₅基因的重组腺病毒载体并感染体外培养的血管平滑肌细胞，72 h后收集含VEGF的条件培养液，将对数生长期的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分成对照组、H₂O₂处理组和H₂O₂+VEGF处理组，12 h后采用原位末端标记法和流式细胞术检测各组细胞的凋亡发生情况。结果：H₂O₂处理组细胞凋亡明显多于对照组和H₂O₂+VEGF处理组（P<0.01）。结论：H₂O₂能诱导HUVEC凋亡，而VEGF能部分拮抗上述作用。     

严重烧伤早期心肌[Ca2+]m变化及其机制研究

目的:探讨严重烧伤早期心肌线粒体Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_m)的动态变化规律及其发生机制。方法:复制30%Ⅲ°烫伤大鼠模型,测定伤后1、3、6、12、24h大鼠心肌[Ca²⁺]_m,同时检测影响[Ca²⁺]_m的相关指标—胞浆Ca^2＋浓度(_c)及线粒体Ca^2＋转运速率。结果:烧伤后1、3、6h[Ca²⁺]_m依次升高,12、24h较6h虽有所下降,但仍高于正常对照组;_c除伤后1h无明显变化外,其余各时相点变化趋势与[Ca²⁺]_m相同,且伤后[Ca²⁺]_m与_c呈显著正相关,相关系数为0.9177(P＜0.01)。伤后1h心肌线粒体Ca^2＋摄取速率明显升高,而Ca^2＋释放速率无明显改变,但3、6、12、24h心肌线粒体Ca^2＋摄取速率与Ca^2＋释放速率均显著降低,且烧伤后3、6、12、24h[Ca²⁺]_m分别与线粒体Ca^2＋释放速率呈明显负相关。结论:烧伤后心肌线粒体存在明显的Ca^2＋超载和转运紊乱。     

泡沫细胞形成与胞浆Ca2+水平变化

目的:探讨巨噬细胞在泡沫化过程中,胞浆Ca²⁺水平的变化规律及其病理机制。方法:选择动脉粥样硬化易感性C57BL/6J小鼠,取其腹膜巨噬细胞,在10mg·L^-1氧化低密度脂蛋白中孵育96h,制备了富含脂质成分的泡沫样细胞。在此基础上,应用Ca²⁺荧光指示剂技术和NADH氧化偶联差光谱变化的分析方法,检测了前述泡沫样细胞的胞浆Ca²⁺水平及膜成分Ca²⁺-ATP酶活性。结果:泡沫样细胞的胞浆Ca²⁺水平是对照巨噬细胞的2.7倍,膜成分Ca²⁺-ATP酶活性为后者的24%。结论:在巨噬细胞源性泡沫细胞的形成过程中,伴随着缓慢的膜外Ca²⁺内流或肌质网Ca²⁺释放,这可能与初期膜上Ca²⁺通道的持续性开放及后期膜上Ca²⁺泵功能的不可逆性钝化有关。     

麦冬药物血清对血管内皮细胞凋亡相关基因表达及胞内Ca2+的影响

目的:探讨麦冬药物血清抗血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法:取人脐静脉内皮细胞(HUVEC), 用脂多糖造成凋亡细胞模型, 通过流式细胞仪、激光共聚焦显微镜观察麦冬药物血清对bcl-2表达及胞内Ca²⁺的影响。结果:麦冬药物血清可明显升高LPS所致的bcl-2表达降低, 并缓解其所致的钙超载。结论:麦冬抗HUVEC凋亡并有效防治血栓性疾病的机理与其调控bcl-2基因表达及缓解细胞钙超载有关。     

肿瘤坏死因子α通过PI3K-IP3R-Ca2+途径诱导乳鼠心肌肥大

 目的: 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否通过PI3K-IP₃R-Ca²⁺信号途径诱导心肌肥大。方法: 以培养的乳鼠心肌细胞为模型,采用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;[³H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;Till阳离子测定系统测定心肌细胞内Ca²⁺浓度。结果: PI3K阻断剂LY294002(50 μmol/L)明显抑制TNF-α(100 μg/L)诱导的心肌[Ca²⁺]_i增高(P<0.01),对正常心肌[Ca²⁺]_i无明显影响;其抑制程度与合用2-氨基乙基二苯硼酸盐(2-APB)组相近,但小于与兰尼碱(RYA)合用组(P<0.05)。PI3K阻断剂LY294002(50 μmol/L)明显抑制TNF-α(100 μg/L)诱导的心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及细胞体积的增加;其抑制程度与合用2-APB组无差异,但明显大于单用2-APB组,小于合用RYA组(P<0.05)。PI3K阻断剂LY294002(50 μmol/L)对正常心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及细胞体积无明显影响。结论: TNF-α通过PI3K-IP₃R-Ca²⁺途径诱导心肌肥大。     

Fas、NF-κB及Caspases在TNFα介导的微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNFα)引起微血管内皮细胞凋亡的特点及Fas(即CD95抗原 )、NF-κB和caspases在此种凋亡中的作用。方法:用TUNEL、流式细胞仪等方法测定TNFα引起体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(下称内皮细胞 )凋亡。用Northernblot、Fas抗体测定TNFα对内皮细胞Fas表达的影响及Fas在内皮细胞凋亡中的作用。用Westernblot、免疫组化测定TNFα作用后凋亡蛋白酶caspase-8、caspase-3的活化与表达。结果:细胞生长曲线显示TNFα抑制内皮细胞增殖,并呈剂量依赖关系。TUNEL法测凋亡百分率为 14.0 %± 3.1%,流式细胞仪测凋亡百分率为 13.1%。NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(APDC)与TNFα共同作用后,细胞凋亡增加。TNFα作用后内皮细胞的Fas表达增高,用Fas抗体与TNFα共同作用,细胞凋亡增加。TNFα作用下caspase-8活化显著增加,caspase-3表达增多。caspase-3抑制剂与TNFα共同作用,细胞凋亡减少。结论:大剂量TNFα(5× 10⁶U/L)能够引起一定量的体外培养的内皮细胞发生凋亡。NF-κB有抗内皮细胞凋亡的作用。TNFα上调内皮细胞Fas表达,后者参与内皮细胞凋亡。TNFα所引起的内皮细胞凋亡与caspase-8及caspase-3的作用有关.     

舒张性心力衰竭兔Ca2+调控蛋白mRNA和蛋白质的表达

目的:探讨心肌细胞内Ca²⁺超负荷以及Ca²⁺调控蛋白在舒张性心力衰竭(DHF)发生中的作用。方法:采用RT-PCR和Westernblot技术测定实验兔Ca²⁺调控蛋白mRNA和蛋白质表达的变化。结果:⑴DHF兔心肌细胞内Ca²⁺含量显著高于假手术组(P＜0.01);⑵DHF兔SRCa²⁺-ATPase活性明显低于假手术组(P＜0.01);⑶DHF兔SRCa²⁺-ATPase和细胞膜L型Ca²⁺通道的mRNA水平明显低于假手术组(P＜0.05),而磷酸受纳蛋白、兰尼碱受体和肌集钙蛋白的mRNA转录无明显差异(P＞0.05);⑷DHF兔SRCa²⁺-ATPase的蛋白质表达明显低于假手术组(P＜0.05);磷酸受纳蛋白的相对含量与假手术组无明显差异(P＞0.05)。结论:SRCa²⁺-ATPase的mRNA和蛋白质表达减低以及细胞膜L型Ca²⁺通道mRNA转录减低是导致心肌细胞内Ca²⁺超负荷及DHF发生的重要因素。     

大鼠心肌细胞胞浆和核Ca2+震荡现象及其机制探讨

目的:在培养的新生大鼠心肌细胞上,观察多种刺激因素对细胞胞浆Ca²⁺([Ca²⁺]c)和核Ca²⁺([Ca²⁺]n)的影响,探讨其时间和空间关系及其机制。方法:以Fluo-4/AM荧光指示剂负载培养的心肌细胞,应用激光共聚焦扫描显微镜检测胞浆和核Ca²⁺震荡的变化。结果:正常心肌细胞内核Ca²⁺的荧光强度高于核周与细胞浆,三者均存在小幅度的钙震荡,分别加入去甲肾上腺素(10^-5mol/L)、异丙肾上腺素(10^-4mol/L)和三磷酸腺苷(ATP3×10^-3mol/L),均使心肌细胞钙震荡幅度明显升高(P＜0.01),L-型Ca²⁺通道阻滞剂维拉帕米(verapamil5×10^-4mol/L)、Ca²⁺-ATPase抑制剂thapsigargin(10^-6mol/L)和KCl(20mmol/L)使钙的周期性震荡消失。用thapsigargin10^-6mol/L预先阻断心肌细胞钙库的Ca²⁺摄取,去甲肾上腺素(10^-5mol/L)则不能引起钙震荡和荧光强度增加。结论:心肌细胞胞浆和核Ca²⁺均能产生钙震荡,而钙震荡的维持则依赖于细胞外Ca²⁺的内流、胞内钙库的Ca²⁺摄取和释放以及正常膜电位的维持。核与胞浆Ca²⁺变化不一致,提示细胞核上可能存在相对独立的Ca²⁺调节系统。     

OX-LDL及辛伐他汀对平滑肌细胞PKC活性和胞内Ca2+的影响

目的:探讨OX-LDL是否对大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)蛋白激酶C(PKC)活性和胞浆内游离钙([Ca²⁺]i)水平有影响。方法:应用γ-[³²P]-ATP磷酸转移法和Fluo-3/Am荧光负载、流式细胞术分别检测PKC活性和胞内([Ca²⁺]i)水平。结果:OX-LDL呈剂量依赖方式促进ASMCPKC总活性增加,并可引起ASMC中PKC发生浆膜的转移。胞浆内[Ca²⁺]i以2个时相升高,即快速相和持续相。而辛伐他汀能明显抑制OX-LDL引起的ASMC中PKC活性的浆膜转移,并显著降低持续相胞浆内钙水平,而对快速相无影响。结论:OX-LDL能引起ASMC内信号通路PKC及[Ca²⁺]i的动态变化,二者密切相关。     

一氧化氮对成纤维细胞内游离Ca2+浓度的影响

目的: 研究一氧化氮(NO)对成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。方法: 体外培养人胚肺成纤维细胞(HLF), 给予NO前体-L-精氨酸(L-Arg)及一氧化氮合酶(NOS)抑制剂-硝基-L-精氨酸(L-NNA), 采用比色法测定细胞培养液NO水平, 采用Fura-2/AM荧光法测定细胞内游离Ca²⁺浓度, 观察NO对成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。结果: 随着细胞培养液NO水平逐渐升高, 成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度逐渐升高[实验组NO水平、Ca²⁺ 浓度比正常对照组NO水平、Ca²⁺浓度分别为(3.82±0.53) mol/L比(2.62±0.55) mol/L和(894.48±93.01) nmol/L比(824.56±33.22) nmol/L, P<0.05]; 但进一步升高NO水平, Ca²⁺浓度却逐渐降低[实验组NO水平、Ca²⁺浓度比正常对照组NO水平、Ca²⁺浓度分别为(5.82±0.45) mol/L比(2.62±0.55) mol/L和(162.11±68.50) nmol/L比(824.56±33.22) nmol/L, P<0.01]。结论: NO对成纤维细胞内游离Ca²⁺浓度具有双向调节作用。即低水平NO升高细胞内游离Ca²⁺浓度, 高水平NO降低细胞内游离Ca²⁺浓度。     

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞[Ca~(2+)]_i和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预

目的 :观察脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVECs) [Ca2 + ]i 和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预作用。方法 :分离、培养并鉴定Wistar大鼠RPMVECs;应用Fura - 2 /AM法测定RPMVECs[Ca2 + ]i;流式细胞仪技术测定RPMVECsGq蛋白。结果 :①LPS作用于RPMVECs 30min和 90min后 ,[Ca2 + ]i 显著高于对照组 ;Gq蛋白显著低于对照组。②山莨菪碱可抑制LPS的上述作用。结论 :①LPS致RPMVECs[Ca2 + ]i 增加和Gq蛋白下降 ;②山莨菪碱通过抑制LPS诱导RPMVECs[Ca2 + ]i 增加和Gq蛋白下降的作用而保护其内皮屏障功能。     

旁路活化补体协同TNF-α对血管内皮细胞ICAM-1表达和粘附作用的影响

目的:探讨旁路活化补体协同TNF-α对血管内皮细胞ICAM-1表达及中性粒细胞-内皮细胞(PMN-EC)粘附的影响。方法:采用酵母多糖活化人血清(ZAHS)单独、和TNF-α协同作用于体外培养的内皮细胞单层, 用直接细胞计数和改良细胞ELISA方法检测中性粒细胞-内皮细胞粘附率的变化和细胞间粘附分子(ICAM-1)的表达。结果:旁路活化补体单独作用于内皮细胞对PMN-EC粘附和ICAM-1的表达仅有轻微影响;和40μg/L的TNF-α共同作用可以明显促进PMN-EC粘附率和ICAM-1的表达。结论:旁路活化补体对TNF-α诱导的PMN-EC粘附及ICAM-1的表达具有促进作用, 从而引起炎症反应。     

一氧化碳对缺血脑组织神经细胞胞内Ca2+浓度的影响

目的:研究一氧化碳对局灶性缺血脑组织神经细胞胞内Ca²⁺浓度的影响,试图从离子水平阐明CO对脑组织保护作用的机制。方法:将SD大鼠随机分为3组(n=6), 使用HO诱导剂、HO抑制剂腹腔注射为实验组,等量生理盐水腹腔注射为对照组,12 h后制成MCAO模型。栓塞后24 h检测血浆CO浓度、神经细胞胞内Ca²⁺浓度。结果: HO诱导剂组CO浓度明显高于生理盐水组,而胞内Ca²⁺浓度低于生理盐水组(P<0.05);HO抑制剂组CO浓度明显低于生理盐水组, 胞内Ca²⁺浓度高于生理盐水组(P<0.05)。HO诱导剂、HO抑制剂对非栓塞侧神经细胞胞内Ca²⁺浓度没有影响(P>0.05)。结论: CO通过作用于细胞膜上的Ca²⁺-K⁺通道,引起缺血脑组织神经细胞胞内Ca²⁺浓度的变化可能是CO脑保护作用的机制之一。     

调节性容积减小过程中Ca2+和pH对钾通道的调控

动物细胞在低渗环境中容积胀大时可以发生保护性的调节性容积减小(regulatory volume decrease,RVD),K+通道的开放所介导的K+外流是这一过程的重要机制[1].然而,由于研究技术和方法的限制,对于离子通道活动的研究往往会破坏细胞的完整性和调节能力,因此RVD过程中整体细胞水平的K+通道活动调节仍需进一步探讨.而在已经充分掌握单个K+通道特性的基础上,可以将不同的调节因素加以整合,构建RVD过程中整体细胞水平K+通道活动的调节网络.许多动物细胞的RVD过程中存在胞浆Ca2+浓度和pH值的改变,本文就这一变化的发生机制及其对RVD过程中K+通道活动的调节作用作一综述.     

急性胰腺炎患者的PTH-M、CT、Ca2+水平及其相互关系

目的:研究轻型急性胰腺炎(MAP)和重症急性胰腺炎(SAP)患者的甲状旁腺激素、降钙素(CT)、血钙的变化及其相互关系。方法: 应用放射免疫法测定所选病例的血清甲状旁腺激素中间片段(PTH-M)、降钙素;用全自动生化分析仪测定所选病例的血清钙离子浓度。结果:①MAP和SAP患者的急性期和恢复期血清PTH-M与正常对照组比较差异无显著(P＞0.05); MAP和SAP患者的急性期血清CT显著高于正常对照组(P＜0.01), 而MAP和SAP患者的恢复期血清CT与正常对照组比较差异无显著(P＞0.05)。②SAP患者的急性期血清CT与血钙之间存在直线负相关关系(r=-0.453,P＜0.05)。结论: 重症急性胰腺炎患者,低血钙的发生是由于降钙素分泌显著增加所致,而此时血中甲状旁腺素水平仍保持正常水平。